鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉制劑工藝與穩(wěn)定性考察研究

程海鵬　楊近越　耿久榮

摘 要：鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉是《中國獸藥典》上為數(shù)不多的復(fù)方抗生素獸藥，抗菌譜和活性比單方制劑更廣更強(qiáng)，是抗生素聯(lián)合應(yīng)用的典范之一。市售部分產(chǎn)品采用粉碎工藝增加溶解性，有些采取添加抗結(jié)劑防止板結(jié)，少量產(chǎn)品進(jìn)行輻照滅菌后用于注射。本文就鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉的制劑工藝及其產(chǎn)品穩(wěn)定性進(jìn)行了試驗(yàn)研究，以期能對本品制劑工藝和現(xiàn)場使用有一定指導(dǎo)作用。

關(guān)鍵詞：鹽酸大觀霉素；鹽酸林可霉素；制劑工藝；臨床應(yīng)用

中圖分類號(hào)：S943? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：B 文章編號(hào)：1673-1085（2023）07-0001-08

鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉可用在5～7日齡雛雞革蘭氏陰性細(xì)菌、革蘭氏陽性細(xì)菌及支原體感染[1]，能有效控制雛雞大腸桿菌和支原體混合感染，有效防控氣囊炎和心包炎[2]。羅永江等[3]發(fā)現(xiàn)，鹽酸林可—硫酸大觀霉素可溶性粉在治療霉形體病或與大腸桿菌混合感染時(shí)顯效較快，無明顯毒副作用，是理想的抗禽霉形體的復(fù)方藥。田玲等[4]用鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素注射液治療仔豬腹瀉，結(jié)果治愈率達(dá)到96.7%，總有效率達(dá)到100%，顯著好于痢菌凈和氟苯尼考。章壽民等[5]發(fā)現(xiàn)林可—壯觀合劑能有效防治豬支原體肺炎。鹽酸林可霉素－硫酸大觀霉素混懸注射液除具有治療作用外，還能促進(jìn)豬、雞生長及顯著改善飼料報(bào)酬，使料肉比降低 5.39%[6]。

大觀霉素對部分支原體（如雞毒支原體、火雞支原體、滑液支原體等）敏感，對多種革蘭氏陰性菌有抑制作用[7]；作用于細(xì)菌核蛋白體30s亞單位，有效抑制細(xì)菌細(xì)胞蛋白質(zhì)合成[8]。大觀霉素有關(guān)物質(zhì)來源于發(fā)酵過程，主要有（4R）-雙氫大觀霉素和（4S）-雙氫大觀霉素，前者是有效組分，后者為雜質(zhì)[9-10]。大觀霉素對熱較敏感，尤其水溶液中半縮酮結(jié)構(gòu)非常不穩(wěn)定，易發(fā)生開環(huán)和閉環(huán)[11]。鹽酸林可霉素主要針對革蘭氏陽性菌，抗菌性可與大觀霉素有效協(xié)同，對一部分革蘭氏陰性菌也有一定抗性[6]；容易富集于骨組織，對各種厭氧菌有很好的抗菌作用[12]。林可霉素與細(xì)菌核糖體的 50s亞基相互作用，抑制細(xì)菌的蛋白質(zhì)合成[7]。鹽酸林可霉素理化性質(zhì)非常穩(wěn)定，在70 ℃保質(zhì)期可以到6個(gè)月，并且保存過程中無需遮光，其水溶液在室溫下保持2年不失活[13]。

因大觀霉素內(nèi)服吸收率僅7%，林可霉素生物利用度為30%～40%[7]，兩者口服生物利用度都比較低，所以臨床經(jīng)常溶于油乳劑滅活疫苗注射使用。鹽酸大觀霉素結(jié)晶水多（5個(gè)結(jié)晶水，水分16%～20%）[1]，使得鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉含水分高，在生產(chǎn)、儲(chǔ)運(yùn)和使用過程中極易結(jié)塊變色，發(fā)生性狀、有關(guān)物質(zhì)和含量等指標(biāo)的變化，甚至出現(xiàn)不符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況。本文就鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉不同制劑工藝和生產(chǎn)條件對產(chǎn)品穩(wěn)定性的影響進(jìn)行試驗(yàn)，以確定更好的工藝條件，避免不恰當(dāng)?shù)纳a(chǎn)方式給產(chǎn)品帶來不利影響。

1? 儀器與試藥

1.1 儀器

安捷倫高效液相色譜儀1260II[G7111A型號(hào)四元泵，G7129A型號(hào)自動(dòng)進(jìn)樣器，G7116A型號(hào)柱溫箱，G7114A型號(hào)檢測器，C.01.10（287）版本色譜工作站]，抑菌圈測量儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)有限公司），生化培養(yǎng)箱（德國賓德），水分測定儀（北京先驅(qū)威鋒技術(shù)有限公司），十萬分之一天平（梅特勒公司），薄層成像系統(tǒng)（德國德賽克科技有限公司）。

1.2 試驗(yàn)藥品及試劑

大觀霉素標(biāo)準(zhǔn)品，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)：K0261705，效價(jià)：644單位/mg。林可霉素，中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所，批號(hào)：K0102002，含量：84.9%。其余試劑：甲醇，色譜級(jí)；硼砂、磷酸、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀，都為分析純。

2? 樣品及方法

2.1 樣品的制備

鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉，規(guī)格：5 g；大觀霉素2 g（200萬IU）與林可霉素1 g（按C18H34N2O6S計(jì)）。原料：鹽酸大觀霉素，批號(hào)3232009035，山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司。鹽酸林可霉素，批號(hào)190122022，河南天方藥業(yè)有限公司。

2.1.1 樣品1 鹽酸大觀霉素、鹽酸林可霉素和葡萄糖粉按《中國獸藥典》中本品制法制作樣品，完成配制、混合，并即時(shí)用市售產(chǎn)鋁箔袋（單面14絲，PET 2絲+VMPET 2+PE 8絲+PET 2絲）分裝封口。生產(chǎn)環(huán)境濕度45%±5%，溫度21℃±2℃，標(biāo)記為樣品1，三批的批號(hào)分別為21010401、21010402、21010403。

2.1.2 樣品2 制樣環(huán)境同樣品1。按樣品1制法，混合后在平盤均勻放置，厚度不超過0.5 cm，在環(huán)境濕度65%±2%暴露4 h，標(biāo)記為樣品2，三批的批號(hào)分別為21010501、21010502、21010503。

2.1.3 樣品3 制樣環(huán)境同樣品1。鹽酸大觀霉素、鹽酸林可霉素和葡萄糖粉分別進(jìn)行粉碎，全部通過六號(hào)篩（100目），再完成配制、混合，并即時(shí)用市售產(chǎn)品鋁箔袋分裝封口，標(biāo)記為樣品3，三批的批號(hào)分別為21010601、21010602、21010603。

2.1.4 樣品4 制樣環(huán)境同樣品1。制樣過程中用羥丙基倍他環(huán)糊精替代總制樣量中6%葡萄糖粉，增強(qiáng)產(chǎn)品抗結(jié)性，標(biāo)記為樣品4，三批的批號(hào)分別為21010701、21010702、21010703。

2.1.5 樣品5 制樣環(huán)境同樣品1。? 按樣品1制法，用塑料袋（單面15絲，PE3絲+PET12絲）包裝封口后，在北京鴻儀四方輻射技術(shù)股份有限公司經(jīng)60Co-r射線用5kGy輻照劑量滅菌0.5 h，標(biāo)記為樣品5，三批的批號(hào)分別為21010801、21010802、21010803。

2.2 試驗(yàn)方法

加速試驗(yàn)：按照《中國獸藥典》在溫度40℃±2℃，相對濕度75%±5%的條件下放置6個(gè)月。在試驗(yàn)期間第0、1、2、3、6個(gè)月取樣檢測[1]。

依據(jù)《中國獸藥典》中鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，考察5個(gè)樣品穩(wěn)定性，監(jiān)測性狀（白色或類白色粉末）、外觀均勻度（色澤均勻，無花紋與色斑）、粒度[100%通過五號(hào)篩（80目）]、水分（小于等于15%）、林可霉素B含量（不得超過林可霉素與林可霉素B峰面積和的5.0%）、大觀霉素含量（應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%）和林可霉素含量（應(yīng)為標(biāo)示量的90.0%～110.0%）[1]。

3? 試驗(yàn)結(jié)果

3.1 穩(wěn)定性結(jié)果

樣品1、樣品2、樣品3、樣品4、樣品5的加速試驗(yàn)結(jié)果分別見表 1、表2、表3、表4、表5。

表1樣品1結(jié)果顯示，在符合獸藥GMP要求的環(huán)境和規(guī)程條件下生產(chǎn)的鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉，在6個(gè)月考察期中，各監(jiān)測項(xiàng)均符合質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)要求。其中，水分、林可霉素B略有上升，大觀霉素和林可霉素含量有較明顯下降。

樣品2模擬生產(chǎn)或使用過程產(chǎn)品在較高濕度環(huán)境下靜態(tài)裸露4 h，從3個(gè)月開始，性狀、外觀均勻度和粒度項(xiàng)均不符合標(biāo)準(zhǔn)要求。雖然水分項(xiàng)始終合格，但在0～6個(gè)月時(shí)所有指標(biāo)均比樣品1有明顯提高。

樣品3參考部分企業(yè)的工藝對所有物料都進(jìn)行粉碎，以增加溶解度。在6個(gè)月時(shí)，樣品3的性狀、外觀均勻度和粒度項(xiàng)均不符合標(biāo)準(zhǔn)要求。樣品3的穩(wěn)定性好于樣品2，說明物料粉碎全部通過六號(hào)篩，對穩(wěn)定性的影響小于產(chǎn)品暴露在濕度65%±2%的環(huán)境4 h。但樣品3的穩(wěn)定性，明顯低于樣品1。

樣品4添加了水溶性抗結(jié)劑，各時(shí)間段的所有項(xiàng)目都符合要求。結(jié)果顯示各項(xiàng)優(yōu)于樣品1，明顯優(yōu)于樣品2和3。

樣品5參考個(gè)別企業(yè)的工藝對產(chǎn)品進(jìn)行輻照滅菌，便于臨床應(yīng)用于注射，發(fā)現(xiàn)輻照滅菌對產(chǎn)品穩(wěn)定性產(chǎn)生了非常明顯的影響。其中，性狀、外觀均勻度和粒度在1個(gè)月時(shí)不符合標(biāo)準(zhǔn)要求，6個(gè)月時(shí)所有項(xiàng)目基本都不達(dá)標(biāo)。

3.2 溶解性

樣品1～5號(hào)0個(gè)月溶解度見表6。

4? 結(jié)論

（1）鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉生產(chǎn)過程中，如樣品1按照獸藥GMP要求嚴(yán)格控制物料裸露環(huán)境的溫濕度，試驗(yàn)結(jié)果皆符合要求。樣品2在六個(gè)月考察過程中，水分項(xiàng)都符合要求；但在3個(gè)月時(shí)，產(chǎn)品中出現(xiàn)黃色粉粒，外觀均勻度檢測發(fā)現(xiàn)黃色色斑，不符合要求。

（2）通過粉碎（100%通過五號(hào)篩提高到通過六號(hào)篩）有助于提高產(chǎn)品溶解性，純化水中樣品3溶解度比樣品1增加了1.5 g。但因物料表面積增加，吸濕性增強(qiáng)，在6個(gè)月時(shí)性狀、外觀均勻度和粒度都不符合要求。

（3）產(chǎn)品中添加6%羥丙基倍他環(huán)糊精，比較明顯地增強(qiáng)了產(chǎn)品的穩(wěn)定性和溶解性。在長期穩(wěn)定性考察過程中，36個(gè)月時(shí)樣品1和4依然合格，但樣品4各項(xiàng)指標(biāo)變化幅度更小、更穩(wěn)定，同時(shí)溶解性依然最優(yōu)。

（4）鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉經(jīng)60Co-r用5kGy輻照滅菌，無菌檢測項(xiàng)符合要求，但對產(chǎn)品穩(wěn)定性造成了極大影響。產(chǎn)品在1個(gè)月時(shí)，性狀、外觀均勻度和粒度都不符合要求；林可霉素B在3個(gè)月時(shí)兩批不符合要求；基本所有項(xiàng)目在6個(gè)月時(shí)都不符合要求。含水量高的制劑，因照射而產(chǎn)生水的輻照分解物H和OH自由基或H2O2、H2O過氧基等，都會(huì)快速增加有機(jī)成分的分解率。因此，水分含量高的獸藥產(chǎn)品，很難既滅菌消毒又能保全產(chǎn)品[14]。

（5）林可霉素中有A、B等組分，其中林可霉素中A有最高的藥效和最低的毒性；但林可霉素B組分，其藥效只有A組分的四分之一，而毒性要大很多，而且B組分是生產(chǎn)林可霉素最主要的副產(chǎn)品[15]。林可霉素在不同pH值和溫度范圍內(nèi)降解機(jī)理不同，會(huì)降解為含林可霉素B在內(nèi)的有關(guān)物質(zhì)，降解反應(yīng)服從一級(jí)反應(yīng)動(dòng)力學(xué)規(guī)律。降解為需能過程，給予能量會(huì)提高降解速度[16-17]。

鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉水分高，生產(chǎn)儲(chǔ)運(yùn)過程中控制不當(dāng)容易出現(xiàn)有效期內(nèi)產(chǎn)品不合格的情況，穩(wěn)定性明顯差于鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素預(yù)混劑[100 g：（2.2+2.2）g]。預(yù)混劑穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果顯示，林可霉素含量下降不高于1.59%，大觀霉素含量下降不高于1.08%，其他項(xiàng)目變化不明顯[18]。分析原因應(yīng)是預(yù)混劑含量低、產(chǎn)品水分少以及性狀為淡褐色導(dǎo)致有色度微小變化表現(xiàn)不明顯等有關(guān)。上述試驗(yàn)結(jié)果確認(rèn)了本品生產(chǎn)過程中需要嚴(yán)格控制環(huán)境溫濕度和物料暴露時(shí)間，即溫度控制在18～23℃、濕度為35%～50%，僅在除塵投料口和制劑分裝過程中瞬時(shí)暴漏，保證在獸藥GMP規(guī)范要求的相對封閉設(shè)備中完成自動(dòng)化生產(chǎn)。本品適宜用粒度達(dá)標(biāo)的鹽酸大觀霉素、鹽酸林可霉素、水溶性抗結(jié)劑和所需葡萄糖等原輔料直接混合包裝，不宜用或粉碎為過細(xì)物料，否則影響產(chǎn)品穩(wěn)定性。如果能適量添加水溶性抗結(jié)劑，有助于提高產(chǎn)品的穩(wěn)定性和溶解度，嚴(yán)禁對本品進(jìn)行輻照滅菌，否則將很快失效。儲(chǔ)運(yùn)過程中也要遵守常溫密閉保存的要求，才能保證產(chǎn)品始終符合標(biāo)準(zhǔn)要求。希望通過本試驗(yàn)，給予鹽酸大觀霉素鹽酸林可霉素可溶性粉生產(chǎn)、儲(chǔ)運(yùn)和使用環(huán)節(jié)一些指導(dǎo)，使得產(chǎn)品能有更好的臨床效果。

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Spectinomycin Hydrochloride and Lincomycin Hydrochloride Soluble Powder Preparation Technology and Stability Study

CHENG Haipeng，YANG Jinyue，GENG Jiurong

（Beijing Kang Mu Biotechnology Co.， LTD，Beijing? ?101109， China）

Abstract： Spectinomycin hydrochloride and lincomycin hydrochloride soluble powder is one of the few compound antibiotic veterinary drugs listed in the Chinese Veterinary Pharmacopoeia. Its antibacterial spectrum and activity are broader and stronger than that of monotherapy preparation， and it is one of the models of antibiotic combined application. Some products on the market adopt grinding technology to increase the solubility while others adopt the addition of anti-caking agent to prevent binding， and a small number of products are sterilized by irradiation for injection. In this paper， the preparation technology and stability of spectinomycin hydrochloride and lincomycin hydrochloride soluble powder were studied in order to provide some guidance for the process and field use of this product.

Keywords：? Spectinomycin hydrochloride; Lincomycin hydrochloride; Preparation process; Clinical application