微生物檢驗小知識

何源

微生物是指肉眼難以看清，需要借助光學(xué)顯微鏡或電子顯微鏡才能觀察到的一切微小生物，主要有細菌、真菌、霉菌、衣原體、支原體等。

什么是微生物檢驗

微生物檢驗是一種從人體中或一些產(chǎn)品當(dāng)中提取樣本，并檢測其中可能存在的微生物類型與含量的檢驗方法。微生物在人們的日常生活中扮演著非常重要的角色，有的對人類有益，但有的對人類有害。只有借助科學(xué)有效的微生物檢驗，才能更好地判斷出對人體有害的微生物，并且采取積極有效的應(yīng)對措施。

微生物檢驗的具體步驟

取樣

在微生物檢驗過程中，工作人員首先需采集檢驗樣品。其中，對人體微生物檢驗相對簡單，只需從患者身上獲取樣本即可；對產(chǎn)品樣本的采集則相對復(fù)雜，樣本不僅需要具備對整體的代表性，且要對取樣用到的取樣筐、取樣勺等工具使用酒精進行噴灑或擦拭消毒，必要時使用紫外線燈進行進一步消毒處理。工作人員在取樣前要做好手部清潔工作，在取樣完成后立即送達要求的區(qū)域，將獲取的樣品放入工作臺，準(zhǔn)備進行微生物培養(yǎng)與檢驗。

接種

在獲取樣本后，工作人員需要將其中的微生物移植到適合生長的人工培養(yǎng)基或活生物體內(nèi)，這一過程被稱為接種。常用的接種工具有接種針、接種環(huán)、玻璃涂棒、小解剖刀等。接種方式有劃線接種、三點接種與穿刺接種等。其中，劃線接種是最常用的接種方式，主要使用接種環(huán)、接種針等在固體培養(yǎng)基的表面進行來回直線型移動接種；三點接種常用在霉菌接種與研究上，使用裝置將少量的微生物呈等邊三角形分布接種；穿刺接種則是研究微生物動力或培養(yǎng)厭氧菌時常用的接種方法，即使用接種針蘸取少量的菌種，在半固體培養(yǎng)基中做直線穿刺接種。需要注意的是，所有的接種都必須保持無菌操作模式，培養(yǎng)基需要經(jīng)過高壓滅菌，接種的過程也需要在無菌環(huán)境下使用經(jīng)過滅菌處理的工具進行接種。

分離純化

通常情況下，人們獲取的樣本當(dāng)中不只含有一種類型的微生物。但在進行微生物鑒定時，所需要的微生物一般要求為純培養(yǎng)物，因此在培養(yǎng)前還需要對其進行分離純化。通常情況下，微生物分離純化的方式有傾注法、涂布法等。其中，傾注法指的是將微生物懸液進行稀釋，并與40℃～50℃的營養(yǎng)瓊脂混合，之后傾注到無菌培養(yǎng)皿中，等到含菌瓊脂凝固后倒置，使單一細胞經(jīng)過多次增殖后形成菌落，最后去單個菌落，重復(fù)上述步驟得到純培養(yǎng)物。涂布法則是將微生物懸液稀釋，后在已經(jīng)凝固的無菌營養(yǎng)瓊脂上使用無菌玻璃刮刀對其進行均勻涂布，最終在恒溫培養(yǎng)下得到單個菌落。

微生物培養(yǎng)

在獲取純培養(yǎng)物后，工作人員就可以對微生物進行培養(yǎng)。在此過程中，根據(jù)微生物培養(yǎng)時是否需要氧氣，可以將培養(yǎng)方法分為好氧培養(yǎng)與厭氧培養(yǎng)兩類。其中，好氧培養(yǎng)又稱“好氣培養(yǎng)”，這種微生物在培養(yǎng)時需要加入氧氣，否則就無法正常生長。一般需要使用棉花塞過濾獲取無菌空氣，或是借助搖床震蕩來使空氣進入培養(yǎng)瓶中；厭氧培養(yǎng)則需要清除培養(yǎng)基當(dāng)中的氧氣。根據(jù)培養(yǎng)基狀態(tài)，又可以分為固體培養(yǎng)與液體培養(yǎng)兩類。其中，固體培養(yǎng)指的是在疏松且有營養(yǎng)的固土培養(yǎng)基中進行微生物培養(yǎng)；液體培養(yǎng)是指將微生物直接接種于液體培養(yǎng)基中，并不斷振蕩或攪拌，使微生物均勻地在液體培養(yǎng)基中生長繁殖的一種培養(yǎng)方法。

微生物鑒定

在完成微生物培養(yǎng)后，工作人員需要對微生物進行形態(tài)觀察、生化實驗、化學(xué)成分分析、基因型分析以及系統(tǒng)發(fā)育分析等五個方面的鑒定。其中，形態(tài)觀察指對微生物進行染色，后使用顯微鏡對其細胞的形狀、大小、排列以及細胞結(jié)構(gòu)等進行分析，進而根據(jù)微生物形態(tài)結(jié)構(gòu)上的差異做出鑒定；生化實驗分為糖酵解實驗、淀粉水解實驗等，能夠幫助工作人員有效判定微生物各方面能力；化學(xué)成分分析可以幫助工作人員判斷微生物屬于放線菌還是其他細菌等。通過完善的微生物鑒定，工作人員可以有效判斷出微生物可能造成的影響，及時采取針對性的應(yīng)對措施。

微生物保存

在微生物鑒定完成后，工作人員還需要對微生物樣本進行保存，使其在一定時間內(nèi)具備菌種原本的優(yōu)良特性。常用的保存方法有定期移植法、液體石蠟法、零下80℃低溫凍結(jié)法等。其中，定期移植法是定期將菌種重新在適宜的培養(yǎng)基上接種并培養(yǎng)的保存方法，屬于一種常用的短期保存方法；液體石蠟法指的是在菌種培養(yǎng)基當(dāng)中注入滅菌的液體石蠟覆蓋整個培養(yǎng)基表面，使微生物在隔絕的環(huán)境下保存。只有嚴格遵循“真空、冷凍、干燥”的三大微生物保存原則，才能更有效地保持微生物樣本的質(zhì)量。

微生物檢驗如何控制質(zhì)量

在微生物檢驗過程中，檢驗質(zhì)量的控制指的是使微生物從樣本采集到完成鑒定的全過程當(dāng)中，隔絕外來微生物對樣本的污染，確保微生物檢驗的結(jié)果準(zhǔn)確無誤。通常情況下，微生物檢驗的質(zhì)量控制方式分為外部質(zhì)量控制與內(nèi)部質(zhì)量控制兩種。其中，外部質(zhì)量控制指的是將實驗室檢驗完成后獲取的微生物質(zhì)量檢驗結(jié)果與其他實驗室在相同環(huán)境下相同微生物檢驗的結(jié)果進行對比，根據(jù)微生物質(zhì)量檢測結(jié)果的誤差判斷微生物檢驗工作的質(zhì)量。需要注意的是，這種質(zhì)量控制方法有時會受到不同實驗室當(dāng)中設(shè)備、環(huán)境等因素的影響，導(dǎo)致微生物檢驗質(zhì)量難以控制在一定的標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)。

內(nèi)部質(zhì)量控制又被稱作控制變量法，包括使用不同分析設(shè)備檢驗、不同操作人員檢驗、不同樣本檢驗以及不同檢測溶液檢驗等，借助對上述可能影響檢驗結(jié)果的變量更換來確定微生物檢驗過程當(dāng)中究竟是哪一個環(huán)節(jié)發(fā)生問題與誤差，從而使微生物檢驗的結(jié)果更加真實有效。

結(jié)語

微生物在日常生活當(dāng)中無處不在，與人們的身體健康有著密切關(guān)系。只有對微生物采取適當(dāng)?shù)臋z驗分析措施，并針對不同微生物的特點采取適當(dāng)?shù)膽?yīng)對方法，才能更好地利用微生物改善人們的生活質(zhì)量。