氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定百合（干）中7 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留

萬 靜，王健雄

（1.昆明市食品藥品檢驗(yàn)所 食品檢驗(yàn)中心，云南昆明 650032；2.云南水投供水投資有限公司，云南昆明 650051）

百合是一種藥食兩用的植物，其中淀粉、蛋白質(zhì)、膳食纖維、維生素C、氨基酸及多種礦質(zhì)元素的含量豐富，營養(yǎng)價(jià)值較高[1]。隨著我國對(duì)食品安全監(jiān)管越來越嚴(yán)格，人們對(duì)食品安全越來越重視，農(nóng)副產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留的檢測(cè)必不可少。有機(jī)磷類農(nóng)藥（Organophosphorus Pesticides，OPPs）因種類多、廣譜性、藥效好、易降解等優(yōu)點(diǎn)而被廣泛應(yīng)用，但進(jìn)入人體會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)毒性，嚴(yán)重時(shí)可導(dǎo)致呼吸麻痹而死亡，且有機(jī)磷農(nóng)藥易降解的特性為檢驗(yàn)檢測(cè)帶來了一定難度[2]。因此，本文選用QuEChERS 前處理技術(shù)，結(jié)合靈敏度高、通量高、抗干擾能力強(qiáng)的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（Gas Chromatography-Tandem Mass Spectrometry，GC-MS/MS）進(jìn)行檢測(cè)[3]，為百合（干）中7 種有機(jī)磷農(nóng)藥殘留快速檢測(cè)、準(zhǔn)確定量提供技術(shù)基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

7 種有機(jī)磷農(nóng)藥（滅線磷、治螟磷、甲基對(duì)硫磷、毒死蜱、水胺硫磷、甲基異柳磷、蠅毒磷標(biāo)準(zhǔn)品）：100 mg·L-1；乙腈、乙酸乙酯：色譜純；Bond Elut QuEChERS 提取鹽包：4 g 硫酸鎂、1 g 檸檬酸鈉、0.5 g 檸檬酸氫二鈉、1 g 氯化鈉；PSA、C18、GCB：分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀7890B-7000D；AL104 電子天平；旋渦混合器（Multi Reax）；大容量冷凍離心機(jī)（Allegra X-30R）；超純水器（Arium?Comfort）；全自動(dòng)平行濃縮儀（AutoEVA-20Plus）。

1.3 樣品處理方法

1.3.1 樣品的制備取百合（干）制品，粉碎成粉末，充分混勻過三號(hào)篩，放入聚乙烯袋中保存。

1.3.2 提取

樣品稱取3.00 g 于50 mL 的離心管，并加入10 mL水，渦旋混勻5 min，靜置30 min，加入15 mL 乙腈和一顆陶瓷均質(zhì)子，渦旋提取振蕩5 min，再加入Bond Elut QuEChERS 提取鹽包，立即振蕩混勻，再渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min。

1.3.3 凈化

吸取8 mL 提取液加到15 mL 離心管中（內(nèi)含885 mg 硫 酸 鎂、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB），渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min，取2 mL 凈化液于40 ℃水浴中氮吹至近干，加入1 mL 乙酸乙酯溶解，過0.22 μm 濾膜，待測(cè)定。

1.4 儀器條件

1.4.1 色譜條件色 譜 柱：DB-5MS UI 石 英 毛 細(xì) 管 柱（30 m×0.25 mm×0.25 μm）；進(jìn)樣口溫度：280 ℃；載氣流速：1.0 mL·min-1；不分流進(jìn)樣，進(jìn)樣量：1.0 μL；升溫程序：40 ℃保持1 min，以40 ℃·min-1升溫至120 ℃，再以8 ℃·min-1升溫至300 ℃保持5 min。

1.4.2 質(zhì)譜條件

電子轟擊電離（EI）；電離能量70 eV，離子源溫度280 ℃，傳輸線溫度280 ℃，四極桿溫度150 ℃；溶劑延遲為4 min，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)模式（MRM），目標(biāo)農(nóng)藥選擇一對(duì)定量離子、兩對(duì)定性離子，其具體參數(shù)見表1。

表1 7 種農(nóng)藥質(zhì)譜條件

1.5 標(biāo)準(zhǔn)系列制備

7 種農(nóng)藥基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液配制：定量吸取各標(biāo)準(zhǔn)品于同一容量瓶，用乙酸乙酯稀釋成1.0 mg·L-1，再用空白百合（干）基質(zhì)溶液進(jìn)行稀釋，制成濃度為5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1和300 μg·L-1的基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。

1.6 基質(zhì)效應(yīng)評(píng)價(jià)

基質(zhì)效應(yīng)（ME）普遍存在于質(zhì)譜分析中，對(duì)于GC-MS/MS 而言，絕大部分農(nóng)藥存在基質(zhì)增強(qiáng)效應(yīng)，可按照公式（1）計(jì)算。當(dāng)-20%＜ME＜20%時(shí) 為 弱 基 質(zhì) 效 應(yīng)； 當(dāng)-50% ＜ME≤-20% 或20%≤ME＜50%為中等基質(zhì)效應(yīng)；當(dāng)ME≤-50%或ME≥50%為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)[4]。

式中：Sm為基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率；Ss為純?nèi)軇?biāo)準(zhǔn)曲線斜率。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取條件選擇

百合（干）含水率較低，在萃取前加入適量水使其完全浸潤后，再加入萃取溶劑能更易滲透到細(xì)胞組織，從而增加萃取效果。乙腈對(duì)農(nóng)藥的溶解性較好，在提取過程中易于提取，且共萃物少，農(nóng)藥回收率高[5-6]。因此，本研究采用乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化條件選擇

QuEChERS 方法中凈化的填料主要是PSA、C18、GCB、MgSO4，可以有效去除樣品中的有機(jī)酸、糖類、脂類、色素等雜質(zhì)，但各自使用量并非越多越好，因此本文對(duì)PSA、C18、GCB 的使用量進(jìn)行考察。百合（干）顏色略黃，選用15 mg GCB 除色素，并分成4 組對(duì)PSA、C18用量作進(jìn)一步考察（①885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA；②885 mg MgSO4+15 mg GCB+150 mg PSA+50 mg C18；③885 mg MgSO4+15 mg GCB+300 mg PSA+100 mg C18；④885 mg MgSO4+15 mg GCB+400 mg PSA+400 mg C18），在加入量為0.05 mg·kg-1百合（干）樣品中，按1.3 方法進(jìn)行提取、凈化，結(jié)果表明，當(dāng)只有PSA 凈化時(shí)，其農(nóng)藥回收率均偏高，而在加入C18凈化后，凈化效果有所提高，說明PSA、C18聯(lián)合使用能有效去除百合飲片中的部分脂類物質(zhì)。組合④中蠅毒磷回收率明顯下降，原因是PSA、C18過多對(duì)農(nóng)藥產(chǎn)生吸附。組合③回收率最好，因此凈化條件選擇組合③。

2.3 回收率及精密度

當(dāng)空白樣品添加量為0.025 mg·kg-1、0.050 mg·kg-1、0.100 mg·kg-1時(shí)，按照上述方法進(jìn)行提取凈化，7 種農(nóng)藥的回收率為71.79%～111.87%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）在0.53%～4.59%，結(jié)果見表2。由表2 可知，本方法回收率高，重復(fù)性好，同時(shí)滿足《實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范 食品理化檢測(cè)》（GB/T 27404—2008）[7]中對(duì)回收率及精密度的要求。

表2 7 種農(nóng)藥在百合（干）中3 個(gè)水平下的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

2.4 線性關(guān)系、檢出限、基質(zhì)效應(yīng)

按1.5 配制基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，縱坐標(biāo)為農(nóng)藥定量離子的峰面積，橫坐標(biāo)為基質(zhì)混合標(biāo)準(zhǔn)溶液的質(zhì)量濃度，制作標(biāo)準(zhǔn)曲線；對(duì)0.005 mg·L-1加標(biāo)量樣品平行測(cè)定10 次，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)偏差得到方法檢出限；繪制純?nèi)軇┖突|(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，并用公式（1）對(duì)基質(zhì)效應(yīng)進(jìn)行評(píng)價(jià)，結(jié)果見表3。

表3 7 種農(nóng)藥方法檢出限與基質(zhì)效應(yīng)

在0.005 ～0.300 mg·L-1，7 種農(nóng)藥線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）均大于0.99，方法檢出限為0.80 ～2.43 μg·kg-1；7 種農(nóng)藥均表現(xiàn)為強(qiáng)基質(zhì)效應(yīng)。因此，百合（干）中7 種有機(jī)磷農(nóng)藥應(yīng)采用基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行定量。

3 結(jié)論

本研究采用QuEChERS 前處理技術(shù)，基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線的氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法（GC-MS/MS），建立了百合（干）中7 種有機(jī)磷類農(nóng)藥快速、準(zhǔn)確定量的分析方法。樣品采用乙腈提取，加到內(nèi)含885 mg硫酸鎂、300 mg PSA、100 mg C18、15 mg GCB 的分散固相萃取管中凈化，該方法在0.005 ～0.300 mg·L-1內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)（R2）＞0.99，方法檢出限為0.80 ～2.43 μg·kg-1，平均回收率為71.79%～111.87%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（n=6）小于5%。本方法方便快速，靈敏度高，重復(fù)性好，能有效消除基質(zhì)效應(yīng)，適合于對(duì)百合（干）中多種有機(jī)磷農(nóng)藥含量的高效測(cè)定。