改良肌氨酸氧化酶法肌酐試劑抗高IgM干擾分析

顧 剛 歐維正 陶銅芳 董江義

（貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心檢驗(yàn)科，貴州 貴陽(yáng) 550003）

血清肌酐（serum creatinine，SCr）是臨床判斷患者腎功能的重要參考指標(biāo)，其檢測(cè)方法的抗干擾性尤其重要。濕化學(xué)酶法具有特異性好、干擾小、線性范圍寬等優(yōu)點(diǎn)，適用于全自動(dòng)生化分析儀，是目前SCr檢測(cè)的首選方法。近幾年有學(xué)者指出，采用濕化學(xué)酶法檢測(cè)華氏巨球蛋白血癥患者SCr會(huì)受到血清中IgM干擾而出現(xiàn)假陽(yáng)性，而堿性苦味酸法（Jaffe法）不會(huì)受到干擾[1-2]。近日，貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心收治了1例華氏巨球蛋白血癥患者，其血清IgM>47.9 g/L，尿素正常，SCr結(jié)果異常增高，查看肌酐反應(yīng)曲線，檢測(cè)受到嚴(yán)重干擾。廠商針對(duì)IgM干擾改良了肌氨酸氧化酶法肌酐檢測(cè)試劑。本研究擬探討改良肌氨酸氧化酶法肌酐試劑（簡(jiǎn)稱改良肌酐試劑）抗IgM干擾的原理，并以不受IgM干擾的Jaffe法作為參照，對(duì)比改良肌酐試劑和原肌氨酸氧化酶法肌酐檢測(cè)試劑（簡(jiǎn)稱原肌酐試劑）SCr檢測(cè)結(jié)果的差異。

1 材料和方法

1.1 樣本來(lái)源

收集1例華氏巨球蛋白血癥患者和88例普通門(mén)診患者的血清樣本。

1.2 儀器與試劑

AU5800全自動(dòng)生化分析儀（美國(guó)貝克曼庫(kù)爾特公司）。肌酐檢測(cè)的反應(yīng)過(guò)程：在0點(diǎn)開(kāi)始向反應(yīng)杯加入試劑R1，加入血清，攪拌混勻，在第10點(diǎn)（180 s）加入試劑R2攪拌混勻。反應(yīng)過(guò)程從0點(diǎn)開(kāi)始，儀器每隔18 s記錄1次吸光度（A）值，記錄到第27點(diǎn)時(shí)終止，連接所有記錄點(diǎn)即為反應(yīng)曲線。原肌酐試劑（編號(hào)H105，批號(hào)210111101）、改良肌酐試劑（編號(hào)H105T，批號(hào)210423101）和校準(zhǔn)品均購(gòu)自寧波美康公司，方法學(xué)均為肌氨酸氧化物酶法。Jaffe法試劑（貨號(hào)100020170，批號(hào)200751）和校準(zhǔn)品均購(gòu)自北京中生北控公司。室內(nèi)質(zhì)控品（批號(hào)：26471、26472）購(gòu)自美國(guó)伯樂(lè)公司。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 26.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。呈正態(tài)分布的計(jì)量資料以x±s表示，2個(gè)組之間比較采用配對(duì)樣本t檢驗(yàn)。以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法檢測(cè)華氏巨球蛋白血癥患者SCr水平比較

采用原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法檢測(cè)華氏巨球蛋白血癥患者SCr水平，結(jié)果分別為625.5、59.7、62.6 μmol/L。3種試劑的反應(yīng)曲線見(jiàn)圖1、圖2。

圖1 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法反應(yīng)曲線

圖2 原肌酐試劑、改良肌酐試劑和Jaffe法主波長(zhǎng)反應(yīng)曲線匯總

2.2 原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測(cè)88例患者SCr水平比較

采用原肌酐試劑和改良肌酐試劑同時(shí)檢測(cè)88例患者樣本，SCr分別為（79.5±37.4）、（79.6±37.3）μmol/L。2種試劑檢測(cè)結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=0.175，P>0.05）。88例患者2種試劑SCr檢測(cè)結(jié)果的散點(diǎn)圖見(jiàn)圖3。

圖3 原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測(cè)88例患者SCr的比較

3 討論

反應(yīng)曲線是生化反應(yīng)發(fā)生過(guò)程的完整記錄。檢驗(yàn)工作人員通過(guò)觀察反應(yīng)曲線的變化可以判斷檢測(cè)過(guò)程中存在的異常情況，更快地查找原因，作出正確判斷[3-4]。肌酐檢測(cè)采用雙波長(zhǎng)，副波長(zhǎng)的作用是消除噪音干擾、減少雜散光影響和樣本本身光吸收干擾，結(jié)果以主波長(zhǎng)與副波長(zhǎng)A值的差來(lái)計(jì)算。肌酐肌氨酸氧化酶法采用雙試劑，參與反應(yīng)的主要是R2試劑。從原肌酐試劑反應(yīng)曲線[圖1（a）]可看出，在第10點(diǎn)加入R2試劑后，主波長(zhǎng)和副波長(zhǎng)反應(yīng)曲線在短時(shí)間內(nèi)迅速升高，且升高幅度很大，提示有某種物質(zhì)生成，造成A值大幅變化。從圖1（b）和圖1（c）可以看出，改良肌酐試劑與Jaffe法反應(yīng)曲線相對(duì)平滑，符合肌酐生化反應(yīng)特征。圖2 3種試劑主波長(zhǎng)反應(yīng)曲線更直觀地顯示出原肌酐試劑受到的干擾，以及改良肌酐試劑和Jaffe法試劑反應(yīng)過(guò)程相似。

本研究結(jié)果顯示，原肌酐試劑和改良肌酐試劑檢測(cè)88例患者SCr水平差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），提示改良肌酐試劑不會(huì)對(duì)其他患者的SCr檢測(cè)造成影響。由此可見(jiàn)，改良肌酐試劑中參與反應(yīng)的成分與原肌酐試劑一致。分析華氏巨球蛋白血癥患者肌酐水平異常升高的原因，在排除參與反應(yīng)的試劑成分因素后，考慮可能是試劑的其他組分對(duì)IgM產(chǎn)生了影響，如緩沖液、防腐劑等均有可能使反應(yīng)溶液的性質(zhì)發(fā)生變化，導(dǎo)致蛋白的大分子發(fā)生沉淀反應(yīng)，影響A值，造成干擾。我們把華氏巨球蛋白血癥患者的血清分別用純水和0.9%NaCl溶液稀釋5倍，結(jié)果顯示加入純水的血清會(huì)變混濁，而加入0.9%NaCl溶液的血清則無(wú)變化。華氏巨球蛋白血癥是以血液中出現(xiàn)大量單克隆巨球蛋白（IgM）為特征的B淋巴細(xì)胞惡性增生性疾病[5]，其IgM為五聚體，是相對(duì)分子質(zhì)量最大的免疫球蛋白。當(dāng)加入0.9%NaCl溶液稀釋時(shí)，氯離子和鈉離子圍繞在IgM周圍，使其不能聚集；而當(dāng)用純水稀釋時(shí)，由于溶液中離子濃度降低，pH值和滲透壓的改變導(dǎo)致大量IgM交聯(lián)聚集，進(jìn)而產(chǎn)生混濁。由此可以判斷，在采用原肌酐試劑檢測(cè)華氏巨球蛋白血癥患者血清樣本的過(guò)程中，加入R2試劑使反應(yīng)溶液中的pH值、滲透壓等因素發(fā)生了改變，導(dǎo)致大量IgM發(fā)生聚集，產(chǎn)生混濁，造成A值急劇升高，干擾了肌酐的檢測(cè)。

綜上所述，由于華氏巨球蛋白血癥患者血清中存在大量IgM，且IgM具有相對(duì)分子質(zhì)量大的特點(diǎn)，因此易受各種因素影響而發(fā)生交聯(lián)聚集。改良肌酐試劑優(yōu)化了試劑組分，使得反應(yīng)溶液中IgM的性質(zhì)穩(wěn)定，未觸發(fā)IgM產(chǎn)生聚集，從而得到真實(shí)的檢測(cè)結(jié)果。在臨床工作中，如遇到肌酐異常高值，且與臨床不相符的情況，建議立即查看反應(yīng)曲線，用合適的方法確定其真實(shí)值，以防止臨床誤診。