中草藥對育肥豬鏈球菌病的預(yù)防及其生長性能、免疫指標(biāo)的影響

賀 馭，王 陽，黨 萌，羅卉卉，吳小萍

(陜西省商洛市動物疫病預(yù)防控制中心，陜西商洛 726000）

在非洲豬瘟疫情常態(tài)化背景下，在生豬養(yǎng)殖中疫病防控為重中之重。在生豬的疫病中，豬鏈球菌病是疫病防控工作重要的內(nèi)容之一，是生豬養(yǎng)殖領(lǐng)域發(fā)生率相對較高的細(xì)菌性傳染病，該病致病性強(qiáng)、致死率高。近年來飼料行業(yè)規(guī)范管理，飼料添加抗生素被全面禁用，該病的發(fā)生率逐漸增加。中草藥具有來源廣泛，價(jià)格便宜，毒副作用小、不易產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)，逐漸被用于畜禽疾病的防治[1]。本試驗(yàn)旨在研究中草藥對育肥豬鏈球菌病的預(yù)防及生長性能、免疫指標(biāo)的影響。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

1.1.1 菌株

豬鏈球菌血清型2 型，在本地養(yǎng)殖場采集分離。

1.1.2 中藥材料

金線重樓，野菊花，白頭翁，紫花地丁，忍冬藤，黃連，甘草，金銀花，梔子，郁金，白芍，黃芩，黃柏，蒲公英，柯子，白毛夏枯草，七葉一枝花。以上中藥均購自怡康藥店。

1.1.3 試驗(yàn)動物

育肥豬由本地豬場提供，本試驗(yàn)于2021 年9—11 月在商洛興旺豬場完成。選取140 日齡、體重86kg、健康的育肥豬80 頭。每組20 頭，共分4 組。其中A 組使用方劑一(金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g），B 組使用方劑二(黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g），C 組使用方劑三(忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g），D 組為空白對照組。

1.1.4 基礎(chǔ)日糧

基礎(chǔ)日糧配方見表1，復(fù)合預(yù)混料購自新鄉(xiāng)市酵守康飼料有限公司。

表1 基礎(chǔ)日糧配方

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 方劑與藥液煎煮制備

方劑一：金線重樓16g、野菊花65g、白頭翁65g、紫花地丁35g、忍冬藤65g。

方劑二：黃連50g，甘草20g、金銀花15g、梔子20g、郁金30g、白芍30g、黃芩30g、黃柏30g、蒲公英15g、柯子40g。

方劑三：忍冬藤65g、白毛夏枯草60g、黃芩30g、野菊花65g、七葉一枝花20g、金銀花15g、紫花地丁35g。

加入藥物重量10 倍量的潔凈水，浸泡后煎煮，煮沸后文火煎30min，用四層紗布過濾藥液，藥渣加入8 倍量藥重的水，煮沸后文火煎30min，過濾藥液，每副合并2 次藥液置于4℃冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 飼養(yǎng)及給藥

百年大計(jì)，教育為本。如果說要“打開視野看效率”，那么文化教育事業(yè)更需如此，教育所產(chǎn)生的效果往往不能在短時(shí)間內(nèi)呈現(xiàn)，而需要長時(shí)間的積累和沉淀。

對育肥豬進(jìn)行正常的飼養(yǎng)管理，飼料和飼喂方式均不改變。在各中藥試驗(yàn)組的飼料中按每頭一服藥量拌入飼料中飼喂，每天早晚各1 次。在試驗(yàn)第7 天通過口服豬鏈球菌血清型2 型2.13×107CFU/g 攻毒。試驗(yàn)40d。

1.2.3 測定指標(biāo)和方法

第8 天開始臨床觀察試驗(yàn)動物，主要觀察精神、食欲和排便情況；記錄發(fā)病率、死亡率。

1.2.3.1 生長性能

飼喂試驗(yàn)開始與結(jié)束前，分別記錄試驗(yàn)豬的初重和末重，試驗(yàn)育肥豬空腹12h，稱重，試驗(yàn)結(jié)束后統(tǒng)計(jì)各組試驗(yàn)育肥豬的總采食量，計(jì)算豬平均日采食量、平均日增重及料重比。

平均日增重=總增重/(試驗(yàn)天數(shù)× 試驗(yàn)豬頭數(shù))

料重比=平均日采食量/平均日增重

1.2.3.2 血清細(xì)胞因子

在前腔靜脈進(jìn)行采血，置于干凈的離心管中等待血清的析出，在低溫離心機(jī)中以3000r/min，離心15min，取上清液分裝，及時(shí)測定血清指標(biāo)。使用ELISA 方法檢測血清腫瘤壞死因子-α (tumor necrosis factor-α，TNF-α）、白細(xì) 胞介素-1(interleukin-1，IL-1）、白 細(xì)胞介素-10 (interleukin-10，IL-10）、干擾素-α (interferon-α，IFN-α）含量。所用試劑盒購自南京建成生物工程研究所，具體操作參考說明書。

1.2.4 生物試驗(yàn)

取病死豬淋巴、肝臟、脾臟、關(guān)節(jié)液，加生理鹽水研磨過濾。過濾液接種(20±2)g 健康小白鼠，12～72h 后觀察其病理反應(yīng)。觀察感染后分離出的細(xì)菌，及LD50。

1.2.5 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)

應(yīng)用SPSS 19.0 軟件對各組的發(fā)病率和病死率進(jìn)行顯著性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細(xì)胞因子的影響

由表2 可以看出中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細(xì)胞因子的影響。與D 組相比，A 組、B 組、C 組育肥豬的平均日增重顯著升高(p＜0.05），B 組、C 組育肥豬的平均日采食量顯著升高(p＜0.05），A 組、B 組育肥豬的料重比顯著降低 (p＜0.05）。與D 組相比，A 組、B 組、C 組的發(fā)病數(shù)、病死數(shù)均少于D 組；B 組、C 組發(fā)病率顯著低于D 組 (p＜0.05）A 組和B 組間發(fā)病率差異不顯著 (p＞0.05）；B 組、C 組和A 組病死率顯著低于D 組(p＜0.05）。由表4 可知，與D 組相比，豬血清中TNF-α 含量A 組、B 組、C 組均顯著降低(p＜0.05）。IL-10 含量A 組、B 組、C 組均顯著高于D 組(p＜0.05）；IL-1 和IFN-α 含量各組間差異不顯著(p＞0.05）。

表2 中草藥對育肥豬生長性能、豬鏈球菌病預(yù)防效果和血清細(xì)胞因子的影響

2.2 病理剖檢結(jié)果

病死豬可見四肢內(nèi)側(cè)皮膚發(fā)紅和充血，對病死豬進(jìn)行剖檢，可見淋巴結(jié)腫大和充血。腹腔漿膜可見大量黃色漿液。部分關(guān)節(jié)囊膜有出血癥狀。

2.3 生物試驗(yàn)結(jié)果

12～72h 后接種小白鼠均死亡，從死亡白鼠體內(nèi)分離細(xì)菌，在顯微鏡下呈卵圓形、無鞭毛、鏈狀排列。

3 討論

根據(jù)中獸醫(yī)辨證論治原則，豬鏈球菌病屬于“熱毒熾盛”，所以本次試驗(yàn)選取的都是清熱解毒類中藥，金線重樓消腫止痛、金銀花疏散風(fēng)熱、白頭翁清熱解毒、黃柏解毒療瘡、忍冬藤疏風(fēng)通絡(luò)、紫花地丁涼血消腫、野菊花消腫解毒、蒲公英消腫散瘀、梔子涼血解毒、白芍解熱鎮(zhèn)靜、郁金疏肝解郁、黃芩瀉火解毒、黃連清熱瀉火等。

3.1 中草藥對生長性能的影響

劉仲昊等[2]在育肥豬日糧中分別添加金銀花粗提物、葛根粗提物和混合粗提物(金銀花粗提物+葛根粗提物），與對照組相比，各試驗(yàn)組育肥豬的平均日采食量和平均日增重均有提高趨勢，其中混合提取物組顯著提高。申學(xué)林等[3]研究育肥豬肉質(zhì)時(shí)發(fā)現(xiàn)復(fù)方中草藥能夠改善豬肉的瘦肉質(zhì)。陳曉明等[4]試驗(yàn)表明，將一定量中草藥渣添加至斷奶仔豬日糧中進(jìn)行飼喂，日增重指標(biāo)有明顯的提升，料重比呈下降趨勢，其中腹瀉率的下降尤為明顯。和紹禹等[5]挑選三元雜交生長豬做試驗(yàn)，飼喂試驗(yàn)結(jié)果表明，添加了中草藥添加劑的試驗(yàn)組，育肥豬的生長速度加快，采食量及日增重明顯提升，飼料利用率得到明顯改善，料重比和病豬數(shù)明顯降低。戴玲等[6]用大蒜、黃芪、構(gòu)樹葉等六味中草藥配制成中草藥飼料添加劑對育肥豬生產(chǎn)性能和肉品質(zhì)的影響，結(jié)果表明，在平均日增重和飼料利用率均顯著高于空白組，氨基酸和脂肪酸的含量均顯著高于空白組。谷新利等[7]用黃茅、白術(shù)、熟地黃等中草藥添加劑飼喂育肥羔羊，羔羊的日增重、飼料利用率顯著提高。本試驗(yàn)中與D 組相比，A 組、B 組、C組的平均日增重顯著升高，B 組、C 組的平均日采食量顯著升高，A 組、B 組的料重比顯著降低，可能是中草藥增強(qiáng)豬對鏈球菌病的抵抗能力，食欲較好。

3.2 中草藥對豬鏈球菌病的預(yù)防

馮沙沙等[8]人用黃連、大黃、黃柏、黃芩、連翹、石榴皮、丹參、訶子、烏梅等中藥對豬鏈球菌做了體外抑菌試驗(yàn)，均有不同程度的抑菌作用。劉啟志等[9]使用板藍(lán)根、金銀花、黃連、蒲公英、馬齒莧、野菊花、連翹七味中藥對豬鏈球菌病進(jìn)行預(yù)防試驗(yàn)，在臨床上對豬鏈球菌病有很好的預(yù)防作用，并且效果優(yōu)于西藥。潘任桃等[10]將茶皂素與4 種抗菌藥物聯(lián)用，測定其對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的抑菌效果。郭洋[11]認(rèn)為豬鏈球菌病綜合征型為“熱入營血，毒陷心包，擾動肝風(fēng)證”，治療原則為 “清熱涼血，平肝熄風(fēng)”，使用方劑鉤藤犀角地黃湯進(jìn)行治療，結(jié)果療效較好。本試驗(yàn)中，A 組、B 組、C 組的發(fā)病數(shù)、病死數(shù)均少于D 組空白對照；發(fā)病率B 組、C 組為20%，A 組為30%，D 組為40%，B 組、C 組和D 組顯著降低；病死率B 組、C 組為0，A 組為33.33%，D 組為62.5%，病死率顯著降低，D 組與其他三組差異極顯著。A 組的發(fā)病率高于B 組、C 組，可能由于A 組使用的中藥種類少于其他兩組。

3.3 中草藥對血清細(xì)胞因子的影響

汪德剛等[12]認(rèn)為中草藥富含多種有效活性成分，如多糖、苷類、揮發(fā)油生物堿等物質(zhì)，這些成分能夠提高機(jī)體免疫和體液免疫。蔡進(jìn)[13]研究發(fā)現(xiàn)在日糧中添加黃芪多糖、益母草粉、甘草粉、山藥粉能顯著提高斷奶前仔豬免疫力。謝紅兵等[14]研究表明，中草藥飼料添加劑能明顯提高豬只機(jī)體內(nèi)豬瘟血清抗體、胰島素和甲狀腺素T4水平，對仔豬的免疫能力也有明顯的增強(qiáng)。杜改梅等[15]試驗(yàn)結(jié)果同樣表明，中草藥飼料添加劑能夠增強(qiáng)豬的體液免疫能力。張林麗等[16]研究表明，細(xì)胞因子是機(jī)體內(nèi)部分子量小而生物學(xué)活性較高的一類物質(zhì)，主要由免疫細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、表皮細(xì)胞等多類細(xì)胞經(jīng)過刺激而生成，主要參與炎癥、細(xì)胞增殖與凋亡及免疫應(yīng)答等。本試驗(yàn)中與D 組相比，豬血清中TNF-α 含量A 組、B 組、C 組均顯著降低，IL-10 含量A 組、B 組、C 組均顯著增加；IL-1 和IFN-α 含量4 組差異不顯著。本試驗(yàn)中藥成分可能通過阻斷ERK、MAPKs 等蛋白磷酸化途徑，從而抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的激活，下調(diào)COX-2、iNOS 等蛋白的表達(dá)量，進(jìn)而抑制巨噬細(xì)胞合成TNF-α 等炎性因子。本研究結(jié)果表明中藥可抑制TNF-α 合成，促進(jìn)抗炎因子IL-10 合成。中藥抗菌機(jī)理還需進(jìn)一步的研究，并不是所有清熱解毒類中藥在體內(nèi)都有抗菌作用[17]。

4 結(jié)論

本試驗(yàn)結(jié)果表明，金線重樓、野菊花、白頭翁、紫花地丁、忍冬藤；黃連、甘草、金銀花、梔子、郁金、白芍、黃芩、黃柏、蒲公英、柯子；忍冬藤、白毛夏枯草、野菊花、黃柏、七葉一枝花、金銀花、紫花地丁三副中藥合劑在獸醫(yī)臨床上可以顯著提高患有鏈球菌病育肥豬的生長性能，降低血清炎性細(xì)胞因子含量，提高抗炎因子含量，對育肥豬鏈球菌病有較好的預(yù)防作用。