結(jié)直腸癌組織Twist、Vimentin蛋白表達(dá)情況及與奧沙利鉑為主的術(shù)后輔助化療耐藥的關(guān)系

吳清珍

河南省南陽(yáng)市第一人民醫(yī)院 473000

結(jié)直腸癌是惡性細(xì)胞能夠從原發(fā)腫瘤散播并轉(zhuǎn)移到遠(yuǎn)處器官，嚴(yán)重威脅患者身體健康，臨床以便血、腹脹腹痛、疲勞乏力等為主要表現(xiàn)[1]。結(jié)直腸癌患者機(jī)體對(duì)化療藥物的敏感性、腫瘤對(duì)藥物的抵抗及腫瘤對(duì)化療藥物產(chǎn)生多藥耐藥等因素均可影響效果[2]。扭曲基因(Twist)蛋白是調(diào)控腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的轉(zhuǎn)錄因子，而腫瘤細(xì)胞在上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化過(guò)程中可以獲得耐藥性[3]。波形蛋白(Vimentin)是一種普遍存在的中間絲蛋白，是間充質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物，可影響上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化進(jìn)程，進(jìn)而影響腫瘤細(xì)胞的耐藥性[4]。鑒于此，本文回顧性分析醫(yī)院收治的88例根治性切除術(shù)后并實(shí)施以?shī)W沙利鉑為主輔助化療的結(jié)直腸癌患者臨床資料，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 回顧性分析2019年4月—2020年9月醫(yī)院收治的88例根治性切除術(shù)后并實(shí)施以?shī)W沙利鉑為主輔助化療的結(jié)直腸癌患者臨床資料。其中男48例，女40例，年齡36～79歲，平均年齡(57.39±8.17)歲，高分化19例，中分化59例，低分化10例，結(jié)直癌分期Ⅲ期57例，Ⅳ期31例。腺癌58例，黏液腺癌25例，其他5例，取癌組織和遠(yuǎn)癌組織。

1.2 選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①所有研究對(duì)象均符合結(jié)直腸癌診斷標(biāo)準(zhǔn)[5]，且均經(jīng)病理檢查確診；②術(shù)前未接受放化療、免疫治療，且手術(shù)切除標(biāo)本均有石蠟存檔者；③符合以?shī)W沙利鉑為主的術(shù)后輔助化療方案指征；④臨床資料完整。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他腫瘤患者；②合并急慢性腸炎、炎癥性腸病等消化系統(tǒng)疾病患者；③合并急性泌尿感染、結(jié)核菌感染等感染性疾病患者。

1.3 方法 采集手術(shù)切除術(shù)留取的癌組織和遠(yuǎn)癌組織，所有標(biāo)本經(jīng)10%中性甲醛固定，石蠟包埋，4μm厚切片，0.01mol/L檸檬酸鹽緩沖液抗原修復(fù)，免疫組織化學(xué)染色后光鏡觀察。由2位醫(yī)師采用雙盲法觀察切片，在高倍鏡下隨機(jī)選取5個(gè)視野，按照染色強(qiáng)度及陽(yáng)性細(xì)胞占比綜合計(jì)分，其中染色輕度分為：無(wú)色(0分)、淡黃色(1分)、棕黃色(2分)、黃褐色(3分)，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)占比分為：≤10%(0分)、11%～25%(1分)、26%～50%(2分)、51%～100%(3分)，2類(lèi)分值乘積為總分，0～3分為陰性，4分弱陽(yáng)性，6分為中等陽(yáng)性，9分為強(qiáng)陽(yáng)性，將弱陽(yáng)性、中等陽(yáng)性、強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)均記為陽(yáng)性表達(dá)。

化療敏感及耐藥性判斷參照實(shí)體瘤療效評(píng)價(jià)標(biāo)準(zhǔn)[6]，所有目標(biāo)和(或)殘留病灶消失且維持4周，記為完全緩解；基線目標(biāo)和(或)殘留病灶長(zhǎng)徑總和縮小30%且維持4周，記為部分緩解；基線目標(biāo)和(或)殘留病灶長(zhǎng)徑總和有縮小但未達(dá)到部分緩解標(biāo)準(zhǔn)，記為穩(wěn)定；基線目標(biāo)和(或)殘留病灶長(zhǎng)徑總和增加≥20%，記為進(jìn)展；將完全緩解和部分緩解記為化療敏感，將穩(wěn)定和進(jìn)展記為化療耐藥。

1.4 觀察指標(biāo) (1)對(duì)比癌組織和遠(yuǎn)癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率；(2)統(tǒng)計(jì)所有患者化療效果；(3)對(duì)比化療敏感和耐藥患者癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率；(4)對(duì)比化療耐藥患者與化療敏感患者的自變量構(gòu)成比，分析影響其化療耐藥的影響因素。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS22.0軟件分析所得數(shù)據(jù)。以[n(%)]描述計(jì)數(shù)資料，行χ2檢驗(yàn)，若理論頻數(shù)為1～5則需校正，等級(jí)分布資料以秩和檢驗(yàn)，以Logistic回歸分析探討影響結(jié)直腸癌患者術(shù)后輔助化療耐藥的影響因素，P<0.05時(shí)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 癌組織和遠(yuǎn)癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于遠(yuǎn)癌組織(P<0.05)，見(jiàn)表1。

表1 癌組織和遠(yuǎn)癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

2.2 所有患者化療效果 88例患者化療后有54例化療敏感，占61.36%；有34例化療耐藥，占38.64%。

2.3 化療敏感和耐藥患者癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較 化療耐藥患者癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于化療敏感患者(P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 化療敏感和耐藥患者癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率比較[n(%)]

2.4 對(duì)比化療耐藥患者與化療敏感患者的自變量構(gòu)成比，分析影響其化療耐藥的影響因素 化療耐藥患者記為耐藥組，化療敏感患者記為敏感組，歸納可能影響化療耐藥的因素，對(duì)其進(jìn)行賦值，自變量賦值結(jié)果見(jiàn)表3；將化療敏感/耐藥作為因變量(Y)，化療耐藥為1，化療敏感為0，分析影響因素?；熌退幓颊遃imentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)、Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化、TNM分期Ⅳ期構(gòu)成比均高于化療敏感患者(P<0.05)，見(jiàn)表4。

表3 癌組織患者化療耐藥的自變量賦值結(jié)果

表4 耐藥組和敏感組自變量構(gòu)成比對(duì)比[n(%)]

將單因素分析結(jié)果中P<0.01的因素納入Logistic回歸分析模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)、Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均是影響以?shī)W沙利鉑為主的術(shù)后輔助耐藥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.05)，見(jiàn)表5。

表5 Logistic回歸分析

3 討論

術(shù)后輔助化療耐藥是當(dāng)前結(jié)直腸癌治療中的主要難題，從分子角度探討結(jié)直腸癌細(xì)胞的耐藥機(jī)制具有重要意義。本文結(jié)果顯示，癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于遠(yuǎn)癌組織，提示結(jié)直腸癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高。Twist參與腫瘤細(xì)胞周期的調(diào)控，并通過(guò)調(diào)解腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化等參與惡性腫瘤的發(fā)生，促進(jìn)腫瘤侵襲轉(zhuǎn)移。結(jié)直腸癌組織Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高可能與腫瘤微環(huán)境中免疫細(xì)胞、腫瘤細(xì)胞間釋放腫瘤壞死因子和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β等細(xì)胞因子增多有關(guān)[7]。Vimentin通過(guò)整合來(lái)自環(huán)境的機(jī)械輸入信號(hào)并調(diào)節(jié)微管和肌動(dòng)球蛋白網(wǎng)絡(luò)的動(dòng)力學(xué)促進(jìn)細(xì)胞的遷移，促進(jìn)癌細(xì)胞局部侵襲及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，腫瘤發(fā)生時(shí)負(fù)性調(diào)控Vimentin表達(dá)的微小RNA-145表達(dá)下調(diào)，Vimentin的mRNA穩(wěn)定性增加，導(dǎo)致Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率升高[8]。

本文結(jié)果顯示，癌組織患者化療后化療敏感者占61.36%，化療耐藥者占38.64%，且癌組織化療耐藥患者癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均高于化療敏感患者，提示以?shī)W沙利鉑術(shù)后輔助化療為主的產(chǎn)生耐藥性患者結(jié)直腸癌組織Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率高于化療敏感患者。有研究發(fā)現(xiàn)[9]，減弱E鈣黏蛋白表達(dá)可以獲得間葉細(xì)胞表型，促進(jìn)Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)，使腫瘤細(xì)胞出現(xiàn)典型的上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化表型特征。本文與上述報(bào)道相符。

本文中Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)、Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均是影響以?shī)W沙利鉑化療為主術(shù)后輔助化療耐藥的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。癌組織Twist、 Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞上皮—間質(zhì)轉(zhuǎn)化的發(fā)生，使腫瘤細(xì)胞獲得間質(zhì)細(xì)胞特征，表現(xiàn)為抗凋亡能力增強(qiáng)，突破細(xì)胞外基質(zhì)獲得浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移能力，對(duì)化療藥物產(chǎn)生耐藥性。研究報(bào)道[10]，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化和TNM分期Ⅳ期患者結(jié)直腸癌組織中Twist、Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)率均升高，能夠阻礙化療藥物對(duì)腫瘤細(xì)胞的損傷作用，減少細(xì)胞凋亡，導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)化療藥物不敏感。

綜上所述，Twist、Vimentin蛋白在結(jié)直腸癌組織中陽(yáng)性表達(dá)率均升高，Vimentin蛋白陽(yáng)性表達(dá)、Twist蛋白陽(yáng)性表達(dá)與奧沙利鉑為主的術(shù)后輔助化療耐藥有關(guān)，且淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、腫瘤低分化、TNM分期Ⅳ期均可增加結(jié)直腸癌患者以?shī)W沙利鉑為主術(shù)后輔助化療耐藥的風(fēng)險(xiǎn)。建議在臨床實(shí)踐中積極控制上述因素，同時(shí)將癌組織Twist、Vimentin蛋白作為以?shī)W沙利鉑為主術(shù)后輔助化療耐藥的預(yù)測(cè)分子標(biāo)志物。