膀胱癌組織中脂肪酸結(jié)合蛋白6、核苷酸還原酶M1亞基的表達及與臨床病理特征的相關(guān)性

王莉莉

【摘要】 目的：探究膀胱癌（bladder cancer）組織中脂肪酸結(jié)合蛋白6（fatty acid-binding protein6，F(xiàn)ABP6）、核苷酸還原酶M1亞基（ribonucleotide reductase regulatory subunit M1，RRM1）的表達水平及其與膀胱癌患者臨床病理特征的相關(guān)性。方法：回顧性分析2020年2月-2021年12月大冶市人民醫(yī)院收治的并接受手術(shù)切除的40例膀胱癌患者的臨床資料。采用免疫組化法檢測各組織中的FABP6和RRM1蛋白表達水平，并分析FABP6和RRM1蛋白與各項臨床特征的關(guān)系。結(jié)果：膀胱癌組織中FABP6和RRM1高蛋白表達水平占比均高于癌旁正常組織（P<0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表達和低表達膀胱癌患者的性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表達和低表達膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。結(jié)論：FABP6、RRM1在膀胱癌組織中表達水平高于癌旁正常組織，且兩者均參與了膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展進程。

【關(guān)鍵詞】 膀胱癌 脂肪酸結(jié)合蛋白6 核苷酸還原酶M1亞基 臨床病理特征

[Abstract] Objective： To investigate the expression levels of fatty acid-binding protein 6 （FABP6） and ribonucleotide reductase regulatory subunit M1 （RRM1） in bladder cancer tissues， correlation of the two indicators with clinicopathological characteristics of bladder cancer patients. Method： The clinical data of 40 patients with bladder cancer who received surgical resection in Daye People's Hospital from February 2020 to December 2021 were retrospectively analyzed. The protein expression levels of FABP6 and RRM1 in each tissue were detected by immunohistochemical method， and the relationship between FABP6 and RRM1 and various clinical features were analyzed. Result： FABP6 and RRM1 high protein expression levels in bladder cancer tissues were higher than those in adjacent normal tissues （P<0.05）. There were no significant differences in gender， age， tumor type or tumor diameter in bladder cancer patients with high and low FABP6 and RRM1 expression （P>0.05）. There were significant differences in the degree of differentiation， TNM stage and lymph node metastasis in bladder cancer patients with high and low expression of FABP6 and RRM1 protein （P<0.05）. Conclusion： The expression levels of FABP6 and RRM1 in bladder cancer tissues are higher than those in adjacent normal tissues， and both of them were involved in the occurrence and development of bladder cancer.

[Key words] Bladder cancer Fatty acid binding protein 6 Ribonucleotide reductase regulatory subunit M1 Clinicopathological features

First-author's address： Daye People's Hospital， Hubei Province， Daye 435100， China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2023.13.037

近年來，隨著我國居民生活水平和生活方式的改變，膀胱癌（bladder cancer）發(fā)病群體不斷擴大，深入探究膀胱癌的發(fā)生機制，及早篩查、診斷并治療膀胱癌，對提高患者生存質(zhì)量具有重大意義[1-2]。脂肪酸結(jié)合蛋白6（fatty acid-binding protein 6，F(xiàn)ABP6）是一種脂肪酸載體蛋白，可參與長鏈脂肪酸的代謝調(diào)節(jié)[3]。談宜傲等[4]在相關(guān)研究中發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ABP6在膀胱癌組織中呈現(xiàn)過表達狀態(tài)，該指標可能與膀胱癌預后質(zhì)量有關(guān)。李海斌等[5]在研究中發(fā)現(xiàn)，核苷酸還原酶M1亞基（ribonucleotide reductase regulatory subunit M1，RRM1）可通過靶向通路影響癌細胞增殖過程。但目前關(guān)于FABP6與RRM1表達水平與膀胱癌的病理和作用機制相關(guān)研究較少，且多數(shù)未曾分析其與患者病理特征的關(guān)系。結(jié)合以往研究，本研究納入膀胱癌組織及癌旁正常組織，分析各組FABP6與RRM1蛋白表達水平差異，為探究膀胱癌發(fā)生機制提供一定研究依據(jù)，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2020年2月-2021年12月大冶市人民醫(yī)院收治的并接受手術(shù)切除的40例膀胱癌患者的臨床資料。納入標準：（1）均接受本院影像學及病理檢查確診；（2）患者的各項臨床資料完整無誤；（3）在本次手術(shù)前均未接受任何靶向治療或放化療。排除標準：（1）合并其他惡性腫瘤；（2）有較嚴重心、肝、腎等臟器功能障礙；（3）血液性疾病、感染性疾?。唬?）合并血液系統(tǒng)疾??；（5）自身免疫病。本研究已征得醫(yī)學倫理會批準，倫理批號（2020年第25號）。

1.2 方法

1.2.1 臨床病理資料收集 通過醫(yī)院院內(nèi)患者信息登記系統(tǒng)，收集患者的性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑、分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況等資料。

1.2.2 標本來源 選取膀胱癌組織和癌旁正常組織（距腫瘤邊緣5 cm）。

1.2.3 免疫組織化學檢測 采用免疫組化法檢測膀胱癌組織及癌旁組織中FABP6、RRM1蛋白表達水平。步驟如下：取組織石蠟包塊，常規(guī)切片（4 μm），進行脫蠟處理→高壓修復抗原→阻斷滅活內(nèi)源性過氧化物酶→滴加10%羊血清封閉液（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）封閉→滴加磷酸緩沖鹽溶液（PBS，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）稀釋兔抗人FABP6一抗（上海易匯生物科技有限公司）/兔抗人RRM1一抗（廣州萬孚生物技術(shù)股份有限公司），PBS沖洗→滴加經(jīng)辣根過氧化物酶（HRP）標記的二抗→滴加鏈霉素抗生素蛋白-過氧化物酶（SP，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）→二氨基聯(lián)苯胺（DAB，北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司）顯色→蘇木素復染→脫水、透明、封片、鏡檢。設(shè)置PBS代替一抗為陰性對照。

1.2.4 結(jié)果判定 由同一位資深病理醫(yī)師閱片，在×400倍光學顯微鏡下抽組織內(nèi)的5個視野，每個視野選擇100個細胞，根據(jù)陽性細胞占比和染色強度的乘積（IS值）判定FABP6和RRM1蛋白在組織中表達水平。陽性細胞占比：<5%為0分，5%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分。染色強度：視野內(nèi)未見染色情況為0分，出現(xiàn)淡黃色為1分，出現(xiàn)棕黃色為2分，出現(xiàn)棕褐色為3分。IS值≤3分為低表達，>3分為高表達。

1.3 統(tǒng)計學處理 數(shù)據(jù)采用SPSS 22.0軟件處理，計數(shù)資料采用率（%）表示，組間比較采用字2檢驗。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 FABP6和RRM1在膀胱癌組織及癌旁正常組織中表達水平比較 膀胱癌組織中FABP6和RRM1高蛋白表達水平占比均高于癌旁正常組織（P<0.05），見表1。

2.2 FABP6和RRM1表達水平與膀胱癌患者臨床病理特征的相關(guān)性 FABP6和RRM1蛋白高表達和低表達膀胱癌患者的性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。FABP6和RRM1蛋白高表達和低表達膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。見表2、3。

3 討論

膀胱癌占我國泌尿生殖系統(tǒng)腫瘤發(fā)病率的第一位，男性發(fā)病率為女性的3～4倍，且近些年的發(fā)病率隨年齡增長呈增長趨勢。從癌組織發(fā)生來源角度分析，膀胱癌有尿路上皮癌、鱗癌、腺癌等，其中尿路上皮癌占90%以上，并且在靶向治療、放療、化療等干預后，仍有較高復發(fā)率，5年生存率僅為50%～60%。因此，有必要尋找生物標志物用于膀胱癌的早期篩查診斷[6-7]。

脂肪酸結(jié)合蛋白（FABP）是一種分布于多種組織細胞內(nèi)的脂肪酸載體蛋白，主要參與調(diào)節(jié)機體脂肪酸水平，已有研究證實，F(xiàn)ABP系列蛋白因子（FABPs）可通過多種復雜機制參與多種疾病發(fā)生、發(fā)展進程[8]。FABP6又名回腸型脂肪酸結(jié)合蛋白，研究表明其與肥胖及糖尿病密切相關(guān)，而肥胖及糖尿病又是多種癌癥發(fā)生的獨立危險因素。多項研究表明，F(xiàn)ABP在結(jié)腸癌[9]、前列腺癌[10]、子宮頸癌[11]等組織中呈高表達狀態(tài)，因此推測FABP6可能和膀胱癌發(fā)生相關(guān)。本研究采用免疫組化法檢測FABP6在膀胱癌組織及癌旁正常組織中表達，F(xiàn)ABP6在膀胱癌組織中高表達水平占比高于癌旁正常組織，與既往研究結(jié)果一致，提示FABP6參與了膀胱癌發(fā)生過程[12]。為進一步研究FABP6表達與膀胱癌臨床病理特征的相關(guān)性，本研究比較不同F(xiàn)ABP6表達水平膀胱癌患者臨床病理特征差異，結(jié)果表明，F(xiàn)ABP6高表達和低表達膀胱癌患者的性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。FABP6高表達和低表達膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。該結(jié)果提示FABP6促進了膀胱癌侵襲、轉(zhuǎn)移過程。分析可能機制為FABP6參與脂肪細胞轉(zhuǎn)運及調(diào)控某些靶基因表達，為腫瘤細胞提供能量，并可通過絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）信號通路促進腫瘤細胞侵襲轉(zhuǎn)移，具體機制有待進一步研究予以證實[13]。

研究表明，核苷酸修復途徑為DNA損傷修復中的重要一環(huán)，修復路徑出錯可能導致惡性腫瘤發(fā)生[14]。RRM1是一種DNA損傷修復限速酶，位于染色體11P15.5上，在DNA編碼及細胞增殖過程中扮演重要角色[15-16]。若RRM1基因表達異常將影響核苷酸修復途徑，從而促進腫瘤細胞增殖[17]。研究表明，RRM1蛋白參與了乳腺癌發(fā)生、發(fā)展進程，且降低RRM1蛋白表達能有效抑制腫瘤細胞增殖，因此推測RRM1也可能和膀胱癌發(fā)生相關(guān)[18-19]。本研究采用免疫組化法檢測RRM1在膀胱癌組織及癌旁正常組織中表達差異發(fā)現(xiàn)，RRM1在膀胱癌組織中高表達水平占比高于癌旁正常組織，與朱研峰等[20]研究結(jié)果一致，提示RRM1參與了膀胱癌發(fā)生過程。為進一步研究RRM1表達與膀胱癌臨床病理特征的相關(guān)性，本研究比較不同RRM1表達水平膀胱癌患者臨床病理特征差異，結(jié)果表明，RRM1高表達和低表達膀胱癌患者的性別、年齡、腫瘤類型、腫瘤直徑比較，差異均無統(tǒng)計學意義（P>0.05）。RRM1高表達和低表達膀胱癌患者的分化程度、TNM分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。該結(jié)果表明RRM1促進了膀胱癌侵襲、轉(zhuǎn)移過程，但具體機制尚不清楚。

綜上所述，F(xiàn)ABP6、RRM1在膀胱癌組織中高表達水平占比均高于癌旁正常組織，且兩者均參與了膀胱癌的發(fā)生、發(fā)展進程。此外，因FABP6、RRM1均可采用免疫組化法檢測，且分子量較小，亦可從血液中檢出，提示FABP6、RRM1可能作為膀胱癌潛在生物標志物。本研究局限在于納入樣本量較少，且為回顧性研究，可能會對研究結(jié)果產(chǎn)生偏倚；此外，本研究僅從蛋白質(zhì)層面分析了FABP6、RRM1與膀胱癌臨床病理特征相關(guān)性，且尚未就FABP6、RRM1對膀胱癌具體作用機制進行探究。以上局限均有待進一步多中心、大樣本、前瞻性隨機對照實驗予以證實。

參考文獻

[1]李輝章，鄭榮壽，杜靈彬，等.中國膀胱癌流行現(xiàn)狀與趨勢分析[J].中華腫瘤雜志，2021，43（3）：293-298.

[2]陳莉，汪涌，祝廣峰，等.2020年歐洲泌尿協(xié)會肌層浸潤性膀胱癌診斷和治療指南概要[J].現(xiàn)代泌尿外科雜志，2020，25（11）：1025-1029.

[3] LUIS G，GODFROID A，NISHIUMI S，et al.Tumor resistance to ferroptosis driven by stearoyl-CoA desaturase-1 （SCD1） in cancer cells and fatty acid biding protein-4 （FABP4） in tumor microenvironment promote tumor recurrence[J].Redox Biol，2021，43：102006.

[4]談宜傲，劉樹瀚，楊磊.脂肪酸結(jié)合蛋白6在膀胱癌組織中的表達及其臨床意義[J].國際泌尿系統(tǒng)雜志，2021，41（2）：253-258.

[5]李海斌，高森.核糖核苷酸還原酶調(diào)節(jié)亞基M2對膀胱癌細胞增殖和侵襲的影響[J].第三軍醫(yī)大學學報，2021，43（18）：1762-1768.

[6]陳曉榕，左毅剛.40歲以下青年人膀胱癌的臨床特征及預后[J].臨床泌尿外科雜志，2019，34（12）：999-1002.

[7]應(yīng)文偉，何宇輝，劉海龍，等.非肌層浸潤性膀胱癌預后免疫組化分子標志物研究進展[J].中日友好醫(yī)院學報，2019，33（5）：309-311.

[8]林葉昕，陳科，安方梅，等.肝細胞癌患者脂代謝異常分析及脂肪酸結(jié)合蛋白的表達意義研究[J].中華肝臟病雜志，2021，29（10）：1006-1013.

[9]漢利，徐貴星，王新偉.結(jié)腸癌組織中Ⅱ型人回腸脂肪酸結(jié)合蛋白mRNA表達及其與癌細胞增殖、遷移的相關(guān)性[J].中國醫(yī)師雜志，2019，21（3）：438-440.

[10] FAYI M S A，GOU X J，F(xiàn)OROOTAN S S，et al.The increased expression of fatty acid-binding protein 9 in prostate cancer and its prognostic significance[J].Oncotarget，2016，7（50）：82783-82797.

[11]詹銀珠，劉峰，張燕，等.脂肪酸結(jié)合蛋白5促進宮頸癌細胞增殖侵襲和轉(zhuǎn)移[J].中華腫瘤雜志，2019，41（3）：200-207.

[12]王強，羅涵云，徐述雄，等.A-FABP、NMP22聯(lián)合Pyk2檢測對肌層浸潤性膀胱癌的診斷價值分析[J].解放軍醫(yī)藥雜志，2022，34（7）：35-38.

[13]候明敏，劉紅.CSTB、A-FABP在膀胱癌診斷與預后的價值[J].國際泌尿系統(tǒng)雜志，2019，39（6）：978-981.

[14]楊躍，張安柳，唐順芳，等.H3K9me2調(diào)控核苷酸切除修復相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄在亞砷酸鈉致L-02細胞DNA損傷中的作用[J].中華地方病學雜志，2021，40（1）：12-17.

[15]賈欽堯，宋珊，王濤，等.RRM1及SOD2基因多態(tài)性與晚期NSCLC鉑類化療的相關(guān)性研究[J].西南國防醫(yī)藥，2021，31（4）：277-281.

[16]梁俊國，靳智勇，黃少君，等.ERCC1、RRM1和BRCA1的表達與晚期肺鱗癌病人GP方案治療臨床意義研究[J].內(nèi)蒙古醫(yī)學院學報，2020，42（4）：412-415.

[17]李軍成.ERCC1、RRM1、TUBB3、TYMS和TOP2A基因與乳腺癌化療及預后的研究進展[J].西南國防醫(yī)藥，2020，30（9）：864-866.

[18]曲更寶，朱強，王峰，等.ERCC1、TUBB3和RRM1在三陰性乳腺癌組織中的表達及其意義[J].新疆醫(yī)科大學學報，2021，44（9）：994-998，1005.

[19]田楠楠，周磊，楊丹妮，等.沉默RRM1可逆轉(zhuǎn)乳腺癌細胞MCF-7/R對紫杉醇的耐藥性[J].南方醫(yī)科大學學報，2019，39（3）：304-312.

[20]朱研峰，劉志飛，邢力永，等.膀胱癌組織中TopoⅡα和RRM1蛋白表達水平及其臨床意義[J].東南大學學報（醫(yī)學版），2019，38（2）：296-302.

（收稿日期：2022-11-09） （本文編輯：張明瀾）