基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)與分子對(duì)接探討玉屏風(fēng)散治療過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機(jī)制

楊冰洋　王人杰　汪皓宇　張業(yè)清

摘要：目的本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接技術(shù)探討玉屏風(fēng)散治療過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征（CARAS）的作用機(jī)制。方法首先通過(guò)TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)檢索搜集玉屏風(fēng)散的化學(xué)成分和藥物靶點(diǎn)。從GeneCards、Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM）和DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)搜集過(guò)敏性鼻炎和哮喘治療相關(guān)靶點(diǎn)，構(gòu)建韋恩圖并得到疾病與藥物的交集靶點(diǎn)。使用Cytoscape構(gòu)建單味藥-活性成分-潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)，篩選關(guān)鍵活性成分，然后以STRING構(gòu)建PPI網(wǎng)絡(luò)，借助Cyto NCA插件篩選關(guān)鍵靶點(diǎn)。利用Metascape對(duì)交集靶點(diǎn)進(jìn)行GO和KEGG富集分析。最后將關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)進(jìn)行分子對(duì)接。結(jié)果從玉屏風(fēng)散中獲得45個(gè)活性成分和對(duì)應(yīng)224個(gè)潛在靶點(diǎn)，過(guò)敏性鼻炎相關(guān)靶點(diǎn)有333個(gè)，哮喘相關(guān)靶點(diǎn)372個(gè)，取交集之后得到39個(gè)潛在靶點(diǎn)。從玉屏風(fēng)散中篩選出槲皮素、山奈酚、7-O-methylisomucronulatol、漢黃芩素、刺芒柄花素、異鼠李素等35個(gè)關(guān)鍵活性成分；對(duì)PPI網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行拓?fù)鋮?shù)分析后得到6個(gè)核心靶點(diǎn)為IL-6、TNF、IL-1β、PTGS2、CXCL8、IL-10。GO分析結(jié)果表明其涉及炎癥應(yīng)答、對(duì)細(xì)菌的反應(yīng)、細(xì)胞群體增值的負(fù)調(diào)控等生物過(guò)程。KEGG分析結(jié)果表明可能通過(guò)TNF、NF-kB、IL17等信號(hào)通路治療CARAS。分子對(duì)接結(jié)果顯示，100%的關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的結(jié)合能小于-5.0 kcal·mol-1，具有較好的結(jié)合能力。結(jié)論本研究初步揭示玉屏風(fēng)散通過(guò)多成分、多靶點(diǎn)、多通路治療過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征的作用機(jī)制，為后續(xù)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供了參考依據(jù)。

關(guān)鍵詞：玉屏風(fēng)散；過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征；作用機(jī)制；網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；分子對(duì)接

中圖分類(lèi)號(hào)：R765.21文獻(xiàn)標(biāo)志碼：A文章編號(hào)：1007-2349（2023）05-0032-08

Exploration of the Mechanism of Yupingfeng Powder in the Treatment of Allergic

Rhinitis-Asthma Syndrome Based on Network Pharmacology and Molecular Docking

YANG Bing-yang WANG Ren-jie WANG Hao-yu ZHANG Ye-qing

（1. The Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine，Nanjing University of Traditional Chinese Medicine，

Nanjing 210028，China;2. Jiangsu Institute of Traditional Chinese Medicine，Nanjing 210028，China;

3. Jiangsu Branch，China Academy of Chinese Medical Sciences，Nanjing 210028，China）

【Abstract】Objective： To study the mechanism of Yupingfeng Powder in the treatment of allergic rhinitis-asthma syndrome（CARAS）based on network pharmacology and molecular docking. Methods： Chemical components and drug targets of Yupingfeng Powder were collected by using TCMSP database. Targets related to the treatment of allergic rhinitis and asthma was collected from GeneCards，Online Mendelian Inheritance in Man（OMIM）and DrugBank database，and Venn diagram was constructed to obtain the intersection targets of diseases and drugs. A network of single drug-active ingredient-potential target was built by Cytoscape，and the key active ingredients were screened. Then，PPI network was constructed by STRING，and the key targets were screened by Cyto NCA plug-in. GO and KEGG enrichment analysis of intersection targets were performed by Metascape. Finally，the key active ingredients and the key targets were docked. Results： 45 active ingredients and corresponding 224 potential targets were obtained from Yupingfeng Powder，333 targets related to allergic rhinitis and 372 targets related to asthma and 39 potential targets were obtained after intersection. 35 key active components，such as quercetin，kaempferol，7-O-methylisomucronulatol，baicalin，formononetin and isorhamnetin，were screened from Yupingfeng Powder. PPI network was done by topological parameter analysis to obtain six core targets，namely，IL-6，TNF，IL-1β，PTGS2，CXCL8 and IL-10. The results of GO analysis showed that it involved in inflammatory response，response to bacteria，and negative regulation of cell proliferation. The results of KEGG analysis indicated that TNF，NF-kB，IL17 and other signaling pathways may be used to treat CARAS. The results of molecular docking showed that the binding energy of 100% of the key active ingredients to the core targets was less than -5.0 kcal·mol-1，a good binding ability. Conclusion： This study preliminarily reveals the mechanism of action of Yupingfeng Powder in the treatment of allergic rhinitis-asthma syndrome through multi-component，multi-target and multi-pathway，and provided a reference for subsequent basic research and clinical application.

【Key words】Yupingfeng Powder; Allergic Rhinitis-Asthma Syndrome; Mechanism of Action; Network Pharmacology; Molecular Docking

過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征（allergic rhinitis-asthma syndrome，CARAS）是同時(shí)發(fā)生在臨床或亞臨床的上、下呼吸道的過(guò)敏性炎癥，是同一綜合征在呼吸道兩個(gè)部分的表現(xiàn)［1］。上氣道和下氣道被認(rèn)為是一個(gè)統(tǒng)一的形態(tài)和功能單元，從古代中醫(yī)的“鼻肺同源”到現(xiàn)代醫(yī)學(xué)“同一氣道，同一疾病”的提出，都證實(shí)上、下氣道之間存在的聯(lián)系已經(jīng)被觀察到多年，變應(yīng)性鼻炎和哮喘之間在起源、概念共存和相似等方面表現(xiàn)出密切的聯(lián)系，基于在發(fā)病原因、病理生理機(jī)制及組織病理表現(xiàn)上的共性特征，提出了過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征的概念［2］。流行病學(xué)證據(jù)表明變應(yīng)性鼻炎和哮喘之間有很強(qiáng)的關(guān)系。有15%～38%的變應(yīng)性鼻炎患者同時(shí)患有哮喘，而在6%～85%的哮喘患者中存在鼻炎癥狀。此變應(yīng)性鼻炎是哮喘的一個(gè)危險(xiǎn)因素，未經(jīng)治療或處理不當(dāng)?shù)谋茄卓墒瓜又氐娘L(fēng)險(xiǎn)增加三倍［3］。

中醫(yī)古今醫(yī)家并無(wú)CARAS的專(zhuān)用病名，一般是將過(guò)敏性鼻炎歸于“鼻鼽”，哮喘歸于“哮病”的范疇。鼻鼽與哮證共為肺系疾病，二者更是相互聯(lián)系與影響，《靈樞·本神篇》云：“肺氣虛則鼻塞不利少氣”。肺之竅在鼻，肺之衛(wèi)外不固，風(fēng)寒之邪或異氣侵襲，則外束肌表，陽(yáng)氣無(wú)法宣泄，故噴而上出為之嚏。故為“鼻肺同源”［4］。對(duì)于CARAS的病因病機(jī)研究眾多仍尚無(wú)統(tǒng)一定論，從多角度發(fā)表見(jiàn)解。圍繞病理因素風(fēng)、痰、虛之相關(guān)病機(jī)較為常見(jiàn)。“邪之所湊，其氣必虛”。肺氣不足、衛(wèi)表失固是此病反復(fù)發(fā)作的根本原因，“扶正祛邪”可貫穿治療始終，故當(dāng)補(bǔ)土生金、益氣固表［5］。玉屏風(fēng)散由黃芪、白術(shù)、防風(fēng)3味中藥組成，全方相輔為益氣固表、祛邪扶正之功效。臨床研究顯示，玉屏風(fēng)散能顯著改善氣道患者炎癥、提高免疫功能［6］，但其CARAS治療的作用機(jī)制仍不明確。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)，對(duì)玉屏風(fēng)散治療CARAS的作用機(jī)制進(jìn)行初步探討，以期為后續(xù)基礎(chǔ)研究和臨床應(yīng)用提供參考依據(jù)。

1資料與方法

1.1玉屏風(fēng)散活性成分的篩選及潛在作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)基于TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)（http：//lsp.nwu.edu.cn/tcmsp.php）收集玉屏風(fēng)散中黃芪、防風(fēng)、白術(shù)3味中藥的成分。根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)（ADME）篩選出玉屏風(fēng)散的活性成分，設(shè)置口服生物利用度（OB）≧30%，類(lèi)藥性（DL）≧0.18，并預(yù)測(cè)玉屏風(fēng)散活性成分的潛在作用靶點(diǎn)。利用Uniprot蛋白數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.uniprot.org）對(duì)靶點(diǎn)信息進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。

1.2過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征治療相關(guān)靶點(diǎn)獲取利用“asthma、allergic rhinitis”為關(guān)鍵詞，分別在 GeneCards 數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//www.genecards.org）、Online Mendelian Inheritance in Man數(shù)據(jù)庫(kù)（OMIM，https：//www.omim.org）、DrugBank數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//go.drugbank.com）疾病基因數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索與篩選，將得到的靶點(diǎn)分別匯總并去除重復(fù)值，即為過(guò)敏性鼻炎、哮喘治療相關(guān)靶點(diǎn)。

1.3玉屏風(fēng)散治療過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征潛在作用靶點(diǎn)的獲取使用Venny2.1在線(xiàn)工具（https：//bioinfogp.cnb.csic.es/tools/venny/）對(duì)1.1及1.2中所獲得靶點(diǎn)繪制韋恩圖，所獲得的交集靶點(diǎn)即為玉屏風(fēng)散治療過(guò)敏性鼻炎-哮喘綜合征的潛在作用靶點(diǎn)。

1.4“中藥-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建使用軟件Cytoscape 3.8.2構(gòu)建“中藥-活性成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，其中用“節(jié)點(diǎn)”（node）表示單味藥、活性成分或靶點(diǎn)，用“邊”（edge）表示節(jié)點(diǎn)之間的關(guān)系；使用Network Analyzer分析工具分析網(wǎng)絡(luò)特征，以研究活性成分與靶點(diǎn)及其之間的關(guān)系，并根據(jù)活性成分在網(wǎng)絡(luò)中的度值（degree）篩選出關(guān)鍵活性成分。

1.5蛋白質(zhì)相互作用（PPI）網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將1.3中得到的潛在作用靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING 11.0數(shù)據(jù)庫(kù)（https：//string-db.org）獲得蛋白互作關(guān)系，刪除游離靶點(diǎn)，并導(dǎo)入Cytoscape軟件繪制潛在作用靶點(diǎn)的PPI網(wǎng)絡(luò)，應(yīng)用CytoNCA插件計(jì)算出PPI的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)特征屬性值，篩選出核心靶點(diǎn)。

1.6通路富集分析使用在線(xiàn)分析工具M(jìn)etascape（https：//metascape.org）對(duì)藥物-疾病交集核心蛋白靶標(biāo)基因進(jìn)行GO功能及KEGG通路富集分析，以“P<0.05”為條件進(jìn)行篩選，對(duì)P值進(jìn)行排列從小到大排列，分別選取排名前10位進(jìn)行靶點(diǎn)生物過(guò)程（GO Biological Processes，GO BP）、靶點(diǎn)所在細(xì)胞組分（GO Cellular Components，GO CC）、靶點(diǎn)分子功能（GO Molecular Functions，GO MF）以及前20位進(jìn)行靶點(diǎn)信號(hào)通路（KEGG Pathway）的氣泡圖制作。

1.7分子對(duì)接通過(guò)PubChem數(shù)據(jù)庫(kù)獲得關(guān)鍵成分的2D結(jié)構(gòu)，保存為sdf格式，通過(guò)Chem3D軟件生成配體的3D結(jié)構(gòu)，將其能量最小化，并保存為mol2格式。通過(guò)AutoDockTools軟件將配體保存為pdbqt格式配體參數(shù)文件。通過(guò)PDB數(shù)據(jù)庫(kù)下載核心靶點(diǎn)蛋白晶體結(jié)構(gòu)，運(yùn)用PyMOL 軟件對(duì)核心靶點(diǎn)進(jìn)行去水、去配體操作，使用AutoDockTools進(jìn)行加氫處理，并受體保存為pdbqt格式配體參數(shù)文件。通過(guò)AutoDockTools軟件設(shè)置蛋白受體的口袋參數(shù)，并設(shè)置參數(shù)文本文件，再用AutoDock Vina進(jìn)行分子對(duì)接，將對(duì)接結(jié)果運(yùn)用PyMOL軟件進(jìn)行可視化分析。

2結(jié)果

2.1玉屏風(fēng)散活性成分的篩選及作用靶點(diǎn)的預(yù)測(cè)根據(jù)根據(jù)藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)篩選條件，從TCMSP數(shù)據(jù)庫(kù)篩選出玉屏風(fēng)散的活性化合物45個(gè)，黃芪20個(gè)，防風(fēng)18個(gè)，白術(shù)7個(gè)。將靶點(diǎn)預(yù)測(cè)結(jié)果合并后排除重復(fù)值后獲得224個(gè)靶點(diǎn)。檢索數(shù)據(jù)庫(kù)合并后刪去重復(fù)值共得到過(guò)敏性鼻炎治療相關(guān)靶點(diǎn)333個(gè)，哮喘治療相關(guān)靶點(diǎn)372個(gè)。取交集后共獲得39個(gè)交集靶點(diǎn)，其韋恩圖見(jiàn)圖1。

2.2玉屏風(fēng)散單味藥-活性成分-潛在作用靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建和分析利用Cytoscape 3.8.2對(duì)玉屏風(fēng)散單味藥-活性成分-潛在作用靶點(diǎn)的關(guān)系網(wǎng)絡(luò)進(jìn)行繪制和分析，共獲得269個(gè)節(jié)點(diǎn)與710條關(guān)系，結(jié)果見(jiàn)圖2。通過(guò)NetworkAnalyzer分析玉屏風(fēng)散治療CARAS的網(wǎng)絡(luò)拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)，選取出連接度大于平均數(shù)2倍的活性成分作為核心成分，獲得槲皮素（quercetin）、山奈酚（kaempferol）、7-O-methylisomucronulatol、漢黃芩素（wogonin）、刺芒柄花素（formononetin）、異鼠李素（isorhamnetin）等35個(gè)關(guān)鍵活性成分。

2.3潛在作用靶點(diǎn) PPI 網(wǎng)絡(luò)及分析將2.1中獲得的玉屏風(fēng)散與過(guò)敏性鼻炎、哮喘交集得到的靶點(diǎn)提交至STRING11.0平臺(tái)，得到潛在作用靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，見(jiàn)圖3。分析結(jié)果顯示，degree值前6的蛋白分別為IL-6（Interleukin 6）、TNF（tumor necrosis factor）、IL-1β（Interleukin 1 Beta）、PTGS2（prostaglandin-endoperoxide synthase 2）、CXCL8（Recombinant Human C-X-C motif chemokine 8）、IL-10（Interleukin 10）。

2.4生物過(guò)程分析與 KEGG 分析使用Metascape平臺(tái)對(duì)39個(gè)靶點(diǎn)進(jìn)行基因富集分析，確定了1341個(gè)GO條目，其中生物過(guò)程相關(guān)條目728個(gè)，結(jié)果顯示主要影響炎癥應(yīng)答、脂多糖反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌來(lái)源分子的反應(yīng)、細(xì)胞對(duì)有機(jī)環(huán)狀化合物的反應(yīng)、對(duì)外來(lái)刺激的反應(yīng)、對(duì)細(xì)菌的反應(yīng)、細(xì)胞群體增殖的負(fù)調(diào)控、細(xì)胞對(duì)脂質(zhì)的反應(yīng)、細(xì)胞間粘附的正調(diào)控等生物過(guò)程；細(xì)胞組成相關(guān)條目30個(gè)，顯著的條目是突觸膜、突觸前膜、突觸后膜等細(xì)胞成分；分子功能相關(guān)條目69個(gè)，參與細(xì)胞因子受體結(jié)合、信號(hào)受體激活活性、信號(hào)受體調(diào)節(jié)活性、受體配體活性、G蛋白偶聯(lián)胺受體活性、G蛋白偶聯(lián)乙酰膽堿受體活性、G蛋白偶聯(lián)神經(jīng)遞質(zhì)受體活性等分子功能。將結(jié)果繪制氣泡圖，見(jiàn)圖4。

通過(guò)KEGG通路富集分析，有92個(gè)潛在作用靶點(diǎn)參與的通路，主要涉及腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor，TNF）信號(hào)通路、核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）信號(hào)通路、白細(xì)胞介素17（interleukin 17，IL-17）信號(hào)通路、糖尿病并發(fā)癥中的AGE-RAGE信號(hào)通路、脂質(zhì)與動(dòng)脈粥樣硬化、移植物抗宿主病、細(xì)胞因子-細(xì)胞因子受體相互作用、炎癥性腸病等。將結(jié)果繪制氣泡圖，見(jiàn)圖5。

2.5關(guān)鍵成分和核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接驗(yàn)證將篩選出的前6個(gè)關(guān)鍵活性成分與6個(gè)核心靶點(diǎn)IL-6、TNF、IL-1β、PTGS2、CXCL8、IL-10分別進(jìn)行分子對(duì)接，見(jiàn)圖6。結(jié)果顯示100%的結(jié)合能小于-5.0 kcal·mol-1，表明二者之間有較好的結(jié)合活性。47%的結(jié)合能小于-7.0 kcal·mol-1，表明配體與受體有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。如槲皮素、山奈酚、漢黃芩素、異鼠李素、7-O-methylisomucronulatol、刺芒柄花素6個(gè)成分與PTGS2、TNF都有著強(qiáng)烈的結(jié)合活性；等槲皮素、山奈酚、異鼠李素3個(gè)成分與IL-1β有強(qiáng)烈的結(jié)合活性。其中山奈酚與PTGS2的結(jié)合活性最好（affinity=-9.5 kcal·mol-1），其后為漢黃芩素與PTGS2（affinity=-9.3 kcal·mol-1）、槲皮素與PTGS2（affinity=-9.3 kcal·mol-1）、異鼠李素與PTGS2（affinity=-9.1 kcal·mol-1）、異鼠李素與TNF（affinity=-9.1 kcal·mol-1）、槲皮素與TNF（affinity=-9.0 kcal·mol-1）。對(duì)代表性關(guān)鍵活性成分和核心靶點(diǎn)的分子對(duì)接結(jié)果進(jìn)行可視化處理，分子對(duì)接3D圖見(jiàn)圖7。以上結(jié)果說(shuō)明上述6個(gè)關(guān)鍵活性成分與核心靶點(diǎn)的結(jié)合活性較好，可能通過(guò)上述核心靶點(diǎn)發(fā)揮防治CARAS的作用。

3討論

CARAS主要以Th2免疫反應(yīng)為特征，其生理病理特征與過(guò)敏性個(gè)體直接相關(guān)［1］。大量文獻(xiàn)證明，中藥可以可通過(guò)調(diào)節(jié)不同T細(xì)胞亞群功能等方式干預(yù)Th2免疫反應(yīng)。在中醫(yī)理論中，目前對(duì)于CARAS病因病機(jī)的認(rèn)識(shí)仍處于探索階段。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為，此病的病機(jī)屬于本虛標(biāo)實(shí)，以“肺氣虧虛”為本虛，以“風(fēng)寒”等為標(biāo)實(shí)?！氨咎摗笔荂ARAS產(chǎn)生的根源，決定著疾病的發(fā)展與轉(zhuǎn)歸?；颊呦忍旆A賦不足、肺氣虛弱、腠理疏松、衛(wèi)表不固，鼻竅易感外邪，肺失宣降，水液代謝失常，水濕內(nèi)停不化，聚而成痰，阻滯氣道，故而發(fā)病。玉屏風(fēng)散為益氣固表、扶正祛邪的經(jīng)典方劑。有隨機(jī)對(duì)照試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)在西醫(yī)治療的基礎(chǔ)上加用玉屏風(fēng)散能夠顯著抑制氣道炎癥，提高機(jī)體免疫力從而改善CARAS患者鼻、肺部癥狀［7］。有實(shí)驗(yàn)顯示，玉屏風(fēng)散聯(lián)合西藥治療能更好的改善CARAS患者肺功能，抑制IL-5、IL-10、IL-13等炎癥因子的表達(dá)［8］。

玉屏風(fēng)散中以黃芪補(bǔ)三焦而實(shí)衛(wèi)，補(bǔ)劑中之風(fēng)藥，可入肺、脾二經(jīng)，起到補(bǔ)氣健脾、益衛(wèi)固表、升陽(yáng)止汗、生津養(yǎng)血、利水消腫、脫毒生肌之效；防風(fēng)，治風(fēng)之仙藥，入膀胱、脾、肝之經(jīng)，具有祛風(fēng)解表、勝濕止痛、止痙等功效，為風(fēng)中之潤(rùn)劑；白術(shù)，健脾胃，溫分肉，培土以寧風(fēng)也。入脾、胃經(jīng)，具有補(bǔ)氣健脾、燥濕利水、固表止汗等功效。全方防風(fēng)善驅(qū)風(fēng)，黃芪以固表，白術(shù)以固里，共奏益氣、固表、祛風(fēng)之效。

本研究結(jié)果表明玉屏風(fēng)散治療CARAS的核心成分包括槲皮素、山奈酚、漢黃芩素、異鼠李素等。槲皮素是一種黃酮類(lèi)化合物，具有廣泛的治療性質(zhì)，包括但不限于其抗氧化、抗癌、抗炎和抗過(guò)敏活性［9］。有研究表明，槲皮素可以通過(guò)降低肥大細(xì)胞釋放的介質(zhì)即組胺、TNF-α、IL-1β、IL-4、IgE和IL-5，從而達(dá)到抗過(guò)敏的作用［10］。同時(shí)有研究結(jié)果表示，槲皮素通過(guò)抑制GATA-3和增加T-bet表達(dá)，減少了Th1/Th2極化的改變導(dǎo)致的過(guò)敏性氣道炎癥和高反應(yīng)性［11］。山奈酚，一種黃酮醇類(lèi)類(lèi)黃酮，可以抑制氣道上皮細(xì)胞和過(guò)敏性哮喘小鼠嗜酸性粒細(xì)胞浸潤(rùn)和氣道炎癥［12］。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)山奈酚可以通過(guò)抑制LAD2細(xì)胞的活化及下游MAPK途徑磷酸化，干擾NF-κB信號(hào)傳導(dǎo)，減少β-己糖胺酶、和血清中炎癥介質(zhì)，如組胺、TNF-α、IL-8和MCP-1的分泌等方式，起到抗過(guò)敏和抗炎的作用［13］。漢黃芩素可以誘導(dǎo)嗜酸性粒細(xì)胞凋亡并減輕過(guò)敏性氣道炎癥［14］。有實(shí)驗(yàn)表明，漢黃芩素可以通過(guò)減少嗜酸性粒細(xì)胞向鼻腔粘膜的遷移以及抑制血清IgE和鼻腔IL-4、IL-5和IL-13水平，抑制AR小鼠模型中的過(guò)敏性細(xì)胞因子起到抗炎、抗過(guò)敏的作用［15］。異鼠李素通過(guò)MAPK和NF-κB途徑減弱TNF-α誘導(dǎo)的人支氣管上皮細(xì)胞炎癥、增殖和遷移［16］。因此，玉屏風(fēng)散的關(guān)鍵有效成分以天然黃酮類(lèi)化合物為主，通過(guò)調(diào)節(jié)相關(guān)信號(hào)通路，起到抗過(guò)敏、抗炎、調(diào)節(jié)免疫、抗腫瘤等作用。

通過(guò)對(duì)網(wǎng)絡(luò)圖拓?fù)鋵W(xué)參數(shù)分析，根據(jù)節(jié)點(diǎn)度值篩選得到IL-6、TNF、IL-1β、PTGS2、CXCL8、IL-10這6個(gè)核心靶點(diǎn)作為玉屏風(fēng)散治療CARAS的潛在作用靶點(diǎn)。分子對(duì)接結(jié)果顯示玉屏風(fēng)散中多個(gè)活性成分與TNF、PTGS2結(jié)合力較強(qiáng)，結(jié)合蛋白互作關(guān)系分析結(jié)果推測(cè)TNF、PTGS2可能是玉屏風(fēng)散治療CARAS最關(guān)鍵的作用靶點(diǎn)。PTGS2，又名COX-2（cyclooxygenase-2，環(huán)氧合酶2）僅在炎癥刺激細(xì)胞激活后表達(dá)，NK-κB/COX-2/PGE2軸是炎癥的主要途徑。有研究發(fā)現(xiàn)哮喘患者氣道平滑肌表現(xiàn)出COX-2的表達(dá)增強(qiáng)［17］。同時(shí)，COX-2也積極參與了主動(dòng)致敏大鼠的變應(yīng)性鼻炎［18］。有實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，中草藥可以通過(guò)NF-κB/COX-2和PGE2治療CARAS［19］。

KEGG富集分析結(jié)果顯示，TNF、NF-κB、IL-17等信號(hào)通路在玉屏風(fēng)散治療CARAS的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。TNF-α可以通過(guò)刺激NF-kB磷酸化，從而激活p50-p65亞單位，增加促炎基因如IL-8、IL-6和TNF-α自身的轉(zhuǎn)錄，在氣道炎癥方面起重要作用［20］。同時(shí)，TNF-α可以促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)，參與氣道重塑［21］。TNF-α還可通過(guò)調(diào)節(jié)TRAF2/NF-κB通路與TNFRI偶聯(lián)誘導(dǎo)氣道高反應(yīng)性［22］。在鼻腔成纖維細(xì)胞的研究中，組胺通過(guò)H1R刺激IL-6的產(chǎn)生、激活下游p38 MAPK和NF-κB來(lái)調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)［23］。Th17細(xì)胞及其標(biāo)志性細(xì)胞因子IL-17與哮喘、過(guò)敏性鼻炎的發(fā)生有關(guān)。血清IL-17水平與過(guò)敏嚴(yán)重程度具有顯著相關(guān)性［24］。有實(shí)驗(yàn)證明，IL-17和VEGF信號(hào)在LPS誘導(dǎo)鼻炎的鼻粘膜中的嗜中性細(xì)胞浸潤(rùn)中起重要作用［25］。證據(jù)表明，與健康對(duì)照受試者相比，哮喘患者的痰、支氣管肺泡灌洗液、支氣管活檢和血清中IL-17增加［26］。人體外研究證實(shí)，Th17細(xì)胞因子如IL-17A通過(guò)對(duì)ERK1/2 MAPK和NF-kB介導(dǎo)對(duì)哮喘患者和非哮喘患者氣道平滑肌細(xì)胞的促增殖和遷移作用［27］。IL-17A增加纖維細(xì)胞中α-平滑肌肌動(dòng)蛋白的表達(dá)，但不增加膠原的表達(dá)，使纖維細(xì)胞的活化和增殖，從而導(dǎo)致促纖維化和促炎活性的增加。在上皮細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞中，IL-17又可以誘導(dǎo)TNF-α分泌。IL-17通過(guò)多種方式參與了哮喘氣道高反應(yīng)性和氣道阻塞、氣道重塑、嗜酸性粒細(xì)胞增多和IgE高分泌等多個(gè)病理過(guò)程［28］。

綜上所述，本研究通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)和分子對(duì)接技術(shù)初步揭示了玉屏風(fēng)散具有多成分、多靶點(diǎn)、多通路的作用特點(diǎn)，為后續(xù)針對(duì)玉屏風(fēng)散治療CARAS作用機(jī)制的藥理實(shí)驗(yàn)研究提供了科學(xué)依據(jù)。

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（收稿日期：2022-11-22）