萘普生鈉質量標準統一化研究

熊欣，周敏，夏紅英，劉慧，鐘振華

江西省藥品檢驗檢測研究院，國家藥品監(jiān)督管理局中成藥質量評價重點實驗室，江西省藥品與醫(yī)療器械質量工程技術研究中心，江西 南昌 330029

萘普生鈉為非甾體抗炎藥，其片劑為甲類非處方藥，口服吸收迅速而完全。主要用于風濕性關節(jié)炎等，對各種疾病引起的疼痛和發(fā)熱有良好緩解作用。各國藥典收載的萘普生鈉原料藥及片劑標準中，項目及試驗方法不盡相同，存在同一品種不同檢驗標準現象。本試驗通過對比各國藥典及國內企業(yè)的執(zhí)行標準，篩選并優(yōu)化檢驗項目，完善具體檢測方法，進一步整合標準，盡量統一萘普生鈉各標準中相同檢驗項目的具體試驗參數，節(jié)約人力物力成本，簡化試驗操作流程，減少環(huán)境污染，保證測定結果的真實可靠性，進而確保臨床用藥的安全性。

《中國藥典》2020 年版二部（以下簡稱“ChP2020”）、歐洲藥典（以下簡稱“EP10.0”）、美國藥典（以下簡稱“USP-NF2022”）均收載了萘普生鈉原料藥［1-3］，項目與方法均有差異。此外，國內兩個原料藥生產企業(yè)均有注冊標準，甲企業(yè)標準為YBH05492017，乙企業(yè)標準為YBH02692015。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

LC-20AD 型液相色譜儀（日本島津公司）；Autopol Ⅳ-T/V 型旋光儀（美國魯道夫公司）；Waters 2695 型液相色譜儀（美國沃特世科技有限公司）；Agilent 7890B 型氣相色譜儀（美國安捷倫科技公司）；MS105 型電子天平（精密度：十萬分之一，METTLER TOLEDO）；ML204 型電子天平（精密度：萬分之一，METTLER TOLEDO）。

1.2 試藥

萘普生鈉對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號100330-201503，含量100%）；萘普生鈉雜質I（中國食品藥品檢定研究院，批號100140-201704，含量100%）；萘普生鈉雜質D（甲企業(yè)提供，批號WS2017001，含量97.2%）；萘普生鈉雜質K（乙企業(yè)提供，批號10198697）；萘普生鈉雜質N（乙企業(yè)提供，批號10198687）；萘普生鈉（甲企業(yè)批號：196 304401；196 304402；196 304403；乙企業(yè)批號：NS170201Z；NS170202Z；NS140504Z；NS130312）。冰醋酸（賽默飛世爾科技有限公司，色譜純）；乙腈（北京百靈威科技有限公司，色譜純）；異丙醇（永華化學科技有限公司，色譜純）；正己烷（永華化學科技有限公司，色譜純）；磷酸二氫鉀（西隴科學股份有限公司，分析純）；甲醇（北京百靈威科技有限公司，色譜純）；磷酸（西隴科學股份有限公司，分析純）；鹽酸（西隴科學股份有限公司，分析純）；氫氧化鈉（西隴科學股份有限公司，分析純）；三氯甲烷（上海實驗試劑有限公司，分析純）；甲苯（TEDIA，色譜純）；二甲亞砜（永華化學科技有限公司，色譜純）。

2 方法與結果

2.1 有關物質

通過比較萘普生鈉2 家企業(yè)標準、各國藥典中萘普生、萘普生鈉及萘普生鈉片有關物質色譜條件可知：（1）ChP2020、USP-NF2022 萘普生鈉有關物質方法為TLC 法，該方法在專屬性、靈敏度、準確性等方面均較HPLC 法差，且使用的展開劑對人體毒性大；結合文獻報道［4-7］，萘普生鈉工藝雜質與降解雜質較多，且大部分雜質均有紫外吸收，薄層色譜法在專屬性、靈敏度、準確性等方面對雜質的分離及量均較難控制。（2）萘普生鈉2 家企業(yè)標準、ChP2020 萘普生、EP10.0 萘普生鈉、USP-NF2022 萘普生鈉片有關物質方法為HPLC 法，ChP2020 萘普生方法中雜質I 為外標法，無系統適用性的限定；雜質I 濃度較小時，易被主成分峰包裹，很難判斷是否檢出。（3）2 家企業(yè)標準的色譜條件在EP10.0 萘普生鈉的基礎上進行了適當調整（流速，柱溫，進樣量），調整的范圍均符合耐用性要求［8］；市場份額較大的甲企業(yè)標準中對其獨有工藝雜質D 進行了單獨控制；乙企業(yè)雜質O 與EP10.0 萘普生有關物質項雜質O 相同，該雜質已在萘普生標準中控制，萘普生鈉中如有也應以鈉鹽存在，故不再對其進行控制；其他雜質與EP10.0 萘普生鈉相同甲企業(yè)標準還控制了雜質D、雜質L（即為ChP2020 萘普生雜質I）的校正因子，說明各企業(yè)根據自身產品的合成工藝及雜質特點，在系統適用性與雜質限度方面進行了更嚴格的控制。各標準HPLC 法涉及色譜條件比較情況詳見表1。

表1 各標準有關物質色譜條件比較情況表

通過試驗可知，ChP2020 萘普生有關物質方法［1］系統適用性試驗中，主成分峰與雜質I 保留時間接近，詳見圖1，雜質I濃度較小時，易被主成分峰包裹，很難判斷是否檢出。故建議增加萘普生鈉系統適用性要求。EP10.0 萘普生鈉有關物質的系統適用性溶液中，各雜質濃度與主成分濃度相當，分離較好。但在甲企業(yè)樣品供試品溶液中雜質I 與主成分峰最為接近，易被高濃度的主成分峰包裹，因此，擬修訂系統適用性溶液的配制方法，在供試品溶液加入限度量濃度的雜質混合溶液，調整色譜條件，以達到更好的分離效果。因擬定系統適用性溶液中采用了雜質K、D、N，故擬修訂雜質列表，增加說明雜質K、D、N 相關情況。同時結合ChP2020 萘普生有關物質色譜條件，使用外標法對雜質I 的量進行控制。詳見圖 2。

圖1 ChP2020方法對照溶液色譜圖

圖2 系統適用性溶液色譜圖

2.1.1 色譜條件以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑（4.6 mm×100 mm，3 μm）；以乙腈-1.36 g/L 磷酸二氫鉀（85%磷酸調pH 至2.0）（38∶62）為流動相；檢測波長為230 nm；流速2.0 mL/min；柱溫50 ℃；進樣量20 μL。

2.1.2 方法學驗證新擬定的有關物質方法能有效分離主成分峰與各雜質峰，精密度（n=6）、重復性（n=6）、耐用性良好。室溫下供試品溶液中雜質量24 h 內基本不變，滿足測定要求，穩(wěn)定性良好。雜質I 在0.020 7～1.035 μg/mL 范圍內呈良好線性，回歸方程為y=55 511x+62.068，r=0.999 9，雜質I 的回收率均在99.8%～101.4%之間，RSD 均為0.5%，回收率良好。雜質I 最低檢測限為0.4 ng，定量限為1.0 ng。

2.1.3 雜質D 校正因子的確定經計算，雜質D 的校正因子不在0.9～1.1 的范圍內，不可采用不加校正因子的主成分自身對照法計算雜質D 的含量。雜質D 校正因子為1.27，約為1.3，詳見表2。

表2 雜質D與萘普生鈉線性試驗結果

2.1.4 限度擬定結合EP10.0 萘普生鈉、企業(yè)標準及樣品的實際測定結果，擬定限度為：供試品溶液色譜圖中如有雜質峰，雜質I 按外標法以峰面積計算，不得過0.1%，雜質D 按校正后的峰面積計算（乘以校正因子1.3）不得大于對照溶液主峰面積（0.1%），其他單個雜質峰面積不得大于對照溶液主峰面積的2 倍（0.2%），各雜質（除雜質I）校正后峰面積的和不得大于對照溶液主峰面積的5 倍（0.5%）。

2.1.5 樣品測定結果采用擬修訂方法對企業(yè)提供7批次樣品進行測定，結果詳見表3。結果表明，2家企業(yè)樣品均符合擬定方法規(guī)定。

表3 擬定方法測定樣品結果

2.2 比旋度

ChP2020 萘普生鈉與乙企業(yè)標準中，比旋度采用的方法是將萘普生鈉與鹽酸反應生成萘普生，對萘普生的比旋度進行測定，規(guī)定同萘普生規(guī)定一致。該方法操作較煩瑣，采用的試劑為三氯甲烷，對人體毒性較大；EP10.0 萘普生鈉、USP-NF2022 萘普生鈉及甲企業(yè)標準則將萘普生鈉溶解在氫氧化鈉溶液中，直接測定其旋光度，該方法操作簡便，試劑毒性較低。因測定比旋度需要的溶液量較多，故將萘普生鈉比旋度測定方法修訂統一為甲企業(yè)標準方法。各標準方法比對情況詳見表4。

2.2.1 擬定方法取樣品約1.0 g，精密稱定，用4.2 g/L 氫氧化鈉溶液溶解制成每1 毫升中約含20 mg 的溶液，測定旋光度。比旋度應為-17.0°至-14.7°。

2.2.2 樣品測定結果因甲企業(yè)標準方法為擬采用方法，故對乙企業(yè)4 批次樣品采用修訂后方法測定比旋度，與原標準方法測定結果比較詳見表5。結果表明，4 批樣品采用擬定方法測得結果均符合規(guī)定。

表5 方法修訂前后比旋度結果比對

2.3 L-萘普生鈉

通過分析生產企業(yè)提供的合成工藝可知，萘普生鈉由D,L-萘普生原料粗品拆分得到D-萘普生后，再與氫氧化鈉溶液反應生成萘普生鈉鹽而得。有必要增訂L-萘普生鈉檢查項，對萘普生鈉中殘留的L-萘普生鈉對映異構體進行限定。甲企業(yè)標準（HPLC 法）、EP10.0 萘普生鈉（HPLC 法）、USPNF2022 萘普生鈉（TLC 法）均收載有L-萘普生的檢查項。與TLC 法比較，HPLC 法專屬性強，定量準確性高。故采用HPLC 法測定萘普生鈉中L-萘普生鈉，擬增訂L-萘普生鈉檢查項。

2.3.1 色譜條件色譜柱：REGIS（S,S）-Whelk-O1手性硅膠柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以冰醋酸-乙腈-異丙醇-正己烷（5∶50∶100∶845）為流動相；檢測波長為263 nm；柱溫30 ℃；流速1.0 mL/min；進樣量20 μL。

2.3.2 方法驗證專屬性破壞試驗結果表明，該方法能有效分離降解雜質與L-萘普生，且未產生對L-萘普生測定有干擾的雜質峰。系統適用性試驗中，L-萘普生與萘普生峰分離度大于8.0。已知雜質O、雜質K、雜質N、雜質I、雜質D、雜質E 及葡辛安與L-萘普生分離度良好，對L-萘普生鈉測定無干擾。L-萘普生鈉檢出限為0.52 ng。系統適用性圖譜詳見圖3。

圖3 L-萘普生鈉系統適用性色譜圖

2.3.3 限度擬定EP10.0 萘普生鈉及甲企業(yè)標準中對L-萘普生鈉限度均為“供試品溶液色譜圖中L-萘普生鈉峰面積不得大于對照溶液主峰面積（2.5%）”，該限度能有效保證萘普生鈉原料藥的質量控制。故將該限度作為擬定限度。

2.3.4 樣品測定結果采用擬修訂方法對企業(yè)提供7批次樣品進行測定，均未檢出L-萘普生鈉。結果詳見表6。

表6 L-萘普生樣品測定結果 %

2.4 殘留溶劑

甲企業(yè)萘普生鈉粗品合成路線的后續(xù)工藝中使用甲苯作為溶劑，企業(yè)自身的拆分工藝中使用甲醇作為溶劑，故該企業(yè)執(zhí)行標準的殘留溶劑項中檢測了甲醇和甲苯的殘留量；乙企業(yè)購買的萘普生粗品有四段合成路線，前兩段工藝使用石油醚及異丙醇作為溶劑，后兩段采用水作為溶劑，企業(yè)自身的拆分工藝中使用甲醇作為溶劑，故該企業(yè)執(zhí)行標準的殘留溶劑項中只檢測了甲醇，而石油醚及異丙醇作為內控指標。結合各企業(yè)生產情況，本試驗對該兩家企業(yè)樣品中的甲醇與甲苯進行測定。

2.4.1 色譜條件色譜柱：DB-WAX（Agilent，30 m× 0.53 μm×1.00 μm）；升溫程序：起始溫度為70 ℃，維持5 min，以每分鐘20 ℃的速率升溫至200℃，保持5 min；進樣口溫度：180 ℃；檢測器溫度：250℃；頂空瓶平衡溫度80 ℃，平衡時間30 min；進樣體積：1.0 mL。

2.4.2 方法驗證系統適用性試驗中，甲醇峰與甲苯峰間分離度為13.4；甲醇在1.009 4～10.094 0 μg/mL范圍內呈良好線性，回歸方程為y=2.583 8x+0.666 4，R2=0.999 6，甲苯在0.955 6～9.556 0 μg/mL 范圍內呈良好線性，回歸方程為y=85.873 1x-15.905 8，r=0.999 6；精密度（n=6）、重復性（n=6）、溶液24 h穩(wěn)定性均良好；甲醇回收率均在100.7%～105.8%之間，RSD 均為2.1%，甲苯回收率均在92.0%～95.9%之間，RSD 均為1.3%，回收率良好；甲醇定量限為1.009 4 μg/ mL，檢出限為0.302 8 μg/mL；甲苯定量限為0.038 2 μg/mL，檢出限為0.011 5 μg/mL。系統適用性圖譜詳見圖4。

圖4 殘留溶劑系統適用性色譜圖

2.4.3 限度擬定ChP2020、甲企業(yè)標準、乙企業(yè)標準及國外藥典均未收載殘留溶劑項。將限度擬定為甲企業(yè)標準中殘留溶劑限度“供試品溶液中如有被測溶劑峰，按外標法以峰面積計算，甲醇的殘留量不得過0.005%，甲苯的殘留量不得過0.005%”。

2.4.4 樣品測定結果采用擬修訂方法對企業(yè)提供7批次樣品進行測定，結果詳見表7。

3 討論

藥品標準理應客觀反映出藥品相關特點，才能確保藥品標準的實施取得預期效果。在新藥品研發(fā)與臨床試驗中，由于時間的緊迫性，部分藥品尚未完善質量標準，檢驗標準也處于探索階段。我國現行藥品質量標準有著諸多種類，針對同一品種，有著不同檢驗標準，造成在藥品質量檢驗中，無法統一藥品標準，影響到藥品檢驗效果［9-11］。因此，有必要進一步規(guī)范萘普生鈉檢驗質量標準，進一步完善具體檢驗方法，保證檢測結果的真實可靠性，進而確保臨床用藥的質量及安全性。本試驗統一萘普生鈉有關物質、比旋度、L-萘普生鈉、殘留溶劑測定方法，各項目方法操作簡便，準確度高，經濟實用，為萘普生鈉合理控制質量提供檢驗依據。