MS-222對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)麻醉效果、組織結(jié)構(gòu)及抗氧化酶活性的影響

章霞，徐志進(jìn)，李偉業(yè)，殷小龍，王易帆，陳爽，馬雪彬

(浙江省舟山市水產(chǎn)研究所，浙江 舟山 316000)

大黃魚(yú)(Larimichthyscrocea)隸屬于鱸形目(Perciformes)石首魚(yú)科(Sciaenidae)黃魚(yú)屬(Larimichthys)，是中國(guó)海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)魚(yú)類(lèi)之一，養(yǎng)殖產(chǎn)量居中國(guó)海水魚(yú)類(lèi)養(yǎng)殖前列[1]。大黃魚(yú)體質(zhì)嬌嫩，易受驚嚇，常在養(yǎng)殖操作、養(yǎng)殖運(yùn)輸和商品運(yùn)輸過(guò)程中出現(xiàn)應(yīng)激反應(yīng)，亦常出現(xiàn)充血、掉鱗和受傷等現(xiàn)象，進(jìn)而引發(fā)疾病甚至死亡，造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失，這也是制約大黃魚(yú)生鮮產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要原因[2-3]。因此，采用魚(yú)用麻醉劑是抑制魚(yú)類(lèi)過(guò)度應(yīng)激、有效避免損傷的重用手段。

烷基磺酸鹽同位氨基苯甲酸乙酯(MS-222)具有易溶于水、使用濃度低、入靜快、作用時(shí)間長(zhǎng)和復(fù)蘇快等特點(diǎn)，被世界各國(guó)廣泛應(yīng)用于各種魚(yú)類(lèi)的麻醉運(yùn)輸和日常養(yǎng)殖操作[4-5]。研究表明，體質(zhì)量為2.5～3.0 g的長(zhǎng)江刀鱭(Coilianasus)幼魚(yú)在(25.0±0.5)℃水溫下，理想的MS-222麻醉質(zhì)量濃度為150 mg/L[6]；體質(zhì)量為(5.59±0.29)g的巖原鯉(Procyprisrabaudi)幼魚(yú)在23～24 ℃的水溫下，MS-222有效麻醉質(zhì)量濃度為120～220 mg/L[7]；體質(zhì)量為(130±10)g的大口黑鱸(Micropterussalmoides)幼魚(yú)在(28.0±0.5)℃水溫下，MS-222的最適麻醉質(zhì)量濃度為70 mg/L[8]，MS-222的麻醉效果被廣泛認(rèn)可。有關(guān)MS-222對(duì)大黃魚(yú)的麻醉效果已有一些研究，如體質(zhì)量為450～550 g的大黃魚(yú)，MS-222有效麻醉質(zhì)量濃度為50～60 mg/L，16 ℃條件下麻醉效果最穩(wěn)定[9]；體質(zhì)量為(250.52±15.30)g的大黃魚(yú)，在15 ℃條件下，用40 mg/L的MS-222進(jìn)行麻醉模擬運(yùn)輸24 h后，復(fù)蘇率可達(dá)90%[10]。但這些研究均是圍繞大規(guī)格大黃魚(yú)開(kāi)展的相關(guān)麻醉研究，而針對(duì)小規(guī)格大黃魚(yú)的相關(guān)研究并未見(jiàn)報(bào)道。而在實(shí)際養(yǎng)殖生產(chǎn)中，幼魚(yú)運(yùn)輸、標(biāo)記和科學(xué)研究時(shí)麻醉劑使用頻繁，為降低損耗并科學(xué)應(yīng)用，有針對(duì)性地開(kāi)展幼魚(yú)時(shí)期的麻醉效果研究具有重要意義。

本試驗(yàn)中，對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)采用不同質(zhì)量濃度的MS-222長(zhǎng)時(shí)間靜水麻醉，研究其對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)機(jī)體的影響，并確定MS-222長(zhǎng)時(shí)間靜水麻醉幼魚(yú)的有效劑量，以期為大黃魚(yú)幼魚(yú)長(zhǎng)時(shí)間?；钸\(yùn)輸提供科學(xué)參考。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)用大黃魚(yú)幼魚(yú)體長(zhǎng)為(18.01±0.82)cm，體質(zhì)量為(97.97±9.56)g，由浙江省舟山市水產(chǎn)研究所朱家尖養(yǎng)殖基地提供，試驗(yàn)魚(yú)體質(zhì)健康、規(guī)格相近。試驗(yàn)前于玻璃鋼養(yǎng)殖桶(400 L)中暫養(yǎng) 1 d。試驗(yàn)用水為無(wú)污染的清澈海水，pH為7.99，鹽度為20±1，水溫為(16±1)℃。試驗(yàn)用玻璃鋼魚(yú)桶(半徑r= 0.40 m，高H=0.40 m，實(shí)際水位h=0.20 m)水體體積為100 L。

MS-222購(gòu)自上海麥克林生化科技有限公司。

1.2 方法

1.2.1 麻醉試驗(yàn) 將MS-222溶于水，配成質(zhì)量濃度為10、20、30、40、50、60、70 mg/L的麻醉液。

1)麻醉和復(fù)蘇試驗(yàn)。將停食24 h的幼魚(yú)從暫養(yǎng)的玻璃鋼養(yǎng)殖桶(400 L)轉(zhuǎn)移到盛有不同質(zhì)量濃度的MS-222麻醉液養(yǎng)殖水體(100 L)中，每桶放10尾魚(yú)，魚(yú)水質(zhì)量比約為1∶20，觀察魚(yú)體的活動(dòng)情況，用秒表記錄魚(yú)體進(jìn)入不同麻醉階段的時(shí)間。結(jié)合在麻醉劑作用下幼魚(yú)表現(xiàn)出的行為變化，參考張麗等[9]、魏鎖成[11]和劉長(zhǎng)琳等[12]的研究結(jié)果，將幼魚(yú)麻醉過(guò)程分為6期，復(fù)蘇過(guò)程分為4期(表1)。麻醉24 h后記錄存活率，然后轉(zhuǎn)入相同水溫的清水中復(fù)蘇。

表1 麻醉和復(fù)蘇不同階段魚(yú)類(lèi)的行為特征[9]Tab.1 Behavioural characteristics of fish at different stages of anesthesia and recovery

2)24 h靜水麻醉試驗(yàn)。根據(jù)上述試驗(yàn)中麻醉程度、復(fù)蘇時(shí)間及存活率，選擇能使幼魚(yú)進(jìn)入鎮(zhèn)靜期的兩組MS-222質(zhì)量濃度(20.0、40.0 mg/L)，以及空白組(0 mg/L)開(kāi)展長(zhǎng)時(shí)間(24 h)靜水麻醉試驗(yàn)，觀察不同麻醉時(shí)間對(duì)幼魚(yú)機(jī)體的影響。每組設(shè)3桶重復(fù)，每桶放18尾魚(yú)。麻醉24 h后放在清水中復(fù)蘇6 h，此時(shí)記為30 h。分別在試驗(yàn)的第1.5、3、6、12、24、30 h時(shí)從每組取3尾魚(yú)，采集其血液、肝臟樣品，用于生理生化指標(biāo)測(cè)定。

1.2.2 理化指標(biāo)測(cè)定 將血液樣品以4 000 r/min離心20 min，抽取上清液測(cè)定血清中皮質(zhì)醇濃度；取肝臟樣品測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)活力。

所有指標(biāo)均使用商品化試劑盒(購(gòu)自南京建成生物工程研究所)進(jìn)行測(cè)定，采用紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度值。

1.2.3 組織結(jié)構(gòu)觀察

1)組織切片觀察。用40 mg/L的MS-222麻醉幼魚(yú)24 h后，解剖取其肝臟、鰓絲和腦組織，分別用體積分?jǐn)?shù)為4%的多聚甲醛固定，再用體積分?jǐn)?shù)為50%、70%、85%、95%的乙醇和無(wú)水乙醇逐級(jí)脫水，每級(jí)進(jìn)行2 h；石蠟包埋后，經(jīng)過(guò)切片、蘇木精-伊紅(HE)染色、中性樹(shù)膠封片等步驟，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織學(xué)特征。

2)電鏡觀察。用40 mg/L的MS-222麻醉幼魚(yú)24 h后，解剖取其肝臟、鰓絲和腦組織，分別用體積分?jǐn)?shù)為2.5%的戊二醛和1%的鋨酸固定，梯度乙醇脫水；用白膠包埋組織，烘干后先進(jìn)行半薄切片(1 μm)，定位需觀察的位置，隨后進(jìn)行超薄切片(80 nm)；用體積分?jǐn)?shù)為2%的醋酸鈾飽和乙醇溶液避光染色8 min，用體積分?jǐn)?shù)為70%的乙醇清洗3次，用超純水清洗3次；用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為2.6%的枸櫞酸鉛溶液避二氧化碳染色8 min，再用超純水清洗3次，濾紙稍吸干；切片在室溫下干燥過(guò)夜，用透射電鏡(HITACHI HT7800)觀察拍照。

1.3 數(shù)據(jù)處理

試驗(yàn)數(shù)據(jù)以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±S.D.)表示，采用SPSS 17.0軟件對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析(one-way ANOVA)，用 Duncan法進(jìn)行組間多重比較，顯著性水平設(shè)為0.05。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同質(zhì)量濃度的MS-222對(duì)幼魚(yú)的麻醉和復(fù)蘇效果

不同質(zhì)量濃度的MS-222對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)的麻醉及復(fù)蘇效果見(jiàn)表2。

從表2可見(jiàn)：魚(yú)體最終的麻醉程度隨著MS-222質(zhì)量濃度的增加，麻醉時(shí)間逐漸縮短；當(dāng)MS-222質(zhì)量濃度為10、20、30 mg/L時(shí)，幼魚(yú)只能進(jìn)入輕度鎮(zhèn)靜期(Ⅱ期)，無(wú)法進(jìn)入最終麻醉狀態(tài)；當(dāng)MS-222的質(zhì)量濃度為40 mg/L時(shí)，幼魚(yú)可進(jìn)入深度鎮(zhèn)靜期(Ⅲ期)；當(dāng)MS-222的質(zhì)量濃度為50 mg/L時(shí)，魚(yú)體進(jìn)入麻醉(Ⅳ～Ⅴ期)的時(shí)間均大于5 min；當(dāng)MS-222的質(zhì)量濃度為60 mg/L時(shí)，魚(yú)體進(jìn)入麻醉(Ⅳ～Ⅴ期)時(shí)間小于5 min，并能進(jìn)入深度麻醉期(Ⅵ期)，麻醉24 h后，該組幼魚(yú)的復(fù)蘇率仍為100%；當(dāng)MS-222的質(zhì)量濃度為70 mg/L時(shí)，幼魚(yú)能進(jìn)入深度麻醉期(Ⅵ期)，但麻醉24 h后，幼魚(yú)的復(fù)蘇率僅為50%。

表2 不同濃度MS-222對(duì)幼魚(yú)的麻醉及復(fù)蘇效果(n=10)Tab.2 Anaesthetic and recovery effects of MS-222 on juvenile at different concentrations(n=10)

2.2 MS-222長(zhǎng)時(shí)間麻醉對(duì)幼魚(yú)組織結(jié)構(gòu)的影響

用40 mg/L的MS-222麻醉24 h時(shí)，對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)肝臟、鰓絲和腦組織結(jié)構(gòu)的影響見(jiàn)圖1、圖2。組織切片觀察顯示：空白組幼魚(yú)肝細(xì)胞有少數(shù)空泡，但細(xì)胞核完整，細(xì)胞排列有序(圖1A)，而40 mg/L麻醉組出現(xiàn)肝細(xì)胞腫脹，部分肝細(xì)胞核溶解、消失，細(xì)胞核皺縮，核膜形變，胞漿嗜酸性下降，胞漿內(nèi)脂質(zhì)沉積(圖1B)；空白組幼魚(yú)鰓絲排列整齊(圖1C)，而40 mg/L麻醉組鰓絲的次級(jí)鰓絲遠(yuǎn)端腫脹，上皮細(xì)胞壞死，鰓絲內(nèi)紅細(xì)胞聚集，鰓絲膨大，紅細(xì)胞滲出(圖1D)；空白組幼魚(yú)腦組織神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)濃染，神經(jīng)元細(xì)胞核明顯(圖1E)，而40 mg/L麻醉組腦組織疏松水腫神經(jīng)元細(xì)胞質(zhì)淡染，神經(jīng)元細(xì)胞核不明顯(圖1F)。

A—空白組肝臟；B—40 mg/L的MS-222麻醉組肝臟；C—空白組鰓絲；D—40 mg/L的MS-222麻醉組鰓絲；E—空白組腦；F—40 mg/L的MS-222麻醉組腦。a—核膜；b—胞漿；c—紅細(xì)胞；d—神經(jīng)元細(xì)胞；e—神經(jīng)元細(xì)胞核。A—liver in blank group；B—liver in 40 mg/L MS 222 anesthesia group；C—gill in blank group；D—gill in 40 mg/L MS 222 anesthesia group；E—brain in blank group；F—brain in 40 mg/L MS 222 anesthesia group. a—nuclear membrane；b—cytoplasm；c—red blood cell；d—neuron；e—neuronal nucleus.圖1 麻醉24 h時(shí)幼魚(yú)肝臟、鰓絲和腦的組織結(jié)構(gòu)Fig.1 Histological structure of liver，gill filament and brain of juvenile under anesthesia for 24 hours

BC—膽小管；N—細(xì)胞核；LD—脂滴；M—線粒體；RER—粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)；Epc—上皮細(xì)胞；BM—基底膜；Cap—血管腔；Enc—內(nèi)皮細(xì)胞；PC—柱細(xì)胞；CCS—泌氯細(xì)胞。BC—bile canaliculus；N—nucleus；LD—lipid droplet；M—mitochondria；RER—rough endoplasmic reticulum；Epc—epithelial cell；BM—basement membrane；Cap—capillary；Enc—endothelial cells；PC—pillar cell；CCS—chloride secreting cells.圖2 麻醉24 h時(shí)幼魚(yú)肝臟、鰓絲和腦的超微結(jié)構(gòu)Fig.2 Ultrastructure of liver，gill filament and brain of juvenile fish under anesthesia for 24 hours

組織超微結(jié)構(gòu)觀察顯示：40 mg/L的MS-222麻醉組肝細(xì)胞明顯水腫，整體呈崩解狀態(tài)，細(xì)胞膜大面積破損、不連續(xù)，膜內(nèi)低電子密度水腫區(qū)，膽小管迂曲、擴(kuò)張；細(xì)胞核染色質(zhì)均勻、局部核周隙增寬，胞內(nèi)可見(jiàn)較大量脂滴；線粒體輕度腫脹，部分線粒體膜破損，基質(zhì)外溢，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張(圖2(a))。鰓絲鰓小片結(jié)構(gòu)變形，局部鰓小片斷裂，上皮細(xì)胞增生肥大，胞內(nèi)可見(jiàn)較多脂滴；基底膜厚薄不均一，局部復(fù)層化、連續(xù)，血管腔狹窄，其中可見(jiàn)較多血細(xì)胞，輕度栓塞；內(nèi)皮細(xì)胞局部脫落游離，柱細(xì)胞數(shù)量減少；泌氯細(xì)胞明顯水腫，細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、空泡變性(圖2(b))。腦中神經(jīng)元細(xì)胞輕度水腫，細(xì)胞膜局部小區(qū)域破損、不連續(xù)，膜內(nèi)基質(zhì)分布均勻；細(xì)胞核呈圓形，以常染色質(zhì)為主，染色質(zhì)均勻，線粒體輕度固縮，大多線粒體膜完整；嵴存在，少量線粒體輕度固縮，膜內(nèi)電子密度高，嵴擴(kuò)張，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)未見(jiàn)明顯擴(kuò)張，表面可見(jiàn)核糖體附著(圖2(c))。

2.3 MS-222質(zhì)量濃度和麻醉時(shí)間對(duì)幼魚(yú)血清皮質(zhì)醇濃度和肝臟抗氧化酶活力的影響

2.3.1 皮質(zhì)醇濃度 從圖3可見(jiàn)：靜水中的幼魚(yú)經(jīng)MS-222麻醉處理24 h內(nèi)，20 mg/L麻醉組幼魚(yú)血清皮質(zhì)醇濃度大致呈現(xiàn)先增長(zhǎng)后下降再增長(zhǎng)的趨勢(shì)，在1.5 h內(nèi)皮質(zhì)醇濃度迅速上升，且顯著高于空白組、40 mg/L麻醉組(P<0.05)；40 mg/L麻醉組在麻醉期間皮質(zhì)醇濃度變化趨勢(shì)與空白組較為一致，波動(dòng)較小；麻醉期間，空白組及20、40 mg/L麻醉組皮質(zhì)醇峰值時(shí)間點(diǎn)分別為24、1.5、24 h，麻醉24 h時(shí)，3個(gè)麻醉組的血清皮質(zhì)醇濃度相近(P>0.05)；復(fù)蘇6 h后，20、40 mg/L麻醉組幼魚(yú)血清皮質(zhì)醇濃度均恢復(fù)至空白組水平(P>0.05)。

標(biāo)有不同字母者表示相同時(shí)間下不同麻醉組間有顯著性差異(P<0.05)，標(biāo)有相同字母者表示組間無(wú)顯著性差異(P>0.05)，下同。Means with different letters are significant differences at the same time in different MS-222 groups (P<0.05)and the means with the same letter are not significant differences(P>0.05)，et sequentia.圖3 不同濃度麻醉組幼魚(yú)血清皮質(zhì)醇濃度的變化Fig.3 Changes in serum cortisol concentration of juvenile under different concentrations of MS-222

2.3.2 SOD活力 從圖4(a)可見(jiàn)：MS-222對(duì)幼魚(yú)肝臟中的SOD有顯著性影響，總體上來(lái)看，20 mg/L麻醉組SOD活性變化較40 mg/L麻醉組變化更為劇烈，空白組則波動(dòng)較?。辉诼樽淼母鱾€(gè)時(shí)間點(diǎn)，20、40 mg/L麻醉組SOD活性均顯著高于空白組(P<0.05)；復(fù)蘇6 h后，20、40 mg/L麻醉組幼魚(yú)SOD活性均恢復(fù)至空白組水平(P>0.05)。

圖4 不同濃度麻醉組幼魚(yú)肝臟SOD、CAT和GSH-Px活力的變化Fig.4 Changes in activities of SOD，CAT and GSH-Px in liver of juvenile under different concentrations of MS-222

2.3.3 CAT活力 從圖4(b)可見(jiàn)：MS-222對(duì)幼魚(yú)肝臟中的CAT活力有顯著性影響，在1.5、3、12 h時(shí)，20 mg/L麻醉組CAT活力顯著高于空白組(P<0.05)；在1.5、24 h時(shí)，40 mg/L麻醉組幼魚(yú)的CAT活力顯著高于空白組(P<0.05)；復(fù)蘇6 h后，40 mg/L麻醉組幼魚(yú)CAT活力恢復(fù)至空白組水平(P>0.05)。

2.3.4 GSH-Px活力 從圖4(c)可見(jiàn)：MS-222對(duì)幼魚(yú)肝臟中的GSH-Px活力有顯著性影響，但影響出現(xiàn)的時(shí)間稍晚；20 mg/L麻醉組GSH-Px活力在6 h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)明顯變化，在12、24時(shí)顯著高于空白組(P<0.05)；而40 mg/L麻醉組則在3 h時(shí)開(kāi)始出現(xiàn)顯著變化，且在3、12、24 h時(shí)顯著高于空白組(P<0.05)，6 h時(shí)顯著低于空白組(P<0.05)；復(fù)蘇6 h后，20 mg/L麻醉組幼魚(yú)GSH-Px活力恢復(fù)至空白組水平(P>0.05)，而40 mg/L麻醉組則顯著高于空白組(P<0.05)。

3 討論

3.1 MS-222濃度對(duì)大黃魚(yú)麻醉和復(fù)蘇行為的影響

麻醉劑濃度直接影響對(duì)魚(yú)類(lèi)的麻醉效果，濃度過(guò)低起不到抗應(yīng)激作用，濃度過(guò)高則容易引起魚(yú)類(lèi)休克甚至死亡。為此，探究不同應(yīng)用條件、應(yīng)用目的時(shí)的給藥劑量對(duì)有效開(kāi)展麻醉工作至關(guān)重要。有研究表明，體質(zhì)量為(200±50)g的黃顙魚(yú)(Pelteobagrusfulvidraco)，用20 mg/L的MS-222麻醉24 h時(shí)，存活率達(dá)到100%[13]；體質(zhì)量為(360.4±50)g的大口黑鱸靜水麻醉24 h，MS-222的適宜質(zhì)量濃度為50～60 mg/L[14]；體質(zhì)量為500～600 g的大菱鲆(Scophthalmusmaximus)，在水溫為8 ℃、魚(yú)水質(zhì)量比為1∶3條件下，40 mg/L的MS-222適用于魚(yú)的長(zhǎng)時(shí)間(24 h)運(yùn)輸[15]。張麗等[9]研究表明，體質(zhì)量為450～550 g的大黃魚(yú)在水溫(10.5±0.5)℃下，MS-222麻醉的有效質(zhì)量濃度為50～60 mg/L，且在16 ℃時(shí)大黃魚(yú)進(jìn)入麻醉所需時(shí)間最長(zhǎng)，也最穩(wěn)定。本試驗(yàn)中，體質(zhì)量為(97.97±9.56)g的大黃魚(yú)幼魚(yú)在水溫為(16±1)℃下，MS-222質(zhì)量濃度為50～60 mg/L時(shí)，魚(yú)體能進(jìn)入深度麻醉期，麻醉24 h后大黃魚(yú)幼魚(yú)復(fù)蘇率為100%，這與張麗等[9]的研究結(jié)果較為一致。而本研究中大黃魚(yú)幼魚(yú)麻醉24 h的MS-222適宜劑量(40 mg/L)高于黃顙魚(yú)[13]，與大口黑鱸[14]、大菱鲆[15]相近，這是因?yàn)椴煌~(yú)種、規(guī)格、溫度和麻醉時(shí)間等均會(huì)影響MS-222的使用濃度。如MS-222在50～70 mg/L時(shí)，對(duì)體質(zhì)量為(83.3±7.8)g的大瀧六線魚(yú)(Hexagrammosotakii)幼魚(yú)有良好的麻醉效果[16]；體質(zhì)量為(81.9±0.36)g的鸚鵡魚(yú)(Amphilophuscitrinellus)長(zhǎng)距離運(yùn)輸(12 h)時(shí)，MS-222麻醉的有效質(zhì)量濃度為40 mg/L[17]；在15、20、25 ℃下，體質(zhì)量為260～530 g的圓斑星鰈(Veraspervariegates)成魚(yú)，MS-222麻醉的有效質(zhì)量濃度分別為180～300、160～280、150～230 mg/L[18]。因此，在開(kāi)展實(shí)際生產(chǎn)活動(dòng)時(shí)需科學(xué)參考、適當(dāng)摸索后再用藥。有研究認(rèn)為，深度鎮(zhèn)靜期是運(yùn)輸?shù)倪m宜時(shí)期[11]，麻醉期是試驗(yàn)操作的最佳時(shí)期[19]。根據(jù)本研究結(jié)果，后續(xù)對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)長(zhǎng)時(shí)間麻醉應(yīng)用可選用小于40 mg/L的MS-222進(jìn)行運(yùn)輸試驗(yàn)探索，養(yǎng)殖短暫性操作可選用小于60 mg/L的質(zhì)量濃度進(jìn)行試驗(yàn)探究。

3.2 MS-222長(zhǎng)時(shí)間麻醉對(duì)大黃魚(yú)組織結(jié)構(gòu)的影響

魚(yú)用麻醉劑是一類(lèi)能不同程度地抑制魚(yú)腦感覺(jué)中樞使魚(yú)失去反射動(dòng)作的物質(zhì)。其作用原理是：首先抑制腦的皮質(zhì)(觸覺(jué)喪失期)，再作用于基底神經(jīng)節(jié)與小腦(興奮期)，最后作用于脊髓(麻醉期)[20]。適量的麻醉劑可降低魚(yú)類(lèi)耗氧率和氨氮排泄率，抑制魚(yú)類(lèi)的過(guò)度應(yīng)激，有效減少操作中的損傷或死亡。但過(guò)量的MS-222進(jìn)入魚(yú)體后會(huì)富集在脾、肝臟等器官，并引起肝臟受損等問(wèn)題，大劑量的麻醉劑也會(huì)麻痹呼吸和舒縮中樞，導(dǎo)致魚(yú)體死亡，進(jìn)而影響成活率[21-22]。孫偉紅等[23]研究表明，體質(zhì)量為(300±50)g的大菱鲆，在水溫12～13 ℃下進(jìn)行60 mg/L的MS-222暴露試驗(yàn)，在60 h時(shí)肌肉中MS-222的富集量達(dá)到最高值，平均為47.8 μg/g；肝臟中的MS-222在50 h后基本平衡，平均最大富集量可達(dá)67.9 μg/g。朱敏[24]研究表明，大劑量MS-222會(huì)引起魚(yú)體肝臟、神經(jīng)中樞等方面出現(xiàn)問(wèn)題。本研究中，組織切片顯微觀察和超微結(jié)構(gòu)電鏡觀察結(jié)果表明，用MS-222麻醉24 h的大黃魚(yú)幼魚(yú)，肝細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核皺縮，線粒體輕度腫脹，部分線粒體膜破損；鰓絲的次級(jí)鰓絲遠(yuǎn)端腫脹，上皮細(xì)胞壞死，鰓絲內(nèi)紅細(xì)胞聚集，鰓絲膨大，紅細(xì)胞滲出，泌氯細(xì)胞明顯水腫，細(xì)胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯擴(kuò)張、空泡變性；腦組織中出現(xiàn)神經(jīng)細(xì)胞固縮，組織疏松水腫，細(xì)胞膜局部小區(qū)域破損且不連續(xù)，少量線粒體輕度固縮等現(xiàn)象。推測(cè)用40 mg/L的MS-222麻醉24 h時(shí)，可能對(duì)大黃魚(yú)肝臟、鰓絲和腦組織有一定損傷，但具體的損傷情況及機(jī)理還需從復(fù)蘇養(yǎng)殖、分子毒理及蛋白質(zhì)代謝等多方面對(duì)麻醉效應(yīng)和富集消除規(guī)律進(jìn)行后續(xù)研究。

3.3 MS-222長(zhǎng)時(shí)間麻醉對(duì)大黃魚(yú)理化指標(biāo)的影響

魚(yú)類(lèi)各種酶類(lèi)、代謝產(chǎn)物和血液指標(biāo)可在某種程度上反映各組織或器官的功能變化，是重要的生理、毒理和病理學(xué)評(píng)價(jià)指標(biāo)。魚(yú)類(lèi)的抗氧化系統(tǒng)中的小分子非酶抗氧化劑如SOD、CAT和GSH-Px等，可在魚(yú)類(lèi)處于脅迫的環(huán)境中使機(jī)體內(nèi)過(guò)氧化氫分解，清除生物體內(nèi)的過(guò)氧化氫[25]，這些指標(biāo)可間接反映生物體生理上的變化。本試驗(yàn)表明，20、40 mg/L的MS-222對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)肝臟抗氧化酶活力相較于空白組均有增強(qiáng)作用，這是因?yàn)樵贛S-222的脅迫下，魚(yú)體產(chǎn)生了應(yīng)激反應(yīng)，前期呼吸加快，產(chǎn)生大量的自由基，從而引起清除自由基的抗氧化相關(guān)酶類(lèi)活力增強(qiáng)。在麻醉復(fù)蘇后，抗氧化相關(guān)酶活性又下降至空白組水平，可見(jiàn)，20、40 mg/L的MS-222對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)肝臟的影響是可逆的，此時(shí)魚(yú)體生理機(jī)能尚能維持正常運(yùn)行。本試驗(yàn)結(jié)果與MS-222和丁香酚作用錦鯉(Cyprinuscarpio)的研究結(jié)果相似[26]。

血液中激素濃度的變化是魚(yú)類(lèi)應(yīng)激反應(yīng)的首要表現(xiàn)。在遭遇環(huán)境脅迫時(shí)，魚(yú)體內(nèi)的腎上腺素和皮質(zhì)醇(酮)大量分泌，調(diào)節(jié)機(jī)體的代謝以維持生理平衡[27-28]。有研究表明，魚(yú)體在受到麻醉后，血液皮質(zhì)醇水平短時(shí)間內(nèi)迅速升高[29]；10～20 mg/L的MS-222適于大口黑鱸麻醉后進(jìn)行運(yùn)輸，麻醉運(yùn)輸組血清皮質(zhì)醇變化差異顯著高于基礎(chǔ)組[30]；麻醉運(yùn)輸組與非麻醉運(yùn)輸組美洲鰣(Alosasapidissima)幼魚(yú)血清中皮質(zhì)醇的濃度均顯著高于麻醉前的基礎(chǔ)組[31]。本試驗(yàn)中，用20 mg/L的MS-222麻醉大黃魚(yú)幼魚(yú)后，血清皮質(zhì)醇含量在1.5 h時(shí)內(nèi)迅速升高且顯著高于空白組，之后趨于平穩(wěn)，這與上述結(jié)果一致；而40 mg/L的MS-222麻醉組血清皮質(zhì)醇濃度變化較為平穩(wěn)，各個(gè)時(shí)間點(diǎn)與空白組無(wú)顯著性差異，這可能是40 mg/L的MS-222降低了魚(yú)體對(duì)外界刺激的反應(yīng)能力?？梢?jiàn)，MS-222 在抑制魚(yú)體脅迫應(yīng)激反應(yīng)中起到了重要作用。

4 結(jié)論

1)隨著MS-222質(zhì)量濃度的增加，大黃魚(yú)幼魚(yú)的麻醉時(shí)間逐漸縮短，且復(fù)蘇整體時(shí)間延長(zhǎng)。24 h的麻醉運(yùn)輸可選用質(zhì)量濃度為40 mg/L的MS-222。

2)用40 mg/L的MS-222麻醉24 h，對(duì)大黃魚(yú)幼魚(yú)SOD、CAT和GSH-Px等抗氧化應(yīng)激酶活性的影響作用是可逆的，但對(duì)其組織結(jié)構(gòu)可造成一定損傷，但不致死。今后還需從分子毒理及蛋白質(zhì)代謝等多方面對(duì)MS-222的麻醉效應(yīng)進(jìn)行研究評(píng)估。