基于IGF-1R/PI3K/AKT的益氣固表丸對(duì)慢性阻塞性肺疾病模型大鼠的影響及作用機(jī)制研究

徐丹　荊晶　李爭　王晶　姜敏　王益德　張艷麗

摘要 目的：益氣固表丸對(duì)慢性阻塞性肺疾?。–OPD）有明顯的治療作用，但具體作用機(jī)制尚不清楚。本研究旨在探討益氣固表丸對(duì)脂多糖（LPS）聯(lián)合煙霧暴露構(gòu)建慢性阻塞性肺病模型大鼠的治療作用機(jī)制。方法：通過大鼠氣管內(nèi)灌注LPS和吸入香煙煙霧構(gòu)建慢性阻塞性肺病模型，同時(shí)給予模型大鼠低、中、高劑量益氣固表丸治療14 d。觀察呼吸參數(shù)及肺組織病理變化。采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定支氣管肺泡灌洗液（BALF）及血清胰島素樣生長因子1型受體（IGF-1R）、白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）、IL-10水平。采用蛋白質(zhì)印跡法檢測大鼠肺組織樣品中胰島素樣生長因子1受體（IGF-1R）/PI3K/AKT信號(hào)通路組分的磷酸化狀態(tài)。結(jié)果：與對(duì)照組和低劑量益氣組比較，大劑量益氣固表丸治療可顯著改善COPD大鼠呼吸參數(shù)，減輕肺損傷和炎癥，降低BALF和血清炎癥介質(zhì)水平。此外，高劑量益氣固表丸干預(yù)的COPD大鼠肺組織標(biāo)本中磷酸化IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3、p-mTOR蛋白水平顯著降低。結(jié)論：益氣固表丸對(duì)COPD有明顯的治療作用，可能與靶向IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān)。

關(guān)鍵詞 益氣固表丸；脂多糖；慢性阻塞性肺疾?。籌GF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路；作用機(jī)制；胰島素樣生長因子1受體；白細(xì)胞介素-1β；白細(xì)胞介素-10

Effects and Mechanism of Yiqi Gubiao Pills on Chronic Obstructive Pulmonary Disease in Model Rats Based on IGF-1R/PI3K/AKT Signaling Pathway

XU Dan1，2，3，JING Jing1，2，3，LI Zheng1，2，3，WANG Jing1，2，JIANG Min1，2，WANG Yide1，2，3，ZHANG Yanli3

（1 National Clinical Research Base of Traditional Chinese Medicine，Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830090，China; 2 Xinjiang Key Laboratory Respiratory Disease Research，Urumqi 830090，China; 3 Respiratory Department，Traditional Chinese Medicine Hospital Affiliated to Xinjiang Medical University，Urumqi 830090，China）

Abstract Objective：Yiqi Gubiao Pills have a definite therapeutic effect on chronic obstructive pulmonary disease（COPD），but the specific mechanism of action remains unclear.This study aimed to explore the therapeutic mechanism of Yiqi Gubiao Pills in the treatment of COPD in rats induced by lipopolysaccharide（LPS） combined with cigarette smoke exposure.Methods：The COPD model was induced in rats by intratracheal instillation of LPS and cigarette smoke inhalation.Meanwhile，the model rats were treated with low-，medium-，or high-dose Yiqi Gubiao Pills for 14 days.The respiratory parameters and pulmonary histopathological changes were examined.The enzyme-linked immunosorbent assay（ELISA） was conducted to measure the levels of insulin-like growth factor 1 receptor（IGF-1R），interleukin（IL）-1β，and IL-10 in bronchoalveolar lavage fluid（BALF） and serum.Western blot was used to determine the phosphorylation of the components in the IGF-1R/PI3K/AKT signaling pathway in the lung tissues of rats.Results：Compared with the control group and the low-dose Yiqi Gubiao Pills group，the high-dose Yiqi Gubiao Pills group showed significantly improved respiratory parameters，alleviated lung injury and inflammation，and reduced proinflammatory cytokine levels in BALF and serum of COPD rats.Furthermore，high-dose Yiqi Gubiao Pills could significantly reduce the protein levels of phosphorylated（p）-IGF-1R，p-PI3K，p-AKT，p-GSK3，and p-mTOR in the lung tissues of COPD rats.Conclusion：Yiqi Gubiao Pills have a definite therapeutic effect on COPD，and the mechanism may be related to targeting the IGF-1R/PI3K/AKT signaling pathway.

Keywords Yiqi Gubiao Pills; Lipopolysaccharide; Chronic obstructive pulmonary disease; IGF-1R/PI3K/AKT signaling pathway；Mechanism of action；Insulin-like growth factor 1 receptor；Interleukin-1β；Interleukin-10

中圖分類號(hào)：R256.14文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.014

慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD）是一種進(jìn)行性和部分可逆的慢性肺部疾病，其特征是有毒顆粒或氣體對(duì)氣道和肺誘導(dǎo)的慢性炎癥反應(yīng)導(dǎo)致氣流阻塞［1］，吸煙是COPD的主要危險(xiǎn)因素［2］，患病率為8.80%～14.53%［3］，全球每年有200多萬人死于COPD［4］。據(jù)預(yù)測到2030年COPD將上升到全球第3大死亡原因［5］。因此，制定有效的方法來預(yù)防COPD的發(fā)展是非常重要的。

近年來研究人員發(fā)現(xiàn)，中醫(yī)實(shí)踐中常用的益氣固表丸可以改善COPD大鼠肺功能，緩解肺部炎癥［6］。臨床隨機(jī)、雙盲實(shí)驗(yàn)研究表明益氣固表丸可改善穩(wěn)定期COPD患者的喘息、咳嗽、咳痰等癥狀［7-8］。益氣固表丸的主要中藥黨參、白術(shù)、黃芩等已被證明具有體內(nèi)外免疫調(diào)節(jié)和抗炎作用［9-11］；黃芩治療COPD大鼠可減輕氣道重塑［11］。然而，益氣固表丸治療COPD療效的確切機(jī)制尚不清楚。

胰島素樣生長因子1受體（Insulin-like Growth Factor Type1 Receptor，IGF-1R）是一種通過IGF1和IGF2結(jié)合激活的跨膜酪氨酸激酶，在肺癌、炎癥、纖維化等肺部發(fā)育和疾病中發(fā)揮重要作用［12］。IGF1結(jié)合IGF-1R激活參與COPD發(fā)病機(jī)制的磷脂酰肌醇3激酶（Phosphoinositide 3-Kinase，PI3K）/蛋白激酶B（Protein Kinase B，AKT）/哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（Mammalian Target of Rapamycin，mTOR）信號(hào)通路［13］。COPD中存在IGF1/IGF-1R信號(hào)通路表達(dá)異常［12］。研究表明，PI3K信號(hào)通路在COPD中被激活導(dǎo)致包括AKT、糖原合成酶激酶3（Glycogen Synthase Kinase-3，GSK3）和mTOR等下游介質(zhì)磷酸化水平升高［14-15］，PI3K亞型因此成為COPD潛在治療靶點(diǎn)［16］。PI3Kδ抑制劑GSK2269557的臨床試驗(yàn)在COPD患者中取得了良好的治療效益和安全性［17-18］。因此，我們推測益氣固表丸可能通過靶向IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路來改善COPD癥狀。

為了驗(yàn)證這一假設(shè)，我們前期已經(jīng)采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法確定益氣固表丸治療COPD潛在治療靶點(diǎn)和機(jī)制［19-21］，本研究進(jìn)一步評(píng)估益氣固表丸對(duì)脂多糖（Lipopolysaccharide，LPS）聯(lián)合吸煙誘導(dǎo)的COPD模型大鼠經(jīng)肺損傷和炎癥的治療作用，結(jié)果提示益氣固表丸可通過阻斷IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路減輕COPD肺損傷和炎癥反應(yīng)，為益氣固表丸治療COPD的作用機(jī)制研究提供了新思路。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動(dòng)物 雄性Wistar大鼠75只，8周齡，體質(zhì)量（200±50）g。購自新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物中心，生產(chǎn)許可證號(hào)：SYCK（新）2018-0002，使用許可證號(hào)：SYSK（新）2018-0003。所有動(dòng)物護(hù)理和實(shí)驗(yàn)程序均由新疆醫(yī)科大學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)（倫理審批號(hào)：IACUC-201905301-37）。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)均按照《新疆醫(yī)科大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)正確實(shí)施指南》進(jìn)行。

1.1.2 藥物 益氣固表丸購自新疆醫(yī)科大學(xué)附屬中醫(yī)院中心藥房。

1.1.3 試劑與儀器 ELISA試劑盒（聯(lián)科生物，批號(hào)：70-EK301B/3-96，70-EK310/2-96），RIPA（放射免疫沉淀法）緩沖液（Boster生物技術(shù)，批號(hào)：AR0105）；IGF抗體（Abcam，英國，批號(hào)：ab182408），IGF-1R（武漢華美，批號(hào)：CSB-E13873r）PI3抗體（Abcam，英國，批號(hào)：ab191606），AKT 1/2/3抗體（Abcam，英國，批號(hào)：ab179463），Anti-GSK3 Beta+GSK3 Alpha抗體（Abcam，英國，批號(hào)：ab185141），mTOR抗體（Abcam，英國，批號(hào)：ab32028）；倒置顯微鏡（尼康，日本，型號(hào)：E200），小動(dòng)物肺功能全身容積描記儀（Buxco，英國，型號(hào)：WBP），酶標(biāo)儀（Bio-Rad，美國，型號(hào)：xMarkTM），化學(xué)發(fā)光成像儀系統(tǒng)（上海勤翔科學(xué)儀器有限公司，型號(hào)：Chemiscope 3000），蛋白轉(zhuǎn)膜（Bio-Rad，英國，型號(hào)：Mini-PROTEAN Tetra system）。

1.2 方法

1.2.1 分組與模型制備 將大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、慢阻肺組、慢阻肺+益氣固表低劑量組、慢阻肺+益氣固表中劑量組、慢阻肺+益氣固表高劑量組，每組15只。采用吸入煙霧、氣管內(nèi)灌注LPS的方法建立大鼠COPD模型［22-23］。大鼠在煙草煙霧室中暴露于香煙煙霧（12 mg焦油，1.1 mg尼古丁和14 mg一氧化碳）1 h，2次/d，4 h無煙間隔/次，持續(xù)90 d。對(duì)照組大鼠暴露于室內(nèi)空氣中，在第30天進(jìn)行氣管內(nèi)灌注LPS。大鼠經(jīng)腹腔注射0.4%戊巴比妥鈉溶液（50 mg/kg）麻醉，氣管內(nèi)灌注LPS 100 μL（2 mg/mL）。對(duì)照組大鼠給予等量0.9%生理鹽水。

1.2.2 給藥方法 從第1天開始，用含0.66 g/kg（低劑量）、1.31 g/kg（中劑量）、2.62 g/kg（高劑量）益氣固表丸的水溶液10 mL/kg灌胃給大鼠，1次/d，連續(xù)14 d。根據(jù)美國食品藥品監(jiān)督管理局建議的公式：人當(dāng)量劑量=大鼠劑量×0.16，中劑量可與臨床應(yīng)用的人相當(dāng)；對(duì)照組和COPD組大鼠給予等量蒸餾水。

1.3 檢測指標(biāo)與方法

1.3.1 呼吸參數(shù)測量 益氣固表丸治療14 d后，采用全身容積描記儀測定呼吸頻率（Respiratory Frequency，f）、潮氣量（Tidal Volume，TVb）、每分鐘通氣量（Minute Ventilation Volume，MVb）、吸氣峰流量（Peak Inspiratory Flow，PIFb）、呼氣流量峰值（Peak Expiratory Flow，PEFb）、吸氣時(shí)間（Inspiratory Time，Ti）、呼氣時(shí)間（Expiratory Time，Te）和50%潮氣量呼氣流量（Tidal Expiratory Flow at 50% of Tidal Volume，TEF50）等呼吸參數(shù)。

1.3.2 蘇木精-伊紅（Hematoxylin-Eosin，HE）染色法觀察病理學(xué)改變 所有大鼠于第90天處死。采集肺組織樣本，用4%多聚甲醛固定，制備4 μm厚的組織切片，并進(jìn)行HE染色。采用倒置顯微鏡觀察肺泡壁增厚、中性粒細(xì)胞浸潤等組織病理學(xué)改變。

1.3.3 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn) 經(jīng)37 ℃，2次灌注生理鹽水30 mL，于4 ℃，3 000×g離心15 min，第90天收集支氣管肺泡灌洗液。收集上清，-80 ℃保存。根據(jù)生產(chǎn)商的說明書，使用ELISA試劑盒測定支氣管肺泡灌洗液（Bronchoalveolar Lavage Fluid，BALF）中IGF-1R、白細(xì)胞介素（Interleukin，IL）-1β和IL-10濃度。

1.3.4 蛋白質(zhì)印跡法（Westen Blooting）分析 大鼠肺組織標(biāo)本于第90天采集，用RIPA緩沖液在冰上均質(zhì)，然后離心半徑15 cm，12 000 r/min離心15 min。使用BCA定量試劑盒測定蛋白濃度。蛋白質(zhì)在10% SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳上分離，轉(zhuǎn)移到聚偏氟乙烯膜上，然后用5%脫脂牛奶封閉1 h。然后用抗IGF-1R的一抗（1∶500；ab182408），p-IGF-1R（1∶500；ab39398），PI3K（1∶1 000；ab191606），p-PI3K（1∶2 000；ab182651），一種蛋白激酶（1∶800；ab179463），p-AKT（1∶800；ab192623），人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源物（Phosphatase and Tensin Homologue Deleted on Chromosome Ten，PTEN）；（1∶2 000；GSK3 ab32199），（1∶1 000；ab185141），p-GSK3（1∶800；ab68476），mTOR（1∶800；ab32028），p-mTOR（1∶800；ab137133），或β肌動(dòng)蛋白（1∶800）在4 ℃過夜，然后用含0.1% Tween 20（TBST）的tris緩沖鹽水洗3次。然后用辣根過氧化物酶標(biāo)記的二抗（1∶500；ab205718；Abcam）在室溫下保存1 h。再用洗滌緩沖液（Tris Buffered Saline Tween，TBST）洗3次后，使用Chemiscope 3000對(duì)蛋白條帶進(jìn)行可視化和分析。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用Prism 6.0統(tǒng)計(jì)軟件（Graphpad，San Diego，CA，USA）進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。組間比較采用t檢驗(yàn)或方差分析。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 益氣固表丸對(duì)COPD大鼠呼吸參數(shù)的影響 與對(duì)照組比較，LPS+香煙煙霧暴露導(dǎo)致大鼠呼吸頻率顯著增加，TVb、MVb、PIFb、PEFb、Ti、Te、EF50顯著降低，說明COPD大鼠模型建立成功。益氣固表丸治療COPD組大鼠呼吸頻率降低，其他參數(shù)升高，且呈劑量依賴性，提示益氣固表方可改善COPD大鼠呼吸功能。見表1。

2.2 大劑量益氣固表丸對(duì)COPD大鼠肺組織病理學(xué)的影響 觀察益氣固表丸對(duì)COPD肺損傷的作用。肺組織標(biāo)本HE檢查顯示，與對(duì)照組比較，COPD大鼠表現(xiàn)出明顯的結(jié)構(gòu)改變和炎癥反應(yīng)，包括肺泡損傷、支氣管上皮損傷、炎癥細(xì)胞浸潤。與對(duì)照組、低、中劑量益氣固表丸治療比較，高劑量益氣固表丸治療可預(yù)防COPD大鼠肺組織肺泡、支氣管上皮破裂及淋巴細(xì)胞和炎癥細(xì)胞浸潤。見圖1。

2.3 大劑量益氣固表丸可調(diào)節(jié)COPD大鼠BALF及血清細(xì)胞因子水平 高劑量益氣固表丸顯著降低COPD大鼠BALF和血清中IL-1β水平，升高IL-10水平。BALF和血清IGF-1R水平無明顯變化。見表2～3。

2.4 大劑量益氣固表丸抑制COPD大鼠IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路 與對(duì)照組比較，COPD大鼠肺組織標(biāo)本中p-IGF-1R、p-PI3K、p-AKT、p-GSK3蛋白水平顯著升高，PTEN、p-mTOR蛋白水平顯著降低。與對(duì)照治療比較，益氣固表丸高劑量治療可有效阻斷COPD大鼠IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路的激活。見圖2A～G。

3 討論

前期研究通過整合中醫(yī)研究中廣泛使用的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫和工具［24］，我們發(fā)現(xiàn)益氣固表丸在COPD治療中可能與調(diào)控PI3K/AKT信號(hào)通路有關(guān)。本研究結(jié)果顯示，與對(duì)照組、益氣固表丸低、中劑量組比較，高劑量益氣固表丸治療可有效預(yù)防LPS聯(lián)合煙霧暴露誘導(dǎo)的COPD大鼠的疾病進(jìn)展，

改善呼吸參數(shù)，減輕肺組織病理異常，抑制COPD大鼠BALF和血清細(xì)胞因子水平。此外，高劑量益氣固表丸治療COPD大鼠可阻斷IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路的激活進(jìn)而抑制COPD的疾病發(fā)展。

COPD小鼠模型常采用吸入香煙煙霧加氣管內(nèi)注射LPS進(jìn)行誘導(dǎo)［23］。本研究結(jié)果表明，與對(duì)照組比較，COPD大鼠出現(xiàn)了明顯的呼吸功能受損，COPD組出現(xiàn)了典型的肺組織病理學(xué)改變，細(xì)胞因子分泌失調(diào)，說明COPD大鼠模型建立成功。我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，以2.62 g/kg益氣固表丸湯治療14 d，可有效防止大鼠COPD疾病進(jìn)展。與JIANG等［6］研究一致，2.36 g/kg益氣固表丸可改善慢性阻塞性肺疾病大鼠的咳嗽潛伏期和頻率、呼吸阻力以及氣管黏膜和肺的組織病理學(xué)改變。提示益氣固表丸是一種有前景的治療COPD藥物。

COPD與肺和全身炎癥反應(yīng)密切相關(guān)，以血液炎癥介質(zhì)水平升高為特征，在晚期中更為明顯［25］。IL-1β是一種典型的炎癥介質(zhì)，在COPD中啟動(dòng)和維持氣道炎癥起關(guān)鍵作用［26］。COPD急性加重患者中血清IL-1β水平明顯高于穩(wěn)定期患者或健康對(duì)照組，且與血清C反應(yīng)蛋白和IL-17水平正相關(guān)，可作為持續(xù)氣道炎癥和COPD持續(xù)加重的指標(biāo)［27］。另一方面，IL-10被認(rèn)為是COPD中的一種抗炎細(xì)胞因子。ZHANG等［28］研究證明，與健康的非吸煙對(duì)照組比較，健康吸煙者和COPD患者血清和痰中IL-10水平均顯著降低。最近的一項(xiàng)研究報(bào)道，血清IL-10水平低與COPD患者呼吸參數(shù)惡化相關(guān)［29］。SILVA等［30］發(fā)現(xiàn)COPD患者的病情嚴(yán)重程度與血清IL-10水平負(fù)相關(guān)。在COPD中，BALF和血清細(xì)胞因子水平的變化反映肺部和全身炎癥水平［31］。因此，我們?cè)噲D確定益氣固表丸是否能影響COPD患者BALF及血清細(xì)胞因子水平。與上述結(jié)果一致，本研究數(shù)據(jù)顯示，與對(duì)照組比較COPD大鼠BALF和血清中IL-1β水平顯著升高，IL-10水平降低，高劑量益氣固表丸治療可有效逆轉(zhuǎn)這一現(xiàn)象。結(jié)合HE染色結(jié)果，提示大劑量益氣固表丸可緩解COPD患者的肺部和全身炎癥反應(yīng)。

前期生物信息學(xué)分析結(jié)果提示益氣固表丸在COPD治療中可能靶向PI3K/AKT信號(hào)通路。考慮到IGF-1R信號(hào)主要激活PI3K/AKT下游信號(hào)通路，我們假設(shè)益氣固表丸方可能在COPD治療中調(diào)節(jié)IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路。有報(bào)道稱IGF-1R/AKT/mTOR信號(hào)通路的激活通過抑制受損細(xì)胞成分的自噬消除而參與COPD的發(fā)病［32］。消耗IGF-1R可保護(hù)小鼠免受氧誘導(dǎo)的肺損傷［33］。消蝕IGF1-IGF1R軸可抑制巨噬細(xì)胞中核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域樣受體蛋白3（Nucleotide-binding Oligomerization domain-like Receptor Protein 3，NLRP3）炎癥小體，提示IGF-1R對(duì)肺炎癥的啟動(dòng)至關(guān)重要［34］。為了研究IGF-1R/PI3K/AKT信號(hào)通路在益氣固表丸治療COPD中的作用，我們檢測了大鼠肺組織樣本中該通路成分的磷酸化狀態(tài)。在本研究中，益氣固表丸治療COPD大鼠并未影響B(tài)ALF和血清IGF-1R水平，可能是因?yàn)镮GF-1R不是分泌蛋白，而大劑量益氣固表丸治療后COPD大鼠肺組織標(biāo)本中IGF-1R及下游效應(yīng)因子磷酸化水平顯著升高。相反，PI3K的負(fù)調(diào)控因子PTEN的蛋白表達(dá)在高劑量益氣固表丸治療后顯著上調(diào)［35］。以上數(shù)據(jù)提示，大劑量益氣固表丸可通過抑制IGF1R/PI3K/AKT信號(hào)通路抑制COPD的發(fā)展。

綜上所述，在本研究中提示PI3K/AKT通路是益氣固表丸治療COPD的潛在治療靶點(diǎn)。高劑量益氣固表丸（2.62 g/kg）通過抑制IGF1R/PI3K/AKT信號(hào)通路可減輕COPD大鼠肺損傷和炎癥，本研究為益氣固表丸治療COPD的作用機(jī)制研究提供了新思路。

利益沖突聲明：無。

參考文獻(xiàn)

［1］CHRISTENSON SA，SMITH BM，BAFADHEL M，et al.Chronic obstructive pulmonary disease［J］.The Lancet，2022（10342）：399.

［2］SCHWARTZ AG.Genetic epidemiology of cigarette smoke-induced lung disease［J］.Proc Am Thorac Soc，2012，9（2）：22-26.

［3］VARMAGHANI M，DEHGHANI M，HEIDARI E，et al.Global prevalence of chronic obstructive pulmonary disease：systematic review and meta-analysis［J］.East Mediterr Health J，2019，25（1）：47-57.

［4］GBD 2017 Causes of Death Collaborators.Global，regional，and national age-sex-specific mortality for 282 causes of death in 195 countries and territories，1980-2017：a systematic analysis for the Global Burden of Disease Study 2017［J］.Lancet，2018，392（10159）：1736-1788.

［5］LABAKI WW，ROSENBERG SR.Chronic Obstructive Pulmonary Disease［J］.Ann Intern Med，2020，173（3）：ITC17-ITC32.

［6］JIANG L，LI F，SUN J，et al.Efficacy of Yiqigubiao pill on chronic obstructive pulmonary disease in rats with the disease induced by lipopolysaccharide and cigarette-smoke fumigation［J］.J Tradit Chin Med，2020，40（6）：983-991.

［7］LI FS，ZHANG YL，LI Z，et al.Randomized，double-blind，placebo-controlled superiority trial of the Yiqigubiao pill for the treatment of patients with chronic obstructive pulmonary disease at a stable stage［J］.Exp Ther Med，2016，12（4）：2477-2488.

［8］ZHEN G，JING J，DAN X，et al.A randomized controlled study of the Yi Qi Gu Biao Pill in the treatment of frequent exacerbator phenotype in chronic obstructive pulmonary disease （Lung and Spleen Qi Deficiency Syndrome）［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2017，2017：9130804.

［9］ZHENG YS，WU ZS，NI HB，et al.Codonopsis pilosula polysaccharide attenuates cecal ligation and puncture sepsis via circuiting regulatory T cells in mice［J］.Shock，2014，41（3）：250-255.

［10］HONG MH，KIM JH，BAE H，et al.Atractylodes japonica Koidzumi inhibits the production of proinflammatory cytokines through inhibition of the NF-kappaB/IkappaB signal pathway in HMC-1 human mast cells［J］.Arch Pharm Res，2010，33（6）：843-851.

［11］XU F，LIN J，CUI W，ET AL.Scutellaria baicalensis attenuates airway remodeling via PI3K/Akt/NF-κB pathway in cigarette smoke mediated-COPD rats model［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2018，2018：1281420.

［12］WANG Z，LI W，GUO Q，et al.Insulin-like growth factor-1 signaling in lung development and inflammatory lung diseases［J］.Biomed Res Int，2018，2018：6057589.

［13］LAMOUILLE S，XU J，DERYNCK R.Molecular mechanisms of epithelial-mesenchymal transition［J］.Nat Rev Mol Cell Biol，2014，15（3）：178-196.

［14］WEST KA，BROGNARD J，CLARK AS，et al.Rapid Akt activation by nicotine and a tobacco carcinogen modulates the phenotype of normal human airway epithelial cells［J］.J Clin Invest，2003，111（1）：81-90.

［15］HOUSSAINI A，BREAU M，KEBE K，et al.mTOR pathway activation drives lung cell senescence and emphysema［J］.JCI Insight，2018，3（3）：e93203.

［16］PIROZZI F，REN K，MURABITO A，et al.PI3K signaling in chronic obstructive pulmonary disease：mechanisms，targets，and therapy［J］.Curr Med Chem，2019，26（16）：2791-2800.

［17］CAHN A，HAMBLIN JN，BEGG M，et al.Safety，pharmacokinetics and dose-response characteristics of GSK2269557，an inhaled PI3Kδ inhibitor under development for the treatment of COPD［J］.Pulm Pharmacol Ther，2017，46：69-77.

［18］INO H，WILSON R，TERAO T，et al.Evaluation of the safety，tolerability，and pharmacokinetics of GSK2269557 （Nemiralisib） administered via dry powder inhaler to healthy Japanese subjects［J］.Clin Pharmacol Drug Dev，2019，8（1）：78-86.

［19］SHEN X，ZHAO Z，LUO X，et al.Systems pharmacology based study of the molecular mechanism of SiNiSan formula for application in nervous and mental diseases［J］.Evid Based Complement Alternat Med，2016，2016：9146378.

［20］ZHANG XW，LIU W，JIANG HL，et al.Dissection of pharmacological mechanism of Chinese herbal medicine Yihuo Huatan formula on chronic obstructive pulmonary disease：a systems pharmacology-based study［J］.Sci Rep，2019，9（1）：13431.

［21］世界中醫(yī)藥學(xué)會(huì)聯(lián)合會(huì).網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)評(píng)價(jià)方法指南［J］.世界中醫(yī)藥，2021，16（4）：527-532.

［22］SUN D，OUYANG Y，GU Y，et al.Cigarette smoke-induced chronic obstructive pulmonary disease is attenuated by CCL20-blocker：a rat model［J］.Croat Med J，2016，57（4）：363-370.

［23］RODRIGUES R，OLIVO CR，LOURENO JD，et al.A murine model of elastase-and cigarette smoke-induced emphysema［J］.J Bras Pneumol，2017，43（2）：95-100.

［24］ZHANG R，ZHU X，BAI H，et al.Network pharmacology databases for traditional Chinese medicine：review and assessment［J］.Front Pharmacol，2019，10：123.

［25］HAN XJ，ALU A，XIAO YN，et al.Hyperprogression：a novel response pattern under immunotherapy［J］.Clin Transl Med，2020，10（5）：e167.

［26］LI Z，HE P，DING H，et al.Association between peripheral blood WBCs C3aR mRNA level and plasma C3a，C3aR，IL-1β concentrations and acute exacerbation of chronic obstructive pulmonary disease［J］.Immunobiology，2022，227（1）：152164.

［27］ZOU Y，CHEN X，LIU J，et al.Serum IL-1β and IL-17 levels in patients with COPD：associations with clinical parameters［J］.Int J Chron Obstruct Pulmon Dis，2017，12：1247-1254.

［28］YANG D，WANG L，JIANG P，et al.Correlation between hs-CRP，IL-6，IL-10，ET-1，and Chronic Obstructive Pulmonary Disease Combined with Pulmonary Hypertension［J］.J Healthc Eng，2022，2022：3247807.

［29］BRADFORD E，JACOBSON S，VARASTEH J，et al.The value of blood cytokines and chemokines in assessing COPD［J］.Respir Res，2017，18（1）：180.

［30］SILVA B，LIRA FS，RAMOS D，et al.Severity of COPD and its relationship with IL-10［J］.Cytokine，2018，106：95-100.

［31］SELVARAJAH S，TODD I，TIGHE PJ，et al.Multiple circulating cytokines are coelevated in chronic obstructive pulmonary disease［J］.Mediators Inflamm，2016，2016：3604842.

［32］TAKASAKA N，ARAYA J，HARA H，et al.Autophagy induction by SIRT6 through attenuation of insulin-like growth factor signaling is involved in the regulation of human bronchial epithelial cell senescence［J］.J Immunol，2014，192（3）：958-968.

［33］XIE Y，HE Q，CHEN H，et al.Crocin ameliorates chronic obstructive pulmonary disease-induced depression via PI3K/Akt mediated suppression of inflammation［J］.Eur J Pharmacol，2019，862：172640.

［34］SPADARO O，GOLDBERG EL，CAMELL CD，et al.Growth hormone receptor deficiency protects against age-related NLRP3 Inflammasome activation and immune senescence［J］.Cell Rep，2016，14（7）：1571-1580.

［35］STAMBOLIC V，SUZUKI A，DE LA POMPA JL，et al.Negative regulation of PKB/Akt-dependent cell survival by the tumor suppressor PTEN［J］.Cell，1998，95（1）：29-39.

（2021-08-26收稿 本文編輯：吳珊）

基金項(xiàng)目：新疆維吾爾自治區(qū)自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2018D01C282）作者簡介：徐丹（1983.01—），女，碩士，副主任醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學(xué)，E-mail：66601443@qq.com通信作者：張艷麗（1985.04—），女，博士，副主任醫(yī)師，研究方向：中西醫(yī)結(jié)合呼吸病學(xué)，E-mail：171179265@qq.com