二陳顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

摘 要：通過對古代經(jīng)典名方二陳湯基礎(chǔ)方的研究，建立現(xiàn)代劑型二陳顆粒中橙皮苷含量的測定方法。運(yùn)用高效液相色譜法測定經(jīng)典名方二陳顆粒中橙皮苷的含量，并進(jìn)行方法學(xué)驗證。結(jié)果顯示，本檢測方法專屬性強(qiáng)，陰性無干擾，橙皮苷在10.11～202.2 μg的范圍內(nèi)與峰面積積分值的線性關(guān)系良好，R2=0.999" 9，平均回收率99.89%，重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均符合要求。研究表明，高效液相色譜法測定二陳經(jīng)方顆粒中橙皮苷含量結(jié)果準(zhǔn)確可靠，精密度高，重現(xiàn)性好，可用于二陳經(jīng)方顆粒的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：二陳湯；經(jīng)典名方；顆粒；橙皮苷；HPLC；質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

中圖分類號：R283.6

經(jīng)典名方作為中醫(yī)理論的載體，是中醫(yī)藥傳承發(fā)展的突破口之一，目錄管理的經(jīng)典名方中藥復(fù)方制劑研發(fā)、上市經(jīng)典名方產(chǎn)品的二次開發(fā)、源于經(jīng)典名方的中藥新藥研發(fā)是經(jīng)典名方研發(fā)的3條路徑[1]。二陳湯出自《太平惠民和劑局方》，被公認(rèn)為是中醫(yī)方劑學(xué)中祛痰劑之代表方[2]，古代同名異方及同方異名較多。且后世醫(yī)家常以二陳湯為基礎(chǔ)加減變化，形成諸多衍化方，不但針對濕痰、還可治療熱痰、寒痰、燥痰、風(fēng)痰[3]。為方便臨床上隨癥加減用藥，文章以二陳古籍經(jīng)方為基礎(chǔ)；以傳統(tǒng)中藥理論為指導(dǎo)以水為提取溶劑，保證經(jīng)典名方原有的湯劑藥效；以現(xiàn)代制劑工藝為抓手，將原湯劑或丸劑改變?yōu)轭w粒劑，以提升中藥的生物利用度，提高穩(wěn)定性，同時有利于工業(yè)生產(chǎn)，且服用方便。文章對二陳經(jīng)方顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行深入研究分析。

1 儀器與試藥

儀器：UPH-I-10T 純水系統(tǒng)（成都超純科技公司）；SK250HP超聲清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀器公司）；SHIMADZU Prominence高效液相色譜、LC Solution工作站（日本島津）、SPD-M20A二極管陣列檢測器。

試劑：甲醇（色譜純）；水（純化水）；其余試劑（分析純）。

對照品：橙皮苷（中國藥品生物制品檢定所，批號：110721-201115）。

供試品：前期二陳經(jīng)方顆粒工藝研究過程中小試及中試樣品。

2 色譜條件

色譜柱：十八烷基硅烷鍵合硅膠填充；色譜柱（phenomenex" Luna" C18" 150×4.60mm、5μm。）

流動相：以2種流動相分別進(jìn)行試驗：1. 甲醇-醋酸-水（42：4：54） 2.甲醇-醋酸-水（35：4：61），試驗結(jié)果表明，2種流動相中，以甲醇-醋酸-水（35：4：61）作為流動相，流速為1.0 mL/min時橙皮苷峰與雜質(zhì)峰分離效果更好，因此確定以甲醇-醋酸-水（35：4：61）為流動相進(jìn)行測定。

檢測波長：以甲醇-醋酸-水（35：4：61）為流動相，使用二極管陣列檢測器，檢測得到橙皮苷的紫外全波長掃描圖譜，橙皮苷在以上色譜條件下有一吸收峰，最高峰處波長為284 nm。參考2020版《中國藥典》二陳丸橙皮苷含量測定檢測波長283 nm，故確定本方法檢測波長為283 nm。

橙皮苷紫外全波長掃描圖譜見圖1。

柱溫、流速：試驗結(jié)果表明，采用柱溫40 ℃，流速為1 mL/min時。橙皮苷與其他雜質(zhì)峰分離較好。

3 試驗方法

3.1 制備對照品溶液

在50 mL稱量瓶內(nèi)精稱橙皮苷對照品約10 mg，加甲醇溶解稀釋至刻線，搖勻，于10 mL稱量瓶中精密量取2 mL橙皮苷對照溶液，用流動相稀釋至刻度，搖勻，即得每l mL含橙皮苷40 μg[4]。

3.2 制備供試品溶液

于具塞三角瓶內(nèi)精稱二陳經(jīng)方顆粒約0.2 g，將50 mL甲醇精密加入瓶內(nèi)，密塞，稱重，超聲30 min（功率120 W，頻率40 kHz），放冷，再稱重，以甲醇補(bǔ)足減重，混勻過濾，取續(xù)濾液，即得。

3.3 系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱的理論板數(shù)、分離度、拖尾因子應(yīng)符合“高效液相色譜法”中國藥典各項下的要求。

3.4 理論板數(shù)的計算

在上述條件下，將供試品溶液注入高效液相色譜儀中，記錄色譜圖，量出供試品溶液橙皮苷峰的保留時間Tr（以分鐘或長度計算）和半峰高寬（Wh/2），按n=5.54（Tr/Wh/2）2計算色譜柱的理論板數(shù)。理論板數(shù)按橙皮苷峰計算應(yīng)不低于1 500。

3.5 分離度

“高效液相色譜法”中國藥典中規(guī)定待測峰與其他峰的分離度應(yīng)不小于1.5，按分離度的計算公式計算供試品色譜中橙皮苷的峰與其他峰的分離度，試驗表明樣品的分離度均符合規(guī)定。

分離度的計算公式為：

R=2（tR2-tR1）/（W1+W2）

式中：tR2為相鄰兩峰后一峰的保留時間；tR1為相鄰兩峰前一峰的保留時間；W1及W2為此相鄰兩峰的峰寬。

3.6 拖尾因子

“高效液相色譜法”中國藥典中規(guī)定：除另有規(guī)定外，峰高法測定時T應(yīng)在0.95～1.05，峰面積法測定時，未作明確規(guī)定。本法用峰面積法測定含量，因此不予考慮拖尾因子影響。

3.7 重復(fù)性

“高效液相色譜法”中國藥典中規(guī)定，連續(xù)進(jìn)樣5次，對照品峰面積測量值的相對標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)不大于2.0%。

精密量取橙皮苷對照品溶液（107.0 μg/L），進(jìn)樣量l0 μL，重復(fù)進(jìn)樣5次（依照上述色譜條件），結(jié)果見表2。結(jié)果的RSD為分別為0.12%、0.56％ （n=5），表明本法的重復(fù)性較好，能滿足定量分析要求，見表1。

4 結(jié)果與討論

4.1 專屬性試驗

取對照品、供試品、陰性對照品3種溶液各2份，每份分別10 μL，分別注入色譜儀。供試品與對照品溶液圖譜在相同保留時間位置均出現(xiàn)了色譜峰，而陰性對照品圖在此處并無出現(xiàn)色譜峰，因此無干擾，見表2及圖2—圖4。

4.2 線性關(guān)系考察（同一對照品精密稀釋至少5個濃度）

分別精密吸取橙皮苷對照品溶液（202.20 μg/L）0.5、1、2、4、6 mL，置于l0 mL稱量瓶，加甲醇至刻度線，搖勻，制成濃度分別為10.11、20.22、40.44、80.88，

121.32 μg/L系列對照品溶液。精密量取原對照品溶液（202.20 μg/L）及上述5份稀釋后對照品溶液，各l0 μL，分別注入液相色譜儀進(jìn)行測定，橫坐標(biāo)（X）為橙皮苷質(zhì)量濃度，縱坐標(biāo)（Y）為峰面積積分值，得Y=17 761X+2 411.5，R2=0.999 9的線性回歸方程。結(jié)果表明，橙皮苷在10.11～202.2 μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積積分值呈良好的線性關(guān)系，見表3及圖5。

4.3 重復(fù)性試驗（供試品同一濃度連續(xù)進(jìn)樣6次）

取同一批樣品，依法制備供試品溶液6份，各進(jìn)樣10 μL。平均含量為12.95 mg/g，RSD為1.84％（n=6），見表4。

4.4 準(zhǔn)確度（加樣回收）

精稱6份已知含量的樣品（12.95 mg/g）約0.02 g，按供試品溶液方法制備。并各加入橙皮苷對照品溶液（40.44 μg/L）7.5 mL，對照品加入量即為0.303 3 mg，制加樣回收供試品溶液，分別進(jìn)樣10 μL，測定結(jié)果見表5。

回收率%=[（實測橙皮苷量-樣品中橙皮苷量）/添加橙皮苷量]×100%

4.5 穩(wěn)定性試驗

同一供試品溶液，分別于0、1、2、4、8、12、24/h各進(jìn)樣10 μL。橙皮苷的不同時段的峰面積見表6。RSD為1.35％（n=7），表明在24 h內(nèi)供試品溶液穩(wěn)定。

4.6 耐用性試驗

為了確保本方法在測定條件有小的變動時，測定結(jié)果不受影響，現(xiàn)通過單因素分析，分別對柱溫（40 ℃±2 ℃）、流動相組成（甲醇：醋酸水=35±2：65±2）、流速（1.0±2 mL/min）做微小調(diào)整后，分別按照含量測定方法進(jìn)行測定。取橙皮苷對照品溶液濃度為40.44 μg/L，精密稱取樣品一份樣品0.219 8 g處理后，分別在上述色譜條件下各進(jìn)樣10μL，所得結(jié)果RSD為0.49%，見表7（As為對照品峰面積；At為樣品峰面積）。說明本方法具有可靠性。

4.7 二陳顆粒含量測定

取二陳經(jīng)方顆粒不同批次各3批，各批分別精稱2份，每份0.2 g左右，制備供試品溶液后，并分別進(jìn)樣2針，各10 μL，測定，計算樣品含量。3份樣品的平均值為14.206 9 mg/g，由于樣品量較少，所以將平均含量下浮60%：14.20 mg/g×60%=10.57 mg/g≈8.52 mg/g。每袋裝量為3 g，所以限度暫定為：本品每袋含陳皮以橙皮苷（C28H34O15）計，不得少于0.025 g，見表8。

本法以陳皮中有效成分橙皮苷為含量測定指標(biāo)，采用高效液相色譜法進(jìn)行測定，方法簡便準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，可有效控制二陳經(jīng)方顆粒的質(zhì)量，因此將該方法收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

參考文獻(xiàn)：

[1]" 楊洪軍，黃璐琦. 經(jīng)典名方的研發(fā)：中醫(yī)藥傳承發(fā)展的突破口之一[J]. 中國現(xiàn)代中藥，2018，20（7）：775-779.

[2]" 張紅麗. 二陳湯的文獻(xiàn)學(xué)研究[D]. 石家莊：河北中醫(yī)院，2005，1.

[3]" 彭欣. 二陳湯及其類方研究[D]. 濟(jì)南：山東中醫(yī)藥大學(xué)，2001.

[4]" 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典（一部）[M]. 北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2020.

*基金項目：甘肅省自然科學(xué)基金項目“中藥經(jīng)典名方復(fù)方制劑工藝及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究”（22JR5RA802）；甘肅省藥品監(jiān)督管理局科學(xué)技術(shù)項目“植物源中藥材農(nóng)藥殘留檢測關(guān)鍵技術(shù)研究”（2022GSMPA-KL08）。

△通信作者：崔建軍（1974-），男，高級工程師，研究方向：中藥材資源開發(fā)與應(yīng)用。E-mail：412143587@qq.com。