小鼠短散布核元件B1反義RNA的藥代動(dòng)力學(xué)分析

吳沛園，王曉蝶，劉鑫，武崇光，吉寧，王秀芳，呂占軍

河北醫(yī)科大學(xué)河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室遺傳研究室，河北 石家莊 050017

短散布核元件（short interspersed nuclear elements，SINEs）在哺乳動(dòng)物基因組中廣泛存在，占人類基因組的13%，嚙齒類基因組的8%［1］。人類基因組中主要的SINE 是Alu 元件，而B(niǎo)1 元件是小鼠基因組中主要的SINE。已證明基因組中的Alu 和B1 元件由RNA 聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生SINE RNA；而包埋在基因中的SINE 元件由RNA 聚合酶Ⅱ轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生SINE RNA。這些RNA 發(fā)揮重要的生物學(xué)作用［2］。Alu RNA 的聚集與多種人類疾病的不良預(yù)后有關(guān)［3］。小鼠B1 RNA和人類Alu RNA在阿爾茨海默?。ˋlzheimer，s disease，AD）患者的大腦中表達(dá)上升，且隨病情加重其表達(dá)增加，Alu RNA增加導(dǎo)致AD患者基因表達(dá)改變［4］。

其他RNA 包括microRNA、小激活RNA、非編碼RNA 等，也被證明在調(diào)節(jié)基因表達(dá)方面發(fā)揮重要作用［5-7］。有些RNA有望成為治療癌癥、腎臟、肝臟和心血管疾病的有效藥物［8-9］。為了研究RNA在細(xì)胞內(nèi)以及動(dòng)物體內(nèi)的生物學(xué)作用，本研究室前期已建立了制備無(wú)內(nèi)毒素污染的基因工程RNA的方法［10-11］，并制備了可用于細(xì)胞實(shí)驗(yàn)以及動(dòng)物體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的基因工程Alu正義和反義RNA，以及小鼠B1正義和反義RNA。有文獻(xiàn)報(bào)道，將RNA直接轉(zhuǎn)染細(xì)胞或注射入動(dòng)物體內(nèi)，RNA很快降解，影響其發(fā)揮生物學(xué)作用［11］。

本研究將20 μg B1反義RNA（B1 antisense RNA，B1as RNA）經(jīng)尾靜脈單次注射正常BALB／c 小鼠，并轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞，分析B1as RNA 在小鼠血液樣本和不同組織樣本（包括心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟和胸腺組織）中的生物分布以及細(xì)胞攝取B1as RNA的效率。

1 材料與方法

1.1 B1as RNA B1as DNA 模板單鏈（5'-GCGGCAGCCATATGGCTAGCTTTTTTTTTTCGAGACAGGGTTTCTCTGTG-3'，50 nt）由北京賽百盛基因技術(shù)有限公司（SBS 公司）合成；無(wú)內(nèi)毒素污染的基因工程小鼠B1as RNA（純B1as RNA 占總RNA 的15.8%）和無(wú)關(guān)對(duì)照LacZ3F3R RNA（LacZ3F3R 屬于大腸埃希菌LacZ基因的第3 個(gè)280 bp 片段）均由本實(shí)驗(yàn)室前期制備［10-11］。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 SPF 級(jí)BALB／c 小鼠，8 ～12 周齡，雌雄各半，體質(zhì)量（20.41±1.87）g，由河北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物合格證號(hào)：1804151；SPF 級(jí)自然衰老的BALB／c 小鼠（≥14 月齡），雌雄各半，體質(zhì)量（31.15±4.13）g，購(gòu)自北京華阜康生物科技股份有限公司，動(dòng)物許可證號(hào)：SCXK（京）2019-0008。所有動(dòng)物實(shí)驗(yàn)過(guò)程均經(jīng)河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物倫理與福利委員會(huì)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)為IACUC-Hebmu-2021009）。

1.3 主要試劑及儀器 RevertAid 第一鏈cDNA 合成試劑盒購(gòu)自美國(guó)Thermo Scientific 公司；BlazeTaq?SYBR?Green qPCR Mix 2.0 試劑盒購(gòu)自美國(guó)Gene Copoeia 公司；DMEM 培養(yǎng)基購(gòu)自美國(guó)Gibco 公司；胎牛血清（fetal calf serum，F(xiàn)CS）購(gòu)自美國(guó)ZETATM Life公司；胰蛋白酶購(gòu)自北京索萊寶科技有限公司；TRlzol 試劑購(gòu)自北京賽百盛基因技術(shù)有限公司（SBS公司）；7500 Real-Time PCR 系統(tǒng)由美國(guó)Applied Bio systems公司生產(chǎn)。

1.4 動(dòng)物分組及處理 取6 只8 ～12 周齡BALB／c小鼠，雌雄各3只，經(jīng)尾靜脈注射20 μg B1as RNA，分別于注射后0、5、10、15、30、60、240 min 經(jīng)小鼠眼眶靜脈叢采血，檢測(cè)B1as RNA 在小鼠血液中的生物分布。

取54 只8 ～12 周齡BALB／c 小鼠，經(jīng)尾靜脈注射20 μg B1as RNA，注射后0.5、2、4、8、16、24、48、72、96 h 分別用CO2安樂(lè)處死6 只小鼠，雌雄各3 只，解剖小鼠，取心臟、肝臟、脾臟、肺、腎臟和胸腺，檢測(cè)B1as RNA 在不同組織的生物分布，以靜脈注射生理鹽水的小鼠作為對(duì)照組。

將30 只自然衰老的BALB／c 小鼠（≥14 月齡）分成3組：治療組（經(jīng)尾靜脈注射20 μg B1as RNA，每周1 次）、無(wú)關(guān)RNA 對(duì)照組（經(jīng)尾靜脈注射20 μg LacZ3F3R RNA，每周1 次）和鹽水對(duì)照組（注射相同體積的鹽水），每組10 只，另設(shè)年輕對(duì)照組（正常年輕的8 ～12 周齡BALB／c 小鼠，雌雄各5 只）。給藥4 周后，用CO2安樂(lè)處死各組小鼠，迅速取出肝臟組織，檢測(cè)衰老相關(guān)基因的表達(dá)水平。

1.5 小鼠胚胎細(xì)胞培養(yǎng)及B1as RNA 轉(zhuǎn)染 麻醉情況下處死妊娠16 d的BALB／c小鼠。以下過(guò)程均無(wú)菌操作：從小鼠體內(nèi)取出胚胎，用DMEM 培養(yǎng)基洗滌3次，將胚胎切成約1 mm3的小塊，用10%FCS-DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)于25 mL 培養(yǎng)瓶中，48 h 后更換培養(yǎng)基，沖掉未附壁的組織塊；培養(yǎng)4 d 后，小鼠胚胎培養(yǎng)細(xì)胞達(dá)80%融合，用胰蛋白酶消化，接種于24 孔板中，1×105個(gè)／孔，于37 ℃，5%CO2條件下培養(yǎng)24 h；轉(zhuǎn)染B1as RNA［在細(xì)胞的10%FCS-DMEM 培養(yǎng)基中補(bǔ)充5 μL 1 mg／mL 的B1as RNA-CaCl2（1 mg／mL B1as RNA含3 mmol／L CaCl2）］，繼續(xù)培養(yǎng)，分別于培養(yǎng)5 min（1／12 h）、15 min（1／4 h）、45 min（3／4 h）、1.5 h、3 h、6 h、12 h 和24 h 取一定量的細(xì)胞，提取細(xì)胞總RNA，檢測(cè)細(xì)胞攝取B1as RNA的效率。

1.6 總RNA 的提取 用TRIzol 試劑提取注射B1as RNA不同時(shí)間點(diǎn)采集的小鼠血液和組織樣本以及轉(zhuǎn)染B1as RNA 后不同時(shí)間點(diǎn)收集的小鼠胚胎細(xì)胞RNA，按試劑盒說(shuō)明書(shū)操作。

1.7 小鼠血液及組織樣本中B1as RNA 生物分布的檢測(cè) 采用RT-qPCR 法。為使RT-qPCR 檢測(cè)到的B1as RNA 屬于注射的B1as RNA，而不是細(xì)胞本身的B1as RNA，擴(kuò)增B1as RNA時(shí)所需上游引物屬于pET-28α 質(zhì)粒的多克隆位點(diǎn)序列，下游引物與B1as RNA互補(bǔ)，上游引物序列：5'-GCGGCAGCCATATGGCTAGC-3'，下游引物序列：5'-CACAGAGAAACCCTGTCTCG-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為72 bp；β-actin上游引物序列：5'-CTGTGCCCATCTACGAGGGCTAT-3'，下游引物序列：5'-TTTGATGTCACGCACGATTTCC-3'，擴(kuò)增片段長(zhǎng)度為155 bp。引物由SBS 公司合成。引物設(shè)計(jì)示意圖見(jiàn)圖1。 提取的總RNA 經(jīng)乙醇沉淀后，溶于焦碳酸二乙酯處理過(guò)的雙蒸水中，使用RevertAid第一鏈cDNA 合成試劑盒在20 μL 反應(yīng)體系中進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄，反應(yīng)條件為：25 ℃10 min，42 ℃60 min，72 ℃10 min，孵育于冰上。用7500 Real-Time PCR系統(tǒng)進(jìn)行PCR 擴(kuò)增，使用BlazeTaq?SYBR?Green qPCR Mix 2.0 試劑盒在20 μL 反應(yīng)體系中加入2 μL逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，反應(yīng)條件為：95 ℃2 min，95 ℃10 s，53 ℃40 s，共40 個(gè)循環(huán)［12］。以小鼠β-actin作為內(nèi)參對(duì)照。

圖1 檢測(cè)注射的B1as RNA時(shí)所使用的引物設(shè)計(jì)示意圖Fig.1 Schematic design of primers used to detect injected B1as RNA

1.8 小鼠胚胎細(xì)胞攝取B1as RNA 的效率檢測(cè) 采用RT-qPCR 法。根據(jù)A260值計(jì)算B1as DNA 模板數(shù)量，根據(jù)DNA 模板數(shù)量及其分子量計(jì)算摩爾濃度。根據(jù)拷貝數(shù)將B1as DNA 模板分別稀釋為0、101、102、103、104、105、106、107和108拷貝／μL。提取未轉(zhuǎn)染B1as RNA 的小鼠胚胎細(xì)胞總RNA，逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，用cDNA 溶液作為B1as DNA 模板的稀釋劑。以qPCR得到的平均Ct值為縱坐標(biāo)，拷貝數(shù)為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。根據(jù)RT-qPCR 獲得的樣品Ct值，對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到每μL總RNA溶液中B1as RNA分子數(shù)，按下式計(jì)算細(xì)胞攝取B1as RNA的效率。

式中cDNA 拷貝數(shù)=B1as RNA 拷貝數(shù)；事實(shí)上，由于逆轉(zhuǎn)錄效率低于100%，檢測(cè)到的cDNA 拷貝數(shù)低于B1as RNA。

1.9 小鼠肝臟組織中衰老相關(guān)基因表達(dá)的檢測(cè) 用TRIzol試劑從小鼠肝臟組織中提取總RNA，采用RTqPCR法檢測(cè)衰老相關(guān)基因Sirt1、p21、p16INK4a、p15INK4b、p19Arf的表達(dá)水平，具體操作按1.7項(xiàng)，引物序列見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)衰老相關(guān)基因使用的引物Tab.1 Primers used to detect aging-related genes

1.10 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 采用IBM SPSS Statistics 24.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，組間比較采用t檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 B1as RNA在正常BALB／c小鼠血液中的生物分布 RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，雌性和雄性小鼠血液樣本中B1as RNA 水平無(wú)差異，因此將兩種性別的結(jié)果一起分析。注射B1as RNA 5 min后，即可在小鼠外周血樣本中檢測(cè)到B1as RNA（t=5.366，P＜0.05）；注射后15 min，B1as RNA在血液樣本中的存留量達(dá)最高值（t=9.055，P＜0.05）；注射后30 min，仍可在血液樣本中檢測(cè)到B1as RNA的存留（t=7.355，P＜0.05），但其水平顯著低于15 min；注射60 min后，已檢測(cè)不到B1as RNA，表明B1as RNA在血液中被迅速清除。見(jiàn)圖2。

圖2 正常BALB／c小鼠外周血中B1as RNA的生物學(xué)分布Fig.2 Biodistribution of B1as RNA in peripheral blood of normal BALB／c mice

2.2 B1as RNA在正常BALB／c小鼠不同組織中的生物分布 RT-qPCR檢測(cè)結(jié)果顯示，注射B1as RNA 0.5 h，在小鼠心臟、肝臟、脾臟、腎臟中可檢測(cè)到注射的B1as RNA（t分別為24.77、19.35、3.431和36.74，P均＜0.05），在肺中未檢測(cè)到；注射后2、4、8、16、24 和48 h，在小鼠肺中可檢測(cè)到B1as RNA（t分別為5. 914、13. 94、24.08、8.406、5.149和2.894，P均＜0.05）。見(jiàn)圖3。

圖3 B1as RNA 在正常BALB／c 小鼠不同組織中的生物分布Fig.3 Biodistribution of B1as RNA in different tissues of normal BALB／c mice

2.3 小鼠胚胎細(xì)胞攝取B1as RNA的效率 B1as DNA模板的擴(kuò)增曲線和模板單鏈的標(biāo)準(zhǔn)曲線見(jiàn)圖4 和圖5。培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞見(jiàn)圖6。RT-qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染B1as RNA后5 min（1／12 h，t=5.948，P＜0.05）、15 min（1／4 h，t=21.0，P＜0.05）、45 min（3／4 h，t=16.39，P＜0.05）、90 min（1.5 h，t=4.121，P＜0.05）和180 min（3 h，t=3.930，P＜0.05），在培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞中均可檢測(cè)到B1as RNA，之后逐漸消失，且B1as RNA水平在轉(zhuǎn)染后45 min達(dá)峰值，Ct值為19.46，培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞攝取B1as RNA的效率約為每個(gè)細(xì)胞攝取400個(gè)B1as RNA分子。見(jiàn)圖7。

圖4 B1as DNA模板的擴(kuò)增曲線Fig.4 Amplification curve of B1as DNA template

圖5 B1as DNA模板單鏈的標(biāo)準(zhǔn)曲線Fig.5 Standard curve of B1as DNA template single strand

圖7 轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間B1as RNA 在培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞中的相對(duì)水平Fig.7 Relative levels of B1as RNA in cultured mouse embryo cells at different times after transfection

2.4 B1as RNA 對(duì)小鼠肝臟組織中衰老相關(guān)基因表達(dá)的影響 RT-qPCR 檢測(cè)結(jié)果顯示，與年輕對(duì)照組小鼠比較，鹽水對(duì)照組小鼠肝臟組織中p21、p16Ink4a、p15Ink4b、p19Arf基因mRNA 的表達(dá)水平顯著上升（t分別為35.33、4.434、7.821和43.00，P均＜0.01），Sirt1基因mRNA的表達(dá)水平顯著下降（t=7.895，P＜0.01）；與鹽水對(duì)照組比較，治療組p21、p16Ink4a、p15Ink4b、p19Arf基因mRNA的表達(dá)水平顯著下降（t分別為10.01、4.461、4.420 和5.309，P均＜0.05），Sirt1基因mRNA 的表達(dá)水平顯著升高（t=4.579，P＜0.05）。見(jiàn)圖8。

圖8 B1as RNA 對(duì)小鼠肝臟組織中衰老相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用Fig.8 Regulation of B1as RNA on expression of agingrelated genes in mouse liver

續(xù)圖8 B1as RNA 對(duì)小鼠肝臟組織中衰老相關(guān)基因表達(dá)的調(diào)節(jié)作用Fig.8（Continued）Regulation of B1as RNA on expression of aging-related genes in mouse liver

3 討論

本研究室前期已建立了用大腸埃希菌BL21（DE3）制備基因工程RNA 的方法［10］，從大腸埃希菌中制備RNA的主要問(wèn)題為內(nèi)毒素（細(xì)菌脂多糖）的污染。內(nèi)毒素可引起哺乳動(dòng)物發(fā)熱、炎癥、細(xì)胞和組織損傷，甚至出現(xiàn)不可逆休克或死亡［13］。為了去除基因工程RNA 中的內(nèi)毒素，本研究室又建立了用SDS-NaCl 過(guò)濾聯(lián)合Triton X-114 相分離法制備基因工程RNA 的方法［11］。該方法可有效去除基因工程RNA 中污染的內(nèi)毒素。這些方法的建立使在細(xì)胞體外水平和動(dòng)物體內(nèi)水平研究RNA的功能成為可能。

已有越來(lái)越多的研究證明內(nèi)源性和外源性RNA具有重要的生物學(xué)作用，內(nèi)源性RNA 可調(diào)控基因表達(dá)［14-16］。人工合成的siRNAs轉(zhuǎn)染至培養(yǎng)的哺乳動(dòng)物細(xì)胞，在進(jìn)入RNA誘導(dǎo)沉默復(fù)合物后，降解靶mRNA，并抑制基因表達(dá)［17］。最近的研究表明，通過(guò)RNA 小分子控制基因表達(dá)可能是未來(lái)基因治療的重要措施［18］。SINEs 是哺乳動(dòng)物基因組中最重要的重復(fù)序列。SINE 元件被RNA 聚合酶Ⅲ轉(zhuǎn)錄，產(chǎn)生長(zhǎng)度為100 ～500 個(gè)核苷酸的RNA 分子。SINE RNAs 在調(diào)控基因表達(dá)中起關(guān)鍵作用［19］。已有研究證明，SINE正義和反義RNA的產(chǎn)生與腫瘤抑制基因BRCA1mRNA的下調(diào)有關(guān)［20］。

如使RNA 在細(xì)胞和動(dòng)物組織中發(fā)揮生物學(xué)作用，其需進(jìn)入細(xì)胞并在細(xì)胞中停留一定時(shí)間，但一般認(rèn)為RNA 進(jìn)入細(xì)胞后會(huì)很快降解［11］。近年來(lái)有文獻(xiàn)報(bào)道了不同RNA 在細(xì)胞中的半衰期，差異很大，內(nèi)含子RNA 的半衰期可短至5 min，mRNA 的半衰期可長(zhǎng)至24 h［21］。SHAROVA 等［22］檢測(cè)了小鼠胚胎干細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)mRNA 的半衰期中位數(shù)為7.1 h。也有文獻(xiàn)報(bào)道，RNA 在血液樣本中被迅速降解［23］。細(xì)胞產(chǎn)生的RNA 和轉(zhuǎn)染進(jìn)入細(xì)胞的RNA 均易被降解（從數(shù)分鐘到幾十小時(shí)），但RNA 通過(guò)影響基因轉(zhuǎn)錄發(fā)揮作用，由于轉(zhuǎn)錄本身有激活基因的作用，稱為RNA激活，因此RNA 雖易被降解，但其導(dǎo)致的影響會(huì)長(zhǎng)期存在［24］。

本研究首次分析了基因工程鼠B1as RNA 在BALB／c小鼠血液樣本和不同組織中的藥代動(dòng)力學(xué)。經(jīng)小鼠尾靜脈單次注射20 μg B1as RNA 后5 min，可在小鼠血液樣本中檢測(cè)到注射的B1as RNA；15 min后，注射的B1as RNA 在血液樣本中的水平達(dá)峰值；注射后30 min，有少量存留；60 min 后幾乎檢測(cè)不到注射的B1as RNA 在血液樣本中存留。采用RTqPCR 法檢測(cè)B1as RNA 在正常BALB／c 小鼠不同組織中的生物學(xué)分布，結(jié)果顯示，靜脈注射30 min 時(shí)，在小鼠心臟、肝臟、脾臟、腎臟和胸腺中可檢測(cè)到注射的B1as RNA，但未在肺中檢測(cè)到；注射2 ～48 h，在小鼠肺中檢測(cè)到注射的B1as RNA。上述結(jié)果顯示，B1as RNA 在血液中維持的時(shí)間較短（30 min），而在所有檢測(cè)到的組織中維持時(shí)間較長(zhǎng)（約2 h），尤其在肺中持續(xù)的時(shí)間最長(zhǎng)，可達(dá)48 h。ZHAO等［12］報(bào)道，DNA疫苗在組織中的持續(xù)時(shí)間比在血液樣本中的持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)，在肺中的持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)。本研究結(jié)果與ZHAO 等的報(bào)道一致。BR?VE 等［25］報(bào)道，DNA 質(zhì)粒在肺部停留時(shí)間長(zhǎng)的原因之一是質(zhì)粒暫時(shí)滯留在肺泡周圍毛細(xì)血管的細(xì)網(wǎng)中。因此本研究認(rèn)為，B1as RNA在肺部停留時(shí)間長(zhǎng)的原因也可能與此有關(guān)。

進(jìn)行RNA 生物學(xué)作用研究時(shí)常用細(xì)胞作為模型，為了檢測(cè)B1as RNA能否進(jìn)入培養(yǎng)的細(xì)胞，本研究用培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞作為模型進(jìn)行研究。將B1as RNA 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞后，采用RT-qPCR 法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后不同時(shí)間B1as RNA 在細(xì)胞中的存留水平，結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染后45 min，B1as RNA 水平在細(xì)胞中達(dá)峰值，此時(shí)小鼠胚胎培養(yǎng)細(xì)胞攝取B1as RNA 的效率約為每個(gè)細(xì)胞攝取400個(gè)B1as RNA分子。

以往的研究已使用自然衰老的BALB／c小鼠證明了B1as RNA 具有抗疲勞和抗氧化的活性，并能清除衰老小鼠細(xì)胞中積累的活性氧［26］。本研究進(jìn)一步觀察B1as RNA對(duì)自然衰老小鼠衰老相關(guān)基因表達(dá)的影響。將B1as RNA經(jīng)靜脈注射自然衰老的BALB／c小鼠，可調(diào)節(jié)衰老相關(guān)基因的表達(dá)水平。編碼p16Ink4a、p19Arf和p15Ink4bmRNA的Ink4／Arf基因座的表達(dá)在衰老過(guò)程中逐漸增加，一項(xiàng)全基因組關(guān)聯(lián)研究已將Ink4／Arf基因座與人類多種衰老相關(guān)疾病和衰老聯(lián)系起來(lái)［27］。p21是一種細(xì)胞周期進(jìn)程的抑制劑，隨著年齡的增長(zhǎng)而增加，并抑制衰老生物體的細(xì)胞再生。據(jù)報(bào)道，p21缺乏可部分防止年齡引起的細(xì)胞增殖和組織功能下降［28］。Sirt1是一種煙酰胺腺嘌呤二核苷酸依賴的去乙?；福梢种撇溉閯?dòng)物衰老相關(guān)疾病的發(fā)生［29］。Sirt1 可影響多種生物學(xué)功能，包括線粒體穩(wěn)態(tài)、DNA修復(fù)、腫瘤抑制等。越來(lái)越多的證據(jù)表明，Sirt1 活性的提高可抑制哺乳動(dòng)物的衰老和衰老相關(guān)疾病的發(fā)生［30-31］。本研究發(fā)現(xiàn)，B1as RNA 可顯著降低Ink4／Arf和p21的表達(dá)水平，增加Sirt1的表達(dá)。這些結(jié)果提示，B1as RNA 可能通過(guò)調(diào)節(jié)衰老相關(guān)基因的表達(dá)來(lái)發(fā)揮其抗衰老作用。

本研究首次證明了基因工程鼠B1as RNA 可在小鼠血液中存留一定時(shí)間（15 min 達(dá)峰值），能夠進(jìn)入小鼠多種組織，在組織中存留較長(zhǎng)時(shí)間（2 ～48 h）；并證明將B1as RNA 轉(zhuǎn)染培養(yǎng)的小鼠胚胎細(xì)胞，其可被體外培養(yǎng)的細(xì)胞有效攝取，并在細(xì)胞中停留90 min；B1as RNA 進(jìn)入小鼠肝臟，可調(diào)節(jié)肝臟細(xì)胞中衰老相關(guān)基因的表達(dá)。