鼠源Desmin基因克隆表達及其生物信息學分析

張文 李夢茹 王菁 張傳亮 段辰星 宋丹丹 黃茂發(fā) 羅廷榮 梁晶晶 李曉寧

摘要：【目的】構建鼠源III型中間絲蛋白Desmin真核/原核表達載體，明確鼠源Desmin蛋白生物學功能，為在體外及細胞內表達系統(tǒng)中鑒定Desmin互作蛋白及探索其作用網(wǎng)絡提供理論依據(jù)?！痉椒ā客ㄟ^RT-PCR克隆Desmin基因，分別構建原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag和真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag，以IPTG對原核表達載體進行誘導表達，并通過ProtParam、ProtScale、TMHMM-2.0、SignalP-5.0、SOPMA和SWISS-MODEL等在線軟件對Desmin蛋白進行生物信息學分析?！窘Y果】鼠源Desmin基因長1410 bp，選用pGEX-4T-1載體和pcDNA3.0載體分別成功構建了原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag和真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag。原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag轉化大腸桿菌后經(jīng)IPTG誘導，成功表達出70 kD的融合蛋白Desmin-Flag；真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag轉染BHK-21細胞，通過Western blotting在56 kD處檢測到Flag標簽，即Desmin蛋白能在真核細胞成功表達，且主要定位在細胞質。Desmin蛋白由470個氨基酸殘基組成，分子量為54 kD，分子式為C2299H3722N688O755S13，理論等電點（pI）為5.21，屬于不穩(wěn)定蛋白；蛋白脂溶系數(shù)為79.94，平均親水系數(shù)（GRAVY）為-0.721，推測為親水性蛋白；無跨膜結構域和信號肽；其二級結構由α-螺旋（占67.59%）、無規(guī)則卷曲（占22.39%）、β-轉角（占1.92%）和延伸鏈（占8.10%）構成?！窘Y論】鼠源Desmin蛋白在原核表達體系中主要以包涵體形式進行表達，在真核細胞中表達主要定位于細胞質，呈骨架結構分布，其理化性質不穩(wěn)定，屬親水性蛋白，無跨膜結構域和信號肽。Desmin作為一種重要的III型中間絲蛋白，在神經(jīng)肌肉組織信號轉導及與相關蛋白發(fā)生相互作用方面發(fā)揮重要作用。

關鍵詞：鼠源；Desmin基因；原核表達；真核表達；生物信息學分析

中圖分類號：S865.13? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼：A 文章編號：2095-1191（2023）02-0609-09

Abstract：【Objective】To construct an eukaryotic/prokaryotic expression vector for murine type III intermediate filamentary Desmin protein， to clarify the biological functions of murine Desmin protein， and to provide a theoretical basis for identifying Desmin-interacting proteins and exploring their action networks in in vitro and intracellular expression systems. 【Method】The Desmin gene was cloned by RT-PCR， and the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-Desmin-Flag and the eukaryotic expression vector pcDNA3.0-Desmin-Flag were constructed respectively， and the expression of the prokaryotic expression vector was induced by IPTG. ProtParam， ProtScale， TMHMM-2.0， SignalP-5.0， SOPMA and SWISS-MODEL were used for bioinformatics analysis of Desmin protein. 【Result】The murine Desmin gene was 1410 bp long. pGEX-4T-1 vector and pcDNA3.0 vector were used to successfully construct the prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-Desmin-Flag and the eukaryotic expression vector pcDNA3.0-Desmin-Flag respectively. Prokaryotic expression vector pGEX-4T-1-Desmin-Flag was transformed into Escherichia coli and successfully expressed a 70 kD fusion protein Desmin-Flag， after induction by IPTG. The eukaryotic expression vector pcDNA3.0-Desmin-Flag was transfected with BHK-21 cells and the Flag tag was detected at 56 kD by Western blotting， in other words，the Desmin protein was successfully expressed in eukaryotic cells and was mainly localized in the cytoplasm. Desmin protein consisted of 470 amino acids residues with a molecular weight of 54 kD， a molecular formula of C2299H3722N688O755S13 and a theoretical isoelectric point （pI） of 5.21， which was an unstable protein； its lipolysis coefficient was 79.94 and its mean hydrophilicity coefficient （GRAVY） was -0.721. It was presumed to be a hydrophilic protein； there was no transmembrane structural domain and signal peptide； its secondary structure consisted of α-helix （67.59%）， random coil （22.39%）， β-turn （1.92%） and extended chain （8.10%）. 【Conclusion】In the prokaryotic expression system， murine Desmin protein is mainly expressed in the form of inclusion bodies， while in eukaryotic cells， it is mainly expressed in the cytoplasm， with skeletal structure distribution， unstable physical and chemical properties， and no transmembrane domain or signal peptide. It is a hydrophilic protein， Desmin， as an important type III intermediate filament protein， plays an important role in signal transduction and interaction with related proteins in neuromuscular tissue.

Key words： murine； Desmin gene； prokaryotic expression； eukaryotic expression； bioinformatics analysis

Foundation items：National Natural Science Foundation of China （31902311）

0 引言

【研究意義】動物細胞由細胞膜、細胞漿、細胞核、細胞骨架及細胞器組成，維持其正常功能很大程度上取決于細胞的機械性能，而細胞骨架的完整性決定著細胞機械性能（Charrier et al.，2018）。細胞骨架由微管（Microtubule）、微絲（Microfilament）和中間絲（Intermediate filament）構成。各類真核細胞都包含有微絲和微管，高級真核細胞還特有中間絲。中間絲于1968年首次在肌肉中被描述，此后在生化鑒定中發(fā)現(xiàn)III型中間絲蛋白Desmin（Gomes et al.，2022）。大多數(shù)疾病會引起細胞骨架發(fā)生變化，其中又以中間絲變化最顯著。根據(jù)其分布位置及功能，可將中間絲蛋白分成5種類型：I型為細胞角蛋白（Cytokeratin，CK），分布在上皮細胞；II型為毛發(fā)角蛋白（Hair keratin），分散在毛發(fā)及其他附屬器官；III型為Desmin蛋白，基本分布在肌肉中（Joanne et al.，2021）；IV型為神經(jīng)原纖維蛋白（Internexin nestin synemin syncoilin），分布在神經(jīng)纖維和肌纖維等；V型為核層蛋白，廣泛存在于各種細胞中。Desmin是一種肌肉特異性蛋白，在維持肌肉機械完整性和肌肉組織收縮性方面發(fā)揮重要作用（Paulin and Li，2004；Hakibilen et al.，2022），因此開展Desmin基因生物學特性研究對揭示神經(jīng)肌肉組織信號轉導作用機理具有重要意義。【前人研究進展】近年來的中間絲生物學研究結果表明，細胞骨架張力、細胞核形狀所體現(xiàn)的機械化學信號是調節(jié)組織發(fā)育及其維護的基礎。尤其是在肌肉中，機械力的正確傳播和感知需要多個細胞質和細胞核成分的協(xié)調，而這種胞內通信的主要分子就是Desmin（Capetanaki et al.，2007，2015）。Desmin不僅將收縮的肌原纖維連接到質膜、細胞核和線粒體，還能與線粒體直接相互作用。Desmin突變或缺乏引起的神經(jīng)網(wǎng)絡紊亂致使肌原纖維組織損害，進而導致線粒體分布、形態(tài)及其功能發(fā)生變化（Dayal et al.，2020）。Desmin蛋白還能調節(jié)蛋白平衡及細胞大小，在骨骼肌中Desmin動力學的變化可促進分解代謝，即對環(huán)境變化的適應性反應（Agnetti et al.，2021）；Desmin蛋白在營養(yǎng)不良肌肉的萎縮、生物性能和脆弱性中也發(fā)揮著重要作用（Ferry et al.，2020）。當Desmin纖維網(wǎng)絡丟失，肌纖維中的Desmin形成異常聚集體，引起的相關疾病特征為非壓實型心肌病、心臟傳導缺陷和冠狀動脈夾層（Tamiya et al.，2020），臨床表現(xiàn)為異質性，如骨骼肌病、心肌病、平滑肌病及呼吸缺陷等（Goldfarb and Dalakas，2009）。還有研究表明，Desmin蛋白對于竇房結的結構及功能至關重要，對心律失常的影響十分顯著（Mavroidis et al.，2020），缺乏Desmin蛋白會導致神經(jīng)肌肉接頭的結構和功能障礙（Eiber et al.，2020）。Winter等（2019）研究發(fā)現(xiàn)，當骨骼肌蛋白穩(wěn)態(tài)失衡時，機體會產生熱休克蛋白，而加速Desmin及其伴侶分子發(fā)生轉移，進而導致細胞骨架和肌纖維發(fā)生障礙。Langer等（2021）研究證實，Desmin基因突變后，即使大鼠偏心負荷其骨骼肌也不受急性肌肉損傷的影響。此外，Desmin蛋白可作為細胞核內的轉錄調節(jié)劑（Kural-Mangit et al.，2021），即揭示Desmin的核功能可為研究其生物學意義提供新見解?！颈狙芯壳腥朦c】目前，針對人類Desmin蛋白已有深入研究，但有關于鼠源Desmin的研究相對較少，因此亟待通過構建真核/原核表達載體及開展生物信息學分析進一步揭示鼠源Desmin蛋白的生物學特性?！緮M解決的關鍵問題】通過構建鼠源Desmin基因真核/原核表達載體并進行表達，明確鼠源Desmin蛋白生物學功能，為在體外及細胞內表達系統(tǒng)中鑒定Desmin互作蛋白及探索其作用網(wǎng)絡提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

BHK-21細胞、pcDNA3.0載體、pGEX-4T-1載體、細胞爬片由亞熱帶農業(yè)生物資源保護與利用國家重點實驗室保存提供；總RNA提取試劑盒、膠回收純化試劑盒、氨芐青霉素購自北京索萊寶科技有限公司；大腸桿菌（DH5α和BL21感受態(tài)細胞）、EcoR I/Not I限制性內切酶、質粒小量提取試劑盒、pMD18-T載體及T4 DNA連接酶購自TaKaRa公司；3周齡昆明小白鼠購自廣西醫(yī)科大學實驗動物中心。主要儀器設備：超聲波破碎儀器（JY92-Ⅱ）和分散均質機（S10）購自寧波新芝生物科技股份有限公司；共聚焦掃描成像顯微鏡購自德國Leica公司；分光光度計（NanoDrop-1000）購自Limited基因有限公司。

1. 2 鼠源Desmin基因擴增與測序

使用總RNA提取試劑盒提取昆明小白鼠肌肉組織總RNA，反轉錄合成cDNA作為Desmin基因擴增模板，擴增引物序列信息見表1。PCR反應體系25.0 μL：Max PCR Master Mix（2×Premix）12.5 μL，上、下游引物各1.0 μL，cDNA模板1.0 μL，ddH2O補足至25.0 μL。擴增程序：98 ℃預變性5 min；98 ℃ 10 s，60 ℃ 10 s，72 ℃ 18 s，進行30個循環(huán)；72 ℃延伸10 min。PCR擴增產物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢驗后，加入poly（A）尾，反應程序為72 ℃ 30 min，純化回收后連接至pMD18-T載體，轉化DH5α感受態(tài)細胞，挑取單克隆進行菌液PCR鑒定，陽性克隆送至深圳華大基因科技有限公司測序。測序正確的陽性克隆質粒命名為pMD18-T-Desmin普通引物。

1. 3 Desmin基因原核表達

以pMD18-T普通引物質粒為模板，選用原核表達引物進行PCR擴增，擴增產物連pMD18-T載體后轉化DH5α感受態(tài)細胞，挑取單克隆進行菌液PCR鑒定，測序正確后抽提質粒。質粒pMD18-T-Desmin原核引物和pGEX-4T-1載體分別用EcoR I和Not I進行雙酶切，使用T4連接酶進行連接，并轉化DH5α感受態(tài)細胞，構建原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag，同時轉化BL21感受態(tài)細胞，經(jīng)菌液PCR鑒定后對陽性重組菌株進行擴大培養(yǎng)，在菌液中按合適比例加入0.5 mmol/L IPTG，選擇不同溫度（28和30 ℃）進行誘導表達，誘導表達后進行考馬斯亮藍染色鑒定和Western blotting檢測。

1. 4 Desmin基因真核表達

以pMD18-T普通引物質粒為模板，選用真核表達引物進行PCR擴增，擴增產物連pMD18-T載體后轉化DH5α感受態(tài)細胞，挑取單克隆進行菌液PCR鑒定，測序正確后抽提質粒。質粒pMD18-T-Desmin真核引物和pcDNA3.0載體分別用EcoR I和Not I進行雙酶切，使用T4連接酶進行連接，并轉化DH5α感受態(tài)細胞，構建真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag，測序正確后轉染HEK-293T細胞，收集轉染24 h的蛋白樣品進行Western blotting驗證，采用特異性的Flag標簽確認表達情況。

1. 5 Desmin基因生物信息學分析

構建的原核表達載體和真核表達載體經(jīng)深圳華大基因科技有限公司測序鑒定后，通過ProtParam分析Desmin蛋白理化性質，使用ProtScale預測Desmin蛋白親/疏水性，采用TMHMM-2.0預測Desmin蛋白跨膜結構域，運用SignalP-5.0預測Desmin蛋白信號肽，并利用SOPMA和SWISS-MODEL分別預測Desmin蛋白二、三級結構。

2 結果與分析

2. 1 鼠源Desmin基因擴增與測序結果

以小鼠肌肉組織總RNA反轉錄合成的cDNA為模板，首先以普通引物擴增Desmin基因，經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測，擴增出大小約1400 bp的特異性條帶（圖1-A），與預期結果一致。取5管克隆載體轉化的菌液進行Desmin基因PCR鑒定，結果顯示泳道1和泳道4的培養(yǎng)菌液能擴增出Desmin基因（圖1-B），送華至深圳華大基因科技有限公司測序，測序合格后抽提質粒，并命名為pMD18-T-Desmin普通引物。

2. 2 Desmin基因原核表達結果

2. 2. 1 Desmin基因原核表達載體構建 以克隆質粒pMD18-T-Desmin普通引物為模板，PCR擴增結果顯示得到1410 bp的目的條帶（圖2-A），與預期結果一致。取克隆質粒pMD18-T-Desmin原核引物轉化的DH5α菌液進行Desmin基因PCR鑒定，陽性克隆質粒送至深圳華大基因科技有限公司測序，測序正確后抽提質粒，并命名為pMD18-T-Desmin-Flag。pMD18-T-Desmin-Flag和pGEX-4T-1載體用EcoR I和Not I進行雙酶切，然后以T4連接酶連接，并轉化DH5α感受態(tài)細胞，取3管原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag轉化菌液進行Desmin基因PCR檢測，結果顯示泳道2和泳道3的菌液能擴增出Desmin基因條帶（圖2-B），測序合格后抽提質粒，再以EcoR I和Not I進行雙酶切鑒定，結果獲得2條目的條帶，分別是4969 bp的pGEX-4T-1載體和1410 bp的Desmin基因（圖2-C），因此可確定原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag構建成功。

2. 2. 2 Desmin蛋白原核表達及鑒定結果 以原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag轉化BL21感受態(tài)細胞，加入0.5 mmol/L IPTG，分別在28和30 ℃下誘導表達6 h，然后采用考馬斯亮藍對融合蛋白Desmin進行鑒定。結果（圖3）顯示，在28和30 ℃誘導下均有可溶性的融合蛋白Desmin表達，但主要以包涵體的形式表達，蛋白大小與預期結果相符，在70 kD處出現(xiàn)目的條帶。

2. 2. 3 融合蛋白Desmin表達檢測結果 由于pGEX-4T-1載體本身攜帶有GST標簽，而構建的原核表達載體設計有Flag標簽，因此在誘導表達后取相應的融合蛋白樣品以GST標簽（圖4-A）和Flag標簽（圖4-B）進行Western blotting檢測，進一步驗證誘導表達情況。結果表明，在28和30 ℃下以0.5 mmol/L IPTG誘導表達時，均有可溶性Desmin蛋白表達。

2. 3 Desmin基因真核表達結果

2. 3. 1 Desmin基因真核表達載體構建 以克隆質粒pMD18-T-Desmin普通引物為模板，PCR擴增結果顯示得到1410 bp的目的條帶（圖5-A），與預期結果相符。取克隆載體pMD18-T-Desmin真核引物轉化的DH5α菌液進行Desmin基因PCR檢測，陽性克隆質粒送至深圳華大基因科技有限公司測序，測序正確后抽提質粒，并命名為pMD18-T-Desmin-Flag。pMD18-T-Desmin-Flag和pcDNA3.0載體用EcoR I和Not I進行雙酶切，然后以T4連接酶連接，并轉化DH5α感受態(tài)細胞，取4管真核表達載體pcDNA 3.0-Desmin-Flag轉化的菌液進行Desmin基因PCR檢測，結果顯示泳道1～泳道4的菌液均能擴增出Desmin基因條帶（圖5-B），測序合格后抽提質粒，再以EcoR I和Not I進行雙酶切鑒定，結果獲得2條目的條帶，分別是5427 bp的pcDNA 3.0載體和1410 bp的Desmin基因（圖5-C），因此可確定真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag構建成功。

2. 3. 2 真核表達載體Western blotting檢測結果 培養(yǎng)BHK-21細胞，待其狀態(tài)良好時轉移至6孔板中，以空載體pcDNA3.0和真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag分別轉染BHK-21細胞，于轉染24 h后收集蛋白樣品，采用Flag標簽進行Western blotting檢測，結果表明，轉染真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag的孔細胞在56 kD處能檢測到Flag標簽，而轉染空載體pcDNA3.0的細胞孔檢測不到Flag標簽（圖6），表明真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag能成功表達。

2. 3. 3 pcDNA 3.0-Desmin-Flag在BHK-21細胞中的共聚焦定位 培養(yǎng)BHK-21細胞，待其狀態(tài)良好時轉移至6孔板中，同時在6孔板中鋪上細胞爬片，以真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag轉染BHK-21細胞。轉染24 h后以鼠源Flag抗體為一抗進行間接免疫熒光試驗（IFA），抗小鼠綠色熒光為二抗，同時用DAPI對細胞核進行染色（藍色），結果證實Desmin蛋白主要定位在細胞質（圖7）。

2. 4 Desmin基因生物信息學分析結果

2. 4. 1 Desmin蛋白理化性質分析結果 在不考慮蛋白翻譯后修飾、蛋白多聚體的情況下，利用ProtParam對Desmin蛋白進行理化性質分析，結果表明該蛋白由470個氨基酸殘基組成（表2），分子量為54 kD，分子式為C2299H3722N688O755S13，理論等電點（pI）為5.21。Desmin蛋白不穩(wěn)定系數(shù)為52.24，屬于不穩(wěn)定蛋白；蛋白脂溶系數(shù)為79.94，平均親水系數(shù)（GRAVY）為-0.721，故推測該蛋白為親水性蛋白。

2. 4. 2 Desmin蛋白親/疏水性、信號肽及跨膜結構預測結果 通過ProtScale對Desmin蛋白親/疏水性進行預測，結果（圖8）顯示，分數(shù)<0的區(qū)域較密集，分數(shù)>0的區(qū)域較分散，綜合蛋白理化性質中的GRAVY為-0.721，初步判斷該蛋白為親水性蛋白。TMHMM 2.0預測結果（圖9）表明，Desmin蛋白不存在跨膜螺旋結構，即該蛋白是以非跨膜蛋白的形式表達。利用SignalP-5.0對Desmin蛋白進行信號肽預測，結果（圖10）表明該蛋白無信號肽位點，即Desmin蛋白不屬于分泌蛋白，而是經(jīng)游離核糖體合成后進入細胞質。

2. 4. 3 Desmin蛋白二、三級結構預測結果 SOPMA預測結果（圖11）顯示，Desmin蛋白二級結構由α-螺旋（占67.59%）、無規(guī)則卷曲（占22.39%）、β-轉角（占1.92%）和延伸鏈（占8.10%）構成。利用SWISS-MODEL構建Desmin蛋白可能的三級結構模型，結果表明，Desmin蛋白三級結構GMQE值為0.77，與模板序列匹配度高（圖12），Seq Identity為96.38%，即預測結果可靠。

3 討論

鼠源Desmin是由470個氨基酸組成的一種不穩(wěn)定肌肉組織中間絲蛋白，其N端主要調控蛋白結合，C端提供二聚化結合位點，且包含1個α-螺旋的桿狀體區(qū)，此桿狀體區(qū)又分成1A、1B、2A和2B等4個主要結構域，存在于細胞核周邊，通過網(wǎng)格蛋白作用使Desmin蛋白連接于肌原纖維的Z線上，促使相近的肌原纖維相互連接，而發(fā)揮動力傳輸效應，在維持肌肉組織收縮器官的結構及機械完整性方面發(fā)揮關鍵作用（Paulin and Li，2004）。Desmin是翻譯后修飾的目標，如磷酸化及非酶修飾。其中，磷酸化和二磷酸腺苷—核糖基化的主要作用是分解中間絲，涉及多個重要的生物過程，包括肌細胞的產生與融合、肌肉收縮、肌肉萎縮及肌細胞分裂（Winter et al.，2014）。已有研究表明，通過野生AB型斑馬魚肌肉組織Desmin蛋白和層黏連蛋白B間免疫共沉淀，證實Desmin蛋白與層黏連蛋白B間的相互作用可能是新型核細胞質通信網(wǎng)絡的線索（Kural-Mangit and Din?er，2021）。Desmin蛋白作為基于酵母雙雜交篩選的基質相互作用分子1（STIM1）結合伙伴，通過免疫共沉淀和免疫定位證實，STIM1的CC1-SOAR結構域與Desmin蛋白相互作用能增強STIM1寡聚。Zhang等（2021）通過對Desmin缺失小鼠的研究，發(fā)現(xiàn)Desmin蛋白在神經(jīng)肌肉Z線上連接STIM1以調節(jié)肌質網(wǎng)的Ca2+填充效率，即Desmin-STIM1組裝形成了細胞骨架—肌質網(wǎng)連接，對骨骼肌中的Ca2+信號傳導起重要作用。Desmin作為神經(jīng)肌肉接頭處的重要蛋白，還能將肌原纖維的被動成分連接到肌肉細胞側表面（Tidball，1992）。

目前，原核表達載體構建使用較多的是pGEX-4T-1和pET-32a（+），操作簡單且可高效表達，pGEX-4T-1載體本身攜帶有GST標簽，可通過檢測特異性標簽以確定融合蛋白的誘導表達情況（趙祥秀等，2020）。融合蛋白在表達過程中可能會出現(xiàn)表達量較少或不表達的情況，最適誘導條件難以把握，誘導表達的蛋白量達不到免疫量要求（李玉霄等，2020）。本研究的鼠源Desmin基因原核誘導表達選用pGEX-4T-1載體，構建的原核表達載體pGEX-4T-1-Desmin-Flag在28和30 ℃下以0.5 mmol/L IPTG誘導6 h后，通過特異性的GST標簽可成功檢測到在菌體沉淀和上清液中均有Desmin蛋白表達，但在28 ℃誘導條件下產生的可溶性蛋白較30 ℃誘導的多，說明在低溫誘導條件下可產生更多的可溶性Desmin蛋白，因此后期采用28 ℃進行誘導表達。切膠純化法是經(jīng)KCl染色后針對目的蛋白條帶位置處切膠純化，原核表達純化的融合蛋白再進行SDS-PAGE分析和Western blotting檢測（黃茂發(fā)等，2021），純化后的融合蛋白可作為釣餌通過體外Pull-down鑒定與Desmin直接結合的互作蛋白。此外，本研究構建了真核表達載體pcDNA3.0-Desmin-Flag并成功表達，共聚焦定位結果顯示Desmin蛋白主要定位在細胞質，同時有部分定位在細胞核周圍。真核表達載體的構建進一步驗證Desmin蛋白的互作網(wǎng)絡及細胞內分布定位情況，為了解物理互作的蛋白是否具有功能性關聯(lián)提供了理論依據(jù)。

鼠源Desmin蛋白為親水性蛋白，其理化性質不穩(wěn)定，無跨膜結構和信號肽，其二級結構中α-螺旋（由317個氨基酸殘基組成）占67.59%、無規(guī)則卷曲（由105個氨基酸殘基組成）占22.39%、β-轉角（由9個氨基酸殘基組成）占1.92%、延伸鏈（由38個氨基酸殘基組成）占8.10%，α-螺旋是最主要的二級結構。Desmin作為一種重要的III型中間絲蛋白，在神經(jīng)肌肉組織信號轉導及與相關蛋白發(fā)生相互作用方面發(fā)揮重要作用，為后續(xù)研究其生物學特性打下了基礎。

4 結論

鼠源Desmin蛋白在原核表達體系中主要以包涵體形式進行表達，在真核細胞中表達主要定位于細胞質，呈骨架結構分布，其理化性質不穩(wěn)定，屬親水性蛋白，無跨膜結構域和信號肽。Desmin作為一種重要的III型中間絲蛋白，在神經(jīng)肌肉組織信號轉導及與相關蛋白發(fā)生相互作用方面發(fā)揮重要作用。

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（責任編輯 蘭宗寶）