106 例痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的影響因素

夏雪松，李倫，田二軍，郭建沂

（1.平頂山市第三人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 平頂山 467000；2.平頂山市第一人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，河南 平頂山 467000；3.平頂山市疾控中心檢驗(yàn)科，河南 平頂山 467000）

肺結(jié)核屬于慢性傳染病，由結(jié)核分枝桿菌感染所致，隨著疾病進(jìn)展會(huì)累及患者其他臟器，嚴(yán)重威脅生命健康[1]。我國(guó)是全世界結(jié)核病發(fā)病率最高的國(guó)家之一，隨著《全國(guó)結(jié)核病防治規(guī)劃》等措施的實(shí)施，結(jié)核病發(fā)病率呈現(xiàn)一定下降趨勢(shì)，但防治工作仍不容忽視[2]。肺結(jié)核臨床癥狀缺乏典型性，且隨著疾病嚴(yán)重程度而不同，尤其是早期發(fā)病且病情較輕時(shí)，臨床診斷難度較大，誤診、漏診時(shí)有發(fā)生，不利于臨床治療[3]。痰菌涂片檢驗(yàn)與γ-干擾素釋放試驗(yàn)（IGRA）均為臨床診斷肺結(jié)核的常用檢驗(yàn)手段，其中IGRA 在肺結(jié)核診斷中具有較高特異度（75.2%～95.6%）及敏感度（81.7%～97.1%），但仍會(huì)出現(xiàn)假陰性情況[4]?；诖?，本研究擬探究痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的影響因素，旨在為臨床輔助診斷肺結(jié)核提供參考，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取平頂山市第三人民醫(yī)院于2020 年10 月—2022 年6 月就診的106 例痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：①符合肺結(jié)核相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，痰菌涂片結(jié)果陽(yáng)性；②臨床資料完整。排除標(biāo)準(zhǔn)：①最終診斷非肺結(jié)核；②合并其他肺部疾??；③免疫系統(tǒng)疾?。虎?chē)?yán)重臟器損傷。

1.2 方法

①通過(guò)查閱病例資料、現(xiàn)場(chǎng)問(wèn)詢(xún)等方式收集患者相關(guān)資料，包括性別、年齡、糖尿病、貧血、咳嗽、咳痰、治療史、免疫抑制劑使用、結(jié)核病程、卡介苗接種史、γ-干擾素釋放量、血清總蛋白、血清白蛋白、白細(xì)胞（WBC）計(jì)數(shù)、NK 細(xì)胞計(jì)數(shù)、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、嗜酸性粒細(xì)胞（EOS）計(jì)數(shù)、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、C 反應(yīng)蛋白（CRP）、降鈣素原（PCT）水平。②IGRA：采集患者靜脈血3 ml，采用體外釋放酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒購(gòu)自北京萬(wàn)泰）進(jìn)行IGRA 檢測(cè)。結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：分為陰性孔（N）、檢測(cè)孔（T）、陽(yáng)性孔（P），其中N 孔檢測(cè)基礎(chǔ)γ-干擾素含量，T 孔檢測(cè)經(jīng)結(jié)核分支桿菌特異性抗原刺激并感染的特異性T 細(xì)胞釋放的γ-干擾素含量，P 孔檢測(cè)經(jīng)植物血凝素非特異性刺激后T細(xì)胞釋放的γ-干擾素含量，（T-N）≥14 且（T-N）≥N/4 時(shí)為陽(yáng)性，（T-N）＜14 時(shí)為陰性；根據(jù)IGRA檢測(cè)結(jié)果分為陽(yáng)性組、假陰性組。③采集患者（空腹?fàn)顟B(tài)）外周靜脈血，以3500 r/min 轉(zhuǎn)速離心5 min，取上層清液，靜置于-70℃冰箱內(nèi)待檢。采用CytoFLEX 流式細(xì)胞儀（廠(chǎng)家：美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）檢測(cè)外周血CD4+T 細(xì)胞、CD8+T 細(xì)胞、WBC、NK 細(xì)胞、淋巴細(xì)胞、EOS 水平，采用酶聯(lián)免疫吸附法（試劑盒廠(chǎng)家：上海酶研生物科技有限公司）檢測(cè)血清總蛋白、CRP、PCT 水平，采用比色法（試劑盒廠(chǎng)家：武漢伊萊瑞特生物科技股份有限公司）檢測(cè)血清白蛋白水平。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS22.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。計(jì)量資料以（±s）表示，采用t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用χ2檢驗(yàn)。采用Logistic 多因素回歸模型分析痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的危險(xiǎn)因素。以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的單因素分析

106 例痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性率為21.70%；兩組性別、年齡、糖尿病、貧血、咳嗽、咳痰、治療史、免疫抑制劑使用、結(jié)核病程、卡介苗接種史、血清總蛋白、血清白蛋白、WBC 計(jì)數(shù)、NK 細(xì)胞計(jì)數(shù)、CD8+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)、CRP、PCT 水平比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；陽(yáng)性組γ-干擾素釋放量、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、EOS 計(jì)數(shù)、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)與假陰性組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見(jiàn)表1。

表1 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的單因素分析

2.2 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的多因素Logistic 回歸分析

以106 例痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果為因變量，將單因素分析中差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義的因素（γ-干擾素釋放量、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)、EOS 計(jì)數(shù)、CD4+T細(xì)胞計(jì)數(shù)）作為自變量，對(duì)自變量進(jìn)行賦值（以106例平均值為界：≤平均值=1；＞平均值=2）。經(jīng)多因素Logistic 回歸分析顯示，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計(jì)數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤573.09 個(gè)/μl）是痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果為假陰性的危險(xiǎn)因素，見(jiàn)表2。

表2 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的多因素回歸分析

3 討論

3.1 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的現(xiàn)狀

因患者無(wú)痰等情況，痰菌涂片檢測(cè)在肺結(jié)核診斷中受到一定限制，而IGRA 具有檢測(cè)快速等優(yōu)勢(shì)，故成為臨床輔助診斷肺結(jié)核的重要手段[6]。俞珊等[7]研究顯示，IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性率為24.20%，與本研究痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性率21.70%接近，表明采用IGRA 診斷肺結(jié)核具有一定誤診、漏診率。因此，探究痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的影響因素，對(duì)臨床輔助診斷肺結(jié)核有重要意義。

3.2 痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的影響因素

本研究通過(guò)Logistic 回歸分析發(fā)現(xiàn)，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計(jì)數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤573.09個(gè)/μl）是痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的危險(xiǎn)因素。進(jìn)一步分析其原因在于：①I(mǎi)GRA 是于體外檢測(cè)經(jīng)結(jié)合特異性抗原刺激后的T 細(xì)胞釋放γ-干擾素能力的一項(xiàng)免疫學(xué)技術(shù)，γ-干擾素釋放量較少時(shí)，會(huì)抑制IGRA 的靈敏度及敏感度，從而影響IGRA 檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性[8]。徐寧等[9]研究結(jié)果也表示，γ-干擾素釋放量是IGRA 檢測(cè)結(jié)果的影響因素，也支持本研究結(jié)果。②楊毅等[10]研究發(fā)現(xiàn)，淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)在臨床鑒別診斷脊柱結(jié)核和布魯氏菌性脊柱炎中具有重要作用。淋巴細(xì)胞是參與機(jī)體免疫應(yīng)答反應(yīng)的重要組分，淋巴細(xì)胞的降低會(huì)導(dǎo)致機(jī)體缺乏對(duì)結(jié)核抗原的應(yīng)答，從而抑制γ-干擾素釋放，影響IGRA檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性。③陳彬[11]的一項(xiàng)研究中表示，EOS 計(jì)數(shù)與全血酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定法的IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性有關(guān)（OR=0.057，95%CI：0.004～0.811）。本研究數(shù)據(jù)顯示，EOS 計(jì)數(shù)（＞0.17×109/L）的痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)是EOS 計(jì)數(shù)（≤0.17×109/L）的5.718 倍，說(shuō)明EOS計(jì)數(shù)是IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的影響因素。考慮原因在于EOS 可通過(guò)介導(dǎo)白介素-6、過(guò)氧化物酶等多種介體，調(diào)控Th1-Th2 免疫應(yīng)答，參與機(jī)體抗結(jié)核免疫反應(yīng)。當(dāng)EOS 增多時(shí)，會(huì)降低IGRA 敏感性，從而增加假陰性風(fēng)險(xiǎn)。④有研究發(fā)現(xiàn)[12]，結(jié)核病患者常伴隨CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)降低，而CD4+T 細(xì)胞是分泌γ-干擾素的重要細(xì)胞，CD4+T 細(xì)胞較少會(huì)降低γ-干擾素水平，從而提高IGRA 假陰性率。馬進(jìn)寶等[13]研究中顯示，CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)（＜400 個(gè)/μl）是涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)假陰性的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，一定程度上支持本研究結(jié)果。

此外，既往有研究表示[14]，年齡（≥40 歲）是IGRA 檢測(cè)痰菌陰性肺結(jié)核患者假陽(yáng)性的危險(xiǎn)因素。但本研究經(jīng)進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，IGRA 檢測(cè)假陰性與年齡無(wú)顯著相關(guān)性，與上述研究結(jié)果不一致，這可能與研究對(duì)象不同有關(guān)，患者年齡越大，其身體綜合素質(zhì)及免疫力逐漸下降，且基礎(chǔ)疾病患病風(fēng)險(xiǎn)越高，可能會(huì)對(duì)研究結(jié)果造成一定影響。孫丹雄[15]的一項(xiàng)IGRA 假陰性影響因素的研究中指出，空腹血糖水平與結(jié)核桿菌特異性γ-干擾素水平呈負(fù)相關(guān)，糖尿病和結(jié)核病程均可導(dǎo)致IGRA 假陰性，與本研究結(jié)果較不一致，考慮原因?yàn)楸狙芯窟x取對(duì)象平均年齡較小，且平均病程較短，糖尿病及肺結(jié)核疾病程度可能相對(duì)較輕，在一定程度上影響了研究結(jié)果，造成一定偏差。若要明確年齡、糖尿病、結(jié)核病程等其他因素與IGRA 檢測(cè)假陰性的相關(guān)性，應(yīng)擴(kuò)大樣本選取范圍進(jìn)一步深入分析。

3.3 總結(jié)

綜上所述，γ-干擾素釋放量（≤3.19 IU/ml）、淋巴細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤1.45×109/L）、EOS 計(jì)數(shù)（＞0.17×109/L）、CD4+T 細(xì)胞計(jì)數(shù)（≤573.09 個(gè)/μl）均為痰菌涂陽(yáng)肺結(jié)核患者IGRA 檢測(cè)結(jié)果假陰性的危險(xiǎn)因素，臨床應(yīng)用IGRA 診斷肺結(jié)核時(shí)應(yīng)綜合評(píng)估，如檢測(cè)結(jié)果為陰性且存在以上因素異常，應(yīng)慎重結(jié)合臨床表現(xiàn)及進(jìn)一步檢查進(jìn)行綜合判斷，以防止誤診、漏診。