3%氯氟吡啶酯乳油高效液相色譜分析方法研究

鄭 楊，李 巖

(黑龍江省植檢植保站，黑龍江 哈爾濱 150090)

1 前言

氯氟吡啶酯是美國陶氏益農(nóng)公司開發(fā)的新型芳香基吡啶甲酸類除草劑，化學(xué)名稱為4-氨基-3-氯-6-(4-氯-2-氟-3-甲氧基苯基)-5-氟吡啶-2羧酸苯甲酯，CAS：1390661-72-9[1]，分子式：C20H14Cl2F2N2O3。主要用于直播稻、移栽稻及其他作物田，具有高效廣譜的除草活性，能有效防除水稻田主要禾本科、闊葉及莎草科雜草，可通過葉片和根部吸收，具有使用劑量低、對(duì)環(huán)境友好和其他生物安全等特點(diǎn)，與其他除草劑無交互抗性，是防除抗性雜草的優(yōu)選藥劑[2]。

目前國內(nèi)對(duì)氯氟吡啶酯制劑的液相分析方法尚未見報(bào)道。本文采用高效液相色譜法對(duì)氯氟吡啶酯進(jìn)行定性和定量分析。該方法操作快速、簡便、準(zhǔn)確，分離效果好，準(zhǔn)確度和精密度均能達(dá)到定量分析的要求，適用于農(nóng)藥產(chǎn)品含量分析。

2 試驗(yàn)部分

2.1 試劑和溶液 乙腈：色譜純；水：超純水(電阻率18.2 MΩ·cm，25℃)；氯氟吡啶酯：98.62%，試樣：3%氯氟吡啶酯乳油。

2.2 儀器 高效液相色譜儀：Agilent1260，具有二級(jí)管陣列檢測(cè)器和自動(dòng)進(jìn)樣器，色譜工作站；色譜柱：250 mm×4.6 mm(i.d)不銹鋼柱，內(nèi)裝Zorbax SB-C18、5 μm填充物；過濾器：濾膜孔徑約0.45 um。

2.3 液相色譜操作條件 流動(dòng)相：乙腈∶水=70∶30(V/V)(0～12 min)；流量：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長：245 nm；進(jìn)樣體積：5.0 μL；保留時(shí)間：氯氟吡啶酯約9.2 min。

上述液相色譜操作條件，系典型操作參數(shù)，可根據(jù)不同儀器特點(diǎn)，對(duì)給定的操作參數(shù)作適當(dāng)調(diào)整，以期獲得最佳效果。非分析物空白、標(biāo)樣和樣品高效液相色譜圖(圖1～3)。

圖1 非分析物空白高效液相色譜圖

圖2 氯氟吡啶酯標(biāo)樣高效液相色譜圖

圖3 3%氯氟吡啶乳油高效液相色譜圖

2.4 測(cè)定步驟

2.4.1 標(biāo)樣溶液的配制 稱取氯氟吡啶酯標(biāo)樣38.4 mg(精確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超聲10 min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過濾備用。

2.4.2 試樣溶液的配制 稱取試樣約1 311.5 mg(精確至0.2 mg)，置于100 mL容量瓶中，加入乙腈溶解，超聲10 min，恢復(fù)至室溫后用乙腈稀釋至刻度，搖勻，過濾備用。

2.4.3 測(cè)定 在上述操作條件下，待儀器基線穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待各針相對(duì)響應(yīng)值變化≤1.5%時(shí)，按照標(biāo)樣溶液、試樣溶液、試樣溶液、標(biāo)樣溶液的順序進(jìn)樣測(cè)定。

2.4.4 計(jì)算 將測(cè)得的2針試樣溶液及試樣溶液前后2針標(biāo)樣溶液中氯氟吡啶酯的峰面積值分別進(jìn)行平均，試樣中氯氟吡啶酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)ω，按式(1)計(jì)算：

(1)

式中：

A1—標(biāo)樣溶液中氯氟吡啶酯峰面積的平均值；

A2—試樣溶液中氯氟吡啶酯峰面積的平均值；

m1—標(biāo)樣的質(zhì)量，g；

m2—試樣的質(zhì)量，g；

P—標(biāo)樣中氯氟吡啶酯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

3 結(jié)果分析

3.1 色譜條件的選擇 通過Agilent1260高效液相色譜儀的光譜數(shù)據(jù)采集功能，獲得氯氟吡啶酯的紫外吸收?qǐng)D(圖4)。從圖中看到氯氟吡啶酯有3個(gè)吸收峰，分別在193、215、245 nm附近，根據(jù)樣品中各成分含量及出峰時(shí)間，為減少溶劑的干擾，兼顧較大吸收波長，將檢測(cè)波長定為245 nm。

圖4 紫外光譜吸收?qǐng)D

色譜柱選擇常用的反相填料ZORBAX SB-C18柱。依據(jù)氯氟吡啶酯理化性質(zhì)，使用乙腈為溶劑溶解樣品，選擇乙腈和水為流動(dòng)相，按不同比例在色譜柱上進(jìn)行選擇比較。經(jīng)測(cè)定，當(dāng)流速為1.0 mL/min時(shí)，在乙腈∶水=70∶30(V/V)條件下，氯氟吡啶酯能有效分離，出峰時(shí)間較為合適；峰形對(duì)稱，基線平穩(wěn)，分析時(shí)間較短。

3.2 方法的線性相關(guān)性試驗(yàn) 稱取氯氟吡啶酯46.3 mg(精確至0.2 mg)置于50 mL容量瓶中，用乙腈超聲溶解并稀釋至刻度，靜止備用。用移液管分別移取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度搖勻后備用。按上述條件進(jìn)行測(cè)定，以進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。氯氟吡啶酯線性方程為y=10 440.021x+8.201，線性相關(guān)系數(shù)為0.999 99。線性相關(guān)性試驗(yàn)結(jié)果(表1和圖5)。

表1 分析方法的線性相關(guān)性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

圖5 氯氟吡啶酯線性關(guān)系圖

3.3 分析方法的精密度試驗(yàn) 在上述色譜操作條件下，對(duì)同一產(chǎn)品平行測(cè)定5個(gè)次，氯氟吡啶酯的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.05，變異系數(shù)為1.55%(表2)。

表2 分析方法的精密度試驗(yàn)結(jié)果

3.4 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn) 按照配方比例要求，將除原藥以外的所有填料助劑混勻，做制劑空白，按照制劑標(biāo)稱值在制劑空白中添加有效成分，合成5個(gè)制劑樣品，在上述色譜操作條件下進(jìn)行分析，測(cè)得氯氟吡啶酯的平均加標(biāo)回收率為99.97%(表3)。

表3 分析方法的準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3.5 方法特異性 對(duì)樣品組分色譜峰進(jìn)行峰純度試驗(yàn)，通過工作站軟件計(jì)算匹配度，氯氟吡啶酯的峰純度因子為999.91，特異性符合要求。

4 結(jié)論

試驗(yàn)建立了高效液相色譜法檢測(cè)3%氯氟吡啶酯乳油中有效成分的分析方法。上述試驗(yàn)結(jié)果表明，氯氟吡啶酯在測(cè)試濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，方法準(zhǔn)確度和精密度較高，具有簡便、快速的優(yōu)點(diǎn)，是產(chǎn)品質(zhì)量控制的有效可行的分析方法。