骨痹通消顆粒治療激素性股骨頭壞死的分子機(jī)制*

侯文淵，朱彩玉，朱磊，顧一帆，周正新

1 安徽中醫(yī)藥大學(xué) 安徽合肥 230038

2 安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院 安徽合肥 230031

激素性股骨頭壞死（Steroid induced necrosis of femoral head，SANFH）是股骨頭的多種組織成分如骨髓造血細(xì)胞、骨組織和脂肪細(xì)胞等活性組織在高劑量激素刺激下而死亡的病理過程[1]。據(jù)報道，有55.75%的女性和26.35%的男性股骨頭壞死是糖皮質(zhì)激素所導(dǎo)致[2]。由于SANFH的發(fā)病年齡往往青年化且難以治愈，因此已經(jīng)成為年輕人髖關(guān)節(jié)殘疾最常見的原因之一[3]。

骨痹通消顆粒是全國名中醫(yī)丁鍔教授在骨蝕寧方的基礎(chǔ)上，倡導(dǎo)補(bǔ)腎活血通絡(luò)大法化裁而來。骨痹通消顆粒（丹參 15g，川芎 10g，當(dāng)歸 10g，赤芍 12g，淫羊藿 10g，續(xù)斷 10g，肉桂 4g，土鱉蟲 6g，甘草 6g）由安徽中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院制成顆粒劑，其最主要的藥理作用是補(bǔ)腎、活血、通絡(luò)。已有研究表明，應(yīng)用該復(fù)方治療股骨頭壞死在臨床上效果顯著[4]。動物試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明，骨痹通消顆粒可能有助于改善類固醇誘導(dǎo)的股骨頭壞死的進(jìn)展[5]。然而，其關(guān)鍵活性化合物、潛在靶點(diǎn)以及作用途徑尚不清楚。

近年來，系統(tǒng)藥理學(xué)的一般解決方案被提出，研究多靶點(diǎn)化合物影響中藥生物網(wǎng)絡(luò)的多種分子機(jī)制已成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。因此，本研究采用系統(tǒng)藥理學(xué)的方法，結(jié)合分子對接和分子動力學(xué)模擬等手段探討中藥復(fù)方骨痹通消顆粒對SANFH的藥理作用機(jī)制。

資料與方法

1 復(fù)方成分和靶點(diǎn)的篩選

復(fù)方骨痹通消顆粒由丹參、川芎、當(dāng)歸、赤芍、淫羊藿、續(xù)斷、肉桂、土鱉蟲和甘草9味中藥組成，我們在 TCMSP數(shù)據(jù)庫（https：//tcmsp-e.com/）以及 SwissTargetPrediction數(shù) 據(jù) 庫（http：//www.swisstargetprediction.ch/）上以口服生物利用度（OB ≥ 30%）和類藥性（DL ≥ 0.18）作為篩選條件，對骨痹通消顆粒的9味中藥進(jìn)行化學(xué)成分及其作用靶點(diǎn)的篩選。

然 后，我 們 使 用 UniProt數(shù) 據(jù) 庫（https：//www.uniprot.org）將這些藥物靶點(diǎn)的蛋白名稱轉(zhuǎn)化為基因Symbol。值得注意的是，TCMSP數(shù)據(jù)庫未涵蓋中藥土鱉蟲，因此，我們通過大量查閱文獻(xiàn)收集到土鱉蟲化學(xué)成分及預(yù)測成分作用的所有靶點(diǎn)。

2 疾病靶點(diǎn)的篩選

我們使用 GeneCards數(shù)據(jù)庫（https：//www.genecards.org）、OMIM 數(shù) 據(jù) 庫（http：//www.omim.org）和PharmGKB 數(shù)據(jù)庫（https：//www.pharmgkb.org/），以疾病英文縮寫“SANFH”作為關(guān)鍵詞進(jìn)行檢索，得到相關(guān)疾病靶點(diǎn)。然后將上述三種數(shù)據(jù)庫中獲得的疾病靶點(diǎn)進(jìn)行Excel列表匯總，確定SANFH的相關(guān)靶點(diǎn)，然后將整理所得復(fù)方的靶點(diǎn)和藥物的靶點(diǎn)取交集。

3 復(fù)方藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)與蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建

CytoScape 3.8.0軟件被用來構(gòu)建藥物-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖。為了闡明骨痹通消顆粒靶點(diǎn)與SANFH疾病靶點(diǎn)間的作用關(guān)系，我們利用R 4.1.1軟件計算兩者的交集靶點(diǎn)，然后使用STRING數(shù)據(jù)庫（https：//string-db.org）構(gòu)建蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)絡(luò)，使用Cyto-Scape軟件確對網(wǎng)絡(luò)的拓?fù)湫螒B(tài)進(jìn)行進(jìn)一步分析。

4 基因富集分析

繼上一步分析的結(jié)果，使用Metascape數(shù)據(jù)庫（http：//metascape.org/gp/index.html）進(jìn) 行 GO（生 物過程）分析，根據(jù)Q值，對排名前20的生物學(xué)過程使用R軟件繪制氣泡圖，并對排名前20的KEGG通路進(jìn)行可視化分析，篩選出可以用于解釋骨痹通消顆粒治療SANFH的通路。

5 成分-靶點(diǎn)分子對接驗(yàn)證

分子對接開始之前，我們將分析得到的靶點(diǎn)和成分一一對應(yīng)，然后置于PubChem數(shù)據(jù)庫（https：//pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/）獲取骨痹通消顆粒關(guān)鍵活性成分的Smiles格式，使用Chem3D 19.0軟件獲得對應(yīng)的小分子pdb文件，使用PDB數(shù)據(jù)庫下載核心靶點(diǎn)的PDB 文件。使用 DS（Discovery Studio 4.5 Client）蛋白大分子處理軟件處理，最后由 AutoDock Tools Vina 1.1.2軟件進(jìn)行分子對接，得到對接的結(jié)合能以及相應(yīng)的配體-受體結(jié)合的3D圖。

6 分子動力學(xué)模擬

分子動力學(xué)模擬（Molecular Dynamics Simulation，MD）主要是依靠牛頓力學(xué)模擬配體在蛋白體系的運(yùn)動情況，在配體運(yùn)動進(jìn)行每個步驟的同時，抽取狀態(tài)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行體系的構(gòu)型分?jǐn)?shù)計算，并根據(jù)計算結(jié)果進(jìn)行諸如均方根誤差（RMSD）和均方根浮動（RMSF）的呈現(xiàn)。進(jìn)行分子對接后，盡管有很多體系的結(jié)合效果很好（結(jié)合能高），但是我們并不知道當(dāng)施加人體環(huán)境作用后，該體系是否依然穩(wěn)定。

進(jìn)行MD模擬的方法有很多，但最有效且公認(rèn)的方法是通過GROMACS進(jìn)行的，因此，我們的MD模擬也是基于GROMACS程序包的，在MD模擬開始之前，我們預(yù)先設(shè)置了一系列參數(shù)進(jìn)行體系的平衡，比如使用水分子的TIP3P模型，溶劑環(huán)境為中性氯化鈉溶液，溫度為開爾文溫度310K（約為人體的36.85℃），在1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓下開始MD模擬。

最后，我們使用Origin 2018軟件對RMSD結(jié)果進(jìn)行可視化，得到了RMSD（nm）隨時間（ns）變化的三體系折線圖。

結(jié) 果

1 藥物成分與靶點(diǎn)篩選

我們借助TCMSP數(shù)據(jù)庫檢索骨痹通消顆粒中9味中藥的成分，共檢索到有效成分丹參65個，川芎7個，當(dāng)歸2個，赤芍29個，淫羊藿23個，續(xù)斷8個，肉桂65個，土鱉蟲18個以及甘草92個。部分有效成分見表1。

表1 骨痹通消顆粒部分化合物成分

然后我們借助SwissTargetPrediction、TCMSP和Perl語言預(yù)測到丹參的有效成分靶點(diǎn)932個，川芎的有效成分靶點(diǎn)42個，當(dāng)歸的有效成分靶點(diǎn)69個，赤芍的有效成分靶點(diǎn)158個，淫羊藿的有效成分靶點(diǎn)511個，續(xù)斷的有效成分靶點(diǎn)63個，肉桂的有效成分靶點(diǎn)166個，土鱉蟲的有效成分靶點(diǎn)1445個以及甘草的有效成分靶點(diǎn)1769個，將這9味中藥的作用靶點(diǎn)合并后去重共得到靶點(diǎn)678個。

2 成分靶點(diǎn)與疾病靶點(diǎn)交集

借助GeneCards、OMIM和PharmGkb三個疾病靶點(diǎn)數(shù)據(jù)庫得到SANFH相關(guān)的所有靶點(diǎn)，分別得到1367個，120個和380個結(jié)果。我們使用R 軟件將SANFH疾病靶點(diǎn)及所有藥物成分靶點(diǎn)進(jìn)行篩選篩選，去除重復(fù)的靶點(diǎn)后，使用R 軟件將成分靶點(diǎn)和疾病靶點(diǎn)取交集，同時繪制出交集的Venn圖（見圖1），得到SANFH靶點(diǎn)共1644個，其中，所有中藥有效成分靶點(diǎn)共678個，SANFH和中藥有效成分的交集靶點(diǎn)共283個。

圖1 SANFH靶點(diǎn)和藥物靶點(diǎn)的交集

3 中藥調(diào)控網(wǎng)絡(luò)圖的構(gòu)建

我們將篩選到的中藥成分和成分-疾病交集靶點(diǎn)借助R軟件和Cytoscape軟件繪制中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)（見圖2）。骨痹通消顆粒治療SANFH相關(guān)的中藥有效成分共199個（其中關(guān)于土鱉蟲的有效成分17個，當(dāng)歸2個，續(xù)斷4個，肉桂14個，淫羊藿16個，川芎6個，丹參58個，甘草88個，赤芍12個）。對應(yīng)交集靶點(diǎn)數(shù)目排名前十的有效成分及其來源：槲皮素（甘草）、十六碳烯酸（肉桂，土鱉蟲）、肉豆蔻酸（土鱉蟲）、棕櫚酸（土鱉蟲）、十六碳-9，12-二烯酸（土鱉蟲）、4'，5-二羥基 -7-甲氧基黃酮（土鱉蟲）、月桂酸（土鱉蟲）、鯊甘醇（土鱉蟲）、十四碳烯酸（土鱉蟲）、山萮酸（土鱉蟲）；其中最多者槲皮素對應(yīng)96個靶點(diǎn)，最少者山崳酸對應(yīng)43個靶點(diǎn)。推測骨痹通消顆粒主要通過以上有效成分來發(fā)揮SANFH的治療作用，應(yīng)予以重視和進(jìn)一步研究。

圖2 骨痹通消顆粒治療SANFH的中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)

在中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)圖中，綠色結(jié)點(diǎn)代表藥物，藍(lán)色結(jié)點(diǎn)代表活性成分，其中紫色結(jié)點(diǎn)代表共同活性成分，紅色結(jié)點(diǎn)代表靶點(diǎn)，中藥-成分-靶點(diǎn)網(wǎng)絡(luò)中共匯集了4229條邊，888個結(jié)點(diǎn)。

4 蛋白互作網(wǎng)絡(luò)（PPI）的構(gòu)建

為了闡明靶點(diǎn)蛋白間的相互作用，將交集的283個靶點(diǎn)提交至STRING 11.0數(shù)據(jù)庫，物種選擇Homo sapiens，相互作用結(jié)合分?jǐn)?shù)≥ 0.7，去除游離無連接的節(jié)點(diǎn)，構(gòu)建蛋白互質(zhì)（PPI）網(wǎng)絡(luò)模型（見圖3），網(wǎng)絡(luò)共有268個節(jié)點(diǎn)，2141個邊，其中，結(jié)點(diǎn)為靶點(diǎn)，連線為靶點(diǎn)之間存在互作關(guān)系，結(jié)點(diǎn)的顏色、大小以PPI得分繪制，結(jié)點(diǎn)越大且結(jié)點(diǎn)顏色越深表示兩靶點(diǎn)在該網(wǎng)絡(luò)越重要。節(jié)點(diǎn)度值最大81，中位數(shù)41以上的16個靶點(diǎn)視作核心靶點(diǎn)，并構(gòu)建核心靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)（見圖4），圖中結(jié)點(diǎn)代表核心靶點(diǎn)，連線代表核心靶點(diǎn)之間存在互作關(guān)系，顏色與度值呈正相關(guān)，顏色越深表示靶點(diǎn)在該網(wǎng)絡(luò)中越重要。

圖3 骨痹通消顆粒-SANFH靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)

圖4 關(guān)鍵靶點(diǎn)的蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)

我們繼續(xù)使用CytoScape自帶的MCODE分析PPI網(wǎng)絡(luò)，確定潛在蛋白質(zhì)相互作用拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)。MCODE分析發(fā)現(xiàn)，共11個拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)，每個拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)中的蛋白有著更為緊密的聯(lián)系，作score得分前5個拓?fù)淠K的網(wǎng)絡(luò)圖（見圖5）。

圖5 交集靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)中的拓?fù)渥泳W(wǎng)絡(luò)

5 GO富集分析和KEGG通路分析結(jié)果

為了使富集結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義，我們將P<0.05作為GO富集分析（生物過程）和KEGG通路分析的條件，并將P值排在前20的條目通過R軟件繪制出氣泡圖。其中，GO生物過程富集分析得到607個條目（見圖6a），對應(yīng)靶點(diǎn)60個，KEGG通路分析得到162條信號通路（見圖6b），對應(yīng)靶點(diǎn)49個。

圖6 （A）GO富集分析（生物過程）（B）KEGG富集分析

可見，骨痹通消顆粒是通過參與多種生物過程和多種通路來發(fā)揮作用的。通過比較富集分析的靶點(diǎn)排名以及分布情況，綜合考慮TP53、AKT1、SRC、STAT3、MAPK3、JUN、MAPK1、EGFR、IL6、ESR1、MYC、RELA、CASP3、VEGFA、IL1B 和 RXRA 等 16個以上的靶點(diǎn)具有較為重要的作用。

6 成分-靶點(diǎn)分子對接驗(yàn)證分析結(jié)果

本研究選取骨痹通消顆?；钚猿煞种蠨egree值排名前3的關(guān)鍵藥效物質(zhì)槲皮素、肉豆蔻酸及棕櫚油酸（Quercetin、Myristic acid 和 Palmitoleic acid），分別與核心靶點(diǎn)TP53、AKT1和SRC進(jìn)行分子對接，結(jié)合能結(jié)果見表2。

表2 分子對接詳細(xì)結(jié)果

使用PyMol軟件將對接結(jié)果進(jìn)行可視化（見圖7），從圖中我們可知，Quercetin與AKT1靶點(diǎn)的氨基酸殘基 ASN-54、GLN-79、LEU-210和 SER-205形成氫鍵，與TP53靶點(diǎn)的氨基酸殘基ALA-138、ARG-196、SER-166、ASP-186和 ASN-200形成氫鍵，與SRC靶點(diǎn)的氨基酸殘基LYS-298、THR-341、ASP-407、GLU-342 和 MET-344 形成氫鍵；Myristic acid 與AKT1靶點(diǎn)的氨基酸殘基VAL-271、ASN-54和GLN-79形成氫鍵，與TP53靶點(diǎn)的氨基酸殘基SER-166和ARG-196形成氫鍵，與SRC靶點(diǎn)的氨基酸殘基GLY-279形成氫鍵；Palmitoleic acid與 AKT1靶點(diǎn)的氨基酸殘基THR-82、THR-81和ASP-292形成氫鍵，與TP53靶點(diǎn)的氨基酸殘基ARG-196和ASN-235形成氫鍵，與SRC靶點(diǎn)的氨基酸殘基LYS-298形成氫鍵。對接結(jié)果表明，當(dāng)骨痹通消顆粒中的三種關(guān)鍵成分結(jié)合于SANFH的靶點(diǎn)上時，SANFH的靶點(diǎn)表現(xiàn)出較為穩(wěn)定的三級結(jié)構(gòu)。

圖7 關(guān)鍵藥效物質(zhì)-核心靶點(diǎn)分子對接

7 分子動力學(xué)模擬結(jié)果

顯而易見，我們根據(jù)分子對接的結(jié)果可以看到槲皮 素 與 TP53（-8 kcal/mol）、AKT1（-9.6 kcal/mol）和SRC（-10.1 kcal/mol）三個靶點(diǎn)有著較好的結(jié)合能效果，然而，MD模擬的結(jié)果并沒有像預(yù)想的一樣與分子對接結(jié)果對應(yīng)（見圖8），可見MD模擬的重要性。

圖8 三個體系的MD模擬結(jié)果（RMSD）

MD模擬結(jié)果顯示，分子對接結(jié)合能最高的SRC靶點(diǎn)在人體中卻沒有特別穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)狀態(tài)，但是該體系的RMSD波動較為微小，有一定的研究價值。相反，槲皮素與AKT1無論是在結(jié)合能上還是在RMSD中，都表現(xiàn)出較為穩(wěn)定的結(jié)合構(gòu)象，而槲皮素與TP53的RMSD結(jié)果表現(xiàn)得更加糟糕，甚至不值得進(jìn)行下一步研究。

討 論

自從Pietrogrande1953年首次報道股骨頭壞死與激素相關(guān)以來[6]，SANFH引起了越來越多的學(xué)者的關(guān)注。目前，盡管提出了許多發(fā)病機(jī)制假說，如脂質(zhì)代謝紊亂、骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成脂分化、血管內(nèi)凝血、細(xì)胞凋亡、氧化應(yīng)激等[7-8]，但針對SANFH具體的發(fā)病機(jī)制仍然沒有統(tǒng)一的結(jié)論。

股骨頭壞死在中醫(yī)歸為“骨痹”“骨蝕”“骨痿”范疇，如《素問·長刺節(jié)論篇》指出“骨重不可舉，骨髓酸痛，寒氣至，名骨痹”[9]。許多醫(yī)家認(rèn)為，骨痹以肝腎虧虛為主要病因，氣滯血瘀是其病理基礎(chǔ)，治宜補(bǔ)益肝腎，活血化瘀[10-12]。周正新教授以補(bǔ)腎活血為原則，在臨床上使用骨痹通消顆粒治療股骨頭壞死效果明顯，但由于中藥成分的復(fù)雜性和疾病發(fā)病機(jī)制的多樣性，骨痹通顆粒治療股骨頭壞死的藥理機(jī)制的探索仍處于初期階段，極大地限制了其臨床應(yīng)用和發(fā)展。

通過構(gòu)建“藥物-成分-靶點(diǎn)”網(wǎng)絡(luò)，篩選出網(wǎng)絡(luò)關(guān)系中Degree排名前3的藥物活性成分，分別為槲皮素、肉豆蔻酸及棕櫚油酸。其中，槲皮素是方中淫羊藿、甘草的主要活性成分。研究表明，槲皮素不僅可以通過miRNA-206/Cx43通路刺激骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨分化，促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，防止骨質(zhì)丟失[13]。還可以通過抑制IRAK1/NLRP3信號通路，下調(diào)IRAK1、NLRP3和caspase-3的表達(dá)水平，抑制炎癥和凋亡，減輕關(guān)節(jié)軟骨的退化和侵蝕[14]。此外槲皮素還可通過p-38α/β信號通路抑制巨噬細(xì)胞極化并調(diào)節(jié)OPG/RANKL平衡，減輕全髖關(guān)節(jié)置換術(shù)后假體磨損顆粒導(dǎo)致的炎癥反應(yīng)[15]。肉豆蔻酸和棕櫚油酸是土鱉蟲的主要活性成分。研究證明，膳食脂肪酸可以調(diào)節(jié)代謝和免疫反應(yīng)，提高全身胰島素敏感性，刺激β細(xì)胞分泌胰島素，增加肝臟脂肪酸氧化，改善血脂水平，并改變巨噬細(xì)胞的分化[16]。另外在LDLR-KO（低密度脂蛋白受體缺陷）小鼠中，添加棕櫚油酸可降低動脈粥樣硬化的發(fā)展，并與改善脂質(zhì)和糖代謝以及參與脂肪生成和炎癥的調(diào)節(jié)基因有關(guān)，表明棕櫚油酸在代謝紊亂方面的具有潛在作用[17]。研究發(fā)現(xiàn)，肉豆蔻酸通過抑制RAGE、Keap1的上調(diào)和Nrf2、NQO1、HO1、SOD、CAT和GPx的下調(diào)，使細(xì)胞免受氧化應(yīng)激。還可以通過降低炎癥（NF-κB，p65，IKKβ，TNF-α，IL-1β 和 iNOS）和凋亡（Bax和 caspase-9），升高抗凋亡（Bcl-2）標(biāo)志物水平來阻止炎癥和凋亡的增加[18]。通過上述結(jié)果，課題組認(rèn)為，骨痹通消顆粒主要通過君藥淫羊藿、土鱉蟲中有效活性成分如槲皮素、肉豆蔻酸等，來調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，抑制炎癥的反應(yīng)，阻止細(xì)胞凋亡，從而延緩SANFH的發(fā)生發(fā)展。

PPI網(wǎng)絡(luò)分析發(fā)現(xiàn)AKT1、SRC和TP53為治療SANFH的核心蛋白。AKT1是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，被稱為AKT激酶（AKT1、AKT2和AKT3）[19]。AKT1具有調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、代謝、凋亡以及血管生成、血液流速、組織重塑的能力，已被提出作為促進(jìn)血管生成相關(guān)的治療靶點(diǎn)，在股骨頭缺血性壞死中治療中發(fā)揮著重要的作用[20]。SRC是一種酪氨酸蛋白激酶，在細(xì)胞生長、分裂、遷移和生存信號通路中發(fā)揮關(guān)鍵作用[21]。TP53蛋白是一種抑制異常細(xì)胞生長的腫瘤抑制因子，功能性TP53被認(rèn)為可以感知DNA損傷，隨后誘導(dǎo)異常細(xì)胞的DNA修復(fù)、生長阻滯或凋亡[22]。同時TP53和Parkin共同調(diào)節(jié)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的線粒體吞噬，可以促進(jìn)早期激素誘導(dǎo)的ONFH的修復(fù)[23]。

GO功能富集分析結(jié)果表明，骨痹通消顆粒治療SANFH的283個潛在靶點(diǎn)的主要生物學(xué)過程涉及激素代謝過程、生物對脂多糖、細(xì)菌源分子、藥物、氧化應(yīng)激的應(yīng)答過程。KEGG通路富集結(jié)果表明，核心靶點(diǎn)對應(yīng)的顯著信號通路主要包括脂質(zhì)代謝紊亂、AGE-RAGE通路、白細(xì)胞介素17信號通路、腫瘤壞死因子信號通路、內(nèi)分泌抵抗通路。這些通路主要與脂質(zhì)代謝紊亂、炎癥反應(yīng)、血管生成、骨代謝及免疫調(diào)節(jié)等有關(guān)，且相互之間有著協(xié)同效應(yīng)，其中脂質(zhì)代謝通路擁有最低的P-value和最多的富集基因數(shù)。由激素誘導(dǎo)的脂質(zhì)代謝紊亂引起的股骨頭壞死主要有兩種機(jī)制：微血管脂肪栓塞和骨細(xì)胞脂肪沉積[24]。相關(guān)研究表明由于使用激素，皮下脂肪動員增加。隨著給藥時間的延長，血脂水平呈增加的趨勢，進(jìn)而導(dǎo)致脂質(zhì)分布異常，微血管內(nèi)脂肪栓塞，髓腔內(nèi)脂肪堆積，脂肪細(xì)胞體積增大，髓腔內(nèi)壓力升高[25]。現(xiàn)有研究已經(jīng)證實(shí)脂質(zhì)代謝紊亂是激素性股骨頭壞死發(fā)展過程中的重要環(huán)節(jié)[26]。因此，課題組推測骨痹通消顆粒主要通過調(diào)控糖皮質(zhì)激素引起的脂質(zhì)代謝紊亂，減輕股骨頭內(nèi)微小動脈的脂肪沉積和脂肪栓塞，降低骨內(nèi)壓，促進(jìn)血流通暢，來達(dá)到防治SANFH的目的。

分子對接結(jié)果顯示，骨痹通消顆粒中關(guān)鍵藥效物質(zhì)槲皮素、肉豆蔻酸及棕櫚油酸與核心靶點(diǎn)蛋白AKT1、SRC及TP53能夠穩(wěn)定地結(jié)合，表明骨痹通消顆?？赡茏饔糜谏鲜霭悬c(diǎn)，從而治療SANFH。而MD模擬驗(yàn)證結(jié)果表明，槲皮素與AKT1的復(fù)合物體系能夠穩(wěn)定存在于人體，并且不會產(chǎn)生其他不良影響，因此槲皮素與AKT1的結(jié)合可成為治療SANFH的新思路。

綜上所述，本研究以骨痹通消顆粒和SANFH為探討對象，以系統(tǒng)藥理學(xué)為基礎(chǔ)，結(jié)合SANFH的病理機(jī)制，排除缺乏特異性的信號通路，我們推測骨痹通消顆粒通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝和氧化應(yīng)激等信號通路發(fā)揮補(bǔ)腎、活血、通絡(luò)的功效，這可能是其治療SANFH的作用機(jī)制之一。為后續(xù)的研究提供了理論支撐，為臨床用藥及靶向新藥研發(fā)提供了導(dǎo)向支持。