標(biāo)準(zhǔn)化操作免疫組化技術(shù)在腫瘤活檢病理診斷中的應(yīng)用

摘 要：目的：探討免疫組化技術(shù)室內(nèi)質(zhì)量控制的標(biāo)準(zhǔn)化管理及免疫組化技術(shù)在腫瘤活檢病理診斷中的臨床價(jià)值。方法：選取2021年6月～2022年7月期間來本院就診的82例腫瘤活檢患者，根據(jù)本科室免疫組化技術(shù)實(shí)際操作，從實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、實(shí)驗(yàn)后三方面進(jìn)行免疫組化室內(nèi)質(zhì)量控制，進(jìn)行免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化操作，并將手術(shù)病理結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，對免疫組化技術(shù)的診斷結(jié)果進(jìn)行評估。結(jié)果：采用標(biāo)準(zhǔn)化流程免疫組化技術(shù)診斷的符合率為97.56%（80/82），高于快速石蠟技術(shù)的90. 24%（74/82）（P＜0.05）；標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷的敏感度為95.83%（69/72），高于快速石蠟技術(shù)的80.56%（58/72）（P＜0.05），標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)的特異度為50.00%（5/10），快速石蠟技術(shù)的特異度為30.00%（3/10），組間對比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）；采用標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷患者滿意度高達(dá)95.12%，顯著高于采用快速石蠟技術(shù)診斷的84.15%（P＜0.05）；采用標(biāo)準(zhǔn)化流程免疫組化技術(shù)診斷患者的信任感評分及舒適度評分顯著高于快速石蠟技術(shù)診斷，心理顧慮評分低于快速石蠟技術(shù)診斷（P＜0.05）。結(jié)論：免疫組化操作的標(biāo)準(zhǔn)化可提高免疫組化結(jié)果的準(zhǔn)確性和可靠性，腫瘤活檢病理診斷中采用免疫組化技術(shù)和快速石蠟技術(shù)進(jìn)行診斷發(fā)現(xiàn)，免疫組化技術(shù)的診斷正確率更高，同時(shí)患者滿意度及依從性更高，便于臨床診治工作的開展。

關(guān)鍵詞：免疫組化技術(shù)，腫瘤診斷，標(biāo)準(zhǔn)化

DOI編碼：10.3969/j.issn.1002-5944.2023.12.059

現(xiàn)代人快節(jié)奏的生活，不良的飲食習(xí)慣加上環(huán)境污染問題日益突出，使得腫瘤成為21世紀(jì)常見疾病，嚴(yán)重威脅現(xiàn)代人生命健康安全，其在我國乃至世界范圍內(nèi)有著極高的發(fā)病率，且逐年提升，發(fā)病群體越來越低齡化。不少腫瘤患者早期無顯著癥狀，多是在體檢中或者疾病發(fā)展到中晚期癥狀明顯時(shí)發(fā)現(xiàn)，進(jìn)而錯(cuò)過最佳的手術(shù)治療時(shí)期[1]。如何盡早識別疾病，并盡早采取診斷及治療措施，對提高患者生存率，改善其預(yù)后有著積極意義。腫瘤的診斷受到醫(yī)護(hù)人員的高度關(guān)注，如何提高腫瘤診斷結(jié)果的準(zhǔn)確性，降低誤診及漏診情況發(fā)生，是其需要重視的問題。腫瘤病理診斷一直被臨床作為診斷腫瘤的“金標(biāo)準(zhǔn)”，正確率較高，得到臨床廣泛認(rèn)可[2]，穿刺活檢技術(shù)僅對患者帶來輕微創(chuàng)傷的同時(shí)提供更早更精確的診斷，常規(guī)快速石蠟技術(shù)對部分穿刺活檢標(biāo)本的腫瘤類型及分型準(zhǔn)確度性不足[3]。因此臨床一直在尋找更加可靠的診斷技術(shù)。免疫組化技術(shù)近年來發(fā)展迅速，為腫瘤的鑒別診斷及發(fā)病機(jī)制的研究提供巨大支持，也為檢測腫瘤相關(guān)抗原提供指導(dǎo)[4-5]，為臨床后續(xù)治療提供參考依據(jù)，其在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)中發(fā)揮重要作用。隨著免疫組化開展的醫(yī)療單位逐步增加，免疫組化質(zhì)量控制問題也日益凸顯。這其中因素包括：組織固定、試劑效價(jià)、試劑盒質(zhì)量、實(shí)驗(yàn)人員等，鑒于此，本科室根據(jù)免疫組化實(shí)際操作從實(shí)驗(yàn)前、實(shí)驗(yàn)中、實(shí)驗(yàn)后分別進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)量控制，將操作標(biāo)準(zhǔn)化，并研究選取82例在我院接受治療的腫瘤患者為主體，均采用標(biāo)準(zhǔn)化操作免疫組化技術(shù)和快速石蠟技術(shù)，對其診斷效果進(jìn)行比照。

1 一般資料與方法

1.1 一般資料

選取2021年6月-2022年7月期間來本院就診的82例腫瘤患者為研究對象。納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）臨床資料均完整且可追溯；（2）了解診斷方案內(nèi)容，愿意配合檢查；（3）患者簽署了相關(guān)知情文件，且研究得到倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。排除條件：（1）預(yù)計(jì)生存期3個(gè)月以內(nèi)；（2）精神障礙或意識不清，無法配合研究者；（3）不愿參與研究或中途退出者。患者性別之比為34：48（男：女）；年齡最小/年齡最大22/78歲，平均年齡（52.34±4.67）歲；病程1～12個(gè)月，平均病程（5.67±1.45）個(gè)月；腫瘤類型：肺癌38例，胃癌22例，大腸癌10例，乳腺癌10例，其他2例。

1.2 診斷方法

患者均實(shí)施標(biāo)準(zhǔn)化操作免疫組化技術(shù)及快速石蠟技術(shù)，具體操作如下：

1.3 實(shí)驗(yàn)前的標(biāo)準(zhǔn)化

組織處理的標(biāo)準(zhǔn)化：采用活檢穿刺法，根據(jù)病灶類型及位置，實(shí)施穿刺活檢，在超聲、CT或纖支鏡下進(jìn)行，取出腫瘤組織。手術(shù)標(biāo)本離體后30分鐘內(nèi)，用10%中性緩沖福爾馬林液固定。固定時(shí)間活檢小標(biāo)本為6～12小時(shí)，組織取材厚度為3 mm左右，放入全自動(dòng)脫水機(jī)進(jìn)行脫水，浸蠟溫度應(yīng)控制在58～60℃。

1.4 免疫組化切片的標(biāo)準(zhǔn)化

玻片處理級切片厚度：玻片進(jìn)行防脫涂膠處理，并采用3～4 μm連續(xù)切片， 在60～65℃烤箱中烤片30～60分鐘左右后進(jìn)行脫蠟至水。

1.5 實(shí)驗(yàn)中的標(biāo)準(zhǔn)化

實(shí)驗(yàn)中的抗原修復(fù)：檸檬酸鹽緩沖液（pH6.0）適合于大多數(shù)抗體，但ER、PR、Bcl-2、Bcl-6、TdT、Ki-67、Cyclin D1等抗原比較難于表達(dá)的抗體多選擇高pH值的修復(fù)液，如EDTA和EGTA緩沖修復(fù)液。

PBS洗2～3次后通過高壓鍋熱修復(fù)10 min，自然冷卻10～15 min，切片不能干涸。免疫組化染色操作標(biāo)準(zhǔn)化：修復(fù)后PBS清洗，滴入特異性一抗，置入4℃環(huán)境中過夜，采用PBS洗3 min，重復(fù)3次；采用DBA顯色，自來水清洗；采用蘇木素襯染色，1 min后采用自來水清洗，再采用鹽酸乙醇分化3 s，自來水返藍(lán)，梯度乙醇脫水，使用中性樹膠將樣本封固。

1.6 陽性對照與陰性對照

每個(gè)抗體都備有陽性對照小蠟塊，在實(shí)驗(yàn)過程種將待測組織與陽性小蠟塊裱于同一張切片（圖），PBS代替一抗作為陰性對照，然后進(jìn)行染色。實(shí)驗(yàn)后的標(biāo)準(zhǔn)化，染色結(jié)果判斷的標(biāo)準(zhǔn)化：陽性結(jié)果應(yīng)定位在細(xì)胞相應(yīng)的部位，在細(xì)胞膜表達(dá)的抗原陽性結(jié)果應(yīng)定位在細(xì)胞膜上，在其他部位的陽性反應(yīng)均為非特異性染色。不當(dāng)?shù)目乖迯?fù)會(huì)導(dǎo)致抗原在組織細(xì)胞中定位的改變。根據(jù)所檢測抗原的不同，抗原分別定位在：（1）細(xì)胞膜：如LCA和CD3、CD20等；（2）細(xì)胞質(zhì)：如Cytokeratin、GFAP、S100、CgA、AFP等；（3）細(xì)胞核：如Ki-67、ER、PR、TTF-1、HPV-Ag、Cyclin D1、TDT等。實(shí)驗(yàn)結(jié)果的記錄、分析：對免疫組化實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行質(zhì)量跟蹤記錄，對異常結(jié)果進(jìn)行原因分析。快速石蠟技術(shù)方法：將腫瘤組織進(jìn)行固定，超聲脫水后浸蠟包埋，常規(guī)切片（約3μm）、烤片，然后二甲苯脫蠟至水，蘇木素染色5min，水洗；1%鹽酸分化數(shù)秒后水洗，將切片于氨水中反藍(lán)后水洗；再用乙醇伊紅染色液染色2 min，水洗后切片經(jīng)梯度酒精脫水，二甲苯透明，中性樹膠封片；樹膠略干時(shí)，貼標(biāo)簽，即可使用切片標(biāo)本。

1.7 觀察指標(biāo)

1）以手術(shù)病理結(jié)果為金標(biāo)準(zhǔn)，對兩種技術(shù)的診斷效能進(jìn)行比照。符合率＝（真陽性人數(shù)＋真陰性人數(shù)）／總?cè)藬?shù)×100%）；靈敏度＝真陽性例數(shù)／（真陽性例數(shù)＋假陰性例數(shù)）×100%；特異度＝真陰性例數(shù)／（真陰性例數(shù)＋假陽性例數(shù)）×100%。

2）滿意度：選擇我科自制的滿意度調(diào)查表，對患者進(jìn)行滿意度調(diào)查，如對整個(gè)檢測程序的滿意情況、對出診結(jié)果時(shí)長滿意情況、診斷過程舒適度滿意情況及對檢查結(jié)果準(zhǔn)確度的滿意情況?？偡?00分，根據(jù)評分，結(jié)果分為非常滿意（90分以上）、滿意（60～90分）及不滿意（60分以下）。總滿意度為前2項(xiàng)之和/總?cè)藬?shù)。3）診斷相關(guān)評分包含信任感、心理顧慮及舒適度評分，采用本院自制的問卷調(diào)查表，讓患者根據(jù)自身感受如實(shí)填寫，每項(xiàng)滿分100分，得分越高，表示患者越信任，舒適度越高，且心理顧慮越少。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 23.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)檢測，卡方檢驗(yàn)計(jì)數(shù)資料間的數(shù)據(jù)差異，t值檢驗(yàn)計(jì)量資料間的差異，P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 診斷效能

82例腫瘤患者，實(shí)際診斷為陽性的患者72例（87.80%），陰性10例（12.20%）；其中采用標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷的符合率為97.56%（80/82），高于快速石蠟技術(shù)的90.24%（74/82）（x 2=7.079，P = 0.0 0 8）；標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷的敏感度為97.22%（70/72），高于快速石蠟技術(shù)的77.78%（56/ 72）（x 2= 8.0 70，P = 0.0 0 4），標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)的特異度為10 0%（10/10），快速石蠟技術(shù)的特異度為10 0%（10/10），組間對比無顯著差異（x 2=0.833，P =0. 361），詳細(xì)數(shù)據(jù)如表1所示。

2.2 滿意度調(diào)查情況

采用標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷患者滿意度高達(dá)95.12%，顯著高于采用快速石蠟技術(shù)診斷的84.15%（P＜0.05），詳細(xì)數(shù)據(jù)如表2所示。

2.3 診斷相關(guān)評分情況

采用標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷患者的信任感評分及舒適度評分顯著高于快速石蠟技術(shù)診斷，心理顧慮評分低于快速石蠟技術(shù)診斷（P＜0. 05），詳細(xì)數(shù)據(jù)如表3所示。

3 討 論

腫瘤有良性與惡性之分，其中，良性腫瘤不會(huì)危及生命安全，但隨著病情的變化，有惡化的風(fēng)險(xiǎn)，進(jìn)而發(fā)展為惡性腫瘤。免疫組化技術(shù)作為一種新的病理診斷技術(shù)，在臨床得以推廣及使用，其采用已知的特異性抗體，通過化學(xué)反應(yīng)，使結(jié)合后的特異性抗體顯示劑顯示出顏色，通過顯微鏡觀察顏色變化，然后，在抗原抗體結(jié)合部位確定細(xì)胞的化學(xué)結(jié)構(gòu)及性質(zhì)，為腫瘤的診斷提供依據(jù)。

本次研究結(jié)果顯示，標(biāo)準(zhǔn)化免疫組化技術(shù)診斷符合率、敏感度均高于快速石蠟技術(shù)。這是因?yàn)槊庖呓M化技術(shù)與特殊染色、電鏡觀察相似，用于各種腫瘤疾病的診斷中，由于抗原與抗體在體內(nèi)異常結(jié)合，此種診斷技術(shù)便于了解抗體情況，觀察到切片的抗原數(shù)量及在組織中的分布情況，以便準(zhǔn)確定位抗原，對其進(jìn)行定量及定性研究。同時(shí)，本次研究結(jié)果顯示，采用免疫組化技術(shù)診斷患者的信任感評分及舒適度評分顯著高于快速石蠟技術(shù)診斷，心理顧慮評分低于快速石蠟技術(shù)診斷，且滿意度高于快速石蠟技術(shù)診斷，可見免疫組化技術(shù)在緩解患者痛苦，提高其舒適度方面更具優(yōu)勢，患者對檢測人員更信任，可提高其依從性，有利于后續(xù)診療工作的開展。然而采用免疫組化技術(shù)診斷時(shí)，免疫組化標(biāo)記物較多，原為特異的標(biāo)記物并非絕對特異，易出現(xiàn)交叉反應(yīng)及異常表達(dá)情況?？梢妴渭儾捎妹庖呓M化技術(shù)確認(rèn)病理，可能出現(xiàn)誤診情況。對陽性結(jié)果加以判讀時(shí)，要借助細(xì)胞形態(tài)學(xué)加以判斷，一般采用免疫組化技術(shù)辨別細(xì)胞來源及嚴(yán)重程度。開展免疫組化病理診斷時(shí)，要根據(jù)實(shí)際需求選擇適宜的抗體，隨著免疫組化使用范圍的增大，抗體的特異性也隨之增大。

綜上所述，腫瘤病理診斷中采用免疫組化技術(shù)和快速石蠟技術(shù)進(jìn)行比照發(fā)現(xiàn)，免疫組化技術(shù)的診斷正確率更高，同時(shí)患者滿意度及依從性更高，便于臨床診治工作的開展。

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作者簡介

耿以如，碩士，中級技師，研究方向?yàn)槿梭w病理學(xué)。

（責(zé)任編輯：劉憲銀）