利格列汀片的制備及體外釋放研究

張磊，郭建鵬，姜慶偉

(1.延邊大學(xué) 藥學(xué)院，吉林 延吉 133002；2.北京天衡藥物研究院有限公司，北京 100000)

0 引言

經(jīng)濟(jì)迅速發(fā)展伴隨著居民生活改善，也使糖尿病等代謝性疾病在中國(guó)盛行。其中2 型糖尿病是一種持續(xù)高血糖狀態(tài)的慢性代謝疾病、進(jìn)展性疾病，在發(fā)現(xiàn)疾病后，若得不到及時(shí)有效治療與控制，將出現(xiàn)各種并發(fā)癥。在臨床治療中，主要治療方式為胰島素治療，但仍有治療空間，通過(guò)選擇DPP-4 抑制劑利格列汀片，可以改善血糖，恢復(fù)胰島B 細(xì)胞功能，緩解胰島素抵抗癥狀[1-4]。由于仿制藥與原研藥品具有相同的質(zhì)量和療效，且開(kāi)發(fā)技術(shù)難度相對(duì)較低和不需要長(zhǎng)期的臨床試驗(yàn)，因此可大幅降低藥企的開(kāi)發(fā)成本和市售價(jià)格，并對(duì)提高國(guó)家醫(yī)療衛(wèi)生服務(wù)水平和挽救人民生命具有重要意義[5-7]。

利格列汀片原研廠家為Boehringer Ingelheim，2011 年5 月2 日首次在美國(guó)上市，同年先后在歐盟、日本上市。2013 年在國(guó)內(nèi)進(jìn)口，商品名為歐唐寧(TradjentaTM)，規(guī)格為5 mg[8]。目前，國(guó)內(nèi)已有多家藥企(如：石藥集團(tuán)歐意藥業(yè)有限公司、四川科倫藥業(yè)股份有限公司等)對(duì)該藥品進(jìn)行了仿制和應(yīng)用，但未見(jiàn)將該藥品的仿制藥與原研藥進(jìn)行對(duì)比有關(guān)報(bào)道。溶出度試驗(yàn)?zāi)M了藥物在體外釋放行為，溶出度不符合要求將影響藥品的生物利用度。處方和工藝變量均會(huì)影響溶出度。在處方和工藝開(kāi)發(fā)的整個(gè)過(guò)程中，都需要對(duì)該關(guān)鍵質(zhì)量屬性進(jìn)行研究[9-13]。為此，文章采用不同處方及生產(chǎn)工藝制備利格列汀片，考察自制品在四條溶出介質(zhì)中的溶出曲線，采用相似因子法與原研品溶出曲線進(jìn)行對(duì)比，補(bǔ)充了利格列汀片的處方工藝及體外釋放研究數(shù)據(jù)，增加了利格列汀片仿制藥與參比制劑人體生物等效試驗(yàn)等效的概率。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 儀器

1260II 高效液相色譜儀(Agilent)；FADT-800RC自動(dòng)溶出儀(上海富科思分析儀器)；SQP 電子天平(北京賽多利斯科學(xué)儀器)；PHSJ-3F 實(shí)驗(yàn)室pH 計(jì)(上海儀電科學(xué)儀器)；KQ-500DE 數(shù)控超聲波清洗器(昆山市超聲)。

1.1.2 藥品

仿制藥：自制藥品，規(guī)格為5 mg，批號(hào)為20220501、20220502、20220503、20220504、20220505、20220506、20220507、20220508、20 220509；原研藥：勃林格殷格翰銷售的一批歐唐寧，規(guī)格為5 mg，批號(hào)為AB4040A，效期2024 年2 月，且運(yùn)輸和貯存過(guò)程均符合要求。

1.1.3 試劑

乙腈(色譜級(jí)，CINC)，甲醇(色譜級(jí)，CINC)，磷酸(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，磷酸二氫銨(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)，鹽酸(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、冰醋酸(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、醋酸鈉(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、磷酸二氫鉀(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、氫氧化鈉(分析級(jí)，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)、超純水(北京天衡藥物研究院有限公司)，利格列汀對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院)，利格列汀(山東新時(shí)代藥業(yè)有限公司，含量99.3%)，甘露醇(青島明月海藻集團(tuán)有限公司)，預(yù)膠化淀粉(湖州展望藥業(yè)有限公司)，共聚維酮VA64Fine(BASF SE)，硬脂酸鎂(安徽山河藥用輔料股份有限公司)，微晶纖維素PH-102(德國(guó)瑞登梅爾父子公司)，二氧化硅(湖州展望藥業(yè)有限公司)，胃溶型薄膜包衣預(yù)混劑(上?？?lè)康包衣技術(shù)有限公司)，交聯(lián)聚維酮CL(BASF SE)，玉米淀粉(安徽山河藥用輔料股份有限公司)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 濕法制粒技術(shù)制備利格列汀片

稱取3 000 片處方量的利格列汀、甘露醇(粉碎后過(guò)80 目篩)、預(yù)膠化淀粉/交聯(lián)聚維酮于Mini-CG 型濕法混合制粒機(jī)，混合15min，攪拌速度為200 r/min，剪切速度為200 r/min，混合均勻；在攪拌剪切作用下將共聚維酮VA64Fine 水溶液噴入干物料中制軟攪拌速度為200 r/min，剪切速度為800 r/min，制軟材時(shí)間5～6 min；將濕顆粒放入YK-60 搖擺顆粒機(jī)制粒，篩網(wǎng)目數(shù)為尼龍篩40 目；將制好的濕顆粒放入WBFIIG 型流化床進(jìn)行干燥，進(jìn)風(fēng)溫度為55～60 ℃，風(fēng)量為50～60 m3/h，干燥時(shí)間30～40 min，水分≤3.0%；將干燥好的顆粒放入YZLJ 型高速整粒機(jī)進(jìn)行整粒，篩網(wǎng)為φ01.0 mm；將制備好的顆粒計(jì)算收率，加入到SYH-10 型三維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)再加入硬脂酸鎂進(jìn)行總混，總混時(shí)間5 min，混合頻率30 Hz；將總混顆粒使用ZPW23 壓片機(jī)壓片，φ8.0 mm；將片芯使用BG1-5高效包衣機(jī)進(jìn)行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，處方組成如表1 所示。

表1 濕法制粒處方組成列表

1.2.2 粉末直壓技術(shù)制備利格列汀片

稱取3000 片處方量的利格列汀、直壓甘露醇、玉米淀粉、預(yù)膠化淀粉、交聯(lián)聚維酮于SYH-10 型三維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)預(yù)混，混合時(shí)間20 min，混合頻率：30 Hz；再加入硬脂酸鎂進(jìn)行總混，總混時(shí)間5 min，混合頻率30 Hz；將總混顆粒使用ZPW23 壓片機(jī)壓片，φ8.0 mm；將片芯使用BG1-5 高效包衣機(jī)進(jìn)行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，處方組成如表2 所示。

表2 粉末壓片處方組成列表

1.2.3 干法制粒技術(shù)制備利格列汀片

稱取3 000 片處方量的利格列汀、甘露醇(粉碎過(guò)80 目篩)、微晶纖維素PH-102、預(yù)膠化淀粉、交聯(lián)聚維酮CL、二氧化硅于SYH-10 型三維運(yùn)動(dòng)混合機(jī)預(yù)混，混合時(shí)間20 min，混合頻率：30 Hz；將混合好的粉末加入到RCG100-25L 型干法制粒機(jī)進(jìn)行干法制粒，進(jìn)料速度：10 r/min、壓輥速度：10 r/min、設(shè)定壓力：16 MPa，即得顆粒；將制備好的顆粒加入到SYH-10 型三維運(yùn)動(dòng)中，再加入硬脂酸鎂進(jìn)行總混，總混時(shí)間5 min，混合頻率30 Hz；將總混顆粒使用ZPW23壓片機(jī)壓片，φ8.0 mm；將片芯使用BG1-5 高效包衣機(jī)進(jìn)行包薄膜衣，包衣增重2%～4%，即得利格列汀片，處方組成如表3 所示。

表3 干法制粒處方組成列表

1.2.4 溶出曲線的測(cè)定

(1) 色譜條件：色譜柱為辛烷基硅烷鍵為填充劑；流動(dòng)相為磷酸鹽緩沖液(取磷酸二氫銨2.6，加水1 000 mL 使溶解，并用磷酸調(diào)節(jié)pH 值至3.0±0.1)-乙腈(78∶22)；流速為1.0 mL/min；柱溫為50 ℃；檢測(cè)波長(zhǎng)為295 nm；進(jìn)樣體積10 μL。

(2)系統(tǒng)適用性：重復(fù)進(jìn)利格列汀對(duì)照品溶液5 次，利格列汀峰面積的RSD 應(yīng)不大于2.0%，拖尾因子不得過(guò)2.5。

(3)溶出條件：照溶出度測(cè)定法(中國(guó)藥典2020 版第一法)，溶出介質(zhì)分別為0.1mol/L 鹽酸、水、pH 值6.8 磷酸鹽緩沖液、pH 值4.5 醋酸鹽緩沖液，溶出體積900 mL，轉(zhuǎn)速為50 r/min，經(jīng)5、10、15、30、45 min時(shí)取樣。

(4)測(cè)定方法：分別取不同時(shí)間點(diǎn)的溶出液，過(guò)濾，棄去初濾液1 mL 以上，取續(xù)濾液作為供試品；另精密稱取利格列汀對(duì)照品約14 mg，置50 mL 干燥的棕色量瓶中，加甲醇5 mL 使溶解，加入溶出介質(zhì)35 mL，超聲20 min 使利格列汀對(duì)照品溶解，用溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液5 mL，置250 mL 棕色量瓶中，加溶出介質(zhì)稀釋至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。精密量溶出介質(zhì)、對(duì)照品溶液、供試品溶液，分別注入液相色譜儀，計(jì)算溶出曲線。

2 結(jié)果和分析

2.1 方法學(xué)考察結(jié)果

2.1.1 線性與范圍

通過(guò)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線求出利格列汀的線性回歸方程為y=116.7x-2.863 4，R2為0.999 8，利格列汀在0.56～7.84 μg/mL 呈良好的線性關(guān)系。

2.1.2 精密度

取線性100% 的溶液按照溶出曲線的測(cè)定色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6 次，計(jì)算6 次的精密度，RSD 為0.3%，表明測(cè)定溶出曲線的儀器精密度良好(表4)。

2.1.3 準(zhǔn)確度

稱取對(duì)照品適量配制成相當(dāng)于檢測(cè)濃度10%、20%、40%、80%、100%、120%的溶液；平行配樣3 份。按照溶出曲線的測(cè)定色譜條件注入液相色譜儀，結(jié)果為利格列汀的平均加樣回收率為100.0%，RSD 為0.88%，表明利用該方法測(cè)定溶出曲線的準(zhǔn)確度較好(表5)。

表5 利格列汀片溶出曲線測(cè)定回收率試驗(yàn)結(jié)果

2.1.4 溶液穩(wěn)定性

在不同時(shí)間(0、2、4、6、8、12、24 h) 分別測(cè)定供試樣品中利格列汀的峰面積，結(jié)果顯示RSD 為0.1%，說(shuō)明供試樣品溶液在24 h 內(nèi)穩(wěn)定(表6)。

表6 溶液穩(wěn)定性試驗(yàn)檢查結(jié)果

2.2 自制品溶出曲線測(cè)定結(jié)果

測(cè)定結(jié)果如表7～表10 以及圖2 ～圖5 所示。

表7 在0.1 mol/L 鹽酸的溶出曲線

表8 在水的溶出曲線

表9 在pH=6.8 磷酸鹽的溶出曲線

表10 在pH=4.5 醋酸鹽的溶出曲線

圖2 在0.1mol/L 鹽酸中溶出曲線

圖3 在水中溶出曲線

圖4 在pH=6.8 磷酸鹽中溶出曲線

3 結(jié)語(yǔ)

由于利格列汀具有低溶解、高滲透的特點(diǎn)，因此制劑的溶出情況對(duì)人體的吸收至關(guān)重要。某種程度上來(lái)說(shuō)，口服固體制劑的溶出曲線能真實(shí)反映在體內(nèi)活性成分從該制劑溶出的速率與程度。文章采用HPLC法測(cè)定了自制樣品和一批原研藥的溶出曲線，以相似因子f2 評(píng)價(jià)不同制備處方工藝樣品與原研品的溶出曲線相似性。采用濕法制粒技術(shù)，可改善物料的流動(dòng)性及可壓性，制備的樣品溶出行為主要受崩解劑加入量以及粘合劑的濃度以及制粒時(shí)間的影響，交聯(lián)聚維酮發(fā)揮毛細(xì)管作用導(dǎo)致片劑迅速崩解，玉米淀粉、預(yù)膠化淀粉自身具有很強(qiáng)的吸水膨脹性，從而瓦解片劑的結(jié)合力，膨脹率越大，崩解效率越顯著，進(jìn)而影響溶出行為。粘合劑主要影響制備顆粒的粉體學(xué)性質(zhì)松密度、粒度分布情況進(jìn)而影響自制品的溶出。粉末直壓技術(shù)通過(guò)選擇直壓的填充劑，可以改善物料的流動(dòng)性及可壓性，進(jìn)而可以保證混粉混合均勻性良好及進(jìn)而壓制成片，由于無(wú)制粒過(guò)程，溶出行為主要受崩解劑用量影響，自制品溶出行為較快[14]。干法制粒技術(shù)是在無(wú)外加液體粘合劑的情況下，經(jīng)干法制粒機(jī)上下兩只輥輪將松散的粉末壓縮團(tuán)聚成片狀，然后將壓實(shí)的粉末粉碎、整粒形成顆粒，從而使粉未的流動(dòng)性得到改善的工藝過(guò)程。溶出行為主要受崩解劑用量及顆粒粉體學(xué)性質(zhì)影響。通過(guò)調(diào)整處方組成用量以及制備工藝，最終采用濕法制粒技術(shù)制備的20220503 批樣品在四條溶出介質(zhì)的溶出曲線相似因子f2 均＞50，與原研品溶出曲線相似性較好，表明兩個(gè)制劑溶出相似[15]。

口服固體制劑進(jìn)入人體內(nèi)經(jīng)過(guò)胃腸道及各種酶的復(fù)雜環(huán)境最終潤(rùn)濕、崩解成細(xì)小顆粒，API 溶解后通過(guò)各種滲透膜最終被吸收入血，所以單純通過(guò)體外溶出曲線預(yù)測(cè)體內(nèi)生物等效情況是有局限的，仍需藥學(xué)研究者繼續(xù)開(kāi)發(fā)出體內(nèi)外相關(guān)性更強(qiáng)的評(píng)價(jià)方法。