存儲(chǔ)溫度對(duì)不同廠家鹽酸阿糖胞苷穩(wěn)定性影響

張玉倩，解偉偉，李德強(qiáng)，王可欣，劉劍，靳怡然

鹽酸阿糖胞苷是一種嘧啶類(lèi)抗代謝藥物，是治療白血病的基礎(chǔ)藥物，主要通過(guò)抑制DNA多聚酶而起作用，特異性作用于細(xì)胞分裂的S期，與其他類(lèi)型的抗代謝藥物無(wú)交叉耐藥性[1-2]。目前，國(guó)內(nèi)應(yīng)用較多的是國(guó)藥一心制藥有限公司及海正輝瑞制藥有限公司生產(chǎn)的注射用鹽酸阿糖胞苷，但兩個(gè)廠家要求的儲(chǔ)存條件卻不同，國(guó)藥一心制藥有限公司要求的存儲(chǔ)溫度為2～10 ℃，而海正輝瑞制藥有限公司要求的則是常溫保存(10～30 ℃)。但在醫(yī)院藥房及有些病區(qū)未按照說(shuō)明書(shū)要求存放，而是置于常溫下保存。而冷藏藥品的質(zhì)量受儲(chǔ)存溫度的影響很大，如果儲(chǔ)存不當(dāng)，就會(huì)縮短效期，使藥物的效價(jià)降低或變質(zhì)，甚至出現(xiàn)毒性反應(yīng)，引發(fā)相關(guān)的醫(yī)療事故[3-4]。因此，本研究采用高效液相色譜測(cè)定常溫放置下鹽酸阿糖胞苷的含量，觀察溫度對(duì)鹽酸阿糖胞苷穩(wěn)定性的影響，同時(shí)觀察常溫放置的鹽酸阿糖胞苷在不同溶媒中放置于不同溫度條件下的濃度、pH值的變化情況，為臨床安全用藥提供一定參考?，F(xiàn)報(bào)道如下。

1 材料與儀器

1.1 藥品與試劑 鹽酸阿糖胞苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：140784-201001)，注射用鹽酸阿糖胞苷(國(guó)藥一心制藥有限公司，批號(hào)1906121)，甲醇(美國(guó)Fishr Chemical公司)，0.9%氯化鈉注射液、5%葡萄糖注射液(石家莊四藥有限公司)，磷酸二氫鉀、磷酸氫二鉀、磷酸均為分析純，水為超純水。

1.2 儀器 高效液相色譜儀(美國(guó)Waters公司)，包括515泵和486紫外檢測(cè)器；KQ-30 B超聲波臺(tái)式清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)；pH-213臺(tái)式酸度測(cè)定儀(北京天信偉業(yè)科貿(mào))；CPA 225 D分析天平(德國(guó)賽多利斯)；XW-80 A渦旋混合器(上海醫(yī)科大學(xué)儀器廠)；MPC 201 E隔膜式真空泵(德國(guó)伊爾姆)；HS-9240 A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海和晟儀器科技)，GWF-8JA微粒分析儀(天津天河醫(yī)療儀器有限公司)，pH計(jì)(HANNA儀器)。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液制備

2.1.1 對(duì)照品溶液制備：精密稱(chēng)取鹽酸阿糖胞苷對(duì)照品2 mg于10 ml的容量瓶中，用水溶解，制成濃度為0.2013 mg/ml的鹽酸阿糖胞苷對(duì)照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備：取冷藏注射用鹽酸阿糖胞苷100 mg用水溶解稀釋為20 μg/ml，即得供試品溶液。

2.2 色譜條件 色譜柱為Diamonsil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)，以磷酸鹽緩沖液(取0.0106 mol/L磷酸二氫鉀溶液與0.0104 mol/L磷酸氫二鉀溶液等體積混合—甲醇(90∶10)流動(dòng)相,檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm,流速為1 ml/min,柱溫為35 ℃，進(jìn)樣量為10 μl。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 專(zhuān)屬性考察：分別取對(duì)照品溶液、5%葡萄糖注射液、供試品溶液1(注射用鹽酸阿糖胞苷與5%葡萄糖注射液配伍)、0.9%氯化鈉注射液、供試品溶液2(注射用鹽酸阿糖胞苷與0.9%氯化鈉注射液配伍)各10 μl進(jìn)樣分析，按照2.2項(xiàng)中色譜條件進(jìn)樣分析得色譜圖(圖1-5)，從圖中可看出鹽酸阿糖胞苷的峰型良好，溶媒在其出峰位置處無(wú)干擾，保留時(shí)間為4.8 min。

圖1 對(duì)照品溶液色譜圖

圖2 5%葡萄糖注射液色譜圖

圖3 供試品溶液1色譜圖

圖4 0.9%氯化鈉注射液色譜圖

圖5 供試品溶液2色譜圖

2.3.2 線性關(guān)系：精密量取對(duì)照品溶液2、3、4、5、6、7 ml于50 ml的容量瓶中，用水定容搖勻，得到系列濃度為8、12、16、20、24、28 μg/ml的對(duì)照品溶液，按照2.2項(xiàng)下的條件進(jìn)樣分析。以鹽酸阿糖胞苷的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)，以色譜峰的峰面積為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得到線性回歸方程為Y=13254X-4084(r=0.9994)。

2.3.3 精密度考察：精密量取對(duì)照品溶液4、5、6 ml分別置于50 ml的容量瓶中，用水稀釋定容搖勻，配置成低、中、高3種濃度(16、20、24 μg/ml)的溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件日內(nèi)重復(fù)進(jìn)樣5次，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示低、中、高3種濃度的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(relative standard deviation，RSD)分別為0.06%、0.12%、0.20%；按2.2項(xiàng)下色譜條件3種濃度的溶液重復(fù)進(jìn)樣3 d，測(cè)定峰面積。統(tǒng)計(jì)結(jié)果表明低、中、高3種濃度的RSD分別為0.28%、0.65%、0.92%，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明該方法精密度良好。

2.3.4 重復(fù)性試驗(yàn)：按照供試品的制備方法，平行制備3份。按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣，測(cè)定峰面積。結(jié)果顯示鹽酸阿糖胞苷溶液的RSD為0.05%，表明本試驗(yàn)重復(fù)性良好。

2.3.5 回收率試驗(yàn)：按2.1.1項(xiàng)下的操作配置低、中、高3個(gè)濃度的溶液，按2.2項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣分析，將測(cè)得的峰面積代入回歸方程得測(cè)量值，與加入的值作比較得到回收率。結(jié)果顯示低、中、高3個(gè)濃度溶液的回收率分別為99.6%、99.2%、100.9%，說(shuō)明本方法回收率良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)：取2.1.1項(xiàng)下對(duì)照品溶液1 ml置于10 ml的容量瓶中，用水溶解定容得20 μg/ml的溶液，分別于放置0、1、2、3、4、5、6、10、12 h時(shí)進(jìn)樣分析。結(jié)果，鹽酸阿糖胞苷的RSD值為0.65%，表明12 h內(nèi)對(duì)照品溶液穩(wěn)定性良好。

2.4 常溫放置下鹽酸阿糖胞苷穩(wěn)定性

2.4.1 配伍方法：根據(jù)臨床鹽酸阿糖胞苷靜脈滴注維持劑量，將冷藏放置及常溫放置1、2、4、8、12、30、60、90、120 d的100 mg注射用鹽酸阿糖胞苷分別溶于0.9%氯化鈉注射液100 ml和5%葡萄糖注射液100 ml中并定容，依次編號(hào)為N1-10及G1-10(N：0.9%氯化鈉注射液；G：5%葡萄糖注射液)，每個(gè)樣品平行三份，考察其穩(wěn)定性。

2.4.2 含量變化：取供試品N1-10及G1-10，按2.2項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)樣分析，記錄色譜峰，按照外標(biāo)法以峰面積計(jì)算藥物含量。以常溫放置天數(shù)為橫坐標(biāo)，將常溫放置的鹽酸阿糖胞苷濃度與冷藏放置鹽酸阿糖胞苷濃度比較作為縱坐標(biāo)，結(jié)果見(jiàn)圖6。由圖可看出常溫放置2 d后，鹽酸阿糖胞苷濃度開(kāi)始下降，常溫放置120 d的鹽酸阿糖胞苷濃度相比冷藏放置下降10%。

圖6 常溫存儲(chǔ)注射用鹽酸阿糖胞苷與不同載體溶媒配伍后溶液濃度相對(duì)百分含量變化

2.4.3 pH值變化：取供試品N1-10及G1-10，每份供試品測(cè)定其pH值，并觀察外觀變化，結(jié)果見(jiàn)圖7。經(jīng)觀察所有供試品溶液外觀呈透明澄清，其中5%葡萄糖注射液中pH值在2 d后開(kāi)始有上升的趨勢(shì)，當(dāng)其放置4個(gè)月其pH值上升到4.5左右，而0.9%氯化鈉注射液的pH值無(wú)顯著變化。

圖7 常溫存儲(chǔ)注射用鹽酸阿糖胞苷與不同載體溶媒配伍后溶液pH值變化

3 討 論

在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，先采用高春等[5]測(cè)定鹽酸阿糖胞苷的方法，測(cè)定的檢測(cè)波長(zhǎng)為270 nm，色譜柱為Description C18(150 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為流動(dòng)相:磷酸鹽緩沖液(取Na2HPO4·12H2O 12 g與NaH2PO43 g置1 000 ml量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度)—甲醇(90∶10)，但色譜峰的峰型不好，拖尾嚴(yán)重。后經(jīng)查閱文獻(xiàn)及多次試驗(yàn)，采用了檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，色譜柱為Diamonsil C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)，流動(dòng)相為(0.0106 mol/L的磷酸二氫鉀與0.0104 mol/L的磷酸氫二鉀等體積混合)—甲醇(90∶10)，所得的色譜峰的峰型良好。

本實(shí)驗(yàn)測(cè)定了常溫放置下鹽酸阿糖胞苷(國(guó)藥一心制藥有限公司)與溶媒配伍后其含量、外觀及pH值的變化，通過(guò)觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果可發(fā)現(xiàn)，需冷藏放置的鹽酸阿糖胞苷，放置于常溫下對(duì)其質(zhì)量是有影響的，尤其是鹽酸阿糖胞苷的含量，常溫放置2 d后其含量開(kāi)始有較明顯下降，經(jīng)查閱文獻(xiàn)[1,6]，發(fā)現(xiàn)注射用鹽酸阿糖胞苷在儲(chǔ)存過(guò)程中有可能分解為尿苷及阿糖尿苷，影響療效。根據(jù)臨床需要，當(dāng)病情嚴(yán)重時(shí)采用沖擊療法最大劑量為2 g/m2[7-8]，如果使用儲(chǔ)存不當(dāng)?shù)淖⑸溆名}酸阿糖胞苷則濃度會(huì)降低很多，影響療效，最終貽誤患者病情。注射用鹽酸阿糖胞苷在臨床主要用于治療急性粒細(xì)胞白血病，而患者大多數(shù)腎功能較差，氯化鈉注射液會(huì)加重患者腎臟負(fù)擔(dān)，多采用5%葡萄糖注射液，《中國(guó)藥典》規(guī)定葡萄糖注射液的pH值范圍為3.2～5.5，但有文獻(xiàn)[9]報(bào)道葡萄糖注射液的pH值在3～4時(shí)最穩(wěn)定，在本研究中發(fā)現(xiàn)注射用鹽酸阿糖胞苷常溫放置其在5%葡萄糖注射液中pH值在2 d后開(kāi)始有上升的趨勢(shì)，當(dāng)其放置4個(gè)月其pH值上升到4.5左右，如輸注到患者體內(nèi)，可能會(huì)對(duì)患者身體產(chǎn)生不利影響。因此，在臨床工作中一定要注意藥品的儲(chǔ)存條件，以免對(duì)藥品質(zhì)量產(chǎn)生影響。

利益沖突：所有作者聲明無(wú)利益沖突。