• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    基于UPLC-QTOF/MS的關(guān)黃母顆粒主要化學(xué)成分及腦組織移行成分研究

    2023-04-01 05:28:48彭秘張?jiān)鲋?/span>李剛蘇丹熊國營劉匡一中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第908醫(yī)院南昌0000江西中醫(yī)藥大學(xué)抑郁癥中醫(yī)證候動物模型江西省中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室南昌0000南昌市第一醫(yī)院南昌0000
    中南藥學(xué) 2023年2期
    關(guān)鍵詞:知母黃柏芍藥

    彭秘,張?jiān)鲋?,李剛,蘇丹,熊國營,劉匡一*(. 中國人民解放軍聯(lián)勤保障部隊(duì)第908醫(yī)院,南昌 0000;. 江西中醫(yī)藥大學(xué)抑郁癥中醫(yī)證候動物模型江西省中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室,南昌 0000;. 南昌市第一醫(yī)院,南昌 0000)

    女性更年期綜合征(絕經(jīng)前后諸證)中醫(yī)辨證屬肝腎陰虛證,癥見烘熱汗出、頭暈、耳鳴、腰膝酸軟或足跟痛、少寐多夢、急躁易怒等,關(guān)黃母顆粒在臨床上常應(yīng)用于婦女更年期后抑郁癥類疾病的治療,其主要成分包括熟地黃、龜甲膠、鹽關(guān)黃柏、鹽知母以及白芍。目前臨床對抑郁治療的藥物多為化學(xué)類精神藥品,普遍存在副作用大,成癮性隱患等問題。近年來,愈來愈多的藥學(xué)科研人員將目光轉(zhuǎn)移至傳統(tǒng)中藥上來,以五味子、白芍、關(guān)黃柏等藥材為主要代表。相對于關(guān)黃柏等單味藥材,已有文獻(xiàn)表明知母與關(guān)黃柏配伍聯(lián)用可顯著提高其小檗堿等生物堿的含量[1],而關(guān)黃母顆粒作為臨床療效確切的中藥復(fù)方制劑,其具體聯(lián)合用藥抗抑郁作用機(jī)制尚不清晰,藥物主要化學(xué)成分能否跨過血腦屏障直接調(diào)控神經(jīng)系統(tǒng)成為傳統(tǒng)中藥治療抑郁疾病的重要環(huán)節(jié)之一[2-3],因此,對其主要化學(xué)成分的分析及腦組織移行成分的研究顯得極為重要。

    本實(shí)驗(yàn)利用超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(UPLC-QTOF/MS)中的IDA采集技術(shù)[4-7],結(jié)合數(shù)據(jù)庫及文獻(xiàn)資料,解析藥物中可能存在的主要化學(xué)成分,并鑒定大鼠灌胃給藥后藥物的入腦成分,為進(jìn)一步明晰該藥物抗抑郁作用物質(zhì)基礎(chǔ)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)[8],也為下一步的藥物質(zhì)量控制研究奠定基礎(chǔ)。

    1 材料

    1.1 儀器

    ExionLC AD超高效液相色譜系統(tǒng)、SCIEX X500R 四極桿飛行時(shí)間質(zhì)譜儀(美國SCIEX);高速離心機(jī)(上海安亭科學(xué)儀器廠);渦旋混合器(海門市其林貝爾儀器制造有限公司);分析天平(梅特勒-托利多儀器有限公司);恒溫氮?dú)獯蹈蓛x(青島??苾x器有限公司)。

    1.2 試藥

    紅景天苷(批號:B1619137,純度≥97.5%,上海阿拉丁生化科技股份有限公司),槲皮苷(批號:111538-200301,純度≥94.5%,中國食品藥品檢定研究院),益母草苷(批號:YA220607,純度≥98%,合肥博美生物科技有限責(zé)任公司)。甲醇、乙腈(色譜級,Thermo Fisher公司),甲酸(質(zhì)譜級,美國Sigma公司)。蒸餾水采用屈臣氏蒸餾水。關(guān)黃母顆粒(批號:04210503,通化萬通藥業(yè)股份有限公司,每袋裝9 g,相當(dāng)于飲片4.8 g)。

    2 方法

    2.1 藥液樣品的制備

    取1袋藥品(相當(dāng)于飲片4.8 g),移至100 mL燒杯中,加入80%乙腈水溶液50 mL,超聲30 min,取適量超聲提取液,16 000 r·min-1離心10 min,取上清液進(jìn)樣分析。

    灌胃藥液:取1袋藥品,用25 mL蒸餾水溶解完全,現(xiàn)配現(xiàn)用。

    2.2 對照品溶液的制備

    取紅景天苷、槲皮苷及益母草苷對照品溶液適量,乙腈溶解稀釋,混合配制成為終質(zhì)量濃度為1 mg·mL-1的對照品溶液,4℃冷藏保存。

    2.3 動物實(shí)驗(yàn)

    SPF級雄性SD大鼠4只,體質(zhì)量(180±20)g [江西中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中心,動物生產(chǎn)許可證號SCXK(贛)2018-003]。正常喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn),給藥前禁食12 h,自由飲水,空白組灌胃2.5 mL蒸餾水,實(shí)驗(yàn)組灌胃2.5 mL灌胃藥液,3只大鼠分別于灌胃后1、2、4 h剝離大鼠腦組織,生理鹽水沖洗,洗凈后加入2倍于組織重量的生理鹽水溶液于勻漿機(jī)上處理,勻漿后樣本4000 r·min-1離心5 min,取上清液至-20℃保存。

    2.4 血漿及組織樣品前處理

    取各時(shí)間點(diǎn)大鼠腦勻漿后上清組織液200 μL,600 μL乙腈沉淀蛋白,渦旋震蕩2 min,16 000 r·min-1離心10 min,取上清液,室溫下氮?dú)夂懔鞔蹈桑?00 μL乙腈復(fù)溶,進(jìn)樣分析。

    2.5 色譜條件

    采用Acquity UPLC HSS T3 色譜柱(100 mm×2.1 mm,1.8 μm,Waters公司);流動相:正離子模式下0.1% 甲酸水(A)-乙腈(B),負(fù)離子模式下水(A)-乙腈(B),梯度洗脫(0~1 min,5%B;1~10 min,5%~15%B;10~35 min,15%~65%B;35~38 min,65%~95%B;38~41 min,95%B;41~41.1 min,95%~5%B,41.1~45 min,5%B);流速:0.3 mL·min-1;柱溫:40℃;進(jìn)樣體積:2 μL。

    2.6 質(zhì)譜條件

    ESI正負(fù)離子掃描,噴霧電壓+5500 V/-4500 V。Gas 1/Gas 2 55 psi;Cur Gas 35 psi;一級TOF MS掃描范圍100~1500 Da,DP 65 V。IDA掃描模式下對碎片進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,CE ±35 V,MS/MS掃描范圍50~1500 Da。采樣全程DBS(動態(tài)背景扣除)模式下運(yùn)行。

    2.7 數(shù)據(jù)處理

    使用SCIEX OS 2.0對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理,在Mass Error<5×10-6內(nèi),鑒定藥物中主要化學(xué)成分。

    3 結(jié)果

    3.1 藥液化合物分析結(jié)果

    藥液的總離子流圖見圖1。通過Sciex OS 2.0數(shù)據(jù)處理軟件,結(jié)合數(shù)據(jù)庫、對照品、部分文獻(xiàn)[9-16]以及天然產(chǎn)物裂解規(guī)律,共鑒定出159個(gè)化學(xué)成分,包括萜類27個(gè),生物堿22個(gè),黃酮類20個(gè),醇苷類11個(gè),皂苷類13個(gè),有機(jī)酸類12個(gè),氨基酸類12個(gè),木脂素類3個(gè),其他類39個(gè)。具體結(jié)果見表1。

    表1 正、負(fù)離子模式下樣品的主要化學(xué)成分Tab 1 Main chemical compositions in samples in the positive and negative ion modes

    續(xù)表1

    續(xù)表1

    續(xù)表1

    圖1 正(A)、負(fù)(B)離子模式下樣品的總離子流圖Fig 1 Chromatogram of samples in positive(A)and negative(B)ion modes

    3.2 醇苷類化合物結(jié)構(gòu)解析鑒定

    樣品中存在較多醇苷類化合物,以地黃苷為例,負(fù)離子模式下,保留時(shí)間23.07 min存在加和離子m/z651.2291 [M-H]-的信號強(qiáng)度,對應(yīng)的IDA MS/MS碎片離子中存在m/z475.1821以及m/z193.0506和m/z175.0401特征峰,結(jié)合天然產(chǎn)物質(zhì)譜裂解規(guī)律,推測m/z475.1821以及m/z193.0506可能為苷鍵斷裂后產(chǎn)生的[M-C10H8O3-H]-及[M-C21H30O11-H]-的碎片離子,m/z175.0401為m/z193.0506脫去一分子水所得。

    3.3 萜類化合物結(jié)構(gòu)解析鑒定

    在整個(gè)色譜結(jié)構(gòu)解析過程中鑒定出大量的萜類化合物,實(shí)驗(yàn)通過m/z165.0557以及m/z121.0298特征碎片離子的方式來尋找化合物,結(jié)果主要以芍藥苷、牡丹皮苷D、牡丹皮苷B、芍藥苷亞硫酸酯、氧化芍藥苷為主。以芍藥苷為例,保留時(shí)間14.64 min存在加和離子m/z479.1564 [M-H]-的信號強(qiáng)度,同時(shí)產(chǎn)生m/z449.1449 [M-CH2O-H]-的碎片離子,并再次碎裂分解為m/z327.1078的一分子苯甲酸結(jié)構(gòu)及脫去一分子苯甲酸的m/z327.1078的碎片離子[9]。

    3.4 生物堿類化合物結(jié)構(gòu)解析鑒定

    共鑒定出22種含生物堿類結(jié)構(gòu)的化合物。從峰面積響應(yīng)強(qiáng)度上來看,含量較多的為黃柏堿、木蘭花堿、藥根堿、小檗堿以及巴馬汀。該類化合物大多都含有m/z308.1275以及m/z294.1120特征碎片離子。以藥根堿為例,tR20.23 min出現(xiàn)m/z338.1379以[M]+的一級信號,二級質(zhì)譜圖中m/z323.1145為[M-CH3]+所致碎片離子,m/z322.1068則為m/z323.1145結(jié)構(gòu)中含氮的閉合環(huán)上發(fā)生電子重排反應(yīng)再次失去H分子產(chǎn)生雙鍵所得,m/z308.0915[M-CH3-CH3]+則可能是m/z338.1379母離子失去兩分子甲基后的電子重排的雙鍵產(chǎn)物[14],m/z294.1120則是m/z322.1068裂解失去CO所得。具體二級質(zhì)譜圖及裂解方式見圖2。

    圖2 藥根堿二級質(zhì)譜圖及可能存在的裂解途徑Fig 2 MS spectrogram of jatrorrhizine and possible cracking pathways

    3.5 黃酮類化合物結(jié)構(gòu)解析鑒定

    通過文獻(xiàn)檢索、數(shù)據(jù)庫以及天然產(chǎn)物裂解規(guī)律,結(jié)合數(shù)據(jù)處理軟件中Formula Finder確證方式,正離子掃描模式下共鑒定出以[M+H]+加和方式存在的槲皮素、芒果苷、新芒果苷以及牡荊苷等20種黃酮類化合物。在天然產(chǎn)物裂解規(guī)律中,黃酮類物質(zhì)一般帶有糖基類基團(tuán),失去糖基后結(jié)構(gòu)易再次發(fā)生RDA裂解反應(yīng)。以tR17.51 min金絲桃苷為例,二級碎片離子包括失去一分子葡萄糖基的m/z303.0499以及經(jīng)RDA等裂解反應(yīng)終得的m/z85.0284碎片離子。其中m/z303.0499、m/z85.0284的碎片離子是蘆丁、金絲桃苷的共有特征碎片離子,m/z301.0363是漢黃芩苷黃酮化合物的特有碎片離子[16]。

    整合裂解規(guī)律,黃酮類化合物在整體二級質(zhì)譜裂解過程中C環(huán)1位和4位上的CO鍵易脫去,產(chǎn)生新的碎片離子。以tR13.73 min槲皮素為例,m/z303.0499是槲皮素的[M+H]+一級信號,失去一分子水得二級碎片信息中m/z285.0411,再次發(fā)生縮合反應(yīng)失去一分子CO得到m/z257.0452碎片離子[16]。

    3.6 皂苷類化合物鑒定

    共鑒定出13種皂苷類成分,主要以知母皂苷A2、知母皂苷AⅢ及知母皂苷BⅡ?yàn)橹?。以tR26.88 min知母皂苷BⅡ?yàn)槔琺/z919.4895的[M-H]-離子為其一級加和方式,m/z757.4353為[M-C6H10O5-H]-碎片離子,m/z595.3787為[M-C12H20O10-H]-碎片離子,具體二級質(zhì)譜圖及可能裂解途徑見圖3。

    圖3 知母皂苷B Ⅱ二級質(zhì)譜圖及可能存在的裂解途徑Fig 3 MS spectrogram of timosaponin and possible cracking pathways

    3.7 腦組織樣本分析結(jié)果

    根據(jù)以上鑒定結(jié)果,對大鼠灌胃給藥后1、2、4 h腦組織樣本進(jìn)行UPLC-QTOF/MS鑒定分析,通過色譜圖和碎片離子信息共推測出15種入腦成分,并結(jié)合Sciex QTOF中的Swath非數(shù)據(jù)依賴型采集技術(shù),選擇目標(biāo)化合物中MS/MS響應(yīng)強(qiáng)度大的二級碎片離子形成MRMHR(High Resolution)通道進(jìn)行定量研究。結(jié)果顯示,組織樣品中含量較高的部分主要為關(guān)黃柏中生物堿類成分,以小檗堿、巴馬汀、小檗紅堿為代表,其次是芍藥苷類化合物,例如芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等。在其中4 h腦組織樣本中檢測出京尼平苷酸類熟地黃化合物,含量較小。生物樣品移行成分峰面積分布見圖4。

    圖4 不同大鼠1 h、2 h及4 h腦組織移行成分峰面積Fig 4 Peak area content of migrating components in different brain tissues at 1 h,2 h and 4 h

    4 討論

    本實(shí)驗(yàn)基于UPLC-QTOF/MS分析方法對關(guān)黃母顆粒中主要化學(xué)成分進(jìn)行了分析研究,推測出可能存在的159種主要化學(xué)成分。其中共鑒定出關(guān)黃柏類化合物39種,熟地黃類36種,鹽知母類化合物26種以及白芍類化合物35種,其中以鹽關(guān)黃柏中生物堿及白芍中萜類成分最多,并通過動物實(shí)驗(yàn)成功鑒定出15種入腦成分。

    在色譜柱選擇方面,本實(shí)驗(yàn)著重比較了C18與T3兩種色譜柱的分離情況,顆粒中主要成分為水溶性,C18色譜柱得到的色譜圖大部分色譜峰聚集在保留時(shí)間前三分之一段,造成了IDA二級掃描模式下部分化合物二級碎片的缺失,因此,通過最終實(shí)踐比較,選擇了T3色譜柱進(jìn)行分離實(shí)驗(yàn)。

    從鑒定結(jié)果表1中可見,鑒定出大量的氨基酸類、腺苷類及嘌呤類物質(zhì),其在種類及含量上遠(yuǎn)超于知母、關(guān)黃柏、白芍及熟地黃等單味藥材,考慮是顆粒劑中含有龜甲膠成分所致。通過腦組織樣品化合物成分鑒定,發(fā)現(xiàn)以小檗堿、巴馬汀、藥根堿、小檗紅堿、芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等化合物入腦含量較多。有文獻(xiàn)表明,關(guān)黃柏類生物堿化合物能通過調(diào)節(jié)花生四烯酸、甘油磷脂等代謝通路達(dá)到消炎鎮(zhèn)痛的效果,同時(shí)巴馬汀成分具有抑制單胺氧化酶A,調(diào)節(jié)腦去甲腎上腺素、血清素、多巴胺水平的能力[13]。而白芍中大量的萜類成分,則具有神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)節(jié)的功效,芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷等易透過血腦屏障的特點(diǎn)可能是關(guān)黃母顆粒劑中治療抑郁樣情緒障礙的有效成分[8]。與之相同的是,知母皂苷BⅡ作為樣品鑒定中成分最多的皂苷類物質(zhì),在針對女性更年期抗抑郁方面也有一定的藥理作用[17]。而熟地黃中黃酮類化合物則可以顯著提高血清雌激素濃度、脾細(xì)胞雌激素受體含量水平[18]。

    綜上所述,本實(shí)驗(yàn)通過運(yùn)用UPLC-QTOF/MS技術(shù)對關(guān)黃母顆粒主要化學(xué)成分及大鼠入腦成分進(jìn)行了分離和鑒定,后續(xù)將對入腦成分在大鼠各腦組織(海馬、下丘腦、大腦皮層、腦垂體、腦干等)中的分布進(jìn)行研究,進(jìn)一步分析15種入腦成分在各區(qū)域靶器官的含量,為明晰該制劑改善更年期綜合征及抗抑郁等作用的物質(zhì)基礎(chǔ)提供參考。

    猜你喜歡
    知母黃柏芍藥
    芍藥鮮切花 美景變“錢”景
    陸抑非《芍藥》
    Systematic review of robust experimental models of rheumatoid arthritis for basic research
    黃柏炮制品的考證、化學(xué)成分和藥理作用研究進(jìn)展
    美麗芍藥化學(xué)成分的研究
    中成藥(2019年12期)2020-01-04 02:02:44
    美麗的黃柏山
    青年歌聲(2019年4期)2019-04-11 08:35:00
    ICP-MS法測定不同產(chǎn)地知母中5種重金屬
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:19:06
    黃金分割法結(jié)合動態(tài)設(shè)計(jì)優(yōu)選鹽黃柏提取工藝
    知母中4種成分及對α-葡萄糖苷酶的抑制作用
    中成藥(2018年5期)2018-06-06 03:11:58
    知母多糖治療糖尿病大鼠
    中成藥(2017年9期)2017-12-19 13:34:18
    91字幕亚洲| 12—13女人毛片做爰片一| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放 | 欧美日韩乱码在线| 91老司机精品| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产激情久久老熟女| 女性生殖器流出的白浆| 在线观看免费视频网站a站| 久久天堂一区二区三区四区| 亚洲久久久国产精品| 99精国产麻豆久久婷婷| 51午夜福利影视在线观看| 十八禁人妻一区二区| 色婷婷av一区二区三区视频| 国产av一区在线观看免费| 怎么达到女性高潮| 夫妻午夜视频| 日韩大尺度精品在线看网址 | 咕卡用的链子| 曰老女人黄片| 亚洲欧美激情在线| 在线观看免费视频日本深夜| 欧美日韩亚洲高清精品| 婷婷精品国产亚洲av在线| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 一a级毛片在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 国产精品日韩av在线免费观看 | 欧美乱妇无乱码| 国产伦人伦偷精品视频| 久久久久久久精品吃奶| 免费观看人在逋| 久久99一区二区三区| 久久久久久久精品吃奶| 这个男人来自地球电影免费观看| 国产极品粉嫩免费观看在线| 可以免费在线观看a视频的电影网站| 亚洲avbb在线观看| 可以在线观看毛片的网站| 激情在线观看视频在线高清| 成人国产一区最新在线观看| 丰满的人妻完整版| 一个人免费在线观看的高清视频| 国产成人影院久久av| 亚洲成国产人片在线观看| 亚洲国产中文字幕在线视频| 99久久99久久久精品蜜桃| 黑人巨大精品欧美一区二区mp4| 嫩草影视91久久| 男女下面进入的视频免费午夜 | 国产成人av激情在线播放| 色综合婷婷激情| 久久精品亚洲熟妇少妇任你| 成人av一区二区三区在线看| 美女午夜性视频免费| 久久久久久久午夜电影 | 精品一区二区三区视频在线观看免费 | 多毛熟女@视频| 真人做人爱边吃奶动态| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| ponron亚洲| 国产av在哪里看| 丁香欧美五月| 欧美午夜高清在线| 久久精品人人爽人人爽视色| 国产成人精品无人区| 日韩大码丰满熟妇| x7x7x7水蜜桃| 亚洲国产中文字幕在线视频| 国产激情欧美一区二区| 免费日韩欧美在线观看| 亚洲五月色婷婷综合| 亚洲 国产 在线| 国产不卡一卡二| 国产一区二区三区综合在线观看| 高清黄色对白视频在线免费看| 国产成人影院久久av| 国产国语露脸激情在线看| 久久久久精品国产欧美久久久| 精品卡一卡二卡四卡免费| 女同久久另类99精品国产91| 亚洲精品一区av在线观看| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩成人在线观看一区二区三区| 午夜福利一区二区在线看| 国产三级黄色录像| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 一区二区三区精品91| 女人被狂操c到高潮| 国产成人av激情在线播放| 午夜福利影视在线免费观看| 久久国产精品影院| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 国产精品久久久av美女十八| 亚洲久久久国产精品| 一级,二级,三级黄色视频| 搡老乐熟女国产| 国产一区二区三区视频了| 国产午夜精品久久久久久| 美女 人体艺术 gogo| 99久久99久久久精品蜜桃| 午夜影院日韩av| 国产亚洲精品久久久久5区| 中文字幕色久视频| 水蜜桃什么品种好| 免费在线观看完整版高清| 丝袜人妻中文字幕| 后天国语完整版免费观看| 搡老乐熟女国产| 久久婷婷成人综合色麻豆| 久久久久久久午夜电影 | 精品久久久久久,| 欧美激情高清一区二区三区| 欧美大码av| 免费在线观看影片大全网站| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| www.熟女人妻精品国产| 999久久久精品免费观看国产| 亚洲熟妇中文字幕五十中出 | 在线视频色国产色| 日日干狠狠操夜夜爽| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲欧美精品综合一区二区三区| 国产精品九九99| 久久这里只有精品19| 一本大道久久a久久精品| 免费少妇av软件| 啪啪无遮挡十八禁网站| 正在播放国产对白刺激| 天天躁夜夜躁狠狠躁躁| 亚洲av熟女| 久久影院123| 亚洲精品国产区一区二| 51午夜福利影视在线观看| 日本三级黄在线观看| 成人特级黄色片久久久久久久| 国产黄a三级三级三级人| 日本wwww免费看| 欧美乱色亚洲激情| 日本精品一区二区三区蜜桃| 成人国语在线视频| 999久久久精品免费观看国产| 视频区欧美日本亚洲| 首页视频小说图片口味搜索| 亚洲熟女毛片儿| 成年人免费黄色播放视频| 国产区一区二久久| 在线观看www视频免费| 国产精品日韩av在线免费观看 | 欧美国产精品va在线观看不卡| 日本 av在线| www.www免费av| 窝窝影院91人妻| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 国产成人精品无人区| 国产在线精品亚洲第一网站| 搡老岳熟女国产| 日韩av在线大香蕉| 免费在线观看黄色视频的| 两个人看的免费小视频| 新久久久久国产一级毛片| 电影成人av| 我的亚洲天堂| av中文乱码字幕在线| 国产成人精品久久二区二区91| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲一区二区三区色噜噜 | 精品一区二区三区av网在线观看| 免费看a级黄色片| 99国产精品一区二区蜜桃av| 男男h啪啪无遮挡| 日本欧美视频一区| 欧美乱妇无乱码| 91九色精品人成在线观看| 欧美黑人精品巨大| 久久这里只有精品19| 亚洲一区中文字幕在线| 国产免费现黄频在线看| 久久国产精品人妻蜜桃| 村上凉子中文字幕在线| 日韩大码丰满熟妇| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 国产免费av片在线观看野外av| 男人操女人黄网站| 激情在线观看视频在线高清| 午夜福利在线免费观看网站| 国产高清国产精品国产三级| 涩涩av久久男人的天堂| 香蕉国产在线看| 欧美乱色亚洲激情| 国产精品九九99| 成人三级做爰电影| 久久人人97超碰香蕉20202| 日韩av在线大香蕉| 韩国av一区二区三区四区| av视频免费观看在线观看| 波多野结衣一区麻豆| 好看av亚洲va欧美ⅴa在| 国产欧美日韩一区二区三| 国产麻豆69| 曰老女人黄片| 丝袜美腿诱惑在线| 精品国内亚洲2022精品成人| av视频免费观看在线观看| 三级毛片av免费| 欧美精品亚洲一区二区| 黑丝袜美女国产一区| 久久伊人香网站| 亚洲专区中文字幕在线| 日韩高清综合在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 黄色视频不卡| 久久久久精品国产欧美久久久| 神马国产精品三级电影在线观看 | 纯流量卡能插随身wifi吗| 国产亚洲精品久久久久5区| 黑人欧美特级aaaaaa片| 一a级毛片在线观看| 欧美日韩福利视频一区二区| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 男女之事视频高清在线观看| 热re99久久国产66热| 一区二区日韩欧美中文字幕| 久久久国产成人精品二区 | 99久久精品国产亚洲精品| 亚洲专区国产一区二区| 成人免费观看视频高清| 黄片播放在线免费| 国产高清激情床上av| 午夜老司机福利片| 在线观看www视频免费| 91成年电影在线观看| 操美女的视频在线观看| 国产精品久久久久成人av| 男女下面进入的视频免费午夜 | 最新美女视频免费是黄的| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产精品99久久99久久久不卡| 国产亚洲精品第一综合不卡| 国产成人精品在线电影| 欧美日韩福利视频一区二区| 久久青草综合色| 老熟妇仑乱视频hdxx| 五月开心婷婷网| 日本wwww免费看| 韩国av一区二区三区四区| 新久久久久国产一级毛片| 成人手机av| 岛国在线观看网站| 久久中文看片网| 亚洲欧美日韩无卡精品| 亚洲九九香蕉| 日韩一卡2卡3卡4卡2021年| 咕卡用的链子| 国产三级在线视频| 在线看a的网站| 黄色丝袜av网址大全| 午夜精品国产一区二区电影| 国产精华一区二区三区| 亚洲色图av天堂| 亚洲人成77777在线视频| 中文字幕最新亚洲高清| 在线观看一区二区三区激情| 别揉我奶头~嗯~啊~动态视频| 欧美日韩精品网址| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 丝袜美足系列| 在线天堂中文资源库| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 伊人久久大香线蕉亚洲五| 嫁个100分男人电影在线观看| 女人爽到高潮嗷嗷叫在线视频| 长腿黑丝高跟| 亚洲在线自拍视频| 亚洲av美国av| 黄色丝袜av网址大全| 亚洲国产精品999在线| 女警被强在线播放| 色哟哟哟哟哟哟| 免费人成视频x8x8入口观看| 又黄又粗又硬又大视频| 成人亚洲精品一区在线观看| 丁香六月欧美| 在线天堂中文资源库| 国产人伦9x9x在线观看| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 两人在一起打扑克的视频| 悠悠久久av| 国产成人影院久久av| 国产精品国产高清国产av| 国产av精品麻豆| 日日夜夜操网爽| 另类亚洲欧美激情| 日本三级黄在线观看| 波多野结衣av一区二区av| 一级作爱视频免费观看| 免费在线观看影片大全网站| www.www免费av| 日韩精品中文字幕看吧| 免费女性裸体啪啪无遮挡网站| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 人人妻人人爽人人添夜夜欢视频| www.熟女人妻精品国产| 亚洲美女黄片视频| 国产精华一区二区三区| 两性午夜刺激爽爽歪歪视频在线观看 | 国产黄a三级三级三级人| 日本撒尿小便嘘嘘汇集6| 热re99久久精品国产66热6| 黄色视频,在线免费观看| 女人被狂操c到高潮| 国产高清视频在线播放一区| 久久久国产成人免费| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 亚洲国产精品一区二区三区在线| 欧美性长视频在线观看| av在线天堂中文字幕 | 一进一出好大好爽视频| 午夜成年电影在线免费观看| 99re在线观看精品视频| 在线av久久热| 国产野战对白在线观看| 十分钟在线观看高清视频www| 精品电影一区二区在线| 精品熟女少妇八av免费久了| 动漫黄色视频在线观看| 久久性视频一级片| 黄网站色视频无遮挡免费观看| 母亲3免费完整高清在线观看| 亚洲专区字幕在线| 丝袜美腿诱惑在线| 亚洲专区字幕在线| 51午夜福利影视在线观看| 韩国av一区二区三区四区| 久久久国产精品麻豆| 日日爽夜夜爽网站| 在线天堂中文资源库| 亚洲欧美日韩高清在线视频| 长腿黑丝高跟| 免费一级毛片在线播放高清视频 | 男人操女人黄网站| 亚洲成人久久性| 欧美精品一区二区免费开放| a级毛片黄视频| 99热只有精品国产| 女人精品久久久久毛片| 欧美国产精品va在线观看不卡| 两个人免费观看高清视频| 在线观看午夜福利视频| 久久青草综合色| 久久国产乱子伦精品免费另类| 亚洲精品中文字幕一二三四区| 久久午夜综合久久蜜桃| 午夜两性在线视频| 亚洲中文av在线| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 色老头精品视频在线观看| 亚洲av美国av| 精品久久久久久电影网| 亚洲一区中文字幕在线| av欧美777| 久久香蕉激情| 欧美不卡视频在线免费观看 | 一级黄色大片毛片| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲成人免费电影在线观看| 制服诱惑二区| 超碰97精品在线观看| 如日韩欧美国产精品一区二区三区| 天堂俺去俺来也www色官网| a在线观看视频网站| 久热爱精品视频在线9| 色精品久久人妻99蜜桃| 变态另类成人亚洲欧美熟女 | 在线播放国产精品三级| 精品乱码久久久久久99久播| 久久人人爽av亚洲精品天堂| 国产精品一区二区三区四区久久 | 久久香蕉激情| 精品电影一区二区在线| 一进一出抽搐动态| 最好的美女福利视频网| 十分钟在线观看高清视频www| 91成人精品电影| e午夜精品久久久久久久| 久久人人精品亚洲av| 免费不卡黄色视频| 在线视频色国产色| 免费久久久久久久精品成人欧美视频| 丰满的人妻完整版| 我的亚洲天堂| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 精品日产1卡2卡| 天天躁狠狠躁夜夜躁狠狠躁| 亚洲男人的天堂狠狠| av欧美777| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 老司机深夜福利视频在线观看| 91av网站免费观看| 9热在线视频观看99| 久久亚洲真实| 精品少妇一区二区三区视频日本电影| 久久午夜亚洲精品久久| 好男人电影高清在线观看| 美女 人体艺术 gogo| 国产av在哪里看| 国产成人欧美在线观看| 在线观看一区二区三区| 久久午夜综合久久蜜桃| 欧美日本中文国产一区发布| 一区二区三区国产精品乱码| 日本免费a在线| 国产精品久久久久成人av| 在线看a的网站| 欧美精品亚洲一区二区| 欧美乱妇无乱码| 女人被躁到高潮嗷嗷叫费观| 日本vs欧美在线观看视频| 无遮挡黄片免费观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 亚洲片人在线观看| 9色porny在线观看| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 色播在线永久视频| 日韩欧美免费精品| a级毛片黄视频| 18美女黄网站色大片免费观看| 亚洲欧美激情在线| 日韩有码中文字幕| 亚洲美女黄片视频| 免费av中文字幕在线| 亚洲成人国产一区在线观看| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 免费高清在线观看日韩| 国产精品国产高清国产av| 国产黄色免费在线视频| 久久久久久人人人人人| 亚洲一区高清亚洲精品| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 免费高清视频大片| 亚洲av成人一区二区三| 69av精品久久久久久| 国产精品亚洲一级av第二区| 欧美日韩视频精品一区| 国产深夜福利视频在线观看| 中出人妻视频一区二区| 国产91精品成人一区二区三区| 我的亚洲天堂| 欧美日韩国产mv在线观看视频| av有码第一页| 免费日韩欧美在线观看| 高清毛片免费观看视频网站 | 一区二区三区精品91| ponron亚洲| 久久久久久亚洲精品国产蜜桃av| 80岁老熟妇乱子伦牲交| 国产成人av激情在线播放| 久久精品人人爽人人爽视色| 亚洲国产精品合色在线| 国产色视频综合| 嫩草影视91久久| 精品久久蜜臀av无| 国产精品国产av在线观看| 精品一区二区三区av网在线观看| 成在线人永久免费视频| 九色亚洲精品在线播放| av福利片在线| 丁香欧美五月| 亚洲情色 制服丝袜| 国产一区二区激情短视频| 成人永久免费在线观看视频| 亚洲av熟女| 激情视频va一区二区三区| 日本一区二区免费在线视频| 国产xxxxx性猛交| 国产精品一区二区在线不卡| 成人亚洲精品一区在线观看| 欧美不卡视频在线免费观看 | 一边摸一边做爽爽视频免费| 夜夜爽天天搞| 色婷婷久久久亚洲欧美| 男女之事视频高清在线观看| 精品久久久精品久久久| 欧美日韩中文字幕国产精品一区二区三区 | 久久久水蜜桃国产精品网| 91大片在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产成人啪精品午夜网站| 精品一区二区三卡| 99久久综合精品五月天人人| 欧美日本亚洲视频在线播放| 免费不卡黄色视频| 亚洲伊人色综图| 极品人妻少妇av视频| 日韩精品青青久久久久久| 无人区码免费观看不卡| 三上悠亚av全集在线观看| 欧美日韩视频精品一区| 欧美日韩黄片免| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 久久草成人影院| 91麻豆精品激情在线观看国产 | 免费人成视频x8x8入口观看| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 狂野欧美激情性xxxx| 他把我摸到了高潮在线观看| 亚洲av片天天在线观看| 一级,二级,三级黄色视频| 18禁观看日本| 亚洲欧美精品综合久久99| 国产成年人精品一区二区 | 这个男人来自地球电影免费观看| 黑人巨大精品欧美一区二区蜜桃| 国产精品 欧美亚洲| 欧美激情极品国产一区二区三区| 欧美性长视频在线观看| 真人一进一出gif抽搐免费| 午夜影院日韩av| 成人18禁高潮啪啪吃奶动态图| 黑丝袜美女国产一区| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 午夜老司机福利片| av视频免费观看在线观看| 99国产精品99久久久久| av超薄肉色丝袜交足视频| 亚洲 国产 在线| √禁漫天堂资源中文www| av有码第一页| 国产精品1区2区在线观看.| 99精品久久久久人妻精品| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 免费观看精品视频网站| 国产成人精品久久二区二区91| 悠悠久久av| 高清av免费在线| 久久精品影院6| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 亚洲一卡2卡3卡4卡5卡精品中文| 一a级毛片在线观看| 一级毛片精品| 免费人成视频x8x8入口观看| 日韩免费av在线播放| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 美女高潮到喷水免费观看| 水蜜桃什么品种好| 精品一区二区三区四区五区乱码| 欧美午夜高清在线| 午夜福利影视在线免费观看| 欧美成狂野欧美在线观看| 国产在线观看jvid| 欧美最黄视频在线播放免费 | 99久久99久久久精品蜜桃| 丝袜人妻中文字幕| 亚洲成人免费av在线播放| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国内毛片毛片毛片毛片毛片| 欧美日韩黄片免| 欧美一级毛片孕妇| 国产精品九九99| 久热爱精品视频在线9| 色婷婷av一区二区三区视频| 亚洲av美国av| 女性被躁到高潮视频| 免费在线观看黄色视频的| 两个人免费观看高清视频| netflix在线观看网站| 亚洲五月婷婷丁香| 日韩成人在线观看一区二区三区| 免费观看精品视频网站| 国产精品 国内视频| 午夜免费成人在线视频| 亚洲情色 制服丝袜| 满18在线观看网站| 午夜视频精品福利| 国内久久婷婷六月综合欲色啪| 亚洲人成77777在线视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 国产单亲对白刺激| 国产精品九九99| 侵犯人妻中文字幕一二三四区| 十分钟在线观看高清视频www| 亚洲精品美女久久久久99蜜臀| 亚洲va日本ⅴa欧美va伊人久久| 日韩有码中文字幕| 亚洲激情在线av| 日韩国内少妇激情av| 麻豆国产av国片精品| 久久狼人影院| 久久久久久久久中文| 国产精华一区二区三区| 国产不卡一卡二| 精品国产国语对白av| 久久午夜亚洲精品久久| 久久亚洲精品不卡| 热re99久久国产66热| 91国产中文字幕| 国产精品香港三级国产av潘金莲| 美女福利国产在线| 久久精品亚洲av国产电影网| 一a级毛片在线观看| 黑人操中国人逼视频| 后天国语完整版免费观看| 两个人免费观看高清视频| 又黄又粗又硬又大视频| 国产极品粉嫩免费观看在线| 国产91精品成人一区二区三区| www日本在线高清视频| x7x7x7水蜜桃| 免费高清视频大片| 久久 成人 亚洲| 桃红色精品国产亚洲av| 一级a爱片免费观看的视频|