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    光激化學發(fā)光法檢測兒童乙型肝炎核心抗體最佳臨界值探討

    2023-05-22 08:12:44張嘉懿郭文偉沈永明崔小健
    檢驗醫(yī)學 2023年3期
    關鍵詞:預測值乙型肝炎試劑

    張嘉懿 郭文偉 沈永明 娜 仁 崔小健 司 萍

    (天津市兒童醫(yī)院檢驗科,天津 300134)

    乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)引起的傳染病,主要經(jīng)母嬰、血液和性接觸途徑傳播。兒童是HBV的易感人群,圍生期感染和兒童感染是我國慢性乙型肝炎(chronic hepatitis B,CHB)新增病例的主要來源[1]。乙型肝炎核心抗體(hepatitis B core antibody,HBcAb)是判定HBV既往感染的血清學指標[2]。目前,化學發(fā)光微粒子免疫測定法(chemiluminescence microparticle immunoassay,CMIA)和電化學發(fā)光法(electrochemiluminescence immunoassay,ECLIA)作為乙型肝炎血清標志物的常規(guī)檢測方法已廣泛應用于臨床[3],而光激化學發(fā)光法(light-initiated chemiluminescence assay,LiCA)是較新的檢測方法。在實際工作中,我們發(fā)現(xiàn)用LiCA篩查兒童HBcAb假陽性結(jié)果較多。初篩試劑通常敏感性較高,會有一定比例的假陽性結(jié)果,但傳染病項目出現(xiàn)假陽性結(jié)果可能會導致臨床誤判。在疾病流行率不同或免疫狀態(tài)不同的人群中,傳染病項目初篩結(jié)果陽性預測值>95%的臨界值往往不同[4]。本研究擬探討LiCA檢測兒童HBcAb的最佳臨界值,以針對不同S/CO值區(qū)間的檢測結(jié)果進行確證試驗。

    1 材料和方法

    1.1 研究對象

    收集2019年1—3月天津市兒童醫(yī)院、上海交通大學醫(yī)學院附屬國際和平婦幼保健院、常州市兒童醫(yī)院和上海市第一婦嬰保健院檢測后剩余的兒童靜脈血血清樣本448例,入組兒童中男313例、女135例,年齡9個月~15歲。

    1.2 儀器與試劑

    LiCA 500自動光激化學發(fā)光檢測儀(嘉興凱實生物科技股份有限公司),試劑(LiCA)和校準品購自博陽生物科技(上海)有限公司。ARCHITECT i2000全自動免疫分析儀(美國雅培公司)及配套試劑(CMIA)、校準品。cobas e602電化學發(fā)光免疫分析儀(瑞士羅氏公司)及配套試劑(ECLIA)、校準品。3個檢測系統(tǒng)的檢測結(jié)果均按照試劑盒說明書進行判定,陽性判定標準為:LiCA S/CO值≤1,CMIA S/CO值>1,ECLIA S/CO值≤1。

    1.3 方法

    同時采用LiCA和CMIA檢測所有樣本。LiCA和CMIA檢測結(jié)果均陽性判定為陽性,均陰性判定為陰性,陰性、陽性不一致則采用ECLIA復測。CMIA和ECLIA檢測結(jié)果均陽性判定為陽性,均陰性判定為陰性,陰性、陽性不一致則剔除。當ECLIA與CMIA檢測結(jié)果一致時,以CMIA作為參考方法。

    1.4 統(tǒng)計學方法

    采用SPSS 23.0軟件和GraphPad Prism 7軟件進行統(tǒng)計分析和作圖。采用受試者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲線評估LiCA檢測HBcAb的最佳臨界值、敏感性和特異性。采用Kappa一致性檢驗評價LiCA采用最佳臨界值時HBcAb檢測結(jié)果與參考方法的一致性。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

    2 結(jié)果

    2.1 LiCA檢測HBcAb結(jié)果及與參考方法的比較

    448例樣本中,LiCA、CMIA均陽性的樣本有237例,均陰性的樣本有184例,陰性、陽性不一致的樣本有27例(LiCA單陽性23例、CMIA單陽性4例)。27例結(jié)果不一致樣本用ECLIA復測,其中24例檢測結(jié)果與CMIA結(jié)果一致,3例檢測結(jié)果不一致的樣本被剔除。

    445例樣本中,LiCA陽性258例,其中假陽性21例,陽性預測值為91.86%;陰性187例,其中假陰性3例,陰性預測值98.40%。以S/CO值=1作為臨界值時,敏感性為98.75%,特異性為89.76%。LiCA和參考方法的陰、陽性例數(shù)以及LiCA的S/CO值分布見表1。

    表1 不同S/CO值下LiCA和參考方法的陰性、陽性例數(shù) 例

    2.2 LiCA不同臨界值的陽性預測值

    計算LiCA檢測HBcAb不同臨界值(S/CO值)下的陽性預測值。當S/CO值≤0.77時,LiCA檢測HBcAb的陽性預測值>95%。見表2。

    表2 不同臨界值下LiCA 檢測HBcAb的陽性預測值

    2.3 LiCA的分析性能

    ROC曲線分析結(jié)果顯示,以參考方法為標準,LiCA檢測HBcAb的曲線下面積(95%可信區(qū)間)為0.994(0.990~0.998),最佳臨界值(S/CO值)為0.65,敏感性為95.42%,特異性為97.07%,Youden指數(shù)為0.924 9。見表3、圖1。

    圖1 LiCA檢測HBcAb的ROC曲線

    2.4 采用最佳臨界值時LiCA檢測HBcAb的結(jié)果及其與參考方法的一致性

    當采用最佳臨界值(S/CO值=0.65)判定結(jié)果時,LiCA與參考方法的一致性極好[Kappa值(95%可信區(qū)間)為0.923(0.887~0.959),P<0.01]。用S/CO值=0.65重新評估LiCA的檢測結(jié)果,共檢出陽性235例,其中假陽性6例,陽性預測值為97.45%;檢出陰性210例,其中假陰性11例,陰性預測值為94.76%。采用最佳臨界值判斷陰、陽性例數(shù)及S/CO值分布見表4。

    表4 采用最佳臨界值重新判定后LiCA和參考方法的陰性、陽性例數(shù) 例

    3 討論

    乙型肝炎是全球性的公共衛(wèi)生問題,我國HBV感染者約有7 000萬例,兒童時期HBV感染更易發(fā)展為CHB,約有90%~95%的圍生期感染和20%~30%的兒童期感染會發(fā)展成CHB[1]。HBcAb是判斷HBV現(xiàn)癥感染或既往感染的血清學指標,近年來在隱匿性HBV感染中被廣泛應用[2]。

    化學發(fā)光法具有靈敏度高、重復性好、自動化程度高、通量大等優(yōu)點,已被廣泛用于臨床檢測。涂少華等[5]采用LiCA檢測了453例疑似HBV感染者乙型肝炎血清學標志物,結(jié)果顯示LiCA與CMIA有較高的符合率。然而,本研究結(jié)果顯示,LiCA檢測HBcAb的陽性檢出率較高,且大多陽性樣本經(jīng)補充試驗證實為假陽性。本研究采用試劑盒聲明的S/CO值=1.00作為陰、陽性判斷的臨界值時,LiCA檢測HBcAb的假陽性率為8.14%,陽性預測值僅為91.86%。因此,有必要對LiCA檢測兒童血清HBcAb的性能進行評估,以建立適用于兒童人群的該項目最佳臨界值。本研究ROC曲線分析結(jié)果顯示,LiCA 檢測兒童血清HBcAb的曲線下面積為0.994,說明LiCA在兒童人群中的檢測性能較為理想。通過計算最大Youden指數(shù),得出LiCA檢測兒童血清HBcAb的最佳臨界值(S/CO值)為0.65,此時陽性預測值可達97.45%,即假陽性率僅為2.55%。對檢測結(jié)果落在最佳臨界值兩側(cè)的樣本,實驗室可分別設立相應的復檢規(guī)則[6]。篩查試驗的首要目的是避免漏檢,因此對于S/CO值為0.65~1.00的樣本,即使存在一部分假陽性結(jié)果,也應進行確認,避免漏掉真陽性樣本。結(jié)果確認可以選擇做確證試驗、對患者進行隨訪檢測、采用其他試劑檢測等方法;必要時,幾種方法可以互相補充應用[7]。

    造成篩查試劑在特定人群中出現(xiàn)假陽性的原因很多,如在流行率較低的地區(qū)篩查丙型肝炎病毒抗體,即使試劑性能很好,也難以達到較高的陽性預測值;在篩查老年人群和孕產(chǎn)婦人群的梅毒抗體時,會出現(xiàn)假陽性率高于其他人群的情況[4]。LiCA篩查兒童HBcAb假陽性率偏高,原因可能為:1)與兒童HBcAb低流行率相關,隨著乙型肝炎疫苗接種率的提高和母嬰阻斷的推廣,近年來HBcAb陽性率在各年齡人群中均明顯下降,1~18歲人群的HBcAb陽性率已降至5.99%,LiCA檢測HBcAb陽性預測值偏低可能與兒童人群中的低流行率有關[2,8-9];2)兒科患者感染性疾病較多,血清中的抗體,尤其是IgG類抗體的水平較高,可能會干擾LiCA的檢測,出現(xiàn)一部分弱陽性結(jié)果;3)由于LiCA檢測時無清洗步驟,可能較參考方法更易受樣本中干擾物質(zhì)的影響,本研究部分假陽性樣本加入抗生物素試劑中和后復測為陰性,提示生物素干擾可能是LiCA檢測產(chǎn)生假陽性的原因之一。

    綜上所述,廠商建立檢測系統(tǒng)的臨界值時選取人群通常覆蓋范圍較廣,故試劑說明書聲明的臨界值不一定適用于特定人群。本研究建立的LiCA檢測兒童血清HBcAb的最佳臨界值可能更適用于兒童人群,可更準確地反映兒童人群中HBcAb的真實狀態(tài),也可為實驗室設立更合理的復檢規(guī)則提供依據(jù)。

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