來賓市牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控（區(qū)域）監(jiān)測凈化技術(shù)

李崇斌，王武，黃江峰，陳勝文，鄭子勝，謝海

（1.廣西來賓市動物疫病預(yù)防控制中心 廣西來賓 546100；2.廣西來賓市興賓區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心 廣西來賓 546100）

牛結(jié)節(jié)性皮膚病是由痘病毒科羊痘病毒所引起的一種急性、亞急性傳染病，又稱牛結(jié)節(jié)疹、牛結(jié)節(jié)性皮炎、牛疙瘩性皮膚病，以體溫升高，皮膚表面出現(xiàn)結(jié)節(jié)性或疙瘩樣結(jié)節(jié)（疹）、消瘦等為特征。

流行情況：2019 年8 月我國首次確診發(fā)生該病，2020 年以來賓市零星出現(xiàn)以發(fā)熱、皮膚或黏膜出現(xiàn)結(jié)節(jié)狀痘疹、鼻炎、結(jié)膜炎等為特征疑似牛結(jié)節(jié)性皮膚病的病例。感染牛和發(fā)病牛的皮膚結(jié)節(jié)、唾液、精液等為傳染源，通過吸血昆蟲等蟲媒叮咬、消化道、針尖頭等器械、交配等途徑傳播。

臨床癥狀：病牛體溫升高40～42℃，高熱稽留，精神委頓，不愿走動，鼻、眼有炎癥和膿性分泌物。以全身皮膚、黏膜（頭、頸、胸、腹、背、腿、陰囊、會陰、外陰、乳房、尾部、口鼻黏膜、生殖器黏膜、消化道黏膜等部位）出現(xiàn)大小不等、凸出于皮膚表面結(jié)節(jié)，或潰爛灶，重癥可聚成不規(guī)則的腫塊，結(jié)節(jié)切面為浮白色或白色，初期有滲出血清，隨著病程發(fā)展，2 周內(nèi)結(jié)節(jié)可能出現(xiàn)錐形中央核、壞死組織或壞死灶。全身體表淋巴結(jié)節(jié)腫大。母牛流產(chǎn)，流產(chǎn)胎兒皮膚有結(jié)節(jié)性小瘤，有子宮內(nèi)膜炎，或暫時性不孕，泌乳牛產(chǎn)奶量顯著減少；公牛睪丸炎或附睪炎，暫時性或終生不育。因滑膜炎和腱鞘炎而表現(xiàn)跛行癥狀。

剖檢癥狀：皮膚結(jié)節(jié)部皮膚層、皮下組織或鄰近肌肉有充血、水腫、炎癥、壞死，或有漿液性滲出?？谇火つ?、消化道黏膜、生殖道黏膜有丘疹狀結(jié)節(jié)或痘樣病變。有原發(fā)性或繼發(fā)性肺炎。

1 牛結(jié)性皮膚病防控（區(qū)域）監(jiān)測凈化技術(shù)

1.1 制定來賓市牛養(yǎng)殖區(qū)域牛結(jié)節(jié)性皮膚監(jiān)測凈化技術(shù)規(guī)程方案

依據(jù)《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》《動物疫病凈化示范區(qū)評估標準（試行）（2019 版）》《廣西壯族自治區(qū)養(yǎng)殖場動物疫病凈化技術(shù)規(guī)程的通知》等規(guī)范、文件的標準和要求，制定《來賓市牛養(yǎng)殖區(qū)域牛結(jié)節(jié)性皮膚監(jiān)測凈化技術(shù)規(guī)程方案》。

1.2 開展本底調(diào)查

由市級流調(diào)人員、市、縣（區(qū)、市）級疫情測報人員、鄉(xiāng)鎮(zhèn)級動物防疫員和村級動物防疫員不定期對轄區(qū)內(nèi)存欄的牛群進行普查、排查，建立存欄20 頭以上養(yǎng)殖場（或養(yǎng)殖大戶）檔案信息，包括具體地點、種牛類別、飼養(yǎng)量等情況。

1.3 疫苗預(yù)防免疫

按照《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》規(guī)范要求，選用政府統(tǒng)采購的山羊痘活疫苗（哈藥集團生物疫苗有限公司），用法及用量：每瓶（50 頭份）用5mL 生理鹽水（或注射用水）稀釋為每0.5mL 含5頭份，不論牛只大小，每頭尾根內(nèi)側(cè)皮內(nèi)注射0.5mL。要求牛站立保定，選用7×8 針頭，按30°的小角度于尾根內(nèi)側(cè)皮膚進行皮內(nèi)注射免疫。建立高密度免疫牛群，要求牛群免疫山羊痘活疫苗免疫密度100%，抗體合格率75%以上。

1.4 防治技術(shù)培訓(xùn)和科普宣傳

充分利用廣播、電視、標語、通告等形式加強宣傳，通過春秋兩防全員動員培訓(xùn)會、科普大行動、專項技術(shù)培訓(xùn)會等形式增加組織培訓(xùn)，印發(fā)宣傳冊、明白紙（《牛結(jié)節(jié)性皮膚病預(yù)防控制知識問答》）、掛圖（《牛結(jié)節(jié)性皮膚病臨床癥狀及剖檢癥狀診斷彩色圖譜》《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控知識掛圖》）等，積極向群眾宣傳牛結(jié)節(jié)性皮膚病的綜合防治知識，培訓(xùn)基層獸醫(yī)人員、村級防疫員、經(jīng)營、養(yǎng)殖、屠宰等相關(guān)從業(yè)人員，增強對牛結(jié)節(jié)性皮膚病的綜合預(yù)防控制意識。

1.5 進行血清學監(jiān)測

1）樣品采集：采集牛的血液，每頭應(yīng)不少于5mL，血液樣品中分離出血清樣品，置于冷凍保存、備檢。

2）牛結(jié)節(jié)性皮膚病抗體檢測：采用牛結(jié)節(jié)性皮膚病競爭ELISA抗體檢測試劑盒（蘭州獸研生物科技有限公司生產(chǎn)）。步驟及方法：按該試劑盒操作步驟及方法，取待檢血清樣品、陽性對照血清樣品及陰性對照血清樣品各50μl/孔進行檢測，用酶標儀讀取OD450nm值。結(jié)果判定（計算同一酶標板上陰、陽性對照孔和每份待檢血清孔的OD450nm值，根據(jù)以下公式計算陰、陽性血清及待檢血清的抑制率（PI）。公式:PI=[1-(樣品孔的OD450nm值/陰性對照孔的OD450nm值)]*100%。判定標準：①當陽性對照血清PI＞60%，陰性對照血清OD450nm值＞1.0 時，檢測結(jié)果成立，否則該次檢測結(jié)果無效。②診斷或流行病學調(diào)查時，待檢血清PI55%，陽性；PI＜55%，陰性。③進行抗體效價評估時，待檢血清PI50%，合格；PI＜50%，不合格。

如：來賓市某規(guī)?；雠＝Y(jié)節(jié)性皮膚病抗體檢測結(jié)果見圖1。

圖1 來賓市某規(guī)?；雠＝Y(jié)節(jié)性皮膚病抗體檢測結(jié)果

1.6 進行病原學監(jiān)測

1）樣品采集：采集牛的唾液、口腔/鼻腔棉拭子、精液等，立即裝入如5mL 血清離心管等樣品保存管，加入0.5～1mL 生理鹽水，按蓋封緊，冷凍保存、備檢。

2）病毒DNA 提?。翰捎肨Guide S32 磁珠法病毒DNA/RNA 提取試劑盒提取各類樣品中的待檢病毒DNA，按TGuide S32 自動核酸提取儀操作步驟，樣品平衡至室溫后，取200μL 樣品進行核酸提取。自動化程序結(jié)束后，將DNA 樣品取出，用封口膜封好并低溫保存、備用。

3）牛結(jié)核性皮膚病病毒核酸檢測：采用牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒熒光PCR 檢測試劑盒（青島立見診斷技術(shù)發(fā)展中心生產(chǎn)），用法：按該試劑盒操作步驟，取5μL 待檢DNA 樣品、陽性對照樣品及陰性對照樣品進行檢測。判定：結(jié)果有效性（陽性對照應(yīng)出現(xiàn)特異性擴增曲線且Ct（CP）值≤35，且陰性對照無特異性擴增曲線或無Ct（CP）值，則試驗成立；否則試驗不成立）；結(jié)果判定（當樣品的擴增結(jié)果有典型的擴增曲線且Ct（CP）值≤37 時可判定為牛結(jié)節(jié)性皮病病毒核酸陽性，Ct（CP）值＞40 或無Ct（CP）值時可判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸陰性；當樣品37＜Ct（CP）值≤40 時判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸可疑，重新提取核酸，重復(fù)檢測仍為可疑則判定為牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒核酸陽性。）

病原學監(jiān)測要求：散養(yǎng)牛、存欄規(guī)模20～500 頭每年監(jiān)測一次，監(jiān)測數(shù)量按流行率2%采集，種牛場（或存欄500 頭以上的）每年一次，監(jiān)測數(shù)量按存欄量25%以上采集。引種種牛（奶牛）隔離觀察期間檢測一次，按引進數(shù)量50%采集。

如：來賓市某規(guī)?；雠＝Y(jié)節(jié)性皮膚病病毒熒光PCR 檢測結(jié)果（圖2、圖3）。

圖2 樣品CT（CP）值表

圖3 樣品擴增曲線圖示

1.7 加強排查，嚴格疫情報告和疫情處置，加強日常監(jiān)測

加強引種和檢疫管理，要求轄區(qū)內(nèi)養(yǎng)殖場（戶）如要從外地引進牛只時，要嚴格按要求進行申報、調(diào)查，加強檢疫檢驗，堅決杜絕從疫區(qū)引種，從而杜絕傳染來源。不定期由各縣（市、區(qū)）動物檢疫員、疫情測報員、動物防疫員進行疫情普查、排查，如每天進行運輸外調(diào)檢疫和市場檢疫，每月進行疫情測報，每季度進行普檢監(jiān)測，發(fā)現(xiàn)有疑似牛結(jié)節(jié)性皮膚病時，實行快報制度，要及時上報，按照"可疑疫情-疑似疫情-確診疫情"程序認定疫情，采樣送檢，由廣西壯族自治區(qū)動物疫病預(yù)防控制中心復(fù)檢、確診病例。如果發(fā)生牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情時，立即啟動本級牛結(jié)節(jié)性皮膚病疫情應(yīng)急預(yù)案，劃定疫點、疫區(qū)和受威脅區(qū)，封鎖疫區(qū)，防止病毒向非疫區(qū)傳播，防止疫情擴散。開展流行病學調(diào)查。開展疫情報告以前樣品采集、送檢、檢測等工作。按要求完成各項信息快報。對疫點采取綜合防控措施（對發(fā)病牛和病原學陽性牛進行撲殺并無害化銷毀處理，同群病原學陰性牛采取隔離飼養(yǎng)，并鼓勵提前出欄屠宰；滅殺牛場吸血昆蟲及幼蟲，清除孳生環(huán)境，防范吸血蟲媒叮咬；對疫點牛只排泄物、被病原污染物、污染的飼料和墊料、污水等進行無害化處理；對被病原污染或可能被病原污染的物品、工具、器械、圈舍、場地等進行嚴格徹底消毒，出入人員、車輛和相關(guān)設(shè)施進行消毒處理）。對疫區(qū)采取的綜合防控措施（禁止牛只出入，禁止未經(jīng)檢疫合格的牛皮張、精液等產(chǎn)品調(diào)出。滅殺牛場吸血昆蟲及幼蟲，清除孳生環(huán)境。對疫區(qū)牛只進行監(jiān)測排查和感染風險評估，及時掌握疫情動態(tài)等）。對受威脅區(qū)采取綜合防控措施（禁止牛只出入，禁止未經(jīng)檢疫合格的牛皮張、精液等產(chǎn)品調(diào)出。滅殺牛場吸血昆蟲及幼蟲，清除孳生環(huán)境。對疫區(qū)牛只進行監(jiān)測排查和感染風險評估，及時掌握疫情動態(tài)等）。對疫點、疫區(qū)、受威脅區(qū)等全部牛只采用山羊痘活疫苗進行緊急免疫（按照山羊的5 倍劑量）。加強檢疫監(jiān)管、日常監(jiān)測、流行病學調(diào)查等工作。

2 總體目標任務(wù)

1）解決關(guān)鍵問題：建立以來賓市為牛養(yǎng)殖區(qū)域牛結(jié)節(jié)性皮膚監(jiān)測凈化技術(shù)規(guī)程；加強牛引種落地后隔離觀察和獸醫(yī)實驗室檢測，為監(jiān)管提供可靠的數(shù)據(jù)支撐；開展本底調(diào)查。

2）通過對牛場無疫牛群開展山羊痘疫苗免疫接種、監(jiān)測并淘汰陽性病例，以及時控制和撲滅養(yǎng)殖環(huán)節(jié)中牛結(jié)節(jié)性皮膚病病毒的傳播風險，到2023 年底，按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部《關(guān)于印發(fā)＜牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范＞的通知》（農(nóng)牧發(fā)〔2020〕30 號）的標準，實現(xiàn)該市肉牛養(yǎng)殖環(huán)節(jié)凈化牛結(jié)節(jié)性皮膚病的目標。

3）依據(jù)《牛結(jié)節(jié)性皮膚病防治技術(shù)規(guī)范》淘汰陽性牛，加強免疫監(jiān)測和宣傳教育，維持凈化效果。

4）對牛結(jié)節(jié)性皮膚病防控（區(qū)域）監(jiān)測凈化技術(shù)進行推廣應(yīng)用，創(chuàng)建1～2 個自治區(qū)級無牛結(jié)節(jié)性皮膚病養(yǎng)殖場（區(qū)），引領(lǐng)來賓市牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。

3 小結(jié)

牛結(jié)節(jié)性皮膚病是一種熱性、急性或慢性、接觸性傳染病，在其預(yù)防控制、凈化工作中，要嚴格實行：加強宣傳和培訓(xùn)、加強普查排查力度、不從疫區(qū)引種、加強血清學和病原學監(jiān)測和檢測工作，嚴格疫情報告和疫情處置，加強疫苗免疫接種工作等措施。

牛結(jié)節(jié)性皮膚病等動物疫病凈化是社會性的服務(wù)工作，是發(fā)展安全畜牧業(yè)的有力保證。對牛結(jié)節(jié)性皮膚病等動物疫病監(jiān)測、凈化技術(shù)進行推廣應(yīng)用，建立牛結(jié)節(jié)性皮膚病等動物疫病凈化示范場，有效增加來賓市養(yǎng)牛業(yè)主的養(yǎng)牛信心，可促進來賓市養(yǎng)牛業(yè)良性發(fā)展。