幽門螺桿菌感染對(duì)老年胃癌病理組織miR-217表達(dá)水平的影響

［摘要］目的探究幽門螺桿菌感染對(duì)老年胃癌病理組織miR-217表達(dá)水平的影響及預(yù)后情況。方法選取武警安徽省總隊(duì)醫(yī)院2019年2月～2020年2月收治的108例老年胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，據(jù)術(shù)后病理組織幽門螺桿菌檢測(cè)結(jié)果分為陽性組（74例）及陰性組（34例）。采用qRT-PCR法檢測(cè)miR-217表達(dá)水平，比較不同臨床病理特征幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平，ROC曲線評(píng)估癌組織miR-217對(duì)幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響，比較miR-217不同表達(dá)水平與幽門螺桿菌陽性胃癌患者生存預(yù)后的關(guān)系。結(jié)果陽性組癌組織miR-217的表達(dá)水平高于陰性組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平較高（P＜0.05）。癌組織miR-217預(yù)測(cè)預(yù)后的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P=0.003），截?cái)嘀禐?.667，靈敏度為70.80%，特異度為62.00%。癌組織miR-217高表達(dá)者（miR-217＞4.667）的死亡率高于miR-217低表達(dá)者（P＜0.05）。結(jié)論幽門螺桿菌感染陽性胃癌患者癌組織的miR-217表達(dá)水平較高，與幽門螺桿菌感染陽性胃癌病理特征有關(guān)，同時(shí)癌組織miR-217對(duì)患者的預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

［關(guān)鍵詞］幽門螺桿菌感染；老年胃癌；miR-217；診斷；預(yù)后

doi：10.3969/j.issn.1674-7593.2023.04.012

EffectofHelicobacterPyloriInfectionontheExpressionofMiR-217inGastricCancerinOlderPatients

TangWeizhi1，ChenHao2**，ZhengDuoan1

1DepartmentofGeneralSurgery，AnhuiProvincialArmedPoliceCorpsHospital，Hefei230041；2DepartmentofGeneralSurgery，theFirstAffiliatedHospitalofUniversityofScienceandTechnologyofChina（AnhuiProvincialHospital），Hefei230000

**Correspondingauthor：ChenHao，email：287003069@qq.com

［Abstract］ObjectiveToinvestigatetheeffectsofHelicobacterpyloriinfectiononthelevelofmiR-217inthetissuesofgastriccancerandpatient′sprognosis.MethodsAretrospectivelyanalysiswasconductedontheclinicaldataof108olderpatientswithgastriccancertreatedinAnhuiProvincialArmedPoliceCorpsHospitalfromFebruary2019toFebruary2020.AccordingtotheHelicobacterpyloriexaminationinpostoperativepathologicaltissues，thepatientsweredividedintoanpositivegroup（74cases）andanegativegroup（34cases）.TheexpressionofmiR-217wasmeasuredbyqRT-PCR，andwascomparedincancertissuesofHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswithdifferentclinical-pathologicalfeatures.Receiveroperatingcharacteristic（ROC）curvewasusedtoevaluatetheeffectofmiR-217onprognosisofgastriccancerpatientswithHelicobacterpyloriinfection.TherelationshipbetweendifferentlevelsofmiR-217andsurvivalinHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswascompared.ResultsThelevelofmiR-217incancertissuesinthepositivegroupwashigherthanthatinthenegativegroup（Plt;0.05）.ThelevelofmiR-217washigherincancertissuesofHelicobacterpylori-positivegastriccancerpatientswithtumorsize≥5cm，low-mediumdifferentiation，TNMstageⅢtoⅣ，andlymphnodemetastasis，andthedifferenceswerestatisticallysignificant（Plt;0.05）.ROCcurveshowedthattheareaundercurve（AUC）ofmiR-217inpredictingtheprognosiswas0.712（95%CI：0.590-0.834，P=0.003），thecut-offvaluewas4.667.Thesensitivityandspecificitywere70.80%and62.00%，respectively.ThemortalityrateinthepatientswithhighlevelofmiR-217（miR-217＞4.667）wassignificantlyhigherthanthatinthepatientswithlowlevelofmiR-217（miR-217≤4.667）（Plt;0.05）.ThemediansurvivaltimeofhighexpressiongroupofmiR-217wassignificantlyshorterthanthatoflowexpressiongroup，thedifferencehadastatisticallysignificant（Plt;0.05）.ConclusionThelevelofmiR-217ishighinpatientswithHelicobacterpylori-positivegastriccancer，anditisrelatedtothecharacteristicsofHelicobacterpylori-positivegastriccancer.ThelevelofmiR-217incancertissueshaspredictivevaluefortheprognosisofpatients.

［Keywords］Helicobacterpyloriinfection；Gastriccancer；MiR-217；Diagnosis；Prognosis

胃癌作為臨床上一類發(fā)病率較高的消化道惡性腫瘤多發(fā)生在中老年人群，對(duì)患者的生命健康可造成較大的影響。據(jù)研究資料顯示，胃癌的發(fā)生發(fā)展受到多種因素的影響，其中幽門螺桿菌在胃癌進(jìn)展期間發(fā)揮重要的作用［1］。通過幽門螺桿菌感染對(duì)胃癌的作用機(jī)制研究在延長(zhǎng)幽門螺桿菌陽性胃癌患者的生存時(shí)間方面具有重要的臨床意義。microRNA是一類重要的非編碼性內(nèi)源性RNA，在細(xì)胞增殖、分化、遷移以及凋亡等多種生物學(xué)行為中起到了重要的調(diào)控作用，在近年來的報(bào)道中也證實(shí)，microRNA在胃癌發(fā)生發(fā)展中呈現(xiàn)出較為異常的表達(dá)水平［2］。既往有臨床資料通過對(duì)TCGA數(shù)據(jù)庫篩查出胃癌組織中特異性高表達(dá)的分子miR-217在胃癌診斷中具有較高的臨床價(jià)值，同時(shí)可作為預(yù)測(cè)胃癌患者死亡的可靠生物標(biāo)記物［3］。不過尚無大量研究證實(shí)miR-217與幽門螺桿菌陽性胃癌的關(guān)系，及其對(duì)預(yù)后可能造成的影響，本研究就幽門螺桿菌感染對(duì)老年胃癌病理組織miR-217表達(dá)水平及對(duì)預(yù)后的影響進(jìn)行評(píng)價(jià)。

1對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象

選取武警安徽省總隊(duì)醫(yī)院2019年2月～2020年2月收治的108例老年胃癌患者進(jìn)行回顧性分析，根據(jù)術(shù)后病理組織幽門螺桿菌檢測(cè)結(jié)果分為陽性組（74例）及陰性組（34例）。納入標(biāo)準(zhǔn)：①經(jīng)臨床癥狀及體征、影像學(xué)以及病理檢查后確診為胃癌，胃癌診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《胃癌診治難點(diǎn)中國專家共識(shí)（2020版）》［4］，幽門螺桿菌陽性診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《幽門螺桿菌感染基層診療指南（2019年）》［5］；②年齡＞65歲；③術(shù)前尚未接受放化療治療；④具有完整的隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤；②接受過幽門螺桿菌根除治療；③合并嚴(yán)重的高血壓、糖尿病等重要慢性疾病史；④妊娠及哺乳期婦女；⑤合并精神類疾病或存在意識(shí)障礙者；⑥因各種原因?qū)е碌呐R床資料缺失者。

1.2方法

1.2.1幽門螺桿菌感染檢測(cè)方法檢查前未口服抗生素以及抑酸藥物等服用史，術(shù)中取適量的胃癌組織以及癌旁組織進(jìn)行檢測(cè)，采用生理鹽水對(duì)組織進(jìn)行清洗，改用Giemsa染色法與快速尿素酶試驗(yàn)法對(duì)幽門螺桿菌進(jìn)行測(cè)量。2次試驗(yàn)均呈現(xiàn)出陽性則認(rèn)定為幽門螺桿菌感染，反之則是無幽門螺桿菌感染。

1.2.2miR-217表達(dá)水平測(cè)量方法切取0.1g的胃癌組織標(biāo)本放入到小燒杯內(nèi)，將組織剪碎，轉(zhuǎn)移至玻璃勻漿管中，充分研磨后，獲取100μL的組織勻漿放入EP管中，加入900μL的Trizol試劑，依次加入氯仿、異丙醇以及無水乙醇，從而獲得組織總RNA，采用微量紫外線分光光度計(jì)對(duì)RNA的濃度及純度進(jìn)行檢測(cè)。配制qRT-PCR反應(yīng)體系，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性20s，95℃變性30s，60℃退火30s，70℃延伸10s；共40個(gè)循環(huán)［6］。以U6為內(nèi)參。miR-217引物序列，正向：5'-GATAACAGGCAAGCTTTGAGG-3'，反向：5'-CTGCAAAGATTGTTTGCGAGA-3'。采用2-ΔΔCt法計(jì)算miR-217mRNA的相對(duì)表達(dá)量。重復(fù)實(shí)驗(yàn)3次。

1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。正態(tài)分布計(jì)量資料以±s表示，采取t檢驗(yàn)和單因素方差分析檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，Kaplan-Meier法繪制生存曲線（組間比較采用Log-rank檢驗(yàn)），ROC曲線評(píng)估癌組織miR-217對(duì)預(yù)后的預(yù)測(cè)價(jià)值，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1幽門螺桿菌陽性及陰性患者癌組織miR-217的表達(dá)水平比較陽性組癌組織miR-217的表達(dá)水平（4.68±0.19）高于陰性組（1.66±0.42），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=51.725，P＜0.001）。

2.2不同臨床病理特征的幽門螺桿菌陽性胃癌癌組織中miR-217的表達(dá)比較

腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者癌組織miR-217的表達(dá)水平較高，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

2.3ROC曲線評(píng)估癌組織miR-217對(duì)幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響

隨訪400d，生存50例，死亡24例。繪制ROC曲線，癌組織miR-217預(yù)測(cè)預(yù)后的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P=0.003），截?cái)嘀禐?.667，靈敏度為70.80%，特異度為62.00%，見圖1。

2.4癌組織miR-217不同表達(dá)水平的幽門螺桿菌陽性胃癌患者的生存情況比較

按照ROC曲線獲得的截?cái)嘀祵?duì)胃癌患者進(jìn)行分組，miR-217≤4.667為低表達(dá)組（38例）、miR-217＞4.667為高表達(dá)組（36例），高表達(dá)組的死亡率［47.22%（17/36）］高于低表達(dá)組［18.42%（7/38）］，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=6.998，P=0.008）。經(jīng)Log-rank檢驗(yàn)，miR-217高表達(dá)組的累積生存率小于低表達(dá)組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.418，P=0.022），見圖2。

3討論

30年間胃癌始終是我國發(fā)病首位的消化系統(tǒng)惡性腫瘤，具有較高的侵襲率以及轉(zhuǎn)移率，隨著人們生活質(zhì)量的提高，胃癌發(fā)病率不斷升高，其中老年作為胃癌的主要發(fā)病人群，確診多已經(jīng)為中晚期［7］。臨床資料顯示，因絕大多數(shù)的胃癌已經(jīng)進(jìn)入晚期，傳統(tǒng)手術(shù)治療方法相對(duì)較差，術(shù)后5年生存率低［8］。報(bào)道顯示，胃癌的發(fā)生發(fā)展可受到多種因素的影響，如幽門螺桿菌感染、消化系統(tǒng)疾病、飲食習(xí)慣等，其中幽門螺桿菌感染被認(rèn)為是誘發(fā)胃癌的重要因素之一［9］。有臨床資料顯示，幽門螺桿菌感染后多寄居在患者的胃竇小凹部位，并在該部位繁殖，誘發(fā)腸上皮化生以及不典型增生等疾病，也是導(dǎo)致胃癌發(fā)生發(fā)展的常見部位［10］。加之幽門螺桿菌的長(zhǎng)期存在也會(huì)對(duì)胃黏膜產(chǎn)生刺激作用，促使其分泌大量的炎癥因子，進(jìn)而引起粒細(xì)胞與淋巴細(xì)胞出現(xiàn)一系列的浸潤，最終產(chǎn)生慢性炎癥疾病，導(dǎo)致胃黏膜萎縮或者不典型增生。因此，幽門螺桿菌也被認(rèn)為是導(dǎo)致胃癌發(fā)生的重要危險(xiǎn)因素。

miRNAs是一類小的內(nèi)源性非編碼RNA，由約22個(gè)核苷酸組成，是一類關(guān)鍵的基因表達(dá)調(diào)節(jié)分子，其作用機(jī)制在于能夠通過與mRNA的3′UTP結(jié)合而抑制轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而影響癌基因和抑癌基因的表達(dá)，從而促進(jìn)或抑制腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與轉(zhuǎn)移［11］。2001年，學(xué)術(shù)界將這類廣泛存在于動(dòng)植物中含有約22個(gè)核苷酸的非編碼蛋白質(zhì)的小RNA命名為miRNA，其在進(jìn)化上是一類高度保守、非編碼、單鏈的小RNA，長(zhǎng)度約為21～22nt，廣泛分布于各種真核細(xì)胞內(nèi)，位于編碼基因的外顯子、內(nèi)含子和基因間區(qū)域，主要通過抑制mRNA翻譯或促進(jìn)其

降解調(diào)控基因表達(dá)從而發(fā)揮功能，在既往臨床工作中已經(jīng)被證實(shí)其與諸多腫瘤疾病的發(fā)生發(fā)展具有密切的相關(guān)性［12］。miR-217作為其中一個(gè)常見的RNA類型，與諸多腫瘤疾病的病理生理活動(dòng)具有密切的相關(guān)性，但與幽門螺桿菌陽性胃癌患者之間的關(guān)系尚無定論［13］。在本研究中，幽門螺桿菌陽性組的癌組織miR-217的表達(dá)水平高于陰性組，腫瘤直徑≥5cm、分化程度為低中分化、TNM分期為Ⅲ～Ⅳ期、存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的幽門螺桿菌陽性胃癌患者的癌組織miR-217表達(dá)水平較高，通過該結(jié)果證實(shí)了miR-217的表達(dá)與幽門螺桿菌陽性胃癌的發(fā)生發(fā)展具有一定的關(guān)系，可作為對(duì)此類患者診斷的靶向指標(biāo)。行ROC曲線可見，癌組織miR-217對(duì)幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后的影響的曲線下面積為0.712（95%CI：0.590～0.834，P＜0.05），可見癌組織miR-217對(duì)幽門螺桿菌陽性胃癌患者預(yù)后影響的預(yù)測(cè)具有顯著價(jià)值。且癌組織miR-217高表達(dá)組的死亡率要明顯高于低表達(dá)組，進(jìn)一步證實(shí)了miR-217表達(dá)水平的升高不僅與幽門螺桿菌陽性胃癌患者細(xì)胞增殖、侵襲及病情惡化有關(guān)，同時(shí)還可用于評(píng)估患者的預(yù)后［14-15］。

綜上所述，幽門螺桿菌感染陽性胃癌患者中的癌組織miR-217的表達(dá)水平較高，且該指標(biāo)與幽門螺桿菌感染陽性胃癌病理特征有關(guān)，同時(shí)癌組織miR-217對(duì)幽門螺桿菌陽性胃癌患者的預(yù)后具有預(yù)測(cè)價(jià)值。

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（2023-02-14收稿）