視疲勞及其中醫(yī)證候動(dòng)物模型的構(gòu)建策略

黃志強(qiáng)　張建軍　王淳　張?！∧虾ｙi　陳彥　賈鳳蘭　張寶旭　杜軍　闞君陶　陳亮　王林元

摘要 視疲勞已發(fā)展為全球性的健康問(wèn)題，臨床注重對(duì)其預(yù)防和保健，可通過(guò)調(diào)整用眼模式，使用適宜物質(zhì)、物理干預(yù)、休息等方式緩解癥狀體征。目前視疲勞主要以主觀癥狀進(jìn)行診斷，尚無(wú)準(zhǔn)確反映該狀態(tài)的客觀評(píng)價(jià)指標(biāo)，導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)和臨床評(píng)價(jià)方法及機(jī)制研究匱乏。建立視疲勞動(dòng)物模型，并結(jié)合中醫(yī)對(duì)視疲勞的認(rèn)識(shí)及診療特色建立視疲勞相關(guān)中醫(yī)證候模型，有助于深入闡釋視疲勞發(fā)生發(fā)展機(jī)制，全面挖掘中醫(yī)對(duì)視疲勞的預(yù)防保健優(yōu)勢(shì)?，F(xiàn)總結(jié)了視疲勞動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀，提出了視疲勞模型的構(gòu)建原則及策略；結(jié)合中醫(yī)臨床文獻(xiàn)調(diào)研，分析出視疲勞人群中醫(yī)證型主要為肝腎陰虛型、肝郁氣滯型和肝血不足型，進(jìn)一步提出了視疲勞相關(guān)中醫(yī)證候模型的構(gòu)建原則及策略，以期為緩解視疲勞中藥產(chǎn)品的研發(fā)提供思路，并為其辨證保健及精準(zhǔn)應(yīng)用提供指導(dǎo)。

關(guān)鍵詞 視疲勞；辨證保?。恢嗅t(yī)證候；動(dòng)物模型；合理用藥；肝腎陰虛；肝郁氣滯；肝血不足

Construction Strategies of Animal Models of Asthenopia and Its Traditional Chinese Medicine Syndromes

HUANG Zhiqiang1，ZHANG Jianjun2，WANG Chun2，ZHANG Rui2，NAN Haipeng1，CHEN Yan1，JIA Fenglan3，ZHANG Baoxu3，DU Jun4，KAN Juntao4，CHEN Liang4，WANG Linyuan1

（1 School of Chinese Materia Medica，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 2 School of Traditional Chinese Medicine，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China; 3 School of Public Health，Peking University，Beijing 100700，China; 4 Amway（China） R&D Center Co.，Ltd.，Shanghai 201203，China）

Abstract Asthenopia has developed into a global health problem.In clinics，attention is paid to its prevention and health care，and symptoms and signs can be relieved by eye use adjustment，appropriate substances，physical intervention，and rest.At present，asthenopia is mainly diagnosed by subjective symptoms，and there is no objective index that accurately reflects the state，resulting in adequate methods and mechanisms for experiments and clinical evaluation.The establishment of an animal model of asthenopia and a traditional Chinese medicine（TCM） syndrome model related to asthenopia based on its understanding and diagnosis and treatment characteristics in TCM，helps further explain the occurrence and development mechanism of asthenopia and comprehensively explore the advantages of TCM for the prevention and healthcare of the disease.This paper summarized the research status of animal models of asthenopia，and proposed the construction principles and strategies.In addition，by reference to TCM clinical literature，it was found the TCM syndromes of asthenopia patients were mainly liver-kidney yin deficiency，liver depression and qi stagnation and liver blood deficiency，and the construction principles and strategies of the TCM syndrome model related to asthenopia were further proposed.This paper was expected to provide ideas for the research and development of TCM products for relieving asthenopia，and provide guidance for the syndrome differentiation-based health care and precise application of asthenopia.

Keywords Asthenopia; Syndrome differentiation-based health care; Traditional Chinese medicine syndrome; Animal model; Rational drug use; Liver-kidney yin deficiency; Liver depression and qi stagnation; Liver blood deficiency

中圖分類號(hào)：R276.7文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：Adoi：10.3969/j.issn.1673-7202.2023.01.003

視疲勞的發(fā)生率與日俱增，雖然不會(huì)直接引起眼器質(zhì)性病變，但長(zhǎng)期反復(fù)的視疲勞可引發(fā)或加重眼、頭、頸、肩等疾病，嚴(yán)重干擾人們的工作與學(xué)習(xí)，逐漸成為威脅人類健康的熱點(diǎn)醫(yī)學(xué)問(wèn)題［1-2］。臨床上視疲勞更注重預(yù)防和保健，主要通過(guò)調(diào)整用眼模式［3］、使用適宜物質(zhì)［4-6］、物理干預(yù)［7］或休息［8］來(lái)緩解癥狀體征。但大多情況下，視疲勞是持續(xù)近距離用眼出現(xiàn)的自覺(jué)不適狀態(tài)，往往不出現(xiàn)器質(zhì)性改變，經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)單休息即可緩解癥狀，動(dòng)物模型難度大研究較少，缺少成熟的動(dòng)物模型，限制了對(duì)其發(fā)生機(jī)制的深入研究及對(duì)預(yù)防保健措施的客觀評(píng)價(jià)。因此，本文總結(jié)文獻(xiàn)報(bào)道、臨床經(jīng)驗(yàn)及我們團(tuán)隊(duì)已進(jìn)行的文獻(xiàn)、理論及實(shí)驗(yàn)研究［9-15］，提出視疲勞的動(dòng)物造模方法和評(píng)價(jià)策略，并在此基礎(chǔ)上探討視疲勞中醫(yī)證候模型的合理性，為闡釋視疲勞病理生理變化與中醫(yī)證候之間的關(guān)系，深入挖掘中醫(yī)對(duì)視疲勞的診療特色，篩選視疲勞的有效預(yù)防和保健措施提供參考。

1 視疲勞動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀及視疲勞模型的構(gòu)建原則及策略

1.1 視疲勞動(dòng)物模型研究現(xiàn)狀

1.1.1 過(guò)用眼調(diào)節(jié)致樹(shù)鼩視疲勞模型 視疲勞最常見(jiàn)的成因是眼部調(diào)節(jié)功能的異常，其程度與持續(xù)用眼時(shí)間成正相關(guān)［16］。白雪等［17］以樹(shù)鼩為研究對(duì)象，每日白晝以活動(dòng)玩具誘視動(dòng)物而造成持續(xù)視近狀態(tài)，造模6 d后，樹(shù)鼩睫狀肌β-腎上腺素受體（Beta-adrenergic Receptor，β-AR）及其第二信使環(huán)磷酸腺苷（Cyclic Adenosine Monophosphate，cAMP）含量上調(diào)，Na+-K+-ATP酶活性處于高水平，副交感神經(jīng)處于持續(xù)興奮狀態(tài)，并引起睫狀肌中神經(jīng)-受體偶聯(lián)鏈的變化。張堰黎［18］以樹(shù)鼩為研究對(duì)象，分別使用3種造模方法（使用誘視物、眼前安置眼罩發(fā)光二極管（Light-emitting Diode，LED）、眼前安戴凹透鏡）迫使樹(shù)鼩眼過(guò)用調(diào)節(jié)，3種造模方法中模型組樹(shù)鼩均表現(xiàn)煩躁不安、回避用眼等行為，組織病理學(xué)顯示睫狀體和瞳孔括約肌處于收縮狀態(tài)，眼睛處于交感與副交感雙重神經(jīng)支配的動(dòng)態(tài)平衡失調(diào)狀態(tài)，虹膜中M-ACh受體的最大結(jié)合容量及環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷鳥(niǎo)苷一磷酸（Cyclic Guanosine Monophosphatec，Guanosine Monophos-phate，cGMP）含量較正常對(duì)照組升高。該造模方法通過(guò)迫使動(dòng)物持續(xù)視近，過(guò)用眼調(diào)節(jié)而成視疲勞，造模方法不易造成視器的損傷，符合視疲勞的特點(diǎn)，但該文無(wú)后續(xù)研究，推測(cè)其造模動(dòng)物不易獲得，造模方法難以在常用實(shí)驗(yàn)動(dòng)物復(fù)制推廣，指標(biāo)檢測(cè)難度較大。

1.1.2 光照致大鼠、小鼠、家兔視疲勞模型 視疲勞還與環(huán)境照度密切相關(guān)［19］。王云和胡曉楠［20］、李麗維等［21］以小鼠為研究對(duì)象，借鑒視網(wǎng)膜光照損傷模型，以LED白光作為光源照射小鼠眼球，采用（9 000±500）Lux距離小鼠50 cm處垂直照射動(dòng)物4 h，連續(xù)照射7 d，迫使小鼠在強(qiáng)光下持續(xù)用眼而成視疲勞；結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組晶體谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（Glutathione Peroxidase，GSH-Px）和總抗氧化能力（Total Antioxidant Capacity，T-AOC）活力明顯下降，肝組織丙二醛（Malondialdehyde，MDA）、超氧化物歧化酶（Superoxide Dismutase，SOD）和GSH-Px活性也明顯下降?！禛B 50034-2013建筑照明設(shè)計(jì)標(biāo)準(zhǔn)》規(guī)定，教室、閱覽室、辦公室等場(chǎng)所的工作面照度標(biāo)準(zhǔn)值為300～500 Lux，又依據(jù)楊春宇等［19］的研究，環(huán)境照度不應(yīng)高于3 000 Lux。但王云和胡曉楠［20］、李麗維等［21］的造模方法的光強(qiáng)度為（9 000±500）Lux，過(guò)強(qiáng)的光照會(huì)引起視力的損傷，色素紊亂，并引起晶體渾濁，甚至是視網(wǎng)膜組織的損傷［22］，而視疲勞一般不會(huì)產(chǎn)生此種損傷，故造模方法應(yīng)避免使用強(qiáng)光。

手機(jī)和電腦等視頻終端屏幕中存在的藍(lán)光可導(dǎo)致視疲勞的發(fā)生，我們團(tuán)隊(duì)也通過(guò)藍(lán)光照射大鼠眼球制備視疲勞模型［9］，但藍(lán)光波長(zhǎng)短，能量高，它可以穿透晶體直達(dá)視網(wǎng)膜，導(dǎo)致視網(wǎng)膜光感受器的凋亡［23］，例如黃斑病變，而視疲勞一般不會(huì)產(chǎn)生此種損傷［24］。此外，目前手機(jī)和電腦等視頻終端的主流屏幕為L(zhǎng)ED光源并已做了低藍(lán)光處理。故藍(lán)光照射動(dòng)物眼球制備視疲勞模型不太符合視疲勞的特點(diǎn)。

由東等［25］以家兔為研究對(duì)象，借鑒電光性眼炎動(dòng)物模型，以254 nm的紫外線照射家兔眼球，共3 d總計(jì)12 h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型動(dòng)物瞼結(jié)膜和球結(jié)膜均呈現(xiàn)充血、水腫等炎癥反應(yīng)，眼角膜出現(xiàn)散在渾濁或半透明區(qū)，眼分泌物增加，睫狀肌張力增加。但紫外線輻射可造成DNA損傷，誘發(fā)細(xì)胞凋亡或基因突變，長(zhǎng)時(shí)間暴露在紫外線下，還會(huì)對(duì)眼結(jié)膜、角膜、晶體及視網(wǎng)膜造成不同程度的損害［26］，而且其實(shí)驗(yàn)結(jié)果中模型組家兔也出現(xiàn)了瞼結(jié)膜、球結(jié)膜和眼角膜的炎癥損傷，故紫外線照射動(dòng)物制備視疲勞模型亦不太符合視疲勞的特點(diǎn)。

HIRAMOTO等［27］以小鼠為研究對(duì)象，在一個(gè)上半部覆蓋鏡子下半部分涂黑的特殊器具內(nèi)以15 W/cm2強(qiáng)度的白光（400～700 nm）距離小鼠30 cm進(jìn)行散射，時(shí)間為2 h，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型動(dòng)物的運(yùn)動(dòng)活動(dòng)明顯減少，出現(xiàn)疲勞，光照引起下丘腦-垂體-腎上腺軸的應(yīng)激反應(yīng)，增強(qiáng)腎上腺皮質(zhì)醇的分泌并使得血漿皮質(zhì)醇、γ干擾素、白細(xì)胞介素-10（Interleukin-10，IL-10）和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β（Transforming Growth Factor-β，TGF-β）水平提高。但檢測(cè)指標(biāo)僅能證實(shí)光照可引起疲勞和抑制免疫，有待揭示其與視疲勞的關(guān)系。

以上造模方法主要通過(guò)改變環(huán)境照度以引起實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的持續(xù)視近，但相較于藍(lán)光或紫外線，白光照射動(dòng)物眼球更接近持續(xù)近距離用眼而產(chǎn)生的視疲勞。

1.1.3 光照結(jié)合中醫(yī)證候致家兔、大鼠視疲勞肝腎陰虛證模型 視疲勞屬于中醫(yī)“肝勞”范疇，以肝腎陰虛證最為常見(jiàn)［28-29］。王家良等［30］以家兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，采用灌胃甲狀腺素和肌內(nèi)注射利血平，結(jié)合白熾燈連續(xù)照射（晝30 Lux夜0 Lux）家兔眼睛的方法，制備了視疲勞肝腎陰虛證模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型動(dòng)物眼睫狀肌組織中cAMP降低、cGMP升高，血清睪酮降低、雌二醇、雌二醇/睪酮升高。但睫狀肌cAMP和cGMP檢測(cè)結(jié)果與白雪等［17］結(jié)果相反，有待進(jìn)一步研究驗(yàn)證。趙丹萍等［9］采用灌胃左甲狀腺素鈉和夾尾情志刺激，結(jié)合藍(lán)光燈照射大鼠眼球的方法，制備了視疲勞肝腎陰虛證模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型組動(dòng)物血清環(huán)核苷酸比值cAMP/cGMP升高，四碘甲狀腺原氨酸升高，三碘甲狀腺原氨酸降低，谷草轉(zhuǎn)氨酶升高，血清白蛋白降低，胸腺指數(shù)降低，眼球cAMP、cGMP、cAMP/cGMP、SOD、MDA等指標(biāo)組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，但視網(wǎng)膜組織出現(xiàn)損傷。

以上造模方法通過(guò)改變環(huán)境照度結(jié)合中醫(yī)證候造成視疲勞肝腎陰虛證候，既模擬了視疲勞的疾病狀態(tài)，又反映了證候特征，提示了視疲勞中醫(yī)證候模型構(gòu)建的可能性。

綜上所述，視疲勞動(dòng)物模型的建立，主要以過(guò)用眼調(diào)節(jié)，改變環(huán)境照度及環(huán)境照度或結(jié)合中醫(yī)證候來(lái)實(shí)現(xiàn)，但存在一定的局限性，主要受到造模方法不符合視疲勞特點(diǎn)、造模動(dòng)物不易獲取、操作復(fù)雜、難重復(fù)等因素的影響。

1.2 視疲勞動(dòng)物模型構(gòu)建原則及策略

1.2.1 造模原理 《視疲勞診療專家共識(shí)（2014年）》指出，視疲勞是由于各種病因使得人眼視物時(shí)超過(guò)其視覺(jué)功能所能承載的負(fù)荷，導(dǎo)致用眼后出現(xiàn)視覺(jué)障礙、眼部不適或伴有全身癥狀等以至不能正常進(jìn)行視作業(yè)的一組綜合征；以患者主觀癥狀為主，眼或全身因素與精神心理因素相互交織，并非獨(dú)立的眼病，臨床多見(jiàn)眼調(diào)節(jié)功能異常導(dǎo)致的視疲勞，與持續(xù)近距離用眼密切相關(guān)［16］。人持續(xù)近距離用眼可使眼代償活動(dòng)頻繁，當(dāng)用眼程度超過(guò)人眼可調(diào)節(jié)的限度，代償活動(dòng)便突然放棄，從而出現(xiàn)不耐久視，暫時(shí)性模糊，眼干、眼酸、眼痛、視力減退、假性近視等輕度視疲勞表現(xiàn)；隨用眼周期增加，視疲勞加重而出現(xiàn)全身癥狀。視覺(jué)顯示終端（Visual Display Terminal，VDT）的顯示因素如亮度、對(duì)比度、顏色、字體大小和間距，其物理特性如閃爍、清晰度不佳、亮度不均勻或不穩(wěn)定等，均可對(duì)視覺(jué)系統(tǒng)產(chǎn)生不良影響［31］。近年來(lái)，因持續(xù)注視電腦、手機(jī)等VDT而引起的視疲勞已成為不可忽視的重要環(huán)境因素［2］。

因此，視疲勞動(dòng)物的造模方法應(yīng)注意由環(huán)境照度引起的持續(xù)近距離用眼特點(diǎn)，可在現(xiàn)有的光照致視疲勞模型基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化調(diào)整，通過(guò)白光照射動(dòng)物眼球以引起動(dòng)物眼緊張來(lái)模擬人的視疲勞狀態(tài)［20-21，27］。

1.2.2 造模方法 視疲勞是一種慢性消耗性綜合征狀態(tài)，造模方法不宜造成動(dòng)物器質(zhì)性病變，應(yīng)避免強(qiáng)光照射動(dòng)物眼球引起的視器損傷。1）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：大鼠或小鼠在視疲勞研究中均有應(yīng)用［20-21，27］，提示大鼠或小鼠可用于研究視疲勞。而且大鼠或小鼠的動(dòng)物品系來(lái)源穩(wěn)定，遺傳背景清晰，實(shí)驗(yàn)成本低。在光照條件下，動(dòng)物易出現(xiàn)瞇眼、昏睡、懶動(dòng)、喜臥等表現(xiàn)［27］，可通過(guò)敲擊動(dòng)物容器以保持其持續(xù)用眼的狀態(tài)。2）造模環(huán)境：應(yīng)選擇受限環(huán)境，人在受限環(huán)境中更易出現(xiàn)視疲勞癥狀［32］，環(huán)境宜為暗室或人為營(yíng)造的黑暗環(huán)境，避免其他光源的影響。3）造模光源及強(qiáng)度：VDT的光源主要為L(zhǎng)ED燈，可選擇其作為造模光源，但強(qiáng)度不高于3 000 Lux，并調(diào)整光源的距離控制入眼強(qiáng)度在300～500 Lux之間，色溫在3 300～5 300 K之間［19］。4）造模時(shí)間及周期：根據(jù)用眼方式的不同，可有持續(xù)近距離用眼和短時(shí)長(zhǎng)期近距離用眼2種；動(dòng)物造模也可分為2種：第1種，人持續(xù)用眼2 h便會(huì)出現(xiàn)明顯視疲勞癥狀［33］，可以2 h作為初始時(shí)間，觀察不同造模時(shí)間（如2 h、4 h、6 h、8 h）的指標(biāo)變化來(lái)篩選與視疲勞相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)和適宜時(shí)長(zhǎng)，并評(píng)價(jià)藥物的干預(yù)效果；第2種，固定每日造模時(shí)間為2 h，觀察不同造模時(shí)間（如5 d、10 d、15 d）的指標(biāo)變化，來(lái)篩選與視疲勞相關(guān)的檢測(cè)指標(biāo)和適宜時(shí)長(zhǎng)，亦可在此造模方法上增加中醫(yī)證候干預(yù)，具體可先以中醫(yī)證候造模，再以光照造模2 h來(lái)篩選適宜天數(shù)以建立視疲勞中醫(yī)證候模型，研究視疲勞中醫(yī)證候的變化及中藥的干預(yù)效果和機(jī)制。

1.2.3 評(píng)價(jià)策略 視疲勞的程度與持續(xù)用眼時(shí)間成正相關(guān)，表征視疲勞的檢測(cè)指標(biāo)應(yīng)與造模時(shí)間存在正/負(fù)相關(guān)性，且不會(huì)出現(xiàn)視器損傷。1）視網(wǎng)膜：視網(wǎng)膜是重要的成像介質(zhì)，對(duì)于視覺(jué)信息的整合有著重要作用，受光源影響，在強(qiáng)光照射損傷下其感光細(xì)胞和視網(wǎng)膜色素上皮細(xì)胞數(shù)目會(huì)減少，排列會(huì)紊亂，生理功能降低，故造模結(jié)束后，模型動(dòng)物視網(wǎng)膜不應(yīng)出現(xiàn)細(xì)胞排列紊亂等損傷。視網(wǎng)膜的血液循環(huán)狀況是影響眼調(diào)節(jié)功能以及成像質(zhì)量的重要因素［34］。視疲勞會(huì)導(dǎo)致眼部供血不足，使得視網(wǎng)膜中央動(dòng)脈和睫狀后動(dòng)脈流速減慢［35］。2）晶體和睫狀體：晶體是眼球的主要屈光結(jié)構(gòu)，透明、呈雙凸形扁圓體，無(wú)血管、富彈性，包以透明的被囊，周緣部的晶體懸韌帶與睫狀體相連［36］。在持續(xù)用眼狀態(tài)下，晶體長(zhǎng)時(shí)間受環(huán)境光照影響，房水代謝或晶體囊出現(xiàn)問(wèn)題，使得晶體的抗氧化能力下降，形變彈性下降，引起視疲勞及其他眼科疾?。?1，37］；故造模結(jié)束后，模型動(dòng)物不應(yīng)出現(xiàn)晶體的明顯渾濁。睫狀體為葡萄膜的中間部分，前接虹膜根部，后以鋸齒緣為界與脈絡(luò)膜相互移行。睫狀肌為睫狀體的主要構(gòu)成部分，起源于鞏膜突及其周?chē)Y(jié)締組織［38］。睫狀肌屬平滑肌，受交感神經(jīng)和副交感神經(jīng)雙重支配。眼調(diào)節(jié)過(guò)程依賴于睫狀體、晶體懸韌帶、晶體物質(zhì)和晶體囊之間的各種機(jī)械相互作用［39］；視近時(shí)，睫狀體向前向內(nèi)移動(dòng)，靠近虹膜，睫狀肌收縮，晶體懸韌帶松弛，晶體變凸，屈光力加大，使近處物像能落在視網(wǎng)膜上［40-41］。持續(xù)視近，睫狀肌一直收縮，會(huì)有自主神經(jīng)功能紊亂，副交感神經(jīng)持續(xù)興奮的現(xiàn)象［17］。3）眼瞼：眼瞼由外向內(nèi)，由皮膚、肌層、瞼板、結(jié)膜及結(jié)膜下組織組成［42］。其中肌層主要為眼輪匝肌，司眼瞼閉合，與視疲勞關(guān)系密切，持續(xù)用眼可使得眼輪匝肌活動(dòng)增加，一直處于收縮狀態(tài)，眨眼次數(shù)減少［43］；當(dāng)肌肉疲勞時(shí)會(huì)大量堆積疲勞代謝物，例如乳酸，可影響糖酵解和肌球蛋白輕鏈磷酸化，導(dǎo)致肌肉收縮張力下降［44］，乳酸脫氫酶可促進(jìn)乳酸代謝成丙酮酸。而瞼板中瞼板腺功能障礙可引起干眼癥［45］或干燥綜合征［46］，而水孔蛋白5（Aquaporin 5，AQP5）是一種分布于各類分泌性腺體中的AQP，可調(diào)節(jié)水液代謝及腺體分泌，在干眼癥和干燥綜合征人群中常出現(xiàn)AQP5分布的異常［47-48］。4）血清：用眼時(shí)間越長(zhǎng)，視疲勞程度越重，人血清中抗氧化因子水平越低［49］，引起機(jī)體缺氧；缺氧與皮質(zhì)酮分泌水平呈顯著負(fù)相關(guān)［50］，可用皮質(zhì)醇的變化可作為疲勞的療效指標(biāo)［51］；此外，當(dāng)機(jī)體缺氧時(shí)，乳酸通過(guò)厭氧代謝積累引起疲勞，乳酸脫氫酶可促進(jìn)乳酸代謝為丙酮酸緩解疲勞［52］。

因此，造模結(jié)束后，可觀察動(dòng)物視網(wǎng)膜是否出現(xiàn)損傷，晶體是否出現(xiàn)渾濁以判斷造模方法是否造成視器的損傷；觀察睫狀體是否靠近虹膜和視網(wǎng)膜血管血流狀態(tài)，以判斷是否處于持續(xù)視近狀態(tài)；檢測(cè)晶體和睫狀體中抗氧化因子、神經(jīng)遞質(zhì)、能量代謝酶、眼瞼乳酸脫氫酶、AQP5，血清中抗氧化因子、皮質(zhì)醇、乳酸脫氫酶等指標(biāo)，篩選出與造模時(shí)間成正/負(fù)相關(guān)性的指標(biāo)。

2 視疲勞中醫(yī)證候模型的構(gòu)建原則及策略

2.1 視疲勞的中醫(yī)名稱、發(fā)生機(jī)制及主要辨證分型“視疲勞”屬于中醫(yī)“肝勞”范疇，現(xiàn)代中醫(yī)將“視疲勞”稱為“目倦”，以視物不能持久，久則視物眼脹、昏花、頭痛為主要表現(xiàn)［10］。中醫(yī)認(rèn)為，諸脈者皆屬于目，肝受血而能視，《景岳全書(shū)·雜證謨·眼目》有“既無(wú)紅腫，又無(wú)熱痛，而但或昏或澀，或眩暈，或無(wú)光，或年及中衰，或酒色過(guò)度，以致羞明黑暗，瞪視無(wú)力，珠痛如摳等癥”的記載，并指出其病因“無(wú)非水之不足也”，多由勞瞻竭視、暗耗精血，不能濡養(yǎng)目竅所致，是持續(xù)超負(fù)荷工作之后而出現(xiàn)的一種持續(xù)衰弱狀態(tài)。目前尚無(wú)視疲勞中醫(yī)診療專家共識(shí)類文件，本團(tuán)隊(duì)對(duì)中成藥、中藥類保健產(chǎn)品配方進(jìn)行整理分析，以方測(cè)證，將視疲勞分為肝腎陰虛、肝郁氣滯和肝血不足3種中醫(yī)證型［53］，其中肝腎陰虛型最為主要［28-29］，且為亞健康人群的常見(jiàn)證候［54］。

2.2 構(gòu)建原則 視疲勞是一種慢性消耗性綜合征，成因復(fù)雜，并非獨(dú)立的眼病，以預(yù)防和保健為主，中醫(yī)證候則是疾病發(fā)展某一階段病理生理的概括，考慮到視疲勞的臨床特點(diǎn)，在中醫(yī)證候復(fù)制上應(yīng)體現(xiàn)保健原則，需要注意以下幾點(diǎn)：1）造模方法的干預(yù)因素宜單一，過(guò)多干預(yù)因素的動(dòng)物模型重現(xiàn)性較差；2）造模周期適中，中醫(yī)的“證”是一種階段性、動(dòng)態(tài)性特征，周期過(guò)長(zhǎng)易出現(xiàn)證候的轉(zhuǎn)化或?qū)?dòng)物造成不可逆?zhèn)Γ芷谶^(guò)短則指標(biāo)無(wú)差異，15～30 d為宜；3）造模方法以不對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物造成實(shí)質(zhì)性傷害為宜，如不宜用手術(shù)切除腎上腺而成的腎陽(yáng)虛動(dòng)物模型［55］；4）造模停止后，可自行恢復(fù)；5）關(guān)鍵指標(biāo)應(yīng)出現(xiàn)顯著性差異；6）陽(yáng)性藥應(yīng)依據(jù)方證相應(yīng)的原則選擇對(duì)證藥物（中成藥或經(jīng)典湯劑），最好該藥物對(duì)視疲勞、干眼癥等眼部問(wèn)題有相關(guān)臨床或動(dòng)物實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

2.3 視疲勞肝腎陰虛證候模型構(gòu)建策略 肝腎陰虛證是視疲勞者的常見(jiàn)證型，主要與肝腎精血不足，經(jīng)筋失養(yǎng)以至調(diào)節(jié)失司有關(guān)，肝腎陰液相對(duì)陽(yáng)熱不足耗傷陰津而呈現(xiàn)出虛熱之象。目前造模方法主要有3種，分別為灌胃利血平、甲狀腺素皮下注射四氯化碳花生油法，慢性激怒法和灌胃激素結(jié)合夾尾法［10］。灌胃利血平和甲狀腺素，皮下注射四氯化碳花生油的造模方法干預(yù)因素較多，易造成動(dòng)物不可逆損傷。慢性激怒法干預(yù)因素單一，易于復(fù)制，但每只大鼠造模時(shí)間需隨實(shí)驗(yàn)天數(shù)增加，實(shí)驗(yàn)周期較長(zhǎng)，可篩選激怒時(shí)間來(lái)設(shè)計(jì)適宜于保健的造模劑量。灌胃激素結(jié)合夾尾法，實(shí)驗(yàn)干預(yù)因素較少，干預(yù)手段較為溫和，符合保健的原則，激素對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的作用明確，且實(shí)驗(yàn)周期較短?？蓞⒖脊P者對(duì)造模方法和評(píng)價(jià)指標(biāo)進(jìn)行改良優(yōu)化的肝腎陰虛模型［10］，即通過(guò)灌胃左甲狀腺素鈉和夾尾情志刺激造成“肝腎陰虛”，從動(dòng)物的環(huán)核苷酸、內(nèi)分泌激素、免疫因子等內(nèi)在生化指標(biāo)的變化來(lái)判斷模型是否成立。陽(yáng)性藥物宜選擇杞菊地黃丸、明目地黃丸或石斛夜光丸，其滋補(bǔ)肝腎，益精明目，可緩解視疲勞人群或干眼癥人群的不適癥狀［6，56］。目前，視疲勞合并肝腎陰虛證候復(fù)合模型已有研究［9，30］，但有待改進(jìn)造模方法，優(yōu)選檢測(cè)指標(biāo)。

2.4 視疲勞肝郁氣滯證候模型構(gòu)建策略 用眼過(guò)度，氣血瘀滯，致脈絡(luò)郁閉，氣血不充，而致肝郁氣滯，其與神經(jīng)中樞的調(diào)節(jié)密切相關(guān)，多表現(xiàn)為神經(jīng)系統(tǒng)的功能紊亂，情緒的異常改變，消化系統(tǒng)、內(nèi)分泌腺、代謝和電解質(zhì)的平衡的紊亂［57］。在中醫(yī)證候研究時(shí)，應(yīng)注意區(qū)分郁怒和發(fā)怒的特點(diǎn)，“郁怒”即受到刺激有怒不能發(fā)而壓抑在體內(nèi)，大鼠表現(xiàn)為胡須下垂叫聲尖細(xì)、貼邊、扎堆活動(dòng)和飲食減少等，發(fā)怒則“嘶咬”“粗叫”［58］?？蓞⒖嘉覀?cè)鴳?yīng)用的肝郁模型［11］，即通過(guò)孤養(yǎng)和慢性束縛應(yīng)激以造成大鼠“郁怒”，對(duì)動(dòng)物外觀狀態(tài)、海馬組織中單胺類神經(jīng)遞質(zhì)以及環(huán)核苷酸水平變化來(lái)判斷模型是否成立。陽(yáng)性藥物可選擇丹梔逍遙丸，其疏肝解郁，健脾合營(yíng)，可改善更年期女性干眼的臨床癥狀與客觀體征［59］。目前肝郁氣滯證候模型研究較為成熟，可在上述證候模型基礎(chǔ)上結(jié)合光照制備視疲勞合并肝郁氣滯證候復(fù)合模型進(jìn)一步探索。

2.5 視疲勞肝血不足證候模型構(gòu)建策略 肝開(kāi)竅于目而主藏血，若肝血虧虛，血不能上榮于目，則出現(xiàn)視疲勞，多表現(xiàn)為交感神經(jīng)活動(dòng)減退，紅細(xì)胞能量代謝低下，機(jī)體代謝率降低，血液流變學(xué)與紅細(xì)胞變形性異常，機(jī)體處于代償性調(diào)節(jié)血量的保護(hù)狀態(tài)等表現(xiàn)［60］。目前血虛模型的方法主要有3種，分別為腹腔注射環(huán)磷酰胺法［12］、綜合放血法［13］和放射線輻照法［14］。環(huán)磷酰胺法破壞骨髓造血系統(tǒng)，影響骨髓造血干/祖細(xì)胞的增殖、分化、轉(zhuǎn)移，免疫功能，有研究表明是一種脾陽(yáng)虛證候模型［15］。放射線輻照法主要影響外周血白細(xì)胞，損傷骨髓造血系統(tǒng)，但血虛的程度與射線照射劑量成正比。有研究表明適宜劑量60Co-γ射線照射動(dòng)物后，四物湯可逆轉(zhuǎn)動(dòng)物的血虛狀態(tài)［14，61］，可篩選輻射劑量來(lái)設(shè)計(jì)適宜于保健的造模劑量。綜合放血法直接造成外周血細(xì)胞數(shù)減少，去掉干預(yù)手段后，動(dòng)物造血功能可恢復(fù)，對(duì)動(dòng)物傷害較小?？蓞⒖嘉覀?cè)鴳?yīng)用的血虛模型［13］，使小鼠“有形之血不能速生”，血液虧損而新血化生不足，再結(jié)合光照照射制備視疲勞肝血不足證候模型，對(duì)免疫功能、造血功能和外周血象的變化來(lái)判斷模型是否成立。陽(yáng)性藥物可選擇芍藥甘草湯，方中白芍、甘草，一酸一甘，甘緩酸收，酸甘化陰而陰血充足，上承于目，可緩解干眼癥人群的臨床癥狀［62］。但目前只有肝血不足證候模型的研究，可在上述證候模型基礎(chǔ)上結(jié)合光照制備視疲勞合并肝血不足證候復(fù)合模型進(jìn)行探索。

3 討論

本文在現(xiàn)有研究的基礎(chǔ)上提出了視疲勞模型的構(gòu)建原則及策略，進(jìn)一步根據(jù)現(xiàn)有中醫(yī)證候模型的研究進(jìn)展提出了視疲勞中醫(yī)證候復(fù)合模型的構(gòu)建原則及策略。我們已對(duì)藍(lán)光照射復(fù)合肝腎陰虛證候［9］及肝腎陰虛證候［10］、肝郁氣滯證候［11］和肝血不足證候［12-15］模型做了一定的研究，但是發(fā)現(xiàn)藍(lán)光可造成大鼠視網(wǎng)膜的損傷，而一般生活中的藍(lán)光不會(huì)出現(xiàn)此種損傷。未來(lái)將繼續(xù)研究，先考察藍(lán)光照射模型恢復(fù)一段時(shí)間后損傷是否可逆，或改進(jìn)光源為白光以驗(yàn)證本文動(dòng)物模型，再探索視疲勞中醫(yī)證候模型的合理性，并挖掘表征模型成立的關(guān)鍵指標(biāo)，建立緩解視疲勞產(chǎn)品成熟可行的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)方法，為深入的機(jī)制內(nèi)涵研究奠定基礎(chǔ)，并為其精準(zhǔn)應(yīng)用提供指導(dǎo)［63］。

利益沖突聲明：無(wú)。

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（2022-11-15收稿 本文編輯：吳珊）

基金項(xiàng)目：國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃（2018YFC1706800）作者簡(jiǎn)介：黃志強(qiáng)（1997.12—），男，碩士研究生在讀，研究方向：緩解視疲勞類中藥復(fù)方產(chǎn)品研究，E-mail：13793477560@163.com通信作者：王林元（1961.10—），男，碩士，教授，博士研究生導(dǎo)師，研究方向：中醫(yī)藥基本理論及新技術(shù)和產(chǎn)業(yè)化，E-mail：wangly@bucm.edu.cn；陳亮（1986.01—），男，博士，高級(jí)營(yíng)養(yǎng)研究科學(xué)家，研究方向：中藥保健食品功效和機(jī)制研究，E-mail：Clark.Chen@amway.com