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    滇重樓葉片和花萼的SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)性分析

    2023-06-07 05:04:28駱亮仲李卓蔚周濃夏李付旭娟黃梅郭冬琴
    南方農(nóng)業(yè)·上旬 2023年2期
    關(guān)鍵詞:相關(guān)性分析葉綠素

    駱亮仲 李卓蔚 周濃 夏李 付旭娟 黃梅 郭冬琴

    摘 要 為探究滇重樓葉片和花萼的SPAD值與葉綠素含量之間的相關(guān)性,以4種生長(zhǎng)年限的滇重樓葉片和花萼為試驗(yàn)材料,采用SPAD葉綠素儀和丙酮法測(cè)定葉片SPAD值和葉綠素含量。結(jié)果表明,滇重樓葉片、花萼的SPAD值和葉綠素含量各不相同,并且兩者受年際間環(huán)境影響較大。相關(guān)分析表明,SPAD值與葉綠素含量間呈極顯著相關(guān)(p<0.01)。對(duì)不同生長(zhǎng)年限的滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素含量進(jìn)行函數(shù)方程擬合,再對(duì)實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行方差分析,結(jié)果表明兩者間無(wú)顯著性差異,因此可通過(guò)將SPAD值代入方程估算滇重樓葉綠素含量。綜上所述,可以采用SPAD值代替?zhèn)鹘y(tǒng)的葉綠素含量,這為快速測(cè)定大田滇重樓葉片和花萼的葉綠素含量提供了新方法。

    關(guān)鍵詞 滇重樓;葉綠素;不同生長(zhǎng)年限;SPAD值;相關(guān)性分析

    中圖分類號(hào):R282.2 文獻(xiàn)標(biāo)志碼:A DOI:10.19415/j.cnki.1673-890x.2023.03.035

    滇重樓(Paris polyphylla var. yunnanensis)作為延齡草科重樓屬植物,是一種常見(jiàn)的名貴中藥材,根莖入藥,具有涼肝定驚、消腫止痛、清熱解毒的功效,是“熱毒清”“宮血寧”“季德勝蛇藥片”和“抗病毒顆?!钡犬a(chǎn)品的主要原材料[1],常用于治療毒蛇咬傷、咽喉腫痛、跌打傷痛等病癥[2]。近些年來(lái),由于中藥產(chǎn)業(yè)的迅速發(fā)展,市面上對(duì)滇重樓的需求大幅提升,導(dǎo)致大量野生滇重樓被采挖空,野生滇重樓的產(chǎn)量已不能滿足人們的需求,因此,人工大規(guī)模種植高產(chǎn)優(yōu)質(zhì)的滇重樓刻不容緩。

    植物光合作用離不開(kāi)葉綠素,葉綠素含量直接影響綠色植株的光合效率,進(jìn)而影響植株的營(yíng)養(yǎng)狀況和生長(zhǎng)品質(zhì),是植物生長(zhǎng)的一項(xiàng)重要指標(biāo)[3]。目前對(duì)葉綠素含量的測(cè)定方法主要有SPAD直接測(cè)定法和傳統(tǒng)的丙酮浸提法,后者測(cè)定結(jié)果較精確,但測(cè)定時(shí)會(huì)損壞葉片,且操作復(fù)雜、耗時(shí)費(fèi)力。而前者則可以在不破壞葉片完整性的情況下,快速準(zhǔn)確地測(cè)定出植株葉綠素含量的相對(duì)值[4],且不受外部環(huán)境的影響,因而此法逐漸被學(xué)者采用,已在荔枝、柞樹(shù)、煙草、蕹菜和江孜沙棘等[5-9]植物中廣泛應(yīng)用。何麗斯等以高山杜鵑為試驗(yàn)材料,發(fā)現(xiàn)葉片內(nèi)SPAD值與葉綠素含量間存在顯著相關(guān)性,可以用SPAD值間接預(yù)測(cè)植株葉片的葉綠素含量,但大量數(shù)據(jù)顯示,不同植株或是同一植株的不同部位,其擬合的數(shù)學(xué)模型仍存在著很大的差異性[10]。目前,關(guān)于滇重樓葉片內(nèi)SPAD值與葉綠素含量之間的關(guān)系尚未見(jiàn)報(bào)道,故本試驗(yàn)以不同生長(zhǎng)年限的滇重樓葉片和花萼為供試材料,探究其SPAD值與葉綠素含量之間的相關(guān)性,旨在為生產(chǎn)中利用SPAD葉綠素儀估測(cè)滇重樓葉片營(yíng)養(yǎng)狀況提供參考依據(jù)。

    1 ?材料與方法

    1.1 ?供試材料

    新鮮的滇重樓葉片采自于貴州省安順市西秀區(qū)安順學(xué)院科研實(shí)驗(yàn)基地,經(jīng)安順學(xué)院沈昱翔副教授鑒定為滇重樓。試驗(yàn)于2021年9月15日10: 00—12: 00進(jìn)行采樣,隨機(jī)選取不同生長(zhǎng)年限的植株各10株,每個(gè)植株摘取1片長(zhǎng)勢(shì)較好、無(wú)病蟲(chóng)害的葉片和花萼,先用SPAD葉綠素儀測(cè)量3次,并記錄數(shù)據(jù);再將其摘下,做好標(biāo)記,閉光、低溫保存,采用丙酮法測(cè)定其葉綠素含量。

    1.2 ?測(cè)定方法

    1.2.1 ?SPAD直接測(cè)定法

    采用葉綠素含量測(cè)定儀(CCM200型)測(cè)定葉片和花萼的頂部、中部、底部的SPAD值,測(cè)定時(shí)應(yīng)注意避開(kāi)葉片的損傷部位,以保證結(jié)果的準(zhǔn)確性,求取平均值。

    1.2.2 ?丙酮法測(cè)定

    將上述測(cè)定的新鮮葉片和花萼表面擦凈,將其摘下并做好標(biāo)記,低溫避光保存,除去葉中脈后剪碎。稱取0.1 g供試樣品放入研缽中,80%丙酮研磨成勻漿,離心機(jī)4 000 r·min-1離心15 min,將上清液用80%丙酮定容至20 mL待測(cè)。以80%丙酮為對(duì)照,采用紫外分光光度計(jì)測(cè)定波長(zhǎng)645、663 nm處的OD值,代入公式計(jì)算其葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量[11-14]:

    Ca=(12.72D663-2.59D645)v/(W×1 000) (1)

    Cb=(22.88D645-4.68D645)v/(W×1 000) (2)

    Ct=(8.02D663+20.29D645)v/(W×1 000) (3)

    式中,Ca、Cb、Ct代表葉綠素a、葉綠素b、總?cè)~綠素含量,mg·g-1;D663和D645代表對(duì)應(yīng)波長(zhǎng)下的吸光度值;v代表定容體積,mL;W代表稱樣重量,g。

    1.3 ?數(shù)據(jù)處理

    采用Microsoft Excel 2010、SPSS 22.0軟件處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)。

    2 ?結(jié)果與分析

    2.1 ?滇重樓葉片、花萼的SPAD值和葉綠素含量比較

    比較不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片、花萼的SPAD值和葉綠素含量,結(jié)果見(jiàn)圖1、圖2。由圖1可知,隨著種植年限的增加,滇重樓葉片SPAD值和葉綠素含量的變化趨勢(shì)幾乎不同,其中SPAD值表現(xiàn)為先增加后減少,而葉綠素a和總?cè)~綠素含量表現(xiàn)為先增加后減少再增加,葉綠素b含量則表現(xiàn)為先減少后增加,其中,2年生的葉綠素b含量最高,4年生的SPAD值、葉綠素a和總?cè)~綠素含量最高。由圖2可以看出,隨著種植年限的增加,滇重樓花萼的SPAD值與葉綠素含量都表現(xiàn)為先降低后增加,其中4年生的SPAD值、葉綠素b和總?cè)~綠素含量最高,7年生的葉綠素a含量最高。通過(guò)比較兩圖可以看出,葉片SPAD值和葉綠素含量均顯著高于花萼。

    2.2 ?滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素a含量的相關(guān)性分析

    由表1得知,不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素a含量之間表現(xiàn)出極顯著相關(guān)性,所有函數(shù)模型的相關(guān)性均達(dá)0.4以上,其中以5年生(葉片)的函數(shù)相關(guān)性最大,相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.958 4。根據(jù)相關(guān)系數(shù)大小,確定適用于二年生(葉片)、四年生(花萼)、四年生(葉片)、五年生(花萼)、五年生(葉片)、七年生(花萼 )、七年生(葉片)的最優(yōu)函數(shù)方程分別為對(duì)數(shù)方程y=0.351 7ln(x)- 0.897 8(R?=0.713 2)、指數(shù)方程y=0.228 0e0.024 9x(R?=0.539 1)、對(duì)數(shù)方程y=0.294 4ln(x)- 0.644 1(R?=0.925 7)、指數(shù)方程y=0.163 2e0.036 5x(R?=0.879 3)、指數(shù)方程y=0.194 6e0.015 1x(R?=0.958 4)、線性方程y=0.013 4x+0.127 8(R?=0.607 4)、指數(shù)方程y=0.082 8e0.047 6x(R?=0.836 4)。

    2.3 ?滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素b含量的相關(guān)性分析

    由表2可知,不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素b含量之間呈極顯著相關(guān),總體相關(guān)性均在0.5以上,其中5年生滇重樓葉片的SPAD值與葉綠素b含量的相關(guān)性最大,相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.978 5。根據(jù)相關(guān)系數(shù)大小,確定適用于二年生(葉片)、四年生(花萼)、四年生(葉片)、五年生(花萼)、五年生(葉片)、七年生(花萼 )、七年生(葉片)的最優(yōu)函數(shù)方程分別為對(duì)數(shù)方程y=1.178 1ln(x)- 0.498 6(R?=0.875 0)、指數(shù)方程y=1.895 0e0.023 0x(R?=0.806 1)、對(duì)數(shù)方程y=2.231 6ln(x)-4.625 0(R?=0.965 5)、線性方程y=0.059 0x+1.426 1(R?=0.916 8)、對(duì)數(shù)方程y=1.590 4ln(x)-2.838 5(R?=0.978 5)、對(duì)數(shù)方程y=2.860 0 ln(x)-5.680 0(R?=0.677 3)、線性方程y=0.131 6x-0.705 2(R?=0.893 5)。

    2.4 ?滇重樓葉片、花萼的SPAD值與總?cè)~綠素含量的相關(guān)性分析

    采用4種函數(shù)對(duì)SPAD 值(x)和總?cè)~綠素含量(y)的關(guān)系進(jìn)行擬合,結(jié)果見(jiàn)表3。由表得知,不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片、花萼的SPAD值與總?cè)~綠素含量之間呈極顯著相關(guān)性,總體相關(guān)性均在0.6以上,其中5年生滇重樓葉片SPAD值與總?cè)~綠素含量的相關(guān)性最大,相關(guān)系數(shù)高達(dá)0.978 8。根據(jù)相關(guān)系數(shù)大小,確定適用于二年生(葉片)、四年生(花萼)、四年生(葉片)、五年生(花萼)、五年生(葉片)、七年生(花萼 )、七年生(葉片)的最優(yōu)函數(shù)方程分別為對(duì)數(shù)方程y=1.529 1ln(x)-1.394 9(R?=0.871 6)、指數(shù)方程y=2.124 7e0.023 2x(R?=0.839 6)、對(duì)數(shù)方程y=2.525 0ln(x)-5.267 2(R?=0.968 5)、線性方程y=0.068 8x+1.564 7(R?=0.920 7)、乘冪方程y=0.442 7x0.548 2(R?=0.978 8)、對(duì)數(shù)方程y=2.941 1ln(x)-5.503 8(R?=0.731 1)、線性方程y=0.150 7-0.922 4(R?=0.905 2)。分析比較表3、表4和表5可以得出,不同生長(zhǎng)年限的滇重樓葉片、花萼的SPAD值與葉綠素含量的相關(guān)性大小總體都表現(xiàn)為:總?cè)~綠素>葉綠素b>葉綠素a,且最大相關(guān)性均為5年生滇重樓的葉片。

    2.5 ?滇重樓葉片SPAD值、葉綠素含量的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值比較

    滇重樓葉片SPAD值和葉綠素含量測(cè)定結(jié)果如表4所示,2年生葉片SPAD值變化范圍為18.433~67.433,葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.121~0.563 mg·g-1、2.969~4.372 mg·g-1和3.089~4.933 mg·g-1;4年生葉片SPAD值變化范圍為28.533~73.233,葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.324~0.630 mg·g-1、2.588~4.812 mg·g-1和2.910~5.440 mg·g-1;5年生葉片SPAD值變化范圍為22.967~65.233,葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.275~0.529 mg·g-1、2.201~3.763 mg·g-1和2.475~4.291 mg·g-1;7年生葉片SPAD值變化范圍為23.133~41.600,葉綠素a、b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.240~0.635 mg·g-1、2.511~4.969 mg·g-1和2.750~5.602 mg·g-1。

    將測(cè)得的不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片的SPAD值代入線性回歸方程中,計(jì)算葉綠素的預(yù)測(cè)值,再對(duì)實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。由表5可知,p值均大于0.05,這說(shuō)明不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片的葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值間差異不顯著,因此可采用線性回歸方程來(lái)預(yù)測(cè)滇重樓葉片葉綠素含量的絕對(duì)值。

    2.6 ?滇重樓花萼葉綠素含量的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值比較

    由表6可知,4年生滇重樓花萼SPAD值變化范圍為10.067~20.267,葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量變化范圍為0.288~0.552 mg·g-1、2.482~4.032 mg·g-1和2.770~4.533 mg·g-1;5年生滇重樓花萼SPAD值變化范圍為4.533~20.567,葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.202~0.366 mg·g-1、1.800~2.622 mg·g-1和2.001~2.979 mg·g-1;7年生滇重樓花萼SPAD值變化范圍為11.933~25.533,葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量的變化范圍為0.260~0.689 mg·g-1、0.771~3.726 mg·g-1和1.196~4.217 mg·g-1。

    將測(cè)得的不同生長(zhǎng)年限花萼的SPAD值代入線性回歸方程中,計(jì)算得出葉綠素的預(yù)測(cè)值,再對(duì)實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)。由表7可知,p值均大于0.05,這說(shuō)明不同生長(zhǎng)年限滇重樓花萼的葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值之間的差異不顯著,因此可采用線性回歸方程來(lái)預(yù)測(cè)滇重樓花萼葉綠素含量的絕對(duì)值。

    由表4和表6可以看出,不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片、花萼的SPAD值和葉綠素含量都各不相同,但葉綠素a、葉綠素b和總?cè)~綠素含量大體上都是隨著SPAD值的變化而變化,即SPAD值與葉綠素含量的變化趨勢(shì)保持一致。

    3 ?小結(jié)與討論

    SPAD葉綠素儀是通過(guò)測(cè)定綠葉在630、690 nm兩段波長(zhǎng)處的吸光率來(lái)評(píng)估綠葉中葉綠素相對(duì)含量的一種手段[15],在這兩段波長(zhǎng)下葉綠素對(duì)光的吸收不同,因此可以對(duì)葉片傳輸光的數(shù)量進(jìn)行計(jì)算,由此得出SPAD值。采用SPAD葉綠素儀對(duì)植株葉片的葉綠素含量進(jìn)行估測(cè),不僅可以省時(shí)省力,測(cè)定還不受溫度和氣候等外部環(huán)境因素的影響,在測(cè)定過(guò)程中也不會(huì)對(duì)葉片造成損傷[16]。因此,現(xiàn)如今許多科研工作者都開(kāi)始采用這種簡(jiǎn)單的測(cè)量方法來(lái)取代傳統(tǒng)的紫外分光光度計(jì)測(cè)量法,也收獲了不少成果,但用此法對(duì)滇重樓的研究還未見(jiàn)報(bào)道[17-18]。

    本研究通過(guò)計(jì)算滇重樓葉片、花萼葉綠素的相對(duì)含量和絕對(duì)含量,發(fā)現(xiàn)不同生長(zhǎng)年限滇重樓葉片和花萼的葉綠素含量各不相同,總體來(lái)看,葉片的葉綠素含量普遍高于花萼,這與高成杰等[19]的研究結(jié)果類似。但4年生的滇重樓,不管是葉片還是花萼,葉綠素含量均高于其他年生,可能是因?yàn)槭艿綒夂?、土壤、微環(huán)境及生長(zhǎng)年限等條件的影響[19-21],可能4年生滇重樓植株是一個(gè)轉(zhuǎn)折點(diǎn),有待進(jìn)一步從光合特性、生理生化等方面深入研究其機(jī)制。通過(guò)線性、指數(shù)、對(duì)數(shù)和乘冪四個(gè)回歸方程[22-24]對(duì)葉片、花萼的SPAD值和葉綠素含量進(jìn)行擬合,發(fā)現(xiàn)上述4種函數(shù)方程的擬合變量因子均達(dá)到極顯著相關(guān)性,這說(shuō)明SPAD值與葉綠素含量間呈極顯著正相關(guān),這與對(duì)甘藍(lán)、油菜、甜瓜、紅楓等[21,25-26]的研究結(jié)果一致。通過(guò)對(duì)滇重樓葉片、花萼的實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行方差檢驗(yàn),發(fā)現(xiàn)實(shí)測(cè)值與預(yù)測(cè)值間差異不顯著,這與潘靜[27]和李田等[28]的研究結(jié)果一致,表明無(wú)論是滇重樓的葉片還是花萼均可采用SPAD值表示葉綠素含量,并且通過(guò)相應(yīng)的回歸方程,可以求出葉綠素含量的絕對(duì)值。

    本研究表明,可以采用SPAD葉綠素儀代替復(fù)雜繁瑣的傳統(tǒng)手段來(lái)測(cè)定滇重樓葉片和花萼的葉綠素含量,這為滇重樓葉綠素含量測(cè)定提供了便捷的手段,也為滇重樓的高效種植模式和田間栽培管理提供理論依據(jù)。

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    (責(zé)任編輯:易 ?婧)

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