QuEChERS 結(jié)合GC-MS/MS 快速檢測火腿中4 種有機磷類農(nóng)藥殘留

◎ 梁 俊，刁玉華，馬艷紅，萬 靜

(1.羅平縣市場監(jiān)督管理綜合檢驗檢測中心，云南 曲靖 655800;2.昆明市食品藥品檢驗所 食品檢驗中心，云南 昆明 650032）

火腿是經(jīng)過腌制或熏制處理過的豬肉，其營養(yǎng)豐富、風味鮮美獨特、口感油而不膩[1-2]。但火腿在腌制過程中容易出現(xiàn)蚊蟲叮咬和生蛆等現(xiàn)象，影響火腿品質(zhì)，一些不法商販為了獲取更多利潤，不惜使用某些劇毒的有機磷類農(nóng)藥。有機磷類農(nóng)藥是一類高效、廣譜的化學(xué)殺蟲劑，廣泛用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)，但如果用于農(nóng)產(chǎn)品中造成殘留會嚴重危害環(huán)境和人類身體健康。因此，監(jiān)測有機磷殺蟲劑殘留對于農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全、食品衛(wèi)生與安全監(jiān)督具有重要意義[3]。

目前，測定食品中有機磷類農(nóng)藥殘留的方法主要有氣相色譜法[4]、氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[5]、液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法[6]等。氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法能夠有效地避免基質(zhì)干擾帶來的假陽性問題，近年來得到廣泛應(yīng)用，但存在前處理步驟較為復(fù)雜、需要消耗大量試劑、回收率低、重現(xiàn)性較差等問題[7]。此外，由于火腿樣品性質(zhì)較為復(fù)雜，針對農(nóng)藥殘留檢測干擾較嚴重，因此提取、凈化方式將采用QuEChERS 方法[8]。定量采用基質(zhì)匹配標準曲線，氣相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進行上機檢測，旨在建立快速檢測火腿中4 種有機磷農(nóng)藥殘留的QuEChERS-GC-MS/MS 法，為實現(xiàn)火腿中有機磷農(nóng)藥殘留的檢測提供實驗依據(jù)及參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

敵敵畏（100 mg·L-1）、敵百蟲（100 mg·L-1）、馬拉硫磷（100 mg·L-1）和蠅毒磷（100 mg·L-1）標準品，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部環(huán)境保護科研監(jiān)測所；乙腈、乙酸乙酯（色譜純），美國默克公司；冰醋酸（色譜純），北京沃凱生物科技有限公司； Bond Elut QuEChERS 提取包、Bond Elut QuEChERS 凈化管，美國Agilent 公司（AOAC 方法）；超純水機，英國ELGA CHORUS超純水機制備。

1.2 儀器與設(shè)備

氣相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（型號Agilent 7890B-7000D），美國安捷倫公司；電子天平，美國梅特勒托利多公司；數(shù)控超聲波清洗器，昆山市超聲儀器有限公司；旋渦混合器，海門其林貝爾公司；大容量冷凍離心機，美國貝克曼公司；超純水器，英國ELGA CHORUS 公司。

1.3 實驗方法

1.3.1 樣品處理

稱取已均質(zhì)好的火腿樣品5.00 g，加10 mL 水，渦旋振蕩5 min 后靜置30 min，再加入15 mL 的酸化乙腈和一顆陶瓷均質(zhì)子，渦旋振蕩5 min，再加入萃取鹽包（6 g 無水硫酸鎂、1.5 g 醋酸鈉），立刻振蕩混勻冰水浴10 min，渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min。吸取9 mL 的上清液加到內(nèi)含1 200 mg 硫酸鎂、400 mg PSA、400 mg C18的15 mL 塑料離心管中，渦旋振蕩5 min，5 000 r·min-1離心5 min，-18 ℃冷凍30 min。吸取2 mL 上清液過0.22 μm 有機相濾膜，上機。

1.3.2 儀器條件

（1）色譜參數(shù)。色譜柱選擇HP-5MS 石英毛細管柱（30 m × 0.25 mm，0.25 μm）；升溫程序：初始溫度60 ℃保持 1 min，以40 ℃·min-1升至170 ℃，以10 ℃·min-1升至310 ℃保持3 min；進樣口溫度為280 ℃；載氣（He）流速1.0 mL·min-1；不分流進樣，進樣量1.0 μL。

（2）質(zhì)譜參數(shù)。電子轟擊電離（ELectron Impact，EI）70 eV，離子源溫度280 ℃，傳輸線溫度280 ℃，四極桿溫度150 ℃；溶劑延遲4.5 min，多反應(yīng)監(jiān)測模式，其具體參數(shù)見表1。

表1 4 種農(nóng)藥質(zhì)譜參數(shù)、線性關(guān)系、檢出限、定量限表

1.3.3 標準曲線

（1）4 種有機磷農(nóng)藥混合標準儲備液。準確吸取各農(nóng)藥標準品0.1 mL 于10 mL 容量瓶中，用丙酮稀釋成1.0 mg·L-1的混合標準儲備液，于4 ℃避光保存。

（2）4 種有機磷農(nóng)藥標準系列基質(zhì)溶液配制。吸取濃度為1.0 mg·L-1的混合標準儲備液適量，用基質(zhì)提取液定容，搖勻，配制成5 μg·L-1、10 μg·L-1、50 μg·L-1、100 μg·L-1、200 μg·L-1、300 μg·L-1和500 μg·L-1的標準系列溶液。

2 結(jié)果與分析

2.1 樣品前處理條件優(yōu)化

QuEChERS 方法是運用有機溶劑提取、鹽析分層、分散固相吸附劑萃取凈化的快速前處理方法，其最常用的提取溶劑是乙腈，對提取極性范圍較寬的多種農(nóng)藥效果較好?；鹜鹊暮枯^低，若直接用乙腈提取，其效率往往不理想，故在提取前通過加水促使細胞溶脹，獲得較高的提取效率。QuEChERS 提取包在弱酸性條件下使用最佳，因此在乙腈中加入1%冰醋酸使其酸化。此外，加入提取溶劑極易產(chǎn)熱影響提取效率，本文采用提前冷凍提取溶劑的方法進行提取。

2.2 線性關(guān)系、檢出限與定量限

將配制好的質(zhì)量濃度為0.005 ～0.500 mg·L-1的基質(zhì)標準系列溶液上機測定，以定量離子的峰面積為縱坐標，對應(yīng)的質(zhì)量濃度為橫坐標繪制標準曲線，結(jié)果顯示在選定的質(zhì)量濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)均不低于0.99，同時采用逐級稀釋法，以3 倍信噪比計算得到方法檢出限為0.13 ～0.61 μg·kg-1，以10 倍信噪比計算得到方法定量限為0.43 ～2.06 μg·kg-1，其結(jié)果見表1。

2.3 回收率及精密度

當向空白基質(zhì)中加入0.015 mg·kg-1、0.060 mg·kg-1、0.300 mg·kg-1的農(nóng)藥標準物質(zhì)，每組進行6 次平行測定，其回收率范圍為68.7%～96.5%，精密度小于5%，結(jié)果見表2。

表2 4 種農(nóng)藥回收率和精密度實驗結(jié)果表

2.4 樣品測定

應(yīng)用本文方法對10 份市售的樣品（1 ～6 火腿、7 ～8 牛干巴、9 ～10 臘腸）進行測定，其中5 份檢出有機磷類農(nóng)藥，詳見表3。從表3 中可看出部分樣品中檢出敵敵畏和蠅毒磷，腌臘肉制品使用有機磷農(nóng)藥是比較普遍的情況，為監(jiān)管部門提供一定的數(shù)據(jù)參考，以促進其進一步規(guī)范和減少安全風險。

表3 樣品測定結(jié)果表（單位：mg·kg-1）

3 結(jié)論

實驗結(jié)果表明，火腿試樣中的有機磷類農(nóng)藥經(jīng)酸化乙腈提取，分散固相萃取凈化后，采用GC-MS/MS進行檢測，在質(zhì)量濃度為0.005 ～0.500 mg·L-1時，相關(guān)系數(shù)均不低于0.99，檢出限為0.13 ～0.61 μg·kg-1，定量限為0.43 ～2.06 μg·kg-1， 平均回收率為68.7%～96.5%，重復(fù)性實驗的相對標準偏差在5%以下（n=6）。本實驗建立的方法簡單、快速、安全、便宜且重現(xiàn)性好，適用于火腿類食品中多種有機磷類農(nóng)藥殘留檢測，值得廣泛推廣。