海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血冷藏品質(zhì)的影響

萬(wàn)康 陶樂(lè)仁 沈釘

摘?要：血液的長(zhǎng)期保存有著重要的應(yīng)用價(jià)值和理論意義。以豬全血為研究對(duì)象，將其保存于含不同濃度（0.05、0.25和0.50 mol ·L?1）海藻糖的血液保存液Ⅲ（CPDA）和不同保存設(shè)備中，并對(duì)豬全血的保存品質(zhì)進(jìn)行了評(píng)價(jià)。保存期間，每4天測(cè)量1次血液的?pH、紅細(xì)胞總數(shù)（RBC）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、紅細(xì)胞比容（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、白細(xì)胞總數(shù)（WBC）、游離血紅蛋白（FHb）、溶血率。結(jié)果表明，0.05 mol ·L?1海藻糖延緩了紅細(xì)胞、白細(xì)胞的凋亡速度以及紅細(xì)胞的形變速度，降低了血液的溶血速度，使血液得到了更好的保存，海藻糖濃度過(guò)高反而會(huì)對(duì)血液的保存產(chǎn)生不利的影響。此外，與冰箱相比，恒溫槽中的溫度更為穩(wěn)定，使得血液的保存效果明顯提升。

關(guān)鍵詞：豬全血；紅細(xì)胞；海藻糖；保存設(shè)備

中圖分類號(hào)： R446.11 ??文獻(xiàn)標(biāo)志碼： A

Effect of trehalose and preservation equipment on storage quality of porcine whole blood

WAN Kang，TAO Leren ，SHEN Ding

（School of Health Science and Engineering， University of Shanghai for Science and Technology， Shanghai 200093， China）

Abstract：Long-term preservation of blood has important application value and theoretical significance. The influence of trehalose concentration （0.05， 0.25 and 0.5 mol ·L?1） in blood preservation solution III （CPDA） and preservation equipment on storage quality of porcine whole blood was evaluated. pH， total red blood cells（RBC）， average red blood cell hemoglobin content （MCH）， hematocrit （HCT）， average red blood cell volume （MCV）， total white blood cells （WBC）， free hemoglobin （FHb） and hemolysis rate of porcine blood were determined every 4 days in its preservation process. Results show that at the trehalose concentration of 0.05 mol ·L?1， both the apoptosis rate of RBC and WBC and the deformation rate of RBC are delayed， and the hemolysis rate of blood reduces， which results in better preservation of blood. High concentration of trehalose has an adverse impact on the preservation of blood. In addition， compared with the refrigerator， the temperature in the thermostatic bath maintains more stably， which significantly improves thepreservation of blood.

Keywords：porcine whole blood; red blood cell; trehalose; preservation equipment

全血保存在過(guò)去是保存血制品的一種常見(jiàn)方式，近年來(lái)又重新引起了醫(yī)學(xué)界的重視［1–2］。血液離體后保存于不同條件下，其血細(xì)胞的生化狀況、形態(tài)等均會(huì)出現(xiàn)不同程度的變化，在衰老的過(guò)程中血細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)不可逆的改變，從而導(dǎo)致血液保存失敗。

海藻糖是一種人體細(xì)胞間優(yōu)化溝通所需要的己糖脫氧糖，廣泛存在于人體中，具有軟化血管、調(diào)節(jié)血壓的作用。此外，海藻糖還具有極高的穩(wěn)定性，在各種惡劣環(huán)境下依然可以對(duì)生物膜、蛋白質(zhì)等生物大分子發(fā)揮良好的保護(hù)作用［3］。研究［4–5］發(fā)現(xiàn)，海藻糖在冰凍過(guò)程中對(duì)細(xì)胞膜具有保護(hù)作用，可以取代水與磷脂極性基團(tuán)結(jié)合來(lái)保持膜結(jié)構(gòu)的完整性，同時(shí)還可以起到伴侶蛋白的作用，抑制變性蛋白質(zhì)聚集，為蛋白質(zhì)復(fù)性提供能量，進(jìn)而有效延緩血液保存品質(zhì)的變化。

人血因管控嚴(yán)格難以獲得，豬血與人血在成分上大致相同，可以用來(lái)代替人血進(jìn)行血液保存方面的研究，市面上也存在用人血保存液保存的實(shí)驗(yàn)用豬血。目前已有的研究表明，冷凍紅細(xì)胞可以達(dá)到長(zhǎng)期保存的效果，但是冷凍紅細(xì)胞制作成本高且制作過(guò)程中添加的甘油對(duì)身體有害，需要在輸注前經(jīng)洗滌去除，操作過(guò)程復(fù)雜繁瑣，因此該方法主要用于保存稀有血型。而現(xiàn)行的低溫保存方法會(huì)使血細(xì)胞損傷速度加快，導(dǎo)致溶血率快速增高，血液變質(zhì)，從而易造成資源浪費(fèi)。基于海藻糖對(duì)細(xì)胞的保護(hù)特性，以全血為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，改變海藻糖濃度和保存設(shè)備，對(duì)全血的保存品質(zhì)進(jìn)行評(píng)估，以期建立一種方便、安全、有效的全血儲(chǔ)存方法。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

THD?2006型低溫恒溫槽購(gòu)于寧波天恒儀器廠。?BCD?226WGAC 型變頻冰箱購(gòu)于無(wú)錫松下冷機(jī)有限公司。?UV?1200型紫外分光光度計(jì)購(gòu)于上海美普達(dá)儀器有限公司。?SQP 型電子天平購(gòu)于賽多利斯科學(xué)儀器（北京）有限公司。HH?2型數(shù)顯恒溫水浴鍋購(gòu)于上海梅香儀器有限公司。?TC?Spinplus?6型低速離心機(jī)購(gòu)于上海珂淮儀器有限公司。330 Vet 型全自動(dòng)動(dòng)物血液細(xì)胞分析儀購(gòu)于山東卓越生物技術(shù)股份有限公司。

二水合枸櫞酸三鈉、枸櫞酸單水合物、磷酸二氫鈉單水合物、葡萄糖單水合物、乙二醇、腺嘌呤均購(gòu)于國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，且均為分析純。微量游離血紅蛋白試劑盒購(gòu)于南京建成生物工程研究所。Tr?100 ml 一次性使用塑料血袋購(gòu)于山東威高集團(tuán)醫(yī)用高分子制品股份有限公司。豬全血采集于昆山市定點(diǎn)屠宰加工中心有限公司。

1.2 保存液和血液保存溫度的確定

本實(shí)驗(yàn)中采用血液保存液Ⅲ（CPDA），將僅采用?CPDA 保存的血液作為對(duì)照組，將采用加入不同濃度（0.05、0.25和0.50 mol ·L?1）海藻糖的?CPDA 保存的血液作為實(shí)驗(yàn)組。目前常用全血儲(chǔ)存溫度為4℃。有研究表明，4℃下可明顯減緩紅細(xì)胞的溶血情況［6］，因此本次實(shí)驗(yàn)中保存溫度設(shè)定為4℃。

1.3 血液的采集

采血所需的工具多為塑料、樹脂制品，因此對(duì)采血工具進(jìn)行紫外滅菌。對(duì)血液保存液進(jìn)行高溫滅菌后將4種不同配方的血液保存液放置于4個(gè)無(wú)菌瓶中備用，并做好標(biāo)記。

鑒于動(dòng)物血液離體后會(huì)迅速凝固，操作時(shí)將注射器內(nèi)壁先用血液保存液潤(rùn)濕，再進(jìn)行靜脈抽血。按照保存液、血液體積比14∶100將血液注入無(wú)菌瓶中，并將無(wú)菌瓶密封置于0～10℃的保溫箱中帶回。

1.4 樣品的處理

將1個(gè)無(wú)菌瓶中的血液分裝到14個(gè)血袋中，并做好標(biāo)記。為了防止血細(xì)胞分布不均，每次裝袋前將無(wú)菌瓶中的血液充分混勻。將其中7個(gè)血袋置于冰箱中，記為一組，另外7個(gè)血袋置于恒溫槽中，記為一組。按照同樣方法處理其他3個(gè)無(wú)菌瓶中的血液，共得到8組56個(gè)血袋。冰箱和恒溫槽的溫度均設(shè)定為4℃。

1.5 相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

利用血細(xì)胞分析儀測(cè)量紅細(xì)胞總數(shù)（RBC）、紅細(xì)胞比容（HCT）、平均紅細(xì)胞體積（MCV）、平均紅細(xì)胞血紅蛋白含量（MCH）、白細(xì)胞 （WBC）；利用 pH 計(jì)測(cè)量 pH；使用試劑盒測(cè)量游離血紅蛋白（FHb）；通過(guò)公式［7］計(jì)算溶血率。每4天測(cè)量1次各項(xiàng)指標(biāo)，每次實(shí)驗(yàn)時(shí)取1個(gè)血袋，測(cè)量完畢血袋即報(bào)廢。

2 結(jié)果討論

經(jīng)觀察，整個(gè)保存期間所有血袋均未出現(xiàn)破損滲漏，采血管無(wú)裂紋、氣泡、扭結(jié)，上清液呈微黃色且無(wú)雜質(zhì)，血液顏色無(wú)異常，且各組血袋均未出現(xiàn)凝塊。

使用?ADAM?4000?5000 Utility 分別對(duì)冰箱和恒溫槽的溫度進(jìn)行30 min 連續(xù)監(jiān)測(cè)，結(jié)果如圖1所示，其中：?t 為時(shí)間；?T 為溫度。從圖中可以看出，恒溫槽整體溫度波動(dòng)比冰箱的小。由于常規(guī)冰箱采用啟停雙位控制系統(tǒng)，每隔一段時(shí)間溫度會(huì)有一次較大的波動(dòng)，整體溫度波動(dòng)較大，而恒溫槽采用的是電阻絲加熱、壓縮機(jī)制冷的方法，輔以比例積分微分（PID）微機(jī)自整定精確溫度控制方式，將溫度穩(wěn)定在設(shè)定溫度，恒溫槽整體溫度較穩(wěn)定，溫度波動(dòng)均在0.3℃以內(nèi)。

2.1 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 pH 的影響

當(dāng)?pH 過(guò)低時(shí)，全血的細(xì)胞形態(tài)與細(xì)胞膜流變學(xué)特性均會(huì)受到一定影響，同時(shí)還會(huì)出現(xiàn)細(xì)胞聚集，從而加速?pH 的下降，對(duì)紅細(xì)胞的攜氧功能造成影響［8?9］，因此?pH 可以作為評(píng)判血液保存效果的重要指標(biāo)。圖2為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血?pH 的影響。從圖中可見(jiàn)，各組血液的?pH 均呈下降趨勢(shì)。這是由于血漿和外源性葡萄糖在保存過(guò)程中發(fā)生無(wú)氧酵解產(chǎn)生乳酸，乳酸堆積造成?pH 下降［10］。冰箱和恒溫槽中0.50 mol ·L?1海藻糖組的?pH 均迅速下降，在保存末期其值低于6.3，且下降速度均慢于其他2種濃度海藻糖組和對(duì)照組。低濃度海藻糖降低了細(xì)胞膜的通透性，相對(duì)減少了紅細(xì)胞與葡萄糖的接觸，減緩了紅細(xì)胞代謝速度，導(dǎo)致乳酸減少，pH 下降速度減慢，而高濃度海藻糖增加了細(xì)胞膜的通透性，保存液中的葡萄糖更容易滲透至細(xì)胞內(nèi)，加速紅細(xì)胞的代謝，因此?pH 下降得較快。與對(duì)照組相比，0.25、0.50 mol ·L?1海藻糖組的?pH 下降速度反而更快，這表明過(guò)量添加海藻糖不利于血液的保存。恒溫槽中血液的?pH 下降速度比冰箱中的稍慢，尤其在保存末期，其下降速度更慢。

2.2 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 RBC 的影響

RBC 是指血液中數(shù)量最多的一種血細(xì)胞即紅細(xì)胞總數(shù)。紅細(xì)胞主要負(fù)責(zé)運(yùn)送氧氣，因此?RBC 可作為評(píng)判血液保存效果的重要指標(biāo)。紅細(xì)胞在保存過(guò)程中，隨著時(shí)間的推移將發(fā)生一系列物理、生理改變，最終衰敗、死亡，在此期間紅細(xì)胞會(huì)出現(xiàn)雙凹圓盤狀消失、細(xì)胞膜破裂、內(nèi)容物流出，從而造成溶血。圖3為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血?RBC 的影響。從圖中可見(jiàn)，各組的?RBC 均呈緩慢下降趨勢(shì)，這與鄧梅英等［11］的研究結(jié)果一致。冰箱和恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?RBC 下降速度最慢，這表明該濃度海藻糖延緩了紅細(xì)胞的衰亡進(jìn)程。冰箱和恒溫槽中0.50 mol ·L?1海藻糖組的?RBC 在前12天內(nèi)下降速度比對(duì)照組和0.25 mol ·L?1海藻糖組的都慢，但是在整個(gè)保存期間該組的?RBC 持續(xù)快速下降，在第28天時(shí)?RBC 的損失率遠(yuǎn)高于其他組。保存末期，恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?RBC 高于冰箱中同濃度海藻組的。洛群等［12］研究了海藻糖濃度對(duì)紅細(xì)胞的保存效果的影響，發(fā)現(xiàn)高濃度海藻糖可延長(zhǎng)紅細(xì)胞保存期近一倍，這與本次實(shí)驗(yàn)結(jié)果不同。這可能是因?yàn)槁迦旱戎谎芯苛硕唐趦?nèi)的保存效果（4～7 d），而本次實(shí)驗(yàn)時(shí)間為28 d，保存前期0.50 mol ·L?1海藻糖組對(duì)?RBC 保存效果的確優(yōu)于對(duì)照組和0.25 mol ·L?1海藻糖組，但在保存末期0.50 mol ·L?1海藻糖組的?RBC 保存效果明顯更差。

2.3 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 MCH 的影響

MCH 是指每個(gè)紅細(xì)胞內(nèi)所含血紅蛋白的平均量。紅細(xì)胞體積的變化以及胞內(nèi)血紅蛋白外漏均會(huì)導(dǎo)致 MCH 的檢測(cè)結(jié)果發(fā)生變化。圖4為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 MCH 的影響。從圖中可見(jiàn)，直至保存末期，各組的?MCH 均未見(jiàn)明顯的增加或減少，保存過(guò)程中的波動(dòng)也均符合保存質(zhì)量要求。不論是在冰箱中還是在恒溫槽中，3組不同濃度海藻糖組與對(duì)照組之間均沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（概率值r＞0.05），冰箱中0.05、0.50 mol ·L?1 海藻糖組的?MCH 均值分別為21.09、20.76 pg，恒溫槽中的分別為21.21、20.88 pg，可見(jiàn)恒溫槽的保存效果略好于冰箱。但兩種保存設(shè)備對(duì)?MCH 的保存效果差別不大，這說(shuō)明紅細(xì)胞中的血紅蛋白并未發(fā)生明顯的外漏，而血漿中增加的游離血紅蛋白是因紅細(xì)胞破裂所致。

2.4 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 MCV 的影響 MCV 是指單個(gè)紅細(xì)胞的平均體積，可以反映紅細(xì)胞的形變情況。圖5為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 MCV 的影響。從圖中可見(jiàn)，各組的 MCV 均呈上升趨勢(shì)，與現(xiàn)有的研究結(jié)果一致［13］。成熟紅細(xì)胞的主要功能是負(fù)責(zé)運(yùn)輸。為了方便運(yùn)輸，紅細(xì)胞的細(xì)胞膜內(nèi)只有水、血紅蛋白，沒(méi)有細(xì)胞核、細(xì)胞器，因此紅細(xì)胞維持活動(dòng)只能靠攝取葡萄糖。血液離體后血漿中的葡萄糖有限，如在保存液中過(guò)量添加葡萄糖又會(huì)導(dǎo)致胞外滲透壓增加。在保存過(guò)程中紅細(xì)胞代謝需要依靠持續(xù)消耗血漿中有限的葡萄糖來(lái)維持，葡萄糖酵解減少首先會(huì)導(dǎo)致胞外滲透壓持續(xù)降低，在達(dá)到滲透平衡的過(guò)程中紅細(xì)胞不斷吸水導(dǎo)致膨脹變大。此外，葡萄糖的減少還會(huì)導(dǎo)致維持紅細(xì)胞形態(tài)所必需的能量供應(yīng)中斷，并且還會(huì)伴有乳酸產(chǎn)生，乳酸堆積致使?pH 下降，?pH 過(guò)低又進(jìn)一步導(dǎo)致紅細(xì)胞無(wú)法維持自身的正常形態(tài)［14］，紅細(xì)胞變形、體積增大，最后致使紅細(xì)胞脹破，胞內(nèi)的水和血紅蛋白最終流向血漿。冰箱中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?MCV 明顯低于其他組，0.50 mol ·L?1海藻糖組的細(xì)胞形態(tài)維持得相對(duì)較好。恒溫槽中0.50 mol ·L?1海藻糖組的?MCV 相較于其他組的上升更慢。計(jì)算保存末期各組紅細(xì)胞的溶脹率，冰箱中對(duì)照組的為10.5%，0.05、0.25、0.50 mol ·L?1海藻糖組的分別為6.5%、9.8%、7.9%；恒溫槽中對(duì)照組的為11.9%，0.05、0.25、0.50 mol ·L?1海藻糖組的分別為10.2%、11.1%、7.3%。冰箱中0.50 mol ·L?1海藻糖組的溶脹率高于恒溫槽中相應(yīng)濃度組的，其余3組的溶脹率也均低于恒溫槽中相應(yīng)濃度組的，其中0.05 mol ·L?1海藻糖組的溶脹率在8組中最小。

2.5 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 HCT 的影響

HCT 指單位容積內(nèi)紅細(xì)胞的占比，是由血細(xì)胞分析儀測(cè)量出的?RBC 和?MCV 相乘得到，它可以反映紅細(xì)胞的積壓及聚集程度。圖6為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血?HCT 的影響。從圖中來(lái)看，冰箱和恒溫槽中對(duì)照組和0.25 mol ·L?1海藻糖組的?HCT 在前8天均不同程度地下降。從數(shù)據(jù)來(lái)看，這是因?yàn)樵谇?天這兩組的?RBC 下降速度較快，而?MCV 增加緩慢，兩者乘積減少導(dǎo)致?HCT呈下降趨勢(shì)；從微觀來(lái)看，由于紅細(xì)胞對(duì)保存環(huán)境的不適應(yīng)造成前期相當(dāng)一部分紅細(xì)胞出現(xiàn)損傷，且紅細(xì)胞前期聚集性不強(qiáng)，分布較為均勻，紅細(xì)胞占比下降，因此 HCT 降低。第12～20天，對(duì)照組和0.25 mol ·L?1海藻糖組的?HCT 又不同程度地緩慢上升，這是因?yàn)樗鼈兊?RBC 在這段時(shí)間內(nèi)變化趨于平穩(wěn)，MCV 增大，紅細(xì)胞堆積加?。?5］，從而造成?HCT 上升。0.05 mol ·L?1 海藻糖組的?HCT 在整個(gè)保存期間相對(duì)于其他組更為平穩(wěn)，這是因?yàn)?.05 mol ·L?1海藻糖組的?RBC 前期相對(duì)穩(wěn)定，且?MCV 增幅較小。在保存末期?RBC 大幅下降導(dǎo)致對(duì)照組、0.05和0.25 mol ·L?1海藻組的?HCT 均明顯下降。保存期間0.50 mol ·L?1海藻組的?RBC 持續(xù)快速下降，而其?MCV 相對(duì)平穩(wěn)，造成該組的?HCT 在整個(gè)保存期間持續(xù)下降。在第28天時(shí)，冰箱和恒溫槽中0.50 mol ·L?1海藻組的?HCT 均顯著低于其余3組（r＜0.05）。對(duì)冰箱和恒溫槽中對(duì)照組，0.05、0.25 mol ·L?1海藻糖組的?HCT 依次進(jìn)行方差分析，冰箱中各組的方差分別為0.52、0.44、0.56，恒溫槽中各組的方差分別為0.43、0.39、0.48。總體來(lái)看，恒溫槽中?HCT 的數(shù)據(jù)比冰箱中的更為穩(wěn)定，8組中恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?HCT 最為穩(wěn)定。

2.6 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 WBC 的影響

白細(xì)胞的主要功能是防衛(wèi)作用，血液標(biāo)本長(zhǎng)時(shí)間放置會(huì)導(dǎo)致白細(xì)胞脆性增大，使白細(xì)胞受到破壞。圖7為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血?WBC 的影響。從圖中可見(jiàn)，各組的?WBC 均持續(xù)下降。冰箱中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?WBC 下降速度比其他3組的慢，其他3組的?WBC 差別不大，第20天時(shí)各組的?WBC 開始低于標(biāo)準(zhǔn)值的最低值1.1×1010L?1。恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?WBC 下降速度最慢，0.50 mol ·L?1海藻糖組的?WBC 在第20天開始低于標(biāo)準(zhǔn)值最低值。第24天時(shí)對(duì)照組的?WBC（1.05× 1010 L?1）和0.25 mol ·L?1海藻糖組的?WBC（1.04×1010 L?1）也均開始低于標(biāo)準(zhǔn)值最低值；第28天時(shí)?0.05 mol ·L?1海藻糖組的?WBC（1.04×1010 L?1）開始低于標(biāo)準(zhǔn)值的最低值。相同濃度海藻糖組中，恒溫槽中各組?WBC 下降速度更慢，其中0.25 mol ·L?1海藻糖組的?WBC 下降速度顯著低于冰箱中的4組（r＜0.05）。

2.7 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血 FHb 的影響

FHb 是評(píng)價(jià)血液保存效果的重要指標(biāo)。隨著時(shí)間延長(zhǎng)，紅細(xì)胞出現(xiàn)不同程度的破損，釋放血紅蛋白，導(dǎo)致?FHb 增加。圖8為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血?FHb 的影響。從圖中可見(jiàn)，各組的?FHb 均呈上升趨勢(shì)。保存前期各組的?FHb 均緩慢上升，第20天后各組的?FHb 上升速度均不同程度增加。前16天冰箱中4組的?FHb 差別較小，第16天后各組的?FHb 差別明顯，其中0.05 mol ·L?1 海藻組的?FHb 上升速度開始小于其他3組，其值顯著低于其他3組（r＜0.05）。從第4天開始，恒溫槽中0.25、0.50 mol ·L?1海藻糖組的?FHb 高于對(duì)照組，其中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?FHb 在保存期間顯著低于其他3組（r＜0.05）。第28天時(shí)恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的?FHb 開始低于冰箱中的4組，且其值與這4組的值之間均有顯著性差異（r＜0.05）。保存末期冰箱和恒溫槽中0.25、0.50 mol ·L?1海藻糖組的?FHb 均迅速升高。高濃度海藻糖會(huì)造成細(xì)胞膜通透性增加，致使血紅蛋白滲漏，這可能是高濃度海藻糖組的?FHb 高于對(duì)照組的原因。

2.8 海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血溶血率的影響

溶血率是評(píng)判血液保存效果最直接的指標(biāo)，溶血率升高是紅細(xì)胞破損的表現(xiàn)。圖9為海藻糖及保存設(shè)備對(duì)豬全血溶血率的影響。從圖中可見(jiàn)，各組的溶血率均持續(xù)升高，兩種保存設(shè)備中0.05 mol ·L?1海藻糖組的溶血率均明顯低于其他3組，而0.50 mol ·L?1海藻糖組的溶血率最高。前20天，各組溶血率緩慢上升，從第20天開始，各組的溶血率均明顯上升，這與?FHb 的變化情況相同。前20天各組之間無(wú)顯著性差異（r＞0.05），保存末期冰箱中0.05 mol ·L?1海藻糖組的溶血率顯著低于其他3組（r＜0.05），而0.50 mol ·L?1 海藻糖組的溶血率顯著高于其他3組（r＜0.05）。恒溫槽中各組的情況與冰箱中的相同。保存末期恒溫槽中0.05 mol ·L?1海藻糖組的溶血率低于冰箱中相同濃度海藻糖組的，恒溫槽中0.50 mol ·L?1海藻糖組的溶血率低于冰箱中相同濃度海藻糖組的，對(duì)照組和0.25 mol ·L?1海藻糖組的溶血率也均低于冰箱中的。

3 結(jié) 論

通過(guò)研究不同濃度海藻糖和不同保存設(shè)備對(duì)豬全血冷藏品質(zhì)的影響發(fā)現(xiàn)，適量濃度（0.05 mol ·L?1）的海藻糖可以起到穩(wěn)定細(xì)胞膜的作用，維持細(xì)胞自身形態(tài)，同時(shí)低濃度海藻糖可以增加細(xì)胞膜剛性，延長(zhǎng)紅細(xì)胞的保存時(shí)間，延緩紅細(xì)胞損傷，適用于4℃下的血液保存；高濃度（0.50 mol ·L?1）海藻糖雖然減少了紅細(xì)胞的溶脹，使紅細(xì)胞更能維持自身的形態(tài)，然而紅細(xì)胞一直處于高滲透壓環(huán)境中會(huì)導(dǎo)致紅細(xì)胞損傷增加，并且高濃度海藻糖使血液的?pH 下降速度過(guò)快，使紅細(xì)胞的胞外環(huán)境更加惡劣，整體來(lái)看不適用于血液的長(zhǎng)期保存。

海藻糖濃度相同時(shí)，短期內(nèi)冰箱和恒溫槽中保存的血液質(zhì)量差別不大，但隨著保存時(shí)間的延長(zhǎng)，冰箱內(nèi)長(zhǎng)期不穩(wěn)定的溫度使細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)松散，血紅蛋白外漏、MCH 降低、FHb 升高加快，紅細(xì)胞內(nèi)容物減少，同時(shí)也造成 MCV 上升速度有所減緩。此外，胞內(nèi)血紅蛋白的減少使得紅細(xì)胞內(nèi)部結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，在通過(guò)血細(xì)胞分析儀檢測(cè)激光束時(shí)無(wú)法檢測(cè)到其光散射次數(shù)和電脈沖信號(hào)的改變，導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果中 RBC 減少，而恒溫槽中溫度的精準(zhǔn)控制則可避免這些問(wèn)題。

綜上所述，在豬全血中加入適量濃度（0.05 mol ·L?1）海藻糖并保存在溫度更加穩(wěn)定的環(huán)境中可以有效提高全血的保存品質(zhì)。

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