銅藻多糖對H2O2誘導的HaCaT細胞氧化應激的保護作用

魏雙艷, 蔡春爾, 何培民, 賈睿

銅藻多糖對H2O2誘導的HaCaT細胞氧化應激的保護作用

魏雙艷, 蔡春爾, 何培民, 賈睿*

(上海海洋大學海洋生態(tài)與環(huán)境學院，上海 201306)

銅藻；多糖；人角質形成細胞；氧化應激；體外抗氧化

機體內活性氧成分與抗氧化系統(tǒng)之間平衡失調所引起的一系列適應性的反應稱為氧化應激(oxidative stress, OS)[1]。通常，正常代謝產生的活性氧(reactive oxygen species, ROS)可以被細胞內源性抗氧化系統(tǒng)清除[2–3]。然而，過度的環(huán)境壓力(如紫外線輻射和化學物質等)會導致異常的活性氧產生，從而導致多種疾病(如癌癥、炎癥、糖尿病、阿爾茨海默病和衰老等)[4]。因此，具有較強的活性氧清除能力和低毒性或無毒性的抗氧化成分可能是開發(fā)針對氧化應激相關疾病的理想治療劑。由于天然化合物具有生物活性高、無毒的優(yōu)點，從陸地和海洋生物中分離生物活性化合物引起了廣泛的關注[5–7]。海藻含有多種獨特新穎的活性成分如：多酚化合物、甾醇類化合物、不飽和脂肪酸和多糖等[6,8]，具有多種生物活性如：抗癌、降壓、消炎、抗氧化以及抗糖尿病等[5,9–11]，已被廣泛應用于醫(yī)藥、化妝品以及藥妝品等領域。海藻多糖含量尤其豐富，通常由海藻酸鹽、卡拉膠和巖藻多糖組成[12]。海藻多糖由于其獨特的理化性質，如高含量的巖藻糖、半乳糖、糖醛酸和硫酸鹽等，具有很強的生物活性[13–14]。已有報道，從海藻中分離的多糖具有較好的抗氧化活性[15–16]。

1 材料和方法

1.1 材料和儀器

銅藻()于2020年10月采自浙江省枸杞島；人表皮角質形成細胞(HaCaT)購自上海信裕生物科技有限公司。

Nicolet iS5傅里葉變換紅外光譜儀(美國ThermoScientific公司)、CO2培養(yǎng)箱(上海躍進醫(yī)療器械有限公司)、TS2RFL倒置顯微鏡(日本Nikon公司)、F97 熒光分光光度計(上海棱光技術有限公司)、UV-1800型紫外分光光度計(日本島津公司)、iMark酶標儀(美國Bio-Rad公司)等。

1.2 SHP的制備

將新鮮的銅藻用自來水清洗3遍，將水脫干, 在60 ℃烘箱中烘干備用，然后用超微粉碎機粉碎, 過80目篩得到藻粉。稱取藻粉20 g，采用95%酒精浸泡72 h以脫脂脫色。濾渣烘干后按照1:20加蒸餾水，90 ℃煮4 h，用500目的紗布過濾得到濾液, 然后將濾渣重復煮1次，合并2次濾液，抽濾過濾掉濾渣，加熱濃縮至100 mL，加入4倍體積95%乙醇，于4 ℃冰箱靜置24 h，10 989×離心得沉淀。最后沉淀經無水乙醇、丙酮和乙醚洗滌3次以脫水干燥，平均得到1.93 g的SHP粉末。

1.3 SHP的紅外光譜表征

稱取10 mg干燥的SHP樣品，利用Nicolet iS5傅里葉變換紅外光譜儀對SHP進行結構表征，采用KBr壓片法進行測定[28]。

1.4 SHP的體外抗氧化作用

將SHP配制成體積濃度為0.025、0.05、0.1、0.2、0.5、1 mg/mL，參照DPPH自由基和羥自由基測定試劑盒(南京建成生物工程研究所)說明書檢測SHP溶液的DPPH自由基和羥自由基的清除能力；根據超氧陰離子自由基和總抗氧化能力試劑盒(南京建成生物工程研究所)說明書測定SHP溶液(0.5、1、1.5、2、2.5、3 mg/mL)對超氧陰離子自由基清除能力和總抗氧化能力。

1.5 SHP對HaCaT細胞的保護作用

HaCaT細胞的培養(yǎng) 將HaCaT細胞分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清及含1%抗生素的高糖DMEM培養(yǎng)基中，置于5% CO2、37 ℃細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，根據細胞生長的狀況，每2～3 d將舊的細胞培養(yǎng)基全部更換成新鮮的細胞培養(yǎng)基，當細胞達到80%～90%融合度時用0.25%的胰蛋白酶進行消化傳代,然后取處于對數(shù)生長期的細胞進行實驗。

H2O2損傷模型的確定 選擇對數(shù)生長期的HaCaT細胞制成1×105cells/mL的細胞懸液, 以每孔100L接種于96孔板中，每組設6個復孔，置于5% CO2、37 ℃細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)，24 h后待細胞狀態(tài)穩(wěn)定后，分別加入終濃度為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6、0.7 mmol/L的H2O2繼續(xù)孵育24 h。用CCK-8試劑盒(上海碧云天技術有限公司)檢測細胞存活率，選擇細胞存活率接近50%的H2O2濃度作為最佳作用濃度。細胞存活率(%)=(A藥物-A空白)/(A對照- A空白)×100%, 式中，A藥物為實驗組吸光度值，A空白為空白組吸光度值；A對照為對照組吸光度值。

SHP對HaCaT細胞的毒性 將HaCaT細胞制成1×105cells/mL的細胞懸液, 接種于96孔板中, 每孔100L，每組設置6個復孔，在細胞培養(yǎng)箱孵育24 h后, 用含有不同濃度的SHP培養(yǎng)基(0、25、50、75、100、150、200、500g/mL)處理細胞，繼續(xù)孵育24 h后，用CCK-8法測定SHP對細胞的安全劑量。

SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞活力的保護作用 取處于對數(shù)生長期的HaCaT細胞，用胰酶消化并制備單細胞懸液，以細胞密度為1×105cells/mL接種于96孔板，每孔100L，放置于5% CO2、37 ℃細胞培養(yǎng)箱內培養(yǎng)。待細胞貼壁后，向多糖保護組加入等體積的SHP (25、50和100g/mL), 孵育1 h后，多糖保護組和H2O2損傷組分別使用含H2O2(終濃度為0.5 mmol/L)的培養(yǎng)基處理HaCaT細胞，而空白對照組加入等體積的培養(yǎng)基。每組設6個復孔，孵育24 h后，用CCK-8法測定細胞活力?？瞻讓φ战M：不加H2O2，不加SHP; H2O2損傷組：加H2O2損傷，不加SHP; 多糖保護組: 加SHP預保護1 h后加H2O2。

SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞ROS的清除作用 將HaCaT細胞以1×105cells/mL的密度接種于6孔板，每孔加入2 mL，并設立空白對照組、H2O2損傷組和多糖保護組。處理結束后，各孔加入終濃度為10g/mL的DCFH-DA，在細胞培養(yǎng)箱中孵育30 min，每隔5 min搖晃1次，以便于探針與細胞充分接觸，且全程避光操作。孵育結束后，用預熱的培養(yǎng)基清洗2次，然后收集細胞于熒光顯微鏡下拍照并用熒光分光光度計測定細胞內的熒光強度。將空白對照組的熒光強度設置為100%，其他組與空白對照組熒光強度相比，以計算其他組細胞內的熒光強度。

SHP對細胞內的丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響 將細胞接種到6孔板，每孔加入2 mL，設立空白對照組、H2O2損傷組和多糖保護組。處理結束后移除原培養(yǎng)基，并用PBS輕輕漂洗2遍，然后用細胞刮板輕輕刮取，離心并倒去上清液，加200L雙蒸水，利用反復凍融法破碎細胞，離心后取上清液，參照SOD和MDA的試劑盒(南京建成生物工程研究所)說明書進行測定。

1.6 數(shù)據處理

采用SPSS 25.0軟件進行數(shù)據統(tǒng)計分析，采用單因素方差分析(ANOVA)進行顯著性分析。<0.05表示有顯著差異；<0.01表示有極顯著差異。

2 結果和分析

2.1 SHP的紅外光譜表征

通過紅外光譜儀對SHP進行簡單表征(圖1), 在3 432 cm–1處的吸光度是O-H特征伸縮振動峰, 在2 938 cm–1處的吸光度是C-H特征伸縮振動峰; 在1 625 cm–1處的特征峰為H-O-H，這表明樣品中存在水分。此外，在1 200 cm–1處的吸收峰表示S=O的伸縮振動，即硫酸鹽的強烈伸縮振動，而在842 cm–1處的吸收峰為C-O-S的不對稱伸縮振動，即硫酸鹽的彎曲振動。

2.2 SHP的體外抗氧化活性

2.3 SHP對HaCaT細胞的保護作用

H2O2誘導的細胞損傷模型建立 用終濃度分別為0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6和0.7 mmol/L的H2O2處理HaCaT細胞相同時間后，采用CCK-8法檢測HaCaT細胞的活力變化。由圖3可見，HaCaT細胞活力與H2O2濃度呈負相關，即隨H2O2濃度增加，細胞活力迅速下降，當H2O2為0.5 mmol/L時，HaCaT細胞的活力為62.56%，與空白對照達極顯著差異(<0.01)。因此選用0.5 mmol/L H2O2作為HaCaT細胞的損傷濃度。

圖1 SHP的紅外光譜

圖2 SHP的自由基清除能力

圖3 H2O2對HaCaT細胞活力的影響

SHP對HaCaT細胞的毒性 采用CCK-8法分析SHP對HaCaT細胞的毒性(圖4)，當SHP為25～100g/mL時，HaCaT細胞活性與空白對照沒有顯著差異(>0.05)。但當SHP濃度大于100g/mL時, 細胞活力明顯下降，可能是高濃度SHP對HaCaT細胞產生了細胞毒性。因此在后續(xù)實驗中選用25、50、100g/mL 3個劑量來探究SHP對H2O2誘導HaCaT細胞氧化應激的保護作用。

圖4 SHP對HaCaT細胞活力的影響

SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞活力的保護作用 與空白對照相比，0.5 mmol/L H2O2處理的HaCaT細胞活力極顯著下降(<0.01)，為(56.85± 2.63)%；而25、50、100g/mL SHP處理的HaCaT細胞活力呈劑量依賴性增加，分別為(62.75± 1.96)%、(70.62±3.30)%、(80.57±2.91)% (圖5)。這表明SHP預處理后對H2O2誘導的HaCaT細胞活力具有一定的保護作用，SHP可以有效的減弱H2O2誘導的HaCaT細胞氧化應激損傷。

圖5 SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞氧化損傷的影響。柱上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞內ROS的清除作用 由圖6可見，與空白對照相比，H2O2誘導的HaCaT細胞熒光強度明顯增強，說明HaCaT細胞內ROS含量極顯著增強(<0.01)。但0和25g/mL SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞內ROS水平沒有顯著差異。然而當SHP濃度達50和100g/mL時，HaCaT細胞內ROS水平呈極顯著降低(<0.01)。同時在熒光顯微鏡下觀察的熒光圖像也得到了相似的結果，說明一定濃度范圍的SHP可以有效清除細胞內ROS。

SHP對MDA含量和SOD活性的影響 與空白對照相比，H2O2誘導的HaCaT細胞SOD活力顯著降低(<0.01)，MDA含量顯著升高(<0.01), 但25、50、100g/mL SHP處理的HaCaT細胞SOD活力呈劑量依賴性增加，MDA含量呈劑量依賴性顯著降低(<0.05)(表1)。這說明SHP可以顯著降低H2O2誘導的HaCaT細胞內MDA含量，從而使細胞避免受到氧化應激損傷。

3 結論和討論

與陸生植物棲息環(huán)境相比，海藻具有獨特新穎的分子結構以及生理生化性質，其中多糖類物質依然是近年來眾多學者的研究熱點，廣泛應用于各個領域[29–31]。本研究采用水提法提取銅藻多糖不僅成本低廉而且易于操作，容易實現(xiàn)多糖的規(guī)?；a。紅外光譜結果顯示出SHP的結構特征，2 938 cm–1處的吸收帶是C-H的伸縮振動特征峰，說明多糖的存在[32]，1 260和814 cm–1處的峰是S=O和C-O-S的不對稱伸縮振動，表明SHP中含有硫酸鹽基團[33], 因此可以推測SHP是硫酸多糖[34]。本研究通過測定SHP對DPPH自由基、超氧陰離子自由基、羥自由基以及總抗氧化能力來探究SHP的抗氧化活性，結果表明SHP在體外具有一定的抗氧化能力，并且其抗氧化能力呈現(xiàn)出一定的濃度依賴性。

圖6 SHP對H2O2誘導的HaCaT細胞內ROS生成的影響。A: 熒光分光光度計結果; B: 熒光圖像。柱上不同字母表示差異顯著(P<0.05)。

表1 SHP對HaCaT細胞內SOD活力和MDA含量的影響

數(shù)據后不同字母表示差異顯著(<0.05)。

Data followed by different letters indicate significant difference at 0.05 level.

近年來，利用H2O2建立細胞氧化損傷模型被廣泛應用于評價天然化合物對氧化應激的保護作用[1,19,21,28]，特別是利用多糖作為天然的抗氧化劑已經引起了眾多學者的廣泛關注。Wang等[1]從羊棲菜()中分離的多糖可以顯著降低H2O2誘導的Vero細胞內ROS水平、細胞凋亡等，其對細胞氧化損傷具有明顯的保護作用。郭子葉等[35]研究表明滸苔多糖可以降低H2O2對HSF細胞的氧化損傷，提高細胞的自由基清除能力，并且減少細胞的脂質過氧化作用。由于H2O2可能會誘導細胞死亡，因此細胞存活率也是衡量H2O2誘導氧化應激的理想指標，因此本研究通過不同濃度的誘導優(yōu)化最終選用0.5 mmol/L H2O2作為誘導HaCaT細胞的最優(yōu)氧化應激模型，并利用該模型對SHP進行了體外抗氧化研究。本實驗結果表明，SHP可以呈劑量依賴性地提高H2O2誘導的HaCaT細胞的存活率。除此之外，細胞內積累過量的ROS將會導致脂質過氧化、蛋白質氧化以及DNA損傷等，最終導致細胞死亡[36]。本研究結果還表明，H2O2誘導的HaCaT細胞內的ROS水平明顯高于對照, 而當添加SHP時, H2O2誘導的HaCaT細胞內ROS水平呈劑量依賴性減弱，細胞存活率增加也支持這一觀點。

在正常情況下，細胞具有內源性抗氧化系統(tǒng),其通過產生超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶(CAT)等抗氧化酶來保護細胞避免遭受ROS的損傷[37]。SOD是抗氧化酶防御系統(tǒng)中第一道也是最重要的一道防線，其可以清除細胞內ROS，特別是超氧陰離子自由基，防止脂質過氧化，從而提升生物體的抗氧化能力[38]。本實驗結果表明，H2O2誘導的HaCaT細胞的抗氧化酶SOD活力與空白對照組相比顯著下降，表明HaCaT細胞在H2O2誘導下產生大量的自由基，從而抗氧化酶SOD活性得到抑制、氧化應激程度加深[39]。然而，在經過SHP預處理后其細胞的SOD活力呈劑量依賴性增加，表明減弱了細胞氧化應激損傷程度。脂質過氧化在生物系統(tǒng)中被認為是一種毒理學現(xiàn)象，其會導致各種病理狀況，而H2O2會增強細胞系統(tǒng)中的脂質過氧化[40–41]。MDA是公認的脂質過氧化作用的最終分解產物, 其含量的多少反映了細胞損傷的程度，從而可以間接地反映細胞氧化應激的受損程度[42]。本研究結果表明，SHP呈劑量依賴性降低了H2O2誘導的HaCaT細胞中MDA含量。因此SHP可以阻止過氧自由基的積累，保護HaCaT細胞免受H2O2誘導的細胞損傷。在本研究中，SHP能夠顯著提高H2O2誘導氧化損傷的HaCaT細胞SOD活力，可以有效清除細胞內ROS，阻止脂質過氧化，并且顯著降低細胞內MDA的含量，從而對H2O2誘導HaCaT細胞氧化應激起到保護作用。以上試驗結果證實了SHP具有保護細胞免受H2O2誘導的氧化應激的抗氧化潛力。

本研究采用自由基清除和細胞實驗證實SHP具有較好的體外抗氧化作用，表明SHP具有作為天然抗氧化劑的潛力，可以用來增強對氧化應激的保護作用，以評估SHP作為化妝品和功能性食品成分的應用。從銅藻中提取的多糖作為褐藻多糖的一種，具有良好的對氧化應激損傷的保護作用，那么褐藻多糖可能也具有較好的體外抗氧化活性，并且由于綠色天然無毒的優(yōu)點，因此褐藻多糖作為原料開發(fā)新型的功能性化妝品具有廣闊的前景，同時將其應用到氧化應激等相關疾病的防治也具有一定的可能性。褐藻多糖的抗氧化活性可能與硫酸根含量、分子量、結構組成和溶解度有關，這還需進一步的探究。

[1] WANG L, OH J Y, KIM H S, et al. Protective effect of polysaccharides from celluclast-assisted extract ofagainst hydrogen peroxide-induced oxidative stressin Vero cells andin zebrafish [J]. Int J Biol Macromol, 2018, 112: 483–489. doi: 10.1016/j. ijbiomac.2018.01.212.

[2] WANG L, JO M J, KATAGIRI R, et al. Antioxidant effects of citrus pomace extracts processed by super-heated steam [J]. LWT Food Sci, 2018, 90: 331–338. doi: 10.1016/j.lwt.2017.12.024.

[3] FERNANDO I P S, KIM M, SON K T, et al. Antioxidant activity of marine algal polyphenolic compounds: A mechanistic approach [J]. J Med Food, 2016, 19(7): 615–628. doi: 10.1089/jmf.2016.3706.

[4] KIM Y S, HWANG J W, SUNG S H, et al. Antioxidant activity and protective effect of extract ofL. flower on-butyl hydroperoxide-induced oxidative hepatotoxicity [J]. Food Chem, 2015, 168: 572–579. doi: 10.1016/j.foodchem.2014.07.106.

[5] WANG L, PARK Y J, JEON Y J, et al. Bioactivities of the edible brown seaweed,: A review [J]. Aquaculture, 2018, 495: 873–880. doi: 10.1016/j.aquaculture.2018.06.079.

[6] THOMAS N V, KIM S K. Beneficial effects of marine algal com- pounds in cosmeceuticals [J]. Mar Drugs, 2013, 11(1): 146–164. doi: 10.3390/md11010146.

[7] WEI S Y, CAI C E, HE P M, et al. Application of algae bioactive substances in cosmetics [J]. Chin J Mar Drugs, 2021, 40(3): 71–78. [魏雙艷, 蔡春爾, 何培民, 等. 藻類生物活性物質在化妝品中的應用[J]. 中國海洋藥物, 2021, 40(3): 71–78. doi: 10.13400/j.cnki.cjmd. 2021.03.010.]

[8] GUILLERME J B, COUTEAU C, COIFFARD L. Applications for marine resources in cosmetics [J]. Cosmetics, 2017, 4(3): 35. doi: 10. 3390/cosmetics4030035.

[9] FERNANDO I P S, JAYAWARDENA T U, SANJEEWA K K A, et al. Anti-inflammatory potential of alginic acid fromagainst urban aerosol-induced inflammatory responses in keratinocytes and macrophages [J]. Ecotoxicol Environ Saf, 2018, 160: 24–31. doi: 10.1016/j.ecoenv.2018.05.024.

[10] FERNANDO I P S, SANJEEWA K K A, KIM H S, et al. Apoptotic and antiproliferative properties of 3‐hydroxy‐5‐steroidal congeners from a partially purified column fraction ofagainst HL‐60 and MCF‐7 cancer cells [J]. J Appl Toxicol, 2018, 38(4): 527–536. doi: 10.1002/jat.3559.

[11] WANG L, LEE W W, OH J Y, et al. Protective effect of sulfated polysaccharides from celluclast-assisted extract ofagainst ultraviolet B-induced skin damage by regulating NF-κB, AP-1, and MAPKs signaling pathwaysin human dermal fibroblasts [J]. Mar Drugs, 2018, 16(7): 239. doi: 10.3390/md16070239.

[12] LEE W W, KANG N, KIM E A, et al. Radioprotective effects of a polysaccharide purified from-fermentedagainst oxidative stress caused by gamma ray-irradiation in zebrafishmodel [J]. J Funct Foods, 2017, 28: 83–89. doi: 10. 1016/j.jff.2016.11.004.

[13] SARAVANA P S, CHO Y N, PATIL M P, et al. Hydrothermal degra- dation of seaweed polysaccharide: Characterization and biological activities [J]. Food Chem, 2018, 268: 179–187. doi: 10.1016/j.food chem.2018.06.077.

[14] SEEDEVI P, MOOVENDHAN M, SUDHARSAN S, et al. Isolation and chemical characteristics of rhamnose enriched polysaccharide from[J]. Carbohydr Polym, 2018, 195: 486–494. doi: 10.1016/j.carbpol.2018.05.002.

[15] HE J Z, RU Q M, DONG D D, et al. Chemical characteristics and antioxidant properties of crude water soluble polysaccharides from four common[J]. Molecules, 2012, 17(4): 4373–4387. doi: 10.3390/molecules17044373.

[16] KIM S Y, KIM E A, KIM Y S, et al. Protective effects of poly- saccharides fromleaves against oxidative stresses [J]. Int J Biol Macromol, 2016, 91: 804–811. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2016. 05.111.

[17] LIU F, LIU X F, WANG Y, et al. Insights on thegolden tides in the Yellow Sea inferred from morphological and molecular data [J]. Limnol Oceanogr, 2018, 63(4): 1762–1773. doi: 10.1002/lno.10806.

[18] MATTIO L, PAYRI C E. 190 years oftaxonomy, facing the advent of DNA phylogenies [J]. Bot Rev, 2011, 77(1): 31–70. doi: 10. 1007/s12229-010-9060-x.

[19] FERNANDO I P S, DIAS M K H M, MADUSANKA D M D, et al. Human keratinocyte UVB-protective effects of a low molecular weight fucoidan frompurified by step gradient ethanol precipitation [J]. Antioxidants, 2020, 9(4): 340. doi: 10.3390/antiox 9040340.

[20] WEN Z S, XIANG X W, JIN H X, et al. Composition and anti- inflammatory effect of polysaccharides fromin RAW264.7 macrophages [J]. Int J Biol Macromol, 2016, 88: 403–413. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2016.02.025.

[21] SANJEEWA K K A, FERNANDO I P S, KIM S Y, et al.andanti-inflammatory activities of high molecular weight sulfated polysaccharide; containing fucose separated from: Short communication [J]. Int J Biol Macromol, 2018, 107: 803–807. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2017.09.050.

[22] SHAO P, CHEN X X, SUN P L. Improvement of antioxidant and moisture-preserving activities ofpolysaccharide enzymatic hydrolyzates [J]. Int J Biol Macromol, 2015, 74: 420–427. doi: 10.1016/j.ijbiomac.2014.12.021.

[23] YANG Y Y. Comprehensive application of four algae in cosmetics [D]. Shanghai: Shanghai Ocean University, 2016. [楊亞云. 四種大型海藻在化妝品上綜合應用研究 [D]. 上海: 上海海洋大學, 2016.]

[24] ZHANG Y, ZHANG M S, SHI Y P, et al. Comparison on antioxidant activity of polysaccharide fraction from[J]. Food Res Dev, 2018, 39(6): 12–18. [張玉, 張綿松, 史亞萍, 等. 銅藻活性組分多糖的體外抗氧化性研究 [J]. 食品研究與開發(fā), 2018, 39(6): 12–18. doi: 0.3969/j.issn.1005-6521.2018.06.003.]

[25] GU L X, LIU L J, HE S T, et al. Study on water extraction technology and antioxidative activity of polysaccharides from[J]. J Anhui Agric Sci, 2014, 42(29): 10139–10141. [顧麗霞, 劉麗佳, 何淑婷, 等. 銅藻多糖水提法工藝優(yōu)化及其抗氧化活性研究 [J]. 安徽農業(yè)科學, 2014, 42(29): 10139–10141. doi: 10.13989/j.cnki. 0517-6611.2014.29.038.]

[26] PARK N H, PARK J S, KANG Y G, et al. Soybean extract showed modulation of retinoic acid-related gene expression of skin and photo- protective effects in keratinocytes [J]. Int J Cosmet Sci, 2013, 35(2): 136–142. doi: 10.1111/ics.12014.

[27] FENG B, WU Y, ZHAO Y, et al. Study of cosmetological efficacy ofprescriptions at cell theoretical level [J]. China Surfact Deterg Cosmet, 2014, 44(10): 568–571. [馮冰, 吳越, 趙亞, 等. 金釵石斛復方在細胞水平的美容功效研究 [J]. 日用化學工業(yè), 2014, 44(10): 568–571. doi: 10.13218/j.cnki.csdc.2014.10.127.]

[28] JAYAWARDENA T U, WANG L, SANJEEWA K K A, et al. Anti- oxidant potential of sulfated polysaccharides from; protective effect against oxidative stress in inand inzebrafish model [J]. Mar Drugs, 2020, 18(4): 212. doi: 10.3390/md1 8040212.

[29] HEO S J, JEON Y J. Evaluation of diphlorethohydroxycarmalol isolated fromfor radical scavenging activity and its protective effect against H2O2-induced cell damage [J]. Proc Biochem, 2009, 44(4): 412–418. doi: 10.1016/j.procbio.2008.12.005.

[30] HEO S J, JEON Y J. Protective effect of fucoxanthin isolated fromon UV-B induced cell damage [J]. J Photo- chem Photobiol B, 2009, 95(2): 101–107. doi: 10.1016/j. jphotobiol. 2008.11.011.

[31] KIM H S, WANG L, JAYAWARDENA T U, et al. High-performance centrifugal partition chromatography (HPCPC) for efficient isolation of diphlorethohydroxycarmalol (DPHC) and screening of its antioxidant activity in a zebrafish model [J]. Proc Biochem, 2020, 88: 189–196. doi: 10.1016/j.procbio.2019.09.027.

[32] OLASEHINDE T A, MABINYA L V, OLANIRAN A O, et al. Chemical characterization, antioxidant properties, cholinesterase inhi- bitory and anti-amyloidogenic activities of sulfated polysaccharides from some seaweeds [J]. Bioact Carbohydr Diet Fibre, 2019, 18: 100182. doi: 10.1016/j.bcdf.2019.100182.

[33] YE Y H, JI D S, YOU L J, et al. Structural properties and protective effect ofpolysaccharides against ultraviolet B radiation in hairless Kun Ming mice [J]. J Funct Foods, 2018, 43: 8–16. doi: 10.1016/j.jff.2018.01.025.

[34] ZHANG R, ZHANG X X, TANG Y X, et al. Composition, isolation, purification and biological activities ofpolysaccharides: A review [J]. Carbohydr Polym, 2020, 228: 115381. doi: 10.1016/j.carbpol.2019.115381.

[35] GUO Z Y, CAI C E, GENG Z L, et al. Study on potential use of crude polysaccharides fromin cosmetic [J]. Chin J Mar Drugs, 2014, 33(2): 57–62. [郭子葉, 蔡春爾, 耿中雷, 等. 滸苔粗多糖化妝品開發(fā)潛力研究 [J]. 中國海洋藥物, 2014, 33(2): 57–62. doi: 10. 13400/j.cnki.cjmd. 2014.02.010.]

[36] SHARMA P, JHA A B, DUBEY R S, et al. Reactive oxygen species, oxidative damage, and antioxidative defense mechanism in plants under stressful conditions [J]. J Bot, 2012, 2012: 217037. doi: 10.1155/ 2012/217037.

[37] Lü H L. Free radicals and human aging [J]. Sci Technol Inf, 2011(8): 253. [呂慧玲. 自由基與人類衰老 [J]. 科技資訊, 2011(8): 253. doi: 10.16661/j.cnki.1672-3791.2011.08.200.]

[38] CHEN Y, SUN Z, ZHOU Z G. Anti-aging effects of algae-derived bioactive substances [J]. Nat Prod Res Dev, 2017, 29(5): 893–901. [陳勇, 孫諍, 周志剛. 藻源活性物質的抗皮膚衰老作用 [J]. 天然產物研究與開發(fā), 2017, 29(5): 893–901. doi: 10.16333/j.1001-6880.2017.5. 030.]

[39] ?IMEN M Y B. Free radical metabolism in human erythrocytes [J]. Clin Chim Acta, 2008, 390(1/2): 1–11. doi: 10.1016/j.cca.2007.12.025.

[40] YOKOZAWA T, LIU Z W, CHEN C P. Protective effects ofextract and its compounds in a renal hypoxia (ischemia)- reoxygenation (reperfusion) model [J]. Phytomedicine, 2000, 6(6): 439–445. doi: 10.1016/S0944-7113(00)80072-0.

[41] LEE J H, KO J Y, OH J Y, et al. Evaluation of phlorofucofuroeckol-A isolated from(Phaeophyta) on anti-lipid peroxidationand[J]. Algae, 2015, 30(4): 313–323. doi: 10.4490/algae. 2015.30.4.313.

[42] ZHOU Y H, YU J P, LIU Y F, et al. Effects ofextract on inflammatory mediators (SOD, MDA, TNF-α, NF-κBp65, IL-6) in TNBS-induced colitis in rats [J]. Mediat Inflamm, 2006, 2006: 092642. doi: 10.1155/MI/2006/92642.

Protective Effect of Polysaccharide fromon H2O2- induced Oxidative Stress in HaCaT Cells

WEI Shuangyan, CAI Chuner, HE Peimin, JIA Rui*

(College of Marine Ecology and Environment, Shanghai Ocean University,Shanghai 201306, China)

; Polysaccharide; HaCaT cell; Oxidative stress;antioxidant

10.11926/jtsb.4567

2021-11-12

2022-02-05

國家重點研發(fā)計劃(2019YFC0312604)；上海市農委科技興農項目[滬農科推字(2017)1-13]；國家“八六三”高技術研究發(fā)展計劃(2014AA093506)；上海市大學生創(chuàng)新訓練計劃項目(S201910264057)資助

This work was supported by the National Key Research and Development Project (Grant No. 2019YFC0312604), the Project for Agriculture Science and Technology Innovation in Shanghai [Grant No. (2017)1-13], the National High Technology Research and Development Program of China (863 Program) (Grant No. 2014AA093506), and the Project for Student Innovation Training in Shanghai (Grant No. S201910264057).

魏雙艷(1997年生)，女，碩士研究生，研究方向為海藻多糖的生物活性研究。E-mail: wsy97221@163.com

通訊作者 Corresponding author.E-mail: rjia@shou.edu.cn