血小板活化因子在結直腸癌中的表達及臨床意義*

閆淑貞,王占龍,吳文春,黃燕東,封 凱

(1.內蒙古科技大學包頭醫(yī)學院研究生院,內蒙古 包頭 014040;2.內蒙古科技大學包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院腫瘤中心;3.內蒙古科技大學包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院普外科)

據統(tǒng)計顯示[1],結直腸癌(colorectal cancer, CRC)的發(fā)病率已躍居全球第三位:2018年,全球CRC新發(fā)病例數約180萬,CRC死亡病例數88萬[2];中國CRC新發(fā)病例數為38.76萬,死亡病例數為18.71萬,發(fā)病年齡、死亡年齡趨于年輕化[3]。CRC發(fā)病隱匿,臨床癥狀不典型,多數患者在發(fā)現(xiàn)時即為中晚期。但其癌變是不斷累積發(fā)生的,過程長達數十載,這一特性也使其成為最可預防的癌癥[4-5]?；诖?許多學者致力于癌癥早期篩查的研究,以期提高CRC檢出率,達到早診早治的目的。現(xiàn)如今,早期CRC篩查方法眾多,但均具有局限性[4]。血清腫瘤標志物的篩查在CRC的早期診斷中發(fā)揮一定價值,臨床上最常用的腫瘤標志物有CEA、CA-199、CA-724等,但其靈敏性和特異度均較低。因此,尋找一種可靠、經濟、便捷的早期CRC篩查方法對臨床工作的突破具有重要意義。

血小板活化因子(platelet-activating-factor,PAF)是一種強效的內源性脂質介質,在炎癥中發(fā)揮關鍵作用,引發(fā)各種免疫疾病。據報道,PAF及其受體在乳腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌、肝癌中表達增強,參與腫瘤發(fā)生、發(fā)展[6]。但對于PAF在CRC中表達及作用,國內外研究尚不清楚。本文旨在研究PAF、CEA、CA-724在CRC中的表達情況,及PAF與CEA、CA-724的相關性,為CRC患者的診斷提供參考依據。

1 對象與方法

1.1研究對象 隨機選取2019年12月-2021年10月于包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院經病理診斷為CRC的患者75例,其中男性40例,女性35例,年齡41～87歲,平均年齡(64.60±3.90)歲。根據美國腫瘤聯(lián)合會(american joint committee on cancer,AJCC)TNM分期系統(tǒng)行臨床分期:Ⅰ期(T1～2 N0 M0)14例,Ⅱ期(T3～4 N0 M0)19例,Ⅲ期(TX N1～2 M0)36例,Ⅳ期(TX NX M1)6例。隨機選取我院同時期健康體檢者75例作為對照組,均經系統(tǒng)檢查,排除惡性腫瘤及其他基礎疾病。其中男性41例,女性34例,年齡44～76歲,平均年齡(62.15±2.33)歲。兩組性別和年齡比較差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),具有可比性。

納入標準:(1)經病理證實為腺癌;(2)既往無手術、放療、化療史;(3)病歷資料齊全,術前均行血清腫瘤標志物CEA、CA-724檢測。排除標準:(1)其他惡性腫瘤病史及繼發(fā)腫瘤;(2)心血管、肝、腎、血液、結締組織、內分泌等疾病;(3)術前行其他任何治療。

本研究患者及家屬均簽署知情同意書,獲內蒙古科技大學包頭醫(yī)學院第一附屬醫(yī)院醫(yī)學倫理委員會批準。

1.2研究方法 采集CRC患者術前、術后1個月及對照組晨空腹外周靜脈血各2 mL,放入一次性無熱源、無內毒素的試管中,1 000 r/min離心10 min,取上清液,于-80 ℃冰箱中凍存?zhèn)溆?。采用酶?lián)免疫吸附(enzyme-linked immuno sorbent assay,ELISA)法檢測血清PAF的含量,ELISA試劑盒購自武漢新啟迪生物科技有限公司,嚴格按照試劑盒說明書進行操作。實驗結果以酶標儀讀數為準,使用雙波長檢測(450 nm、630 nm)?；仡櫺苑治鯟RC組及對照組的一般臨床資料、術前血清腫瘤標志物(CEA、CA-724)含量,進行數據的統(tǒng)計分析。

2 結果

2.1CRC組和對照組血清PAF、CEA、CA-724含量比較 CRC患者術前血清PAF、CEA、CA-724含量均高于對照組,組間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見表1。

表1 兩組血清PAF、CEA、CA-724含量比較

2.2CRC患者TNM分期及對照組間PAF、CEA、CA-724含量比較 不同分期的CRC患者PAF含量均高于對照組,其中Ⅰ期、Ⅱ期含量顯著升高,Ⅲ期、Ⅳ期含量較Ⅰ期、Ⅱ期有所下降,Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期與對照組、Ⅳ期之間均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),Ⅳ期與對照組之間無顯著差異(P>0.05);CEA、CA-724含量分別隨著TNM分期的增加而逐漸升高,Ⅰ期與Ⅱ期之間差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05),其余各組兩兩之間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。見圖1、表2。

圖1 CRC組TNM分期及對照組間PAF、CEA、CA-724含量比較

表2 CRC患者TNM分期及對照組間PAF、CEA、CA-724比較結果

2.3血清PAF與CEA、CA-724的關系 根據Spearman相關系數分析結果顯示:PAF水平與CEA水平呈負相關(r=-0.286,P=0.013),與CA-724水平呈負相關(r=-0.300,P=0.009)。見表3。

表3 血清PAF與CEA、CA-724的關系

2.4CRC組術前、術后血清PAF測定結果比較 通過檢測75例CRC患者術前、術后PAF表達水平發(fā)現(xiàn):CRC患者術后的PAF水平(99.93±16.45)低于術前(143.23±44.76),組間差異具有統(tǒng)計學意義(t=7.805,P<0.001)。見表4。

表4 CRC患者術前、術后PAF水平比較

3 討論

CRC的發(fā)病機制復雜,是多種因素共同作用于機體的結果,如遺傳、社會環(huán)境、生活方式等。我國CRC發(fā)病特點為:城市高于農村,東部城市高于中西部地區(qū)[7]。我國的癌癥發(fā)病譜在發(fā)達國家與發(fā)展中國家間共存,但生存率卻遠低于發(fā)達國家,預防和診治的難度巨大[8]。

PAF是一種強效促炎因子,其化學結構是甘油醚脂質(1-O-烷基-2-乙酰基-sn-甘油-3-磷酸膽堿)[9],可由機體內多種參與宿主防御的細胞和器官產生[10],其生成過程依賴于磷脂酶A2(PLA2)產生PAF前體(Lyso-PAF),Lyso化合物再通過乙?；蒔AF分子。PAF通過與靶細胞膜上的PAF受體(platelet-activating factor receptor,PAF-R)結合而發(fā)揮作用,激活下游通路,產生炎癥等反應。PAF經血小板活化因子乙酰水解酶(platelet activating factor acetylhydrolase,PAF-AH)去?；笱杆偈Щ頪11],抑制其生物學效應。

根據其生物學特點可知,PAF含量與PAFR、PLA2及PAF-AH的表達水平相關。韓西等[4]研究中表明PAFR在非小細胞肺癌、乳腺癌、CRC和胃癌中都過度表達。Xu等[12]研究闡述了缺失PLA2的小鼠腸息肉病和結腸腫瘤的發(fā)生率下降。Denizot Y等[13]研究證實PAF在CRC組織中含量高于癌旁組織,且PAF受體的mRNA表達增強。同時,PAF可增強內皮細胞的運動、增加腫瘤細胞與血管內皮細胞的黏附性,刺激新生血管的生成[6,13],還可刺激人類腫瘤細胞系的生長,增強癌基因的表達。這些研究均為PAF可能在癌癥中發(fā)揮作用這一論點提供依據。

本實驗通過ELISA法檢測CRC患者血清PAF含量,推測PAF及CEA、CA-724的含量變化在CRC中的診斷價值。結果顯示:CRC患者術前血清PAF含量顯著高于對照組,兩組之間差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),由此推測PAF可能由炎癥細胞或腫瘤細胞產生并釋放,進入血液循環(huán)系統(tǒng),使血清PAF水平升高,從而增強癌細胞的侵襲力、增殖力及新生血管的形成,加速癌癥的發(fā)展進程。不同分期的CRC患者PAF含量均高于對照組,其中Ⅰ期、Ⅱ期含量顯著升高,Ⅲ期、Ⅳ期含量較Ⅰ期、Ⅱ期有所下降,推測這一現(xiàn)象可能是由于腫瘤的持續(xù)增長,機體啟動自我防御機制,PAF-AH合成和釋放增多,使PAF滅活增加,可能為CRC的分期診斷提供依據。CRC患者術后PAF含量顯著低于術前,兩組間的差異具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),說明手術降低了PAF含量,手術切除腫瘤可能影響血清PAF水平,提示其可作為評價手術療效及監(jiān)測術后復發(fā)的指標。

作為血清生物標志物,對于PAF在CRC中表達的研究非常罕見,而CEA、CA-724作為臨床上常見的腫瘤標志物,主要通過刺激腫瘤細胞和機體分泌產生。CEA是一種多糖蛋白復合物,存在于癌細胞表面的結構蛋白,可在多種腫瘤中高表達[14],如胃癌、結直腸癌、乳腺癌、肝癌、胰腺癌等;CA-724是一種高分子量糖蛋白,是各種消化道癌癥的化驗指標之一[15],發(fā)揮較大的作用,特異性相對較高。CEA、CA-724研究相對成熟,但檢出陽性率不高[16],且不同患者的血清標志物表達水平因臨床病理特征不同而產生個體差異。本研究結果顯示:CRC組中CEA、CA-724的含量均顯著高于對照組,除Ⅰ期與Ⅱ期外,不同TNM分期兩兩之間差異均具有統(tǒng)計學意義(P<0.05),且隨TNM分期的增加而升高,該結果與文獻報道一致。PAF、CEA、CA-724含量升高可提示CRC發(fā)生的可能性,但均為非特異性,無法準確判別是否為CRC來源。通過Spearman相關系數分析三者之間的相關性,結果顯示:PAF表達水平與CEA、CA-724表達水平呈不同程度的負相關(P<0.05),提示PAF的表達水平可能影響CEA、CA-724的含量變化,也可能通過CEA、CA-724的表達水平來預測CRC患者的PAF表達趨勢,三者之間存在密切關聯(lián),可能成為輔助臨床診斷的方法。

綜上所述,PAF與CRC的發(fā)生、發(fā)展具有相關性,有望成為一種新的血清標志物,用于癌癥早期篩查。且方法簡單、經濟,接受度高,便于全面推廣。該研究從蛋白層面進行闡述,但樣本量較少,需進一步驗證。