p16、Ki-67在子宮內(nèi)膜癌組織中的表達(dá)及與患者預(yù)后的關(guān)系

黃艷艷，賈利萍，婁雪玲

1安陽(yáng)市第六人民醫(yī)院婦科，河南 安陽(yáng) 455000

2鄭州大學(xué)第三附屬醫(yī)院婦科，鄭州 450000

子宮內(nèi)膜癌是常見(jiàn)的惡性腫瘤，近年來(lái)發(fā)病率逐年上升，且越來(lái)越年輕化[1]。多項(xiàng)研究指出，與其他生殖系統(tǒng)惡性腫瘤相比，子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后相對(duì)較好，這是由于早期子宮內(nèi)膜癌患者會(huì)出現(xiàn)不規(guī)則的陰道出血癥狀，使得多數(shù)患者可在早期確診，預(yù)后一般較好[2-3]。但研究顯示，早期子宮內(nèi)膜癌的復(fù)發(fā)率超過(guò)10%，仍會(huì)威脅女性生命健康[4]。目前，臨床對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病原因及機(jī)制并未完全清楚，分子生物學(xué)研究指出，抑癌基因失活和突變與癌基因的非正常激活可能在腫瘤的發(fā)生、發(fā)展中發(fā)揮重要作用[5]。子宮內(nèi)膜癌相關(guān)的癌基因p16在多種惡性腫瘤中均有所表達(dá)；原癌基因Ki-67是細(xì)胞核相關(guān)抗原，可參與DNA 合成、細(xì)胞增殖等過(guò)程?；诖?，本研究探討p16、Ki-67 在子宮內(nèi)膜癌中的表達(dá)及與患者臨床特征和預(yù)后的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2018 年2 月至2020 年1 月安陽(yáng)市第六人民醫(yī)院收治的子宮內(nèi)膜癌患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)病理學(xué)檢查證實(shí)為子宮內(nèi)膜癌；②存在陰道不規(guī)則流血、排液等癥狀；③術(shù)前未接受過(guò)放化療；④臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他類型惡性腫瘤；②合并凝血異常；③合并心、肝、肺等功能障礙；④存在其他類型嚴(yán)重婦科疾病。依據(jù)納入和排除標(biāo)準(zhǔn)，本研究共納入89 例子宮內(nèi)膜癌患者，年齡33～71 歲，平均（53.68±5.79）歲。另選取同期在安陽(yáng)市第六人民醫(yī)院進(jìn)行子宮切除的75 例子宮肌瘤患者，年齡36～68 歲，平均（55.21±6.43）歲。兩組患者年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)通過(guò)，所有患者均知情同意。

1.2 免疫組化法檢測(cè)兩組患者的p16、Ki-67 表達(dá)情況

取89 例子宮內(nèi)膜癌患者的子宮內(nèi)膜癌組織和75 例子宮肌瘤患者的正常子宮內(nèi)膜組織，石蠟包埋和切片，二甲苯脫蠟，乙醇脫水，采用鏈霉抗生物素蛋白-過(guò)氧化物酶（streptavidin-peroxidase，SP）法檢測(cè)p16、Ki-67 表達(dá)情況。滴加鼠抗人p16 多克隆抗體、鼠抗人Ki-67 多克隆抗體，稀釋濃度均為1∶100，以磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）代替一抗作陰性對(duì)照，二氨基聯(lián)苯胺（diaminobenzidine，DAB）顯色，顯微鏡下觀察。判定標(biāo)準(zhǔn)：依據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞所占比例及染色強(qiáng)度進(jìn)行評(píng)分[6-7]：無(wú)陽(yáng)性細(xì)胞計(jì)0 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＜11%計(jì)1 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例11%～50%計(jì)2 分，陽(yáng)性細(xì)胞所占比例＞50%計(jì)3 分；無(wú)著色計(jì)0 分，淡黃色染色計(jì)1 分，棕黃色染色計(jì)2 分，棕褐色染色計(jì)3 分。將陽(yáng)性細(xì)胞所占比例評(píng)分和染色強(qiáng)度評(píng)分相乘，≤3 分為陰性，≥4 分為陽(yáng)性。

1.3 隨訪

采用門診、電話等方式對(duì)兩組患者進(jìn)行為期2年的隨訪，記錄患者的預(yù)后情況。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 22.0 軟件對(duì)所有數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，組間比較采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以例數(shù)和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的影響因素采用Logistic 回歸模型分析；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 p16、Ki-67 表達(dá)情況的比較

子宮內(nèi)膜癌組織中p16的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常子宮內(nèi)膜組織，Ki-67 的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常子宮內(nèi)膜組織，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表1）

表1 子宮內(nèi)膜癌組織和正常子宮內(nèi)膜組織中p16、Ki-67表達(dá)情況的比較[n（%）]

2.2 不同臨床特征子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中p16、Ki-67 表達(dá)情況的比較

不同年齡、肌層浸潤(rùn)深度子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中p16 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（International Federation of Gynecology and Obstetrics，F(xiàn)IGO）分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中p16蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別低于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不同年齡子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；FIGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度＞1/2 子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度≤1/2 的患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中p16、Ki-67 表達(dá)情況的比較

2.3 子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的影響因素分析

術(shù)后隨訪2 年，89 例子宮內(nèi)膜癌患者死亡24例，生存65 例。單因素分析結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、p16 表達(dá)情況、Ki-67表達(dá)情況均可能與子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后有關(guān)（P＜0.05）；多因素分析結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、p16 陰性表達(dá)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)均為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素（P＜0.05）。（表3）

3 討論

子宮內(nèi)膜癌是生殖系統(tǒng)常見(jiàn)的惡性腫瘤，其病變主要位于子宮內(nèi)膜上皮，好發(fā)于中老年女性[8]。目前，子宮內(nèi)膜癌的發(fā)病原因尚未完全明確，但有研究指出，其發(fā)病與高齡、激素藥物濫用及肥胖有一定關(guān)系[9]。隨著醫(yī)學(xué)技術(shù)的進(jìn)步，臨床對(duì)于子宮內(nèi)膜癌的診治取得了較大進(jìn)展，早期子宮內(nèi)膜癌患者采取手術(shù)治療的生存率高達(dá)90%，但中晚期患者的生存率仍相對(duì)較低[10]。研究指出，準(zhǔn)確判斷子宮內(nèi)膜癌的生物學(xué)行為及患者的預(yù)后情況，并給予針對(duì)性治療，對(duì)改善患者的預(yù)后尤為重要[11]。

p16基因?yàn)橐职┗虻囊环N，其表達(dá)產(chǎn)物p16蛋白為細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶（cyclin dependent kinase，CDK）4/6 的抑制劑，能對(duì)細(xì)胞周期發(fā)揮負(fù)向調(diào)節(jié)作用，抑制細(xì)胞惡性增殖。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中p16 蛋白的陽(yáng)性表達(dá)率低于正常子宮內(nèi)膜組織，提示p16 可能在子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程中發(fā)揮重要作用。這可能是因?yàn)閜16基因突變可導(dǎo)致細(xì)胞周期蛋白D1（cyclin D1）/CDK6、CDK4/磷酸化視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤蛋白（phosphorylated retinoblastoma protein，pRb）/轉(zhuǎn)錄因子2（transcription factor 2，E2F）通路失調(diào)，從而引起細(xì)胞過(guò)度增殖，引起腫瘤[12]。此外，本研究結(jié)果顯示，F(xiàn)IGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中p16蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別低于FIGO分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。有研究指出，p16 是評(píng)估腫瘤性質(zhì)及患者預(yù)后的重要指標(biāo)[13]。本研究進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，p16 陰性表達(dá)是子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，p16可用于評(píng)估子宮內(nèi)膜癌患者的預(yù)后。

Ki-67 是一種主要存在于增殖細(xì)胞核內(nèi)的非組蛋白核蛋白，其在細(xì)胞增殖的G1、S、G2和M 期中均有所表達(dá)，但在G0期不表達(dá)[14]。研究指出，Ki-67 在細(xì)胞分裂的不同階段的表達(dá)情況不同，使其對(duì)于反映細(xì)胞分裂增殖狀態(tài)有重要意義，故推測(cè)可將其作為檢測(cè)腫瘤細(xì)胞增殖活性的可靠指標(biāo)[15]。本研究結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67 的陽(yáng)性表達(dá)率高于正常子宮內(nèi)膜組織，表明Ki-67 在子宮內(nèi)膜癌組織中異常表達(dá)，可能與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生有密切關(guān)系。進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)IGO 分期為Ⅲ～Ⅳ期、分化程度為中低分化、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度＞1/2 子宮內(nèi)膜癌患者子宮內(nèi)膜癌組織中Ki-67 蛋白陽(yáng)性表達(dá)率分別高于FIGO 分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為高分化、無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、肌層浸潤(rùn)深度≤1/2 患者，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），提示Ki-67 可能參與子宮內(nèi)膜癌的發(fā)生、發(fā)展過(guò)程。相關(guān)研究結(jié)果顯示，Ki-67 與惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展、轉(zhuǎn)移有關(guān)。本研究發(fā)現(xiàn)，Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)是子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，或可將Ki-67 作為評(píng)估子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的潛在指標(biāo)。

綜上所述，p16、Ki-67 在子宮內(nèi)膜癌組織中表達(dá)異常，p16 陰性表達(dá)、Ki-67 陽(yáng)性表達(dá)均為子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，可作為預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌患者預(yù)后的分子標(biāo)志物和潛在治療靶點(diǎn)。