• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    維生素E 穩(wěn)定型高交聯(lián)聚乙烯人工膝關(guān)節(jié)磨屑的分離提取

    2023-06-11 12:25:16黃秀玲朱俊俊華子愷
    關(guān)鍵詞:磨屑濾膜形狀

    鄭 曄, 黃秀玲, 馮 景, 朱俊俊, 華子愷

    (上海大學(xué)機電工程與自動化學(xué)院, 上海 200444)

    近年來, 隨著老齡人口增多、骨關(guān)節(jié)疾病發(fā)病率逐年上升, 人工關(guān)節(jié)置換術(shù)需求也隨之?dāng)U大. 人工膝關(guān)節(jié)置換術(shù)的10 a 存活率為90% 以上[1], 盡管如此, 仍有患者需要術(shù)后翻修. 隨著人工關(guān)節(jié)置換術(shù)數(shù)量的不斷增加, 失效的絕對數(shù)量仍然較大. 有文獻報道, 70%的翻修手術(shù)是由無菌性松動引起的[2]. 磨損產(chǎn)生的磨屑在假體松動的發(fā)生發(fā)展過程中起著關(guān)鍵性作用[3].尤其是聚乙烯(polyethylene, PE) 磨屑, 數(shù)量多(70%~90%), 分布廣, 可以引起假體周圍骨界面附近的生物學(xué)反應(yīng), 繼發(fā)骨溶解并最終導(dǎo)致假體無菌性松動, 進而制約人工假體的使用壽命[4-8]. 因此, 研究人工關(guān)節(jié)假體材料及其磨屑尤為重要.

    超高分子量聚乙烯(ultra high molecular weight polyethylene, UHMWPE) 磨屑已被大量研究, 并形成了標(biāo)準(zhǔn)分離提取方法——ISO 17853:2011. 隨著人工關(guān)節(jié)材料的更新?lián)Q代, 一種抗氧化、低磨損的維生素E 穩(wěn)定型高交聯(lián)聚乙烯(vitamin E stabilized highly cross-linked polyethylene, VE/HXLPE) 出現(xiàn). VE/HXLPE 人工關(guān)節(jié)的磨損率明顯低于UHMWPE[9], 但VE/HXLPE 磨屑同樣存在無菌性松動和骨溶解風(fēng)險. 此外, VE/HXLPE 磨屑是否可以用現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)提取還未知, 且潤滑介質(zhì)降解后的取樣量對磨屑表征影響尚無全面、系統(tǒng)的研究. 針對以上問題, 本工作將通過實驗探究現(xiàn)有的磨屑提取方法是否適用于低磨損VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑, 并分析潤滑介質(zhì)降解后的消化液取樣量對其磨屑數(shù)量、體積和形貌特征等的影響.

    1 實驗材料與方法

    1.1 方案設(shè)計

    基于ISO 17853:2011 標(biāo)準(zhǔn), UHMWPE 磨屑的分離提取一般包括2 個步驟: 血清的消化和磨屑的收集. 消化血清的方法有鹽酸消化法和NaOH 消化法, 其中酸消化法對血清蛋白清除效率較高、成本低、易操作, 是聚乙烯磨屑分離提取的首選方法.

    采用酸消化法對潤滑介質(zhì)中的VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑進行提取, 標(biāo)準(zhǔn)方法的步驟如下:①將冷凍的固態(tài)小牛血清(內(nèi)含磨屑) 從冰柜中取出, 刮掉表面沉積物后在常溫下解凍10 h;②將血清均勻攪拌5 min 并量取10 mL, 使取樣具有代表性; ③取40 mL 鹽酸溶液(體積分數(shù)為37%) 與10 mL 血清混合, 50?C 水浴恒溫攪拌1 h, 得到淺紫色消化液; ④取0.5 mL 消化液加至100 mL 無水甲醇溶液中攪拌均勻, 通過0.05 μm 聚碳酸酯濾膜真空抽濾, 濾膜上的顆粒即為提取的磨屑.

    圖1 為不同取樣量VE/HXLPE 磨屑的掃描電鏡(scanning electron microscope, SEM)圖. 可以看出:取樣量0.5 mL 時提取的VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑在低倍和高倍SEM 圖中均難以達到表征數(shù)量(見圖1(a)). VE/HXLPE 人工膝關(guān)節(jié)磨損量低, 直接導(dǎo)致磨屑數(shù)量減少. 分析標(biāo)準(zhǔn)方法中與磨屑數(shù)量有關(guān)的參數(shù)可知, 消化液取樣量直接影響呈現(xiàn)在濾膜上的磨屑數(shù)量.

    圖1 VE/HXLPE 磨屑SEM 圖像Fig.1 SEM images of VE/HXLPE debris

    研究磨屑群體可以克服磨屑研究的隨機性, 能夠更客觀、全面反映人工關(guān)節(jié)磨損過程的演變規(guī)律. 我們推測消化液取樣量的變化會影響磨屑的數(shù)量, 從而最終影響磨屑的表征. 因此, 將標(biāo)準(zhǔn)方法步驟④中的取樣量新增4 組(1.0、2.0、4.0 和6.0 mL), 探究取樣量對低磨損VE/HXLPE 人工膝關(guān)節(jié)磨屑數(shù)量、體積、形貌特征等的影響. 由圖1(b) 可知, 若僅改變?nèi)恿繛?.0 mL, SEM 圖像中的磨屑數(shù)量明顯增加.

    1.2 實驗方法

    1.2.1 磨屑的制備、分離與提取

    采用Orthotek 實驗室的人工膝關(guān)節(jié)磨損試驗機(型號JointWear-K4301), 以小牛血清為潤滑介質(zhì), 根據(jù)ISO 14243-3 進行總循環(huán)次數(shù)為500 萬次的金屬股骨髁和VE/HXLPE 脛骨襯墊配副的人工膝關(guān)節(jié)步態(tài)體外磨損試驗, 每50 萬次循環(huán)使用450 mL 小牛血清, 在每50 萬次結(jié)束后暫停設(shè)備回收小牛血清潤滑介質(zhì)(內(nèi)含磨屑) 并及時放入冰箱冷凍保存, 直至達到總循環(huán)次數(shù). 表1 為試驗參數(shù). 選取第450 萬次~第500 萬次循環(huán)(此階段處于穩(wěn)定磨損狀態(tài))產(chǎn)生的磨屑進行分析. 試驗結(jié)束后, 采用標(biāo)準(zhǔn)方法以不同取樣量提取磨屑進行研究.

    表1 試驗參數(shù)Table 1 Test parameters

    1.2.2 磨屑的觀測與表征

    裁剪帶有磨屑的濾膜, 并用碳膠粘貼在鋁塊上. 為使磨屑具有導(dǎo)電性, 需要對濾膜進行噴金處理. 使用日本JEOL 公司的JSM-7500F 冷場發(fā)射掃描電子顯微鏡對磨屑進行觀測, 放大倍數(shù)為5 000~10 000 倍, 加速電壓為5 keV, 每個樣品均在視野范圍內(nèi)隨機獲取20 張清晰圖像.

    利用圖像分析軟件Image-Pro Plus 將磨屑從圖像中分離, 得到磨屑的數(shù)量、最大直徑dmax、最小直徑dmin、周長P、長度L、寬度W、面積A (見圖2), 并計算等效圓直徑DEC、縱橫比RA、延伸率E、圓度R 和形狀因子FF等參數(shù), 對磨屑尺寸、形狀進行描述.

    圖2 磨屑參數(shù)Fig.2 Wear debris parameters

    根據(jù)圖像區(qū)域內(nèi)的平均磨屑數(shù)量nm, 計算不同取樣量下濾膜上的磨屑總數(shù)nT:

    式中: SL為每張濾膜的有效過濾面積; SP有每張圖像面積.

    根據(jù)圖像區(qū)域內(nèi)的平均磨屑體積Vm, 計算不同取樣量下濾膜上的磨屑總體積VT. 原子力顯微鏡觀測到磨屑厚度h 可通過線性回歸法確定為約等于磨屑等效圓直徑DEC的1/3[10], 據(jù)此估算獲得的磨屑體積:

    式中: nP為圖像數(shù).

    等效圓直徑DEC是與磨屑投影面積相等的圓的直徑, 是衡量磨屑尺寸的一個重要參數(shù):

    縱橫比RA是描述磨屑形狀的常用參數(shù):

    式中: dmax是磨屑輪廓上任意兩點之間所能畫出的最長直線距離; dmin是垂直于大直徑的最長直線距離.

    延伸率E 與RA類似, 更適用于描述長形磨屑, 尤其是纖維狀磨屑:

    圓度R 用來衡量磨屑與圓的相似程度,

    形狀因子FF與R 類似, 對磨屑輪廓的粗糙度變化更為敏感:

    將統(tǒng)計到的VE/HXLPE 磨屑進行分析, 得出磨屑參數(shù)的頻率分布圖及箱型圖, 再使用IBM SPSS Statistics 26 軟件分析統(tǒng)計數(shù)據(jù)的顯著差異性. 描述數(shù)據(jù)統(tǒng)計描述的表示形式為m±s (平均值± 標(biāo)準(zhǔn)差), 數(shù)據(jù)若符合正態(tài)分布且方差齊次, 則采用單因素方差分析(analysis of variance, ANOVA); 若不符合正態(tài)分布則采用曼-惠特尼-U 非參數(shù)檢驗. 檢驗水準(zhǔn)設(shè)定α=0.05.

    2 結(jié)果與分析

    2.1 磨屑觀測

    圖3 為不同取樣量下提取的VE/HXLPE 人工膝關(guān)節(jié)磨屑的SEM 圖像. 由圖3 可以看出: 磨屑均呈白色不透明狀; 放大5 000 倍時, 磨屑密度隨著取樣量的增加而增大, 并呈不規(guī)則的類球形、片狀、棒狀或絲狀, 形狀復(fù)雜且表面粗糙. 在0.5、1.0、2.0 mL 取樣量下, 磨屑輪廓清晰且形狀完整, 但在4.0、6.0 mL 取樣量下, 磨屑出現(xiàn)團聚狀態(tài), 顆粒重疊、輪廓模糊, 干擾后續(xù)的計數(shù)與表征. 這可能是由于磨屑經(jīng)抽濾方式沉降時, 過量磨屑重疊分布于濾膜. 圖4 為團聚磨屑的SEM 圖像. 可以看出: 4.0、6.0 mL 組的濾膜孔徑模糊不清, 磨屑輪廓模糊且呈團聚態(tài); 對于相互纏繞的纖維狀磨屑, 其數(shù)量統(tǒng)計和形貌表征均受到嚴重影響.

    圖4 團聚磨屑的SEM 圖像Fig.4 SEM image of agglomerated debris

    SEM 圖像模糊也可能是小牛血清中未消化的蛋白質(zhì)所致. 蛋白質(zhì)降解是磨屑提取的首要環(huán)節(jié), 本實驗采用酸消化法降解蛋白質(zhì). 強酸降解蛋白質(zhì)操作簡單、時間短、效率高, 但降解蛋白質(zhì)的效率并非100%. 張濤[11]用50 mL 濃鹽酸在60?C 水浴中攪拌降解10 mL 的小牛血清溶液1 h, 結(jié)果顯示溶液中蛋白質(zhì)的消化率最高時為71.87%, 表明仍有部分蛋白質(zhì)包覆于磨屑上. 圖5 為未降解網(wǎng)狀蛋白質(zhì)包覆磨屑的SEM 圖像. 可以看出, 磨屑邊緣和濾膜的分界模糊, 導(dǎo)致SEM 圖像上可統(tǒng)計的磨屑少. 因此, 本工作僅對取樣量為0.5、1.0、2.0 mL 組別進行分析討論.

    2.2 磨屑鑒定

    圖6 為隨機域中顆粒在濾波器上的X 射線能譜分析. 可以看出, 各組譜圖均顯示C 元素峰最明顯, O 元素峰次之, 無明顯的Co、Cr、Ti、Mo 元素峰. 表2 給出了隨機域中顆粒不同元素的質(zhì)量分數(shù). 由表2 可知, C、O 元素的質(zhì)量分數(shù)合計高達99%, Co、Cr、Ti、Mo 元素的質(zhì)量分數(shù)合計不足1%. 本實驗中關(guān)節(jié)配副材料為金屬與聚乙烯, 能譜顯示磨屑主要由非金屬元素組成, 由此可判斷分離提取的顆粒為聚乙烯磨屑(含C、H 元素). 質(zhì)量分數(shù)最高的C 元素來自磨屑和濾膜(含C、H、O 元素), 而質(zhì)量分數(shù)較高的O 元素可能來自濾膜.

    表2 隨機域中顆粒不同元素的質(zhì)量分數(shù)Table 2_The mass fraction of different elements of the particle in the random domain%

    圖6 隨機域中顆粒在濾波器上的能譜分析Fig.6 Energy spectrum analysis of particles on filters in the random domain

    2.3 提取方法對磨屑數(shù)量的影響

    VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑以不同取樣量分離提取后, 對其SEM 圖像進行磨屑計數(shù)統(tǒng)計,得到單位圖像區(qū)域內(nèi)磨屑數(shù)量的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差(見表3).

    表3 每張圖像內(nèi)VE/HXLPE 磨屑數(shù)量Table 3 The quantity of VE/HXLPE debris in each image

    掃描電鏡放大5 000 倍時, SP約為420.85 μm2(23.37 μm×17.78 μm), SL約為6 361.73 mm2(45 mm×45 mm×π). 將上述數(shù)據(jù)代入式(1), 計算不同取樣量下提取到的磨屑總數(shù), 并做組間差異性分析以確定磨屑數(shù)量分布是否存在顯著性差異, 結(jié)果如圖7 所示.

    圖7 過濾面積內(nèi)的VE/HXLPE 磨屑數(shù)量Fig.7 The quantity of VE/HXLPE debris in the filtration area

    由圖7 可知, 磨屑數(shù)量隨取樣量的增加而增加, 但非嚴格按照取樣量的倍增而倍增. 取樣量0.5 mL 代表現(xiàn)有標(biāo)準(zhǔn)下VE/HXLPE 磨屑的提取數(shù)量, 與取樣量1.0、2.0 mL 組之間均存在顯著性差異(P < 0.05). 以圖像中磨屑數(shù)量估計體外測試中小牛血清所含的全部磨屑數(shù)量,結(jié)果如圖8 所示. 對比標(biāo)準(zhǔn)取樣量0.5 mL 下的VE/HXLPE 磨屑提取數(shù)量, 取樣量1.0 mL組的提取效率為115%, 2.0 mL 組的提取效率為117.5%.

    圖8 體外測試小牛血清中的VE/HXLPE 磨屑總數(shù)Fig.8 Total numbers of VE/HXLPE debris in calf serum was tested by vitro test

    2.4 提取方法對磨屑體積的影響

    VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑以不同取樣量分離提取后, 對各取樣量下的磨屑體積進行計算,得到每張圖像區(qū)域內(nèi)統(tǒng)計到的平均磨屑體積結(jié)果(見表4).

    表4 圖像內(nèi)VE/HXLPE 磨屑平均體積Table 4 Average volume of VE/HXLPE debris in images

    通過表4 中的數(shù)據(jù)計算小牛血清中的磨屑總體積,并與體外測試的人工膝關(guān)節(jié)磨損量對比.實驗中VE/HXLPE 人工膝關(guān)節(jié)磨損量為(11.68±3.16)mg/Mc,材料密度為0.940 mg/mm3,可得磨損體積為(12.43±3.36) mm3/Mc. 根據(jù)式(2), 可計算每百萬次循環(huán)后提取磨屑的總體積, 結(jié)果如圖9 所示. 通過計算可知, 當(dāng)取樣量為0.5、1.0、2.0 mL 時, VE/HXLPE 磨屑的提取效率分別為66%、82%、93%.

    圖9 不同取樣量下VE/HXLPE 磨屑的總體積Fig.9 Total volumes of VE/HXLPE debris

    2.5 提取方法對磨屑形貌的影響

    2.5.1 磨屑尺寸

    圖10 為本實驗提取磨屑的等效圓直徑DEC分布情況. 可以看出, VE/HXLPE 磨屑的尺寸分布范圍廣泛, DEC為0.1~10.0 μm, 其中90% 以上為0.1~1.0 μm, 小于1.0 μm 或大于10.0 μm 的磨屑較少, 這與文獻[12] 中給出的磨屑尺寸范圍一致. 由于小尺寸磨屑數(shù)量多, 大尺寸磨屑數(shù)量少, 磨屑尺寸與磨屑數(shù)量之間呈右偏峰態(tài)分布. 另外, 各取樣量下的磨屑大多為0.1~0.5 μm.

    圖10 VE/HXLPE 磨屑的DEC 分布Fig.10 DEC distribution of VE/HXLPE debris

    磨屑尺寸是決定細胞活性的關(guān)鍵因素, 分布大多為微米級(>1.0 μm)、亞微米級(0.1~1.0μm) 和納米級(<100 nm). 0.1~10 μm 的磨屑可刺激巨噬細胞吞噬, 引起炎癥/細胞因子的產(chǎn)生, 從而導(dǎo)致骨溶解, 其中亞微米級磨屑(0.1~1.0 μm) 的生物活性更高[13-15]. 臨床上已發(fā)現(xiàn)較小的磨屑更易從植入部位移動擴散, 且臨界尺寸為0.2~0.8 μm 的磨屑更是引起生物反應(yīng)的關(guān)鍵[16]. 表5 為不同取樣量下VE/HXLPE 磨屑尺寸. 通過以上分析可知, 磨屑尺寸均在活性范圍內(nèi), 故取樣量對尺寸所決定的磨屑生物活性無明顯影響.

    表5 VE/HXLPE 磨屑尺寸Table 5 VE/HXLPE debris sizes

    2.5.2 磨屑形狀

    磨屑的形狀對細胞活性的影響不可忽視. 較多研究表明, 細長形磨屑比球形磨屑生物活性更活躍, 可刺激細胞分泌更高水平的炎癥因子[17]. RA與E 均為表征磨屑形狀是否為細長形的參數(shù), 值從1 開始, 值越大代表磨屑形狀越偏細長, 生物活性也越高. 圖11 為各取樣量下磨屑形狀參數(shù)RA、E、R、FF的箱型圖. 表6 為磨屑各形狀參數(shù)的平均值. 由圖11 和表6 可知,0.5 mL 下VE/HXLPE 磨屑的RA和E 平均值最大, 2.0 mL 組磨屑的RA和E 平均值較大.根據(jù)RA將磨屑分為類球狀和纖維狀, 若RA>2, 則磨屑為纖維條狀(包含條狀、棒狀及部分片塊狀顆粒); 若RA≤2, 則磨屑為類球狀[18]. 根據(jù)上述分類, 本工作中, 0.5 mL 組纖維條狀磨屑占比10.71%, 而2.0 mL 組纖維條狀磨屑占比11.60%.

    表6 VE/HXLPE 磨屑形狀參數(shù)的平均值Table 6 Average values of shape parameters of VE/HXLPE debris

    圖11 VE/HXLPE 磨屑形狀參數(shù)Fig.11 Shape parameters of VE/HXLPE debris

    R 與FF是衡量磨屑形狀與圓的相似程度, 值為0~1. R 與FF的值越接近1 表示磨屑形狀越偏向圓形, 其生物活性也越低; 而值越接近0, 磨屑的生物活性越高. 由圖11 和表6可知, VE/HXLPE 磨屑在取樣量2.0 mL 的R 和FF平均值分布與0.5 mL 組無顯著性差異(P >0.05), 而與1.0 mL 組存在顯著性差異(P <0.05).

    3 結(jié) 論

    本工作通過實驗探究了現(xiàn)行磨屑提取方法是否適用于低磨損VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑,同時分析了消化液取樣量對提取磨屑各表征參數(shù)的重要影響. 結(jié)果表明: 改變磨屑提取方法中的取樣量會影響提取的磨屑數(shù)量、體積及形貌分布. 采用現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)可提取到的VE/HXLPE 磨屑數(shù)量較少, 難以達到表征數(shù)量, 增大消化液取樣量能夠提取到更多的低磨損VE/HXLPE 膝關(guān)節(jié)磨屑, 更全面地表征磨屑群體, 為VE/HXLPE 人工膝關(guān)節(jié)產(chǎn)品應(yīng)用提供更全面有價值的參考.

    猜你喜歡
    磨屑濾膜形狀
    天然橡膠/順丁橡膠并用膠的耐磨性能與磨屑分形維數(shù)的關(guān)聯(lián)性
    人工膝關(guān)節(jié)不同體外磨損周期的UHMWPE磨屑特征及細胞毒性研究
    挖藕 假如悲傷有形狀……
    磨屑對TC4鈦合金微動磨損行為的影響
    人工關(guān)節(jié)CoCrMo-UHMWPE 配副在不同接觸應(yīng)力下的摩擦、磨損和磨屑特征
    材料保護(2022年12期)2022-02-16 13:15:56
    溶膠-凝膠法制備高性能ZrO2納濾膜
    A case report of acupuncture of dysphagia caused by herpes zoster virus infection
    你的形狀
    看到的是什么形狀
    荷負電手性殼聚糖納復(fù)合濾膜的制備與性能研究
    婷婷六月久久综合丁香| 大香蕉久久成人网| 久久久国产成人精品二区| 精品一区二区三区av网在线观看| 国产精品亚洲一级av第二区| 久久亚洲精品不卡| 亚洲av熟女| 日本一区二区免费在线视频| 午夜免费鲁丝| 亚洲一区中文字幕在线| 婷婷六月久久综合丁香| 又大又爽又粗| 欧美中文综合在线视频| 欧美日韩精品网址| 国产在线观看jvid| 成人亚洲精品一区在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 9热在线视频观看99| 波多野结衣av一区二区av| 女性生殖器流出的白浆| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 最近最新中文字幕大全电影3 | 中文字幕最新亚洲高清| 又黄又爽又免费观看的视频| 在线天堂中文资源库| 俄罗斯特黄特色一大片| 欧美丝袜亚洲另类 | 国产精品乱码一区二三区的特点 | 亚洲欧美激情综合另类| 99久久99久久久精品蜜桃| 国产成人欧美| 国产欧美日韩精品亚洲av| 大香蕉久久成人网| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 国产99白浆流出| 色综合亚洲欧美另类图片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 免费在线观看亚洲国产| 欧美 亚洲 国产 日韩一| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 亚洲性夜色夜夜综合| 一进一出抽搐动态| 咕卡用的链子| 亚洲成人精品中文字幕电影| 国产成人精品久久二区二区91| 老司机午夜十八禁免费视频| 欧美乱色亚洲激情| av欧美777| 欧美成人性av电影在线观看| 大码成人一级视频| 成人永久免费在线观看视频| 丁香欧美五月| av网站免费在线观看视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 色老头精品视频在线观看| 美女免费视频网站| 最近最新免费中文字幕在线| 正在播放国产对白刺激| 一区二区三区高清视频在线| 极品教师在线免费播放| 桃色一区二区三区在线观看| 香蕉久久夜色| 亚洲国产看品久久| 这个男人来自地球电影免费观看| 我的亚洲天堂| 日本五十路高清| 国产精品精品国产色婷婷| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 国产成人免费无遮挡视频| 一进一出抽搐gif免费好疼| 亚洲精品粉嫩美女一区| 日本vs欧美在线观看视频| 色综合婷婷激情| 亚洲专区中文字幕在线| 欧美激情高清一区二区三区| 女人被狂操c到高潮| 成人精品一区二区免费| 久久久国产欧美日韩av| 国产精品久久视频播放| 50天的宝宝边吃奶边哭怎么回事| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 亚洲av电影在线进入| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 91在线观看av| 男人舔女人下体高潮全视频| 在线观看免费日韩欧美大片| 国产1区2区3区精品| 亚洲专区中文字幕在线| or卡值多少钱| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 咕卡用的链子| 久久婷婷人人爽人人干人人爱 | 大型黄色视频在线免费观看| 日本免费a在线| 成年女人毛片免费观看观看9| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 欧洲精品卡2卡3卡4卡5卡区| 国产一区二区三区视频了| 国产欧美日韩精品亚洲av| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产av一区二区精品久久| 久久久久国内视频| 亚洲中文日韩欧美视频| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 久久久久国内视频| 国产精品电影一区二区三区| 男女午夜视频在线观看| 久久久久国内视频| 丝袜美足系列| 最好的美女福利视频网| 亚洲五月天丁香| 日韩欧美国产在线观看| 久久欧美精品欧美久久欧美| 高清黄色对白视频在线免费看| 亚洲精品国产一区二区精华液| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 亚洲视频免费观看视频| 无人区码免费观看不卡| 一本大道久久a久久精品| 男女下面进入的视频免费午夜 | 中文字幕人妻熟女乱码| 搡老熟女国产l中国老女人| 国产在线观看jvid| 好男人在线观看高清免费视频 | 久久人人97超碰香蕉20202| 免费高清在线观看日韩| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 久热爱精品视频在线9| 男女床上黄色一级片免费看| 两人在一起打扑克的视频| 在线十欧美十亚洲十日本专区| 亚洲片人在线观看| 青草久久国产| 美国免费a级毛片| 国产精品免费一区二区三区在线| 制服诱惑二区| 搞女人的毛片| 久热这里只有精品99| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 国产精品电影一区二区三区| av欧美777| 国产亚洲av嫩草精品影院| 成人欧美大片| 久久狼人影院| 波多野结衣一区麻豆| 在线国产一区二区在线| 两个人免费观看高清视频| 桃红色精品国产亚洲av| 亚洲专区字幕在线| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 亚洲一区高清亚洲精品| 亚洲一区二区三区色噜噜| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 久久这里只有精品19| 老司机深夜福利视频在线观看| 国产精品久久久人人做人人爽| 99在线视频只有这里精品首页| netflix在线观看网站| 久久国产精品男人的天堂亚洲| 国产成人影院久久av| 淫妇啪啪啪对白视频| 97碰自拍视频| 久久久久久久久久久久大奶| 高潮久久久久久久久久久不卡| 757午夜福利合集在线观看| 一区福利在线观看| 久久精品成人免费网站| 欧美国产日韩亚洲一区| 男女午夜视频在线观看| 制服诱惑二区| www日本在线高清视频| 亚洲视频免费观看视频| 久久精品国产99精品国产亚洲性色 | 搡老岳熟女国产| 黄片大片在线免费观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 天堂动漫精品| e午夜精品久久久久久久| 老司机在亚洲福利影院| 一个人免费在线观看的高清视频| 级片在线观看| 亚洲美女黄片视频| 国产色视频综合| 在线观看舔阴道视频| 黄色女人牲交| 国产亚洲欧美98| 欧美精品亚洲一区二区| 成人亚洲精品一区在线观看| 黄色丝袜av网址大全| 日本免费一区二区三区高清不卡 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 中文字幕久久专区| 亚洲欧美日韩另类电影网站| 变态另类丝袜制服| 成人18禁在线播放| 免费看a级黄色片| 亚洲精品久久国产高清桃花| 咕卡用的链子| 黄片小视频在线播放| 非洲黑人性xxxx精品又粗又长| 欧美日韩精品网址| 久久人妻福利社区极品人妻图片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 成人三级黄色视频| 欧美日韩一级在线毛片| 少妇 在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 日日夜夜操网爽| 美女午夜性视频免费| 久久性视频一级片| 一边摸一边抽搐一进一出视频| 国产精品一区二区三区四区久久 | 天堂影院成人在线观看| 日韩成人在线观看一区二区三区| 国产极品粉嫩免费观看在线| 少妇 在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 在线播放国产精品三级| 国产精品影院久久| 男人的好看免费观看在线视频 | 丁香六月欧美| 两个人免费观看高清视频| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 国产精品99久久99久久久不卡| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产精品 欧美亚洲| 97碰自拍视频| 99在线视频只有这里精品首页| 岛国在线观看网站| 国产一区二区三区在线臀色熟女| av天堂久久9| av天堂在线播放| 18美女黄网站色大片免费观看| 91在线观看av| 亚洲av成人av| 九色国产91popny在线| 无遮挡黄片免费观看| 成人手机av| 国产免费男女视频| 亚洲人成77777在线视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 久久国产乱子伦精品免费另类| 欧美成狂野欧美在线观看| 欧美性长视频在线观看| 亚洲人成77777在线视频| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 精品久久久久久,| 精品欧美国产一区二区三| 欧美国产精品va在线观看不卡| 变态另类丝袜制服| 久久久久久久久免费视频了| 欧美午夜高清在线| 亚洲男人的天堂狠狠| 好男人电影高清在线观看| 久久精品91无色码中文字幕| 757午夜福利合集在线观看| 成人免费观看视频高清| 久久国产精品人妻蜜桃| 日韩欧美一区二区三区在线观看| 国产亚洲欧美98| 久久婷婷成人综合色麻豆| 一级片免费观看大全| 亚洲国产欧美网| 99精品欧美一区二区三区四区| 久久久久国产一级毛片高清牌| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 老鸭窝网址在线观看| 国产亚洲精品综合一区在线观看 | 精品一品国产午夜福利视频| 久久草成人影院| 午夜视频精品福利| 午夜福利视频1000在线观看 | 成人手机av| 手机成人av网站| 露出奶头的视频| 黄色a级毛片大全视频| 一区福利在线观看| 首页视频小说图片口味搜索| 久久欧美精品欧美久久欧美| 女警被强在线播放| 成人av一区二区三区在线看| 在线观看免费日韩欧美大片| 欧美成人午夜精品| 色综合亚洲欧美另类图片| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| ponron亚洲| 日韩高清综合在线| 岛国在线观看网站| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 精品卡一卡二卡四卡免费| 免费高清视频大片| 久久影院123| 精品国产一区二区三区四区第35| 欧美一级毛片孕妇| 97人妻精品一区二区三区麻豆 | 成熟少妇高潮喷水视频| 乱人伦中国视频| 欧美色视频一区免费| 又紧又爽又黄一区二区| 日韩av在线大香蕉| 亚洲一区中文字幕在线| 精品国产乱码久久久久久男人| 国产99久久九九免费精品| 国产私拍福利视频在线观看| 91麻豆av在线| 免费少妇av软件| 很黄的视频免费| 悠悠久久av| 一边摸一边抽搐一进一小说| 97人妻天天添夜夜摸| 欧美日韩亚洲综合一区二区三区_| 脱女人内裤的视频| 亚洲精品美女久久av网站| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 亚洲成人国产一区在线观看| 欧美大码av| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 国产成人一区二区三区免费视频网站| 久久久久久人人人人人| 国产欧美日韩一区二区精品| 免费在线观看影片大全网站| 真人一进一出gif抽搐免费| 久久香蕉精品热| av超薄肉色丝袜交足视频| 老司机深夜福利视频在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 国产成人精品久久二区二区免费| 露出奶头的视频| 成人欧美大片| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 成人特级黄色片久久久久久久| 亚洲精华国产精华精| 亚洲国产精品合色在线| 欧美在线一区亚洲| 国产精品国产高清国产av| 少妇裸体淫交视频免费看高清 | 99久久精品国产亚洲精品| 一区二区三区高清视频在线| 久99久视频精品免费| 国产午夜福利久久久久久| 日韩高清综合在线| 亚洲电影在线观看av| 99riav亚洲国产免费| 97人妻天天添夜夜摸| 99国产精品一区二区蜜桃av| 成人国产综合亚洲| 日本 欧美在线| 激情在线观看视频在线高清| 色播亚洲综合网| 色老头精品视频在线观看| 久久精品国产亚洲av高清一级| 欧美乱色亚洲激情| 两个人视频免费观看高清| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 满18在线观看网站| 777久久人妻少妇嫩草av网站| 亚洲一码二码三码区别大吗| 国产精品一区二区精品视频观看| 久久精品91无色码中文字幕| 亚洲欧美激情在线| 久久性视频一级片| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 国产成人av教育| 男人舔女人的私密视频| 久久久精品国产亚洲av高清涩受| 最好的美女福利视频网| 中出人妻视频一区二区| 欧美av亚洲av综合av国产av| 欧美成人免费av一区二区三区| 美女免费视频网站| 午夜成年电影在线免费观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产高清videossex| 午夜a级毛片| 亚洲国产中文字幕在线视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久久久久久久免费视频了| 19禁男女啪啪无遮挡网站| 可以在线观看毛片的网站| 国产午夜精品久久久久久| 亚洲情色 制服丝袜| 欧美在线黄色| 日韩有码中文字幕| 看黄色毛片网站| 多毛熟女@视频| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 制服诱惑二区| 国产精品1区2区在线观看.| 欧美日韩乱码在线| 丁香六月欧美| 精品乱码久久久久久99久播| 美女 人体艺术 gogo| 激情在线观看视频在线高清| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 制服诱惑二区| 国产视频一区二区在线看| 91av网站免费观看| 国产成人免费无遮挡视频| 天堂√8在线中文| 久久国产精品人妻蜜桃| av中文乱码字幕在线| 99精品久久久久人妻精品| 黄色成人免费大全| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲精品国产一区二区精华液| 日韩欧美国产一区二区入口| 国产亚洲精品久久久久5区| 亚洲免费av在线视频| 一级黄色大片毛片| 一a级毛片在线观看| 一本久久中文字幕| netflix在线观看网站| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 欧美中文综合在线视频| 婷婷精品国产亚洲av在线| 一区二区三区精品91| 欧美精品啪啪一区二区三区| 日韩三级视频一区二区三区| 人妻久久中文字幕网| 韩国精品一区二区三区| 在线观看午夜福利视频| 无限看片的www在线观看| 一二三四社区在线视频社区8| 亚洲欧美精品综合久久99| 亚洲av成人不卡在线观看播放网| 久久性视频一级片| 欧美不卡视频在线免费观看 | 免费无遮挡裸体视频| 男女之事视频高清在线观看| 淫秽高清视频在线观看| 亚洲人成电影观看| 波多野结衣巨乳人妻| 天堂动漫精品| 午夜福利一区二区在线看| 国内精品久久久久久久电影| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲国产欧美日韩在线播放| 1024视频免费在线观看| 看黄色毛片网站| 男女下面进入的视频免费午夜 | 嫩草影院精品99| 99久久99久久久精品蜜桃| 女性生殖器流出的白浆| 亚洲精品av麻豆狂野| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 欧美最黄视频在线播放免费| 亚洲熟妇熟女久久| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 窝窝影院91人妻| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 成人精品一区二区免费| 国产一区二区激情短视频| 日日夜夜操网爽| 在线免费观看的www视频| 亚洲欧美精品综合久久99| 美女免费视频网站| 精品一区二区三区四区五区乱码| 免费在线观看影片大全网站| 亚洲精华国产精华精| 曰老女人黄片| 亚洲七黄色美女视频| 国产成+人综合+亚洲专区| 日韩欧美免费精品| 波多野结衣巨乳人妻| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 脱女人内裤的视频| 欧美激情极品国产一区二区三区| 啦啦啦观看免费观看视频高清 | 淫妇啪啪啪对白视频| 国产精品久久久久久精品电影 | 久久这里只有精品19| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 操出白浆在线播放| 久久久久亚洲av毛片大全| 97超级碰碰碰精品色视频在线观看| 国产av在哪里看| 久久久国产成人精品二区| 欧美在线黄色| 国产精品永久免费网站| 黄片小视频在线播放| 免费在线观看日本一区| 欧美激情极品国产一区二区三区| 亚洲av片天天在线观看| 香蕉丝袜av| 757午夜福利合集在线观看| 久久天躁狠狠躁夜夜2o2o| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 99香蕉大伊视频| 成人国产一区最新在线观看| 免费在线观看亚洲国产| 丁香欧美五月| www国产在线视频色| 在线观看一区二区三区| 国产精品 欧美亚洲| 日韩欧美三级三区| 亚洲色图综合在线观看| 国产精品爽爽va在线观看网站 | 热re99久久国产66热| 精品国产乱码久久久久久男人| 岛国在线观看网站| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产一级毛片七仙女欲春2 | www国产在线视频色| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 亚洲av电影不卡..在线观看| 男女做爰动态图高潮gif福利片 | 色老头精品视频在线观看| 日本 欧美在线| 亚洲国产高清在线一区二区三 | 这个男人来自地球电影免费观看| 精品不卡国产一区二区三区| 青草久久国产| 一区二区三区高清视频在线| aaaaa片日本免费| 91成人精品电影| 老司机福利观看| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 91大片在线观看| 日本精品一区二区三区蜜桃| 亚洲 欧美一区二区三区| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美乱码精品一区二区三区| 一夜夜www| 黄色成人免费大全| 久久午夜亚洲精品久久| 日韩免费av在线播放| 亚洲成a人片在线一区二区| 成人三级黄色视频| 亚洲国产精品久久男人天堂| 亚洲激情在线av| 国产99久久九九免费精品| 国产精品二区激情视频| 亚洲在线自拍视频| 久久久国产精品麻豆| 热re99久久国产66热| 国产精品日韩av在线免费观看 | 久久精品国产亚洲av高清一级| 午夜激情av网站| 成年人黄色毛片网站| 日韩精品青青久久久久久| 两人在一起打扑克的视频| 亚洲国产毛片av蜜桃av| 丰满人妻熟妇乱又伦精品不卡| 亚洲久久久国产精品| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 黄色视频不卡| 精品久久久久久久人妻蜜臀av | 在线av久久热| 午夜a级毛片| xxx96com| 久久久国产精品麻豆| 757午夜福利合集在线观看| 久久久久国内视频| 亚洲一区二区三区色噜噜| 国产精品美女特级片免费视频播放器 | 国产精品免费视频内射| 欧美乱妇无乱码| 悠悠久久av| 两人在一起打扑克的视频| 午夜a级毛片| 国产日韩一区二区三区精品不卡| 久久久久久国产a免费观看| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| cao死你这个sao货| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 精品熟女少妇八av免费久了| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产区一区二久久| 美女大奶头视频| 美女扒开内裤让男人捅视频| 99精品欧美一区二区三区四区| av天堂久久9| 国产精品九九99| 亚洲中文日韩欧美视频| 99国产综合亚洲精品| 97人妻天天添夜夜摸| 制服诱惑二区| 亚洲精品在线观看二区| e午夜精品久久久久久久| 男人舔女人下体高潮全视频| 久久人人爽av亚洲精品天堂| or卡值多少钱| 一区二区三区国产精品乱码| 日本免费a在线| 成年版毛片免费区| 午夜精品久久久久久毛片777| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲,欧美精品.| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 日本精品一区二区三区蜜桃| 咕卡用的链子| 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲专区国产一区二区| 精品欧美国产一区二区三| 国产精品久久久久久亚洲av鲁大| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 色综合亚洲欧美另类图片| 啦啦啦韩国在线观看视频| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 午夜福利影视在线免费观看| 电影成人av| 老汉色∧v一级毛片| 国产精品秋霞免费鲁丝片| 国产一区在线观看成人免费| 两个人看的免费小视频| 90打野战视频偷拍视频| 亚洲国产精品合色在线| 大香蕉久久成人网| 亚洲美女黄片视频| 天堂影院成人在线观看| 久久久久久大精品| 9热在线视频观看99|