山東縊蟶人工繁育試驗(yàn)及高鹽對(duì)幼蟲生長(zhǎng)的影響

崔玉龍 姜珊 吳彪 曹偉 于貞貞 陳聰聰 趙磊

摘要 研究了山東地區(qū)縊蟶人工繁育過程及鹽度對(duì)幼蟲生長(zhǎng)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，山東地區(qū)能夠順利培育縊蟶苗種，其受精卵在23 ℃條件下發(fā)育24 h便可進(jìn)入D形幼蟲階段，浮游期約為8 d，每天生長(zhǎng)約15 μm，變態(tài)后生長(zhǎng)速度穩(wěn)步加快；將幼蟲在14、21、28鹽度梯度下培育發(fā)現(xiàn)，隨著鹽度的升高，其殼長(zhǎng)生長(zhǎng)速率顯著下降（P<0.05）。該研究結(jié)果可為山東地區(qū)開展縊蟶人工繁育提供參考。

關(guān)鍵詞 縊蟶；人工繁育；鹽度；幼蟲；生長(zhǎng)

中圖分類號(hào) S 968.3? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A? 文章編號(hào) 0517-6611（2023）07-0085-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.07.021

Experiment on Artificial Propagation and Effect of High Salinity on Larvae Growth of Sinonovacula constricta in Shandong

CUI Yu-long1，JIANG Shan1，WU Biao2 et al

（1.Rongcheng Marine Economic Development Center，Rongcheng，Shandong 264300;2.Yellow Sea Fisheries Research Institute，Chinese Academy of Fishery Sciences，Qingdao，Shandong 266071）

Key words The artificial breeding process of razor clams in Shandong and the effects of salinity on the growth of larvae were studied.The results showed that razor clam could be successfully propagated in Shandong，and their fertilized eggs could enter the D-shaped larval stage after 24 h of development at 23°C.The larval stage was about 8 days，with a growth rate of about 15 μm per day，and the growth rate steadily accelerated after larval stage;the larvae were bred under three salinity of 14，21 and 28，and it was found that the shell length growth rate decreased significantly with the increase of salinity （P<0.05）.The results of the study provide a reference for the artificial propagation of razor clams in Shandong.

Key words Sinonovacula constricta;Artificial propagation;Salinity;Larvae;Growth

基金項(xiàng)目 寧波市“科技創(chuàng)新2025”重大專項(xiàng)（2019B10005）；寧波市重大科技攻關(guān)暨“揭榜掛帥”項(xiàng)目（2021Z114）。

作者簡(jiǎn)介 崔玉龍（1981—），男，山東威海人，工程師，從事水產(chǎn)養(yǎng)殖研究。通信作者，碩士，主要從事貝類遺傳育種與繁育工作。

收稿日期 2022-04-07；修回日期 2022-05-12

縊蟶（Sinonovacula constricta）為軟體動(dòng)物，屬瓣鰓綱簾蛤目竹蟶科，常棲息于河口有淡水注入的軟泥底質(zhì)中，是我國(guó)傳統(tǒng)的四大海水養(yǎng)殖貝類之一?？O蟶廣泛分布于中國(guó)、日本和朝鮮等國(guó)的沿海地區(qū)［1］，在我國(guó)浙江、福建的貝類養(yǎng)殖中占有重要地位。

近年來，縊蟶養(yǎng)殖業(yè)呈快速穩(wěn)定發(fā)展趨勢(shì)，養(yǎng)殖區(qū)域從浙江、福建向周邊的江蘇、山東、廣東等省份迅速擴(kuò)展［2］。山東東營(yíng)、濱州、青島縊蟶養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，成為北方灘涂養(yǎng)殖的新亮點(diǎn)［3］。但縊蟶人工繁育主要集中在浙江、福建兩地，山東地區(qū)的養(yǎng)殖苗種均來自南方，尚無縊蟶苗種規(guī)模化人工繁育的相關(guān)報(bào)道。海陽市漁業(yè)技術(shù)推廣站分析比較了北方自然繁殖的苗種與浙江苗種，發(fā)現(xiàn)北方苗種更加適應(yīng)當(dāng)?shù)刈匀画h(huán)境，養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)效益比南方苗種更具優(yōu)勢(shì)，可避免長(zhǎng)途運(yùn)輸苗種，減少投資，降低養(yǎng)殖成本［4］。隨著縊蟶在山東養(yǎng)殖規(guī)模的不斷擴(kuò)大，亟需開展苗種規(guī)模化、本土化生產(chǎn)。

鹽度是影響貝類生長(zhǎng)發(fā)育及新陳代謝的重要環(huán)境因子［5］。牡蠣和貽貝等大多數(shù)瓣鰓綱貝類具有密封且堅(jiān)厚如石的殼來保護(hù)柔軟的身體，而擁有兩片薄而不封閉的殼的縊蟶選擇了深挖洞的生活方式［6-7］，這導(dǎo)致縊蟶最先面臨水體鹽度波動(dòng)、氨氮上升和溶氧下降等不利環(huán)境。因此，縊蟶是研究應(yīng)激反應(yīng)和適應(yīng)的理想生物。林筆水等［8-9］研究了不同鹽度下縊蟶幼蟲生存、生長(zhǎng)及發(fā)育狀況，發(fā)現(xiàn)縊蟶幼蟲對(duì)鹽度的變化很敏感，高鹽度海水會(huì)使其存活率較低、生長(zhǎng)緩慢、無法變態(tài)等，且長(zhǎng)期生活在較高鹽度海域的縊蟶所繁衍的幼蟲對(duì)高鹽的耐受能力強(qiáng)于低鹽耐受力?？O蟶適應(yīng)鹽度范圍是4～28［10］，最適鹽度范圍為15～25［11］。蟶體大小不同，對(duì)鹽度的適應(yīng)能力略有不同，相對(duì)而言，小蟶更耐淡，大蟶更耐咸［10］。然而在實(shí)際生產(chǎn)過程中，縊蟶的人工育苗和養(yǎng)殖經(jīng)常受到高鹽度海水的影響。為此，筆者開展了山東本地縊蟶的工廠化苗種繁育關(guān)鍵技術(shù)摸索，同時(shí)研究了不同鹽度下幼蟲的生長(zhǎng)情況，以期為山東地區(qū)縊蟶本土化規(guī)模繁育提供基礎(chǔ)資料和參考。

1 材料與方法

1.1 親貝采集與催產(chǎn) 縊蟶親貝于9月中旬取自煙臺(tái)萊陽五龍河入?？谔?。于低溫、陰干條件下運(yùn)回育苗場(chǎng)后，選擇殼表無損傷、無附著物且殼長(zhǎng)5 cm以上的個(gè)體為親貝，持續(xù)陰干至22：00之后移至產(chǎn)卵池充氣刺激，產(chǎn)卵池水溫23 ℃、鹽度14，持續(xù)充氣刺激至翌日02：00后便可產(chǎn)卵。

1.2 幼蟲培育 縊蟶受精卵發(fā)育24 h后，大部分可達(dá)到D形幼蟲階段，挑選健康、活力好且上浮的幼蟲轉(zhuǎn)至育苗池分池培育，培育密度為10 ind/mL，保持水溫23 ℃，每日早晚換水，換水量為50%，換水后投喂等鞭金藻（Isochrysis galbana）和牟氏角毛藻（Chaetoceros muelleri）。

1.3 幼蟲附著 在1/3幼蟲出現(xiàn)眼點(diǎn)并有伸足現(xiàn)象時(shí)移入附苗池，利用去除雜質(zhì)并消毒后的細(xì)沙作為附著基。

1.4 稚貝培育 稚貝初始培育密度為2×106顆/m2，隨著個(gè)體的生長(zhǎng)而逐漸降低，一般8 d降低密度50%。每日早晚換水，換水量為80%。每日投餌2～4次。

1.5 不同鹽度培育幼蟲試驗(yàn) 試驗(yàn)鹽度使用海水和曝氣24 h的自來水配制，設(shè)置14、21、28 3個(gè)鹽度，每組3個(gè)生物學(xué)重復(fù)，水溫保持20 ℃以上。受精卵發(fā)育24 h后移入各鹽度養(yǎng)殖池中，幼蟲培育期間每2 d利用顯微鏡測(cè)量縊蟶幼蟲殼長(zhǎng)。

1.6 數(shù)據(jù)分析 試驗(yàn)數(shù)據(jù)采用Excel 2019進(jìn)行統(tǒng)計(jì)和作圖分析，采用SPSS 26進(jìn)行差異顯著性檢驗(yàn)，顯著水平為0.05（P＜0.05）。

2 結(jié)果與分析

2.1 幼蟲發(fā)育前期觀察 由圖1可見，受精9 h后胚胎發(fā)育至原腸期，長(zhǎng)約70 μm，植物極細(xì)胞內(nèi)陷形成一個(gè)小孔，稱為原口或胚孔，形成原腸胚，24 h后發(fā)育成D形幼蟲，殼長(zhǎng)約100 μm，覆蓋兩片透明的半圓形貝殼，頂端初步形成面盤和纖毛，靠面盤上纖毛的擺動(dòng)向前游動(dòng)；D形幼蟲期2～3 d，形成黃色的消化盲囊，殼長(zhǎng)生長(zhǎng)至140 μm；發(fā)育4 d的幼蟲開始形成殼頂，不甚明顯，面盤發(fā)達(dá)，在靜水中能自由游動(dòng)，殼長(zhǎng)約150 μm；殼頂幼蟲期約有3 d，貝殼向卵圓形發(fā)展，并進(jìn)一步形成柱狀的足原基，消化盲囊變黃褐色，殼長(zhǎng)生長(zhǎng)至180 μm；發(fā)育7 d的幼蟲部分出現(xiàn)眼點(diǎn)，足開始收縮，面盤開始萎縮，殼長(zhǎng)約200 μm；發(fā)育8 d的幼蟲面盤退化，纖毛環(huán)脫落，面盤幼蟲期終止，足伸出殼外，內(nèi)部器官逐漸完善，殼長(zhǎng)約為220 μm（表1）。

2.2 幼蟲與稚貝的生長(zhǎng) 表1是縊蟶幼蟲和前期稚貝的生長(zhǎng)情況。D形幼蟲期生長(zhǎng)較快，殼長(zhǎng)以每天20 μm的速度增長(zhǎng)；殼頂幼蟲期生長(zhǎng)速度減緩，殼長(zhǎng)每天生長(zhǎng)約15 μm；眼點(diǎn)幼蟲期生長(zhǎng)速度變快，每天生長(zhǎng)約20 μm；前期稚貝生長(zhǎng)速度慢，但生長(zhǎng)速度隨時(shí)間呈穩(wěn)步增長(zhǎng)。

2.3 不同鹽度縊蟶幼蟲前期生長(zhǎng)的影響 鹽度對(duì)縊蟶幼蟲生長(zhǎng)的影響如圖2所示。試驗(yàn)結(jié)果表明，隨著鹽度的升高，其生長(zhǎng)速率顯著下降（P<0.05），鹽度14組生長(zhǎng)最快，試驗(yàn)期間共生長(zhǎng)約120 μm，增長(zhǎng)率約116 %；鹽度21組生長(zhǎng)緩慢，生長(zhǎng)約50 μm，增長(zhǎng)率約50 %；鹽度28組生長(zhǎng)最慢，只生長(zhǎng)約38 μm，增長(zhǎng)率僅40 %。在試驗(yàn)的第3、5、7、9天，不同鹽度組的平均殼長(zhǎng)兩兩之間均有顯著差異（P<0.05）；在同一鹽度組中，不同試驗(yàn)天數(shù)的平均殼長(zhǎng)兩兩之間也均有顯著差異（P<0.05）。試驗(yàn)結(jié)果說明，鹽度對(duì)縊蟶幼蟲前期生長(zhǎng)存在顯著影響。

3 討論

縊蟶作為我國(guó)重要的經(jīng)濟(jì)貝類，養(yǎng)殖規(guī)模不斷擴(kuò)大，近些年規(guī)模化的人工養(yǎng)殖已北延至山東東營(yíng)等地，發(fā)展前景十分廣闊。有關(guān)縊蟶人工繁育的試驗(yàn)已有很多報(bào)道，福建、浙江在20世紀(jì)50年代就開始人工育苗試驗(yàn)，但由于當(dāng)時(shí)大量催產(chǎn)的技術(shù)未能解決，僅限于實(shí)驗(yàn)室小水體育苗［12］。至20世紀(jì)70年代末，陳文龍等［13］首次采用循環(huán)水池進(jìn)行縊蟶人工育苗試驗(yàn)，不僅連續(xù)4年均獲成功，而且其單位水體出苗量都提高數(shù)倍；有學(xué)者采用流水刺激或冷凍刺激進(jìn)行大量催產(chǎn)，取得了良好的效果，為人工育苗積累了寶貴的經(jīng)驗(yàn)［12］。該研究利用山東本地縊蟶作為親貝在東營(yíng)進(jìn)行了苗種生產(chǎn)試驗(yàn)并獲得成功。在20 ℃、鹽度14培育條件下幼蟲浮游期約8 d，其中D形幼蟲期2～3 d，殼頂幼蟲期約3 d，眼點(diǎn)幼蟲期約2 d。浮游期間殼長(zhǎng)平均每天增加約15 μm，至200 μm左右便可附著變態(tài)，25 d殼長(zhǎng)便可達(dá)到600 μm的出苗規(guī)格。但北方地區(qū)的育苗有一定的局限性。北方地區(qū)縊蟶繁育催產(chǎn)，須充分了解當(dāng)?shù)乜O蟶繁育生物學(xué)［1，14］自然繁殖習(xí)性，謹(jǐn)慎選擇育苗開始時(shí)間。山東萊陽地區(qū)縊蟶的盛產(chǎn)期是8—9月，該研究的親貝采自9月中旬，其性腺發(fā)育較好，是該研究獲得成功的重要前提。其次，北方地區(qū)自9月晝夜溫差變大，特別是進(jìn)入10月后隨時(shí)都可能大幅度降溫，所以應(yīng)選擇保溫性較好的育苗車間。

鹽度是海洋生物的重要環(huán)境因子。縊蟶在有淡水流入的內(nèi)灣或河口附近繁殖，在此環(huán)境中，理化因子變化較大，特別是鹽度變化更為明顯，縊蟶幼蟲能生活在這樣的環(huán)境中，說明它是一種廣鹽而又略偏低鹽的種類［15］。目前，關(guān)于鹽度對(duì)海洋貝類浮游幼蟲生長(zhǎng)的影響已有很多報(bào)道［16-21］，發(fā)現(xiàn)鹽度對(duì)海洋貝類浮游幼蟲生長(zhǎng)產(chǎn)生了顯著影響。與縊蟶有相似生活鹽度的近江牡蠣（Crassostrea ariakensis），其在高鹽脅迫下的幼蟲生長(zhǎng)嚴(yán)重受限［5，22］，這與該研究得出的隨著鹽度的升高，縊蟶幼蟲生長(zhǎng)速率顯著下降結(jié)果一致。同一試驗(yàn)天數(shù)，不同鹽度組平均殼長(zhǎng)兩兩之間均有顯著性差異；同一鹽度組，不同試驗(yàn)天數(shù)平均殼長(zhǎng)兩兩之間也均有顯著性差異，這也與林筆水等［8-9］對(duì)福建地區(qū)縊蟶幼蟲的試驗(yàn)結(jié)果相似。因此，在縊蟶育苗過程中，應(yīng)注重培育鹽度的調(diào)整和控制，避免高鹽度對(duì)幼蟲的危害。

雖然鹽度21、28的高鹽環(huán)境導(dǎo)致縊蟶幼蟲生長(zhǎng)變慢，但其殼長(zhǎng)依然保持一定程度的生長(zhǎng)，初步說明其具有在鹽度28甚至更高鹽度環(huán)境下生長(zhǎng)發(fā)育的潛力。以上研究表明，縊蟶幼蟲對(duì)高鹽環(huán)境的抗性具有一定的可塑性，并且依照林筆水等［9］的研究，這種耐高鹽機(jī)制源自遺傳變異，這種機(jī)制是開展耐高鹽縊蟶育種的基礎(chǔ)。截至目前，我國(guó)已育成縊蟶“申浙1號(hào)”［23］和“甬樂1號(hào)”［24］兩個(gè)新品種，其分別針對(duì)生長(zhǎng)性狀和耐低鹽性狀作為育種目標(biāo)進(jìn)行選留。迄今無耐高鹽新品種的報(bào)道。未來有必要開展縊蟶耐高鹽性狀的遺傳學(xué)分析，為選育耐高鹽縊蟶新品種奠定基礎(chǔ)。

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