肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集效應(yīng)研究

王盧燕, 張昌朋, 王祥云, 何紅梅,趙學(xué)平, 蔣金花

(省部共建農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全危害因子與風(fēng)險(xiǎn)防控國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，農(nóng)業(yè)農(nóng)村部農(nóng)藥殘留檢測(cè)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院 農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全與營(yíng)養(yǎng)研究所，杭州 310021)

肟菌酯 (trifloxystrobin) 屬于甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑，該類(lèi)殺菌劑通過(guò)阻止細(xì)胞色素bc1 Qo 位點(diǎn)的電子傳遞，抑制線(xiàn)粒體的呼吸作用而起到抑菌效果[1]。肟菌酯具有高效、廣譜等特性，對(duì)子囊菌、擔(dān)子菌、半知菌和卵菌等多個(gè)綱的真菌有效，主要用于水稻、小麥、玉米、棉花、花生、油菜、甜菜等多種作物上，可有效防治白粉病、霜霉病、銹病及稻瘟病等多種病害[1]。

肟菌酯在田間施用后可以通過(guò)滲透、徑流、遷移等多種途徑進(jìn)入水環(huán)境，并通過(guò)水體進(jìn)入水生生物體內(nèi)，進(jìn)而影響水生生物的生長(zhǎng)、發(fā)育和繁殖[2-4]。肟菌酯對(duì)不同水生生物具有高毒或劇毒，對(duì)熱帶爪蟾、稀有鮈鯽、草魚(yú)、斑馬魚(yú)、虹鱒魚(yú)、大型溞等的LC50值為0.001～0.530 mg/L[5-10]。研究發(fā)現(xiàn)，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑對(duì)魚(yú)類(lèi)具有一定的生物富集效應(yīng)，斑馬魚(yú)在0.005 和0.05 mg/L的啶氧菌酯溶液中暴露8 d 后，啶氧菌酯在魚(yú)體內(nèi)的濃度可達(dá)到0.48～5.27 mg/kg，生物富集系數(shù)(BCF) 為80.00～99.42，在斑馬魚(yú)中具有中等富集效應(yīng)[11]。肟菌酯在虹鱒魚(yú)中的生物富集系數(shù)為431[12]，并且低濃度暴露在魚(yú)體內(nèi)也具有較強(qiáng)的累積效應(yīng)，稀有鮈鯽胚胎在1.0 μg/L 的肟菌酯溶液中暴露144 h 后，仔魚(yú)體內(nèi)肟菌酯的平均含量可達(dá)到89.56 pg[6]。另有研究發(fā)現(xiàn)，肟菌酯在美國(guó)13 個(gè)州的29 條河流中的最高檢出質(zhì)量濃度為0.029 μg/L，在不同國(guó)家作物施藥后附近水體中的檢出濃度為0.41～0.73 μg/L[13-15]。因此，建立魚(yú)體中低濃度肟菌酯殘留的檢測(cè)方法，并研究其生物富集效應(yīng)，對(duì)闡明肟菌酯殘留對(duì)水生生物的生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)具有重要意義。

水生生物基準(zhǔn) (aquatic life benchmarks，ALB)是指水環(huán)境中的污染物對(duì)水生生物及其使用不產(chǎn)生短期和長(zhǎng)期不良或有害效應(yīng)的最大允許濃度，是建立污染物水環(huán)境質(zhì)量管理、評(píng)價(jià)、預(yù)測(cè)和污染控制體系的科學(xué)依據(jù)[16]。美國(guó)環(huán)境保護(hù)署 (EPA)在農(nóng)藥風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估過(guò)程中，會(huì)基于農(nóng)藥對(duì)水生生物的急性毒性或慢性毒性等數(shù)據(jù)，確定農(nóng)藥對(duì)水生生物的ALB，進(jìn)而制定農(nóng)藥的環(huán)境水質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)并進(jìn)行相應(yīng)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估[16]。目前美國(guó)EPA 在評(píng)估農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，主要基于虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)的LC50值確定其急性ALB。EPA 發(fā)布的肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的急性ALB 值為0.007 15 mg/L[16]，而我國(guó)在評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，大多采用斑馬魚(yú)的急性毒性數(shù)值 (LC50值) 進(jìn)行評(píng)估[17]。現(xiàn)有研究發(fā)現(xiàn)，肟菌酯對(duì)虹鱒魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)和鰷魚(yú)的LC50值分別為0.015、0.054 和0.078 mg/L[12]，對(duì)斑馬魚(yú)成魚(yú)的96 h-LC50值為51.05～120 μg/L[18-19]，可見(jiàn)肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的毒性較高，并且對(duì)不同種類(lèi)魚(yú)類(lèi)的毒性之間具有一定差異。因此，進(jìn)一步研究不同濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集性差異，對(duì)于全面評(píng)價(jià)肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)，以及建立符合我國(guó)水生生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估的方法體系具有一定的指導(dǎo)意義。

PRiME HLB 是一種通過(guò)吸附和去除樣品中干擾物以減少基質(zhì)干擾效應(yīng)的前處理凈化方法，在動(dòng)物源樣本的藥物殘留檢測(cè)中已得到很好的應(yīng)用[20-21]。本研究采用PRiME HLB 固相萃取結(jié)合超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀 (UPLC-MS/MS) ，建立了一種水體和魚(yú)肉中低濃度肟菌酯殘留的快速、簡(jiǎn)便檢測(cè)方法，并在此基礎(chǔ)上，開(kāi)展了基于ALB 和LC50值的低濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集效應(yīng)研究，以期為水環(huán)境中肟菌酯污染的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)提供科學(xué)的技術(shù)方法和依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

ABSciex 超高效液相色譜-三重四極桿串聯(lián)質(zhì)譜儀 (Exion LCAD-Triple QuadTM5500，美國(guó)ABSciex 公司)；ACQUITY UPLCTMBEH C18色譜柱 (2.1 mm × 100 mm × 1.7 μm，美國(guó)Waters 公司)；SPS 402F 型電子天平 [0.01 g，梅特勒-托利多 (常州) 測(cè)量技術(shù)有限公司]；BSA224S 電子天平 (0.0001 g，德國(guó)賽多利斯集團(tuán))；TD5A-WS 型臺(tái)式大容量低速離心機(jī) (金南儀器制造有限公司)；Eppendorf Centrifuge 5430R 高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)艾本德股份公司) 等。

97%肟菌酯 (trifloxystrobin) 原藥 (江蘇耘農(nóng)化工有限公司)；99.3% 肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品 (德國(guó)Dr.Ehrenstorfer GmbH 公司)；乙腈、甲酸為色譜純，無(wú)水硫酸鈉、無(wú)水硫酸鎂、氯化鈉為分析純；屈臣氏純凈水 (廣州屈臣氏食品飲料有限公司)；2 mL Cleanert MAS-Q 凈化管 (PSA 50 mg + C1850 mg +PC 50 mg + MgSO4150 mg) 及Cleanert S C18-SPE 小柱 (500 mg/6 mL) (天津博納艾杰爾科技有限公司)；Oasis PRiME HLB 小柱 (60 mg/3 mL，美國(guó)Waters 公司)。

1.2 試驗(yàn)材料

斑馬魚(yú)Danio rerio種魚(yú)，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院水生生物研究所國(guó)家斑馬魚(yú)資源中心，AB 型品系。本研究采用6 月齡成魚(yú)，為種魚(yú)繁殖所得。試驗(yàn)用水為曝氣除氯24 h 以上并經(jīng)活性炭過(guò)濾的自來(lái)水。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)溶液配制

準(zhǔn)確稱(chēng)取肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品0.0121 g，用乙腈定容至10.0 mL，配成1.20 × 103mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液；用乙腈進(jìn)一步稀釋標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，得到質(zhì)量濃度為10.0 mg/L 的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液；采用空白基質(zhì)溶液逐級(jí)稀釋標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，制得質(zhì)量濃度為0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01 及0.05 mg/L 的系列基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。

1.4 儀器條件

色譜條件：色譜柱為ACQUITY UPLCTM BEH C18柱 (2.1 mm × 100 mm × 1.7 μm)，柱溫40 °C；進(jìn)樣量1 μL；流動(dòng)相A 為0.1% 甲酸水溶液，B 為色譜純乙腈，VA:VB= 20 : 80，流速0.3 mL/min；進(jìn)樣時(shí)間為4.0 min。

質(zhì)譜條件：ESI+離子源；多反應(yīng)監(jiān)測(cè) (MRM)模式；毛細(xì)管電壓5.5 kV；氣簾氣壓力241.5 kPa；噴撞氣壓力48.3 kPa；噴霧氣壓力345 kPa；輔助加熱氣壓力345 kPa；離子源溫度550 °C；輸入電壓10 V；碰撞室輸出電壓16 V；其余質(zhì)譜檢測(cè)參數(shù)見(jiàn)表1。在此條件下，肟菌酯保留時(shí)間為2.46 min。

1.5 樣品前處理

水樣前處理：取5.0 mL 樣品，加入2.00 g 氯化鈉和10.0 mL 乙腈，渦旋1 min，靜置分層。取上層清液過(guò)0.22 μm 濾膜，待UPLC-MS/MS 測(cè)定。

魚(yú)肉樣品前處理：稱(chēng)取1.00 g (精確至0.01 g)魚(yú)肉樣品置于50 mL 離心管中，加入1.0 mL 0.1%的甲酸水溶液和10.0 mL 乙腈，渦旋15 min；加入1.00 g 無(wú)水硫酸鈉和1.00 g 無(wú)水硫酸鎂，渦旋15 min；在4000 r/min 下離心5 min。準(zhǔn)確移取離心管中的上清液2.0 mL 直接過(guò)PRiME HLB 固相萃取柱，經(jīng)0.22 μm 濾膜過(guò)濾，待UPLC-MS/MS測(cè)定。

1.6 生物富集試驗(yàn)

為進(jìn)一步明確利用EPA 魚(yú)類(lèi)ALB 和斑馬魚(yú)急性毒性相關(guān)數(shù)值評(píng)估肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)的差異，開(kāi)展了基于ALB 和斑馬魚(yú)的LC50值濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集效應(yīng)研究。參照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則 第七部分：生物富集試驗(yàn)》[22]，采用半靜態(tài)法，分別測(cè)定了肟菌酯在魚(yú)類(lèi)急性毒性ALB (7.15 × 10-3mg/L)、1/10 ALB 以及對(duì)斑馬魚(yú)的1/10 LC50值和1/100 LC50值暴露下在斑馬魚(yú)成魚(yú)中的生物富集效應(yīng)。因肟菌酯對(duì)斑馬魚(yú)成魚(yú)的96 h-LC50值為51.05～120 μg/L[18-19]，故其LC50值選取51.0 和120 μg/L兩個(gè)濃度同時(shí)進(jìn)行研究。因此，共設(shè)置7.15 ×10-4和7.15 × 10-3mg/L、5.10 × 10-4和5.10 × 10-3mg/L、1.20 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L 6 個(gè)質(zhì)量濃度處理組，同時(shí)設(shè)置曝氣自來(lái)水為空白對(duì)照。根據(jù)設(shè)定的濃度，分別配制5 L 試驗(yàn)藥液，每缸放入15 條斑馬魚(yú)，每處理設(shè)3 次重復(fù)。試驗(yàn)過(guò)程每24 h 更換全部試驗(yàn)藥液，于暴露后0、24、48、96、144 及192 h 分別從各處理中取水樣與魚(yú)樣，測(cè)定水樣與魚(yú)樣中的肟菌酯含量。

按(1)式計(jì)算肟菌酯的生物富集系數(shù) (BCF) 。

式中：Cfs為魚(yú)體內(nèi)的肟菌酯含量 (mg/kg)；Cws為水體中的肟菌酯含量 (mg/L)。

2 結(jié)果與分析

2.1 提取溶劑的優(yōu)化

分別采用甲醇、乙酸乙酯和乙腈3 種有機(jī)溶劑作為提取溶劑，在添加水平為1.0 mg/kg 下，按照1.5 節(jié)中魚(yú)肉樣品前處理方法，比較了魚(yú)肉中肟菌酯的提取回收率。其中，提取溶劑為甲醇時(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂可以除去水分；提取溶劑為乙酸乙酯和乙腈時(shí)，加入無(wú)水硫酸鈉和無(wú)水硫酸鎂以使之分層。結(jié)果表明：采用甲醇、乙酸乙酯和乙腈提取時(shí)的回收率分別為78.5%、88.9%和83.9%，其中乙酸乙酯的提取回收率最高，但是其提取液中雜質(zhì)較多，甲醇的提取回收率較低。綜合考慮溶劑揮發(fā)性、提取回收率、雜質(zhì)去除效果等因素，最終選擇乙腈作為提取溶劑。

2.2 凈化方法的選擇

采用Cleanert MAS-Q 凈化管、C18固相萃取柱及HLB 固相萃取柱分別進(jìn)行試驗(yàn)。魚(yú)肉中肟菌酯添加水平為1.0 mg/kg，每組設(shè)3 個(gè)重復(fù)。結(jié)果表明：PSA 50 mg + C1850 mg + PC 50 mg + MgSO4150 mg 的Cleanert MAS-Q 凈化管凈化后回收率為48.3%，C18固相萃取柱凈化后回收率為42.7%，HLB 小柱凈化后回收率為84.5%；此外，比較HLB 柱活化 (82.9%) 與未活化 (81.4%) 后肟菌酯的回收率發(fā)現(xiàn)，活化與否對(duì)結(jié)果沒(méi)有顯著影響。綜合考慮回收率、雜質(zhì)去除效果和操作過(guò)程簡(jiǎn)便性等因素，最終選擇Oasis PRiME HLB 固相萃取柱作為魚(yú)肉中肟菌酯的凈化小柱。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

將0.0001、0.0005、0.001、0.005、0.01 和0.05 mg/L 的基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)工作溶液按照1.4 節(jié)儀器條件進(jìn)樣測(cè)定，以濃度-峰面積繪制肟菌酯基質(zhì)匹配標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，其回歸方程為y= 96 612 211x+24 728 (R2= 0.9998)，表明肟菌酯在0.0001～0.05 mg/L 范圍內(nèi)具有良好的線(xiàn)性關(guān)系。

2.4 正確度和精密度

在空白水樣中添加0.0005 和0.05 mg/L 2 個(gè)水平的肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，在空白魚(yú)肉樣品中添加0.01、0.1 和10 mg/kg 3 個(gè)水平的肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，每添加水平設(shè)5 個(gè)重復(fù)。平均回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差 (RSD) 結(jié)果見(jiàn)表2。肟菌酯在水樣和魚(yú)肉樣品中的定量限 (LOQ) 分別為0.0005 mg/L和0.01 mg/kg。所建立方法的正確度和精密度均較好，能夠滿(mǎn)足本研究水樣及魚(yú)樣中肟菌酯殘留測(cè)定要求。

表2 水樣和魚(yú)肉樣品中肟菌酯的添加回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差Table 2 The recovery and RSD of trifloxystrobin in water and fish samples

2.5 肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的富集效應(yīng)

從暴露處理開(kāi)始，肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)有一個(gè)快速累積的過(guò)程 (表3)。在較低質(zhì)量濃度水平(5.10 × 10-4、7.15 × 10-4和1.20 × 10-3mg/L) 下暴露24 h，魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別為0.0487、0.0784 和0.130 mg/kg；192 h 后，魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別增長(zhǎng)到0.0609、0.100 和0.153 mg/kg，BCF 值增長(zhǎng)到136、141 和147。在較高質(zhì)量濃度水平 (5.10 × 10-3、7.15 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L)下暴露24 h 后，魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別為0.555、0.856 和1.33 mg/kg；192 h 后，魚(yú)體內(nèi)肟菌酯含量分別增長(zhǎng)到0.720、1.01 和1.72 mg/kg，BCF 值分別達(dá)到156、171 和178?？梢?jiàn)，高濃度肟菌酯暴露可在斑馬魚(yú)中產(chǎn)生較高的殘留累積，但不同濃度肟菌酯在斑馬魚(yú)中的富集效應(yīng)差異不大。研究表明，肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)存在中等富集效應(yīng)。

表3 肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的生物富集性Table 3 The bioconcentration of trifloxystrobin in zebrafish

3 結(jié)論與討論

現(xiàn)有研究報(bào)道中，甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑啶氧菌酯在魚(yú)肉中的殘留檢測(cè)采用乙腈提取后直接過(guò)濾膜的樣品前處理方法，肟菌酯在稀有鮈鯽胚胎中的殘留檢測(cè)采用90%乙腈提取、液-液萃取后經(jīng)硅膠萃取柱凈化的前處理方法，嘧菌酯在水產(chǎn)品中的殘留檢測(cè)采用1%乙酸 + 乙腈提取、聚苯乙烯-二乙烯基苯 (PS-DVB) 和PSA 凈化的前處理方法[6,11,23]。由于魚(yú)肉基質(zhì)復(fù)雜，含有大量的蛋白質(zhì)、脂肪等干擾物，不凈化直接測(cè)定會(huì)產(chǎn)生一定的基質(zhì)效應(yīng)且對(duì)儀器損害大，因此，本研究通過(guò)對(duì)提取溶劑和凈化方法的優(yōu)化，建立了水樣和魚(yú)肉樣品中肟菌酯的HLB固相萃取-UPLCMS/MS 檢測(cè)方法。Oasis PRiME HLB 共聚物具有極強(qiáng)的水浸潤(rùn)性，可省去活化和平衡步驟[24]。相比傳統(tǒng)的固相萃取法，本方法不需要活化平衡萃取柱，節(jié)省了過(guò)柱時(shí)間和溶劑使用量，能很好地吸附魚(yú)肉中大部分脂肪、蛋白質(zhì)等干擾物而不影響回收率，水樣和魚(yú)肉樣品中的定量限 (LOQ) 分別可達(dá)到0.0005 mg/L 和0.01 mg/kg。所建立的方法能夠檢測(cè)水體和魚(yú)肉中低濃度的肟菌酯殘留，可為開(kāi)展環(huán)境中肟菌酯的殘留行為和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估研究提供參考。

隨著肟菌酯等甲氧基丙烯酸酯類(lèi)殺菌劑的廣泛使用，其在環(huán)境中的殘留以及生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)已受到越來(lái)越多的關(guān)注。生物富集作用是評(píng)價(jià)環(huán)境中殘留農(nóng)藥對(duì)生物體及生態(tài)系統(tǒng)危害的重要指標(biāo)[22]。魚(yú)類(lèi)作為水環(huán)境中的重要生物和人類(lèi)的主要食物，其生態(tài)毒理反應(yīng)和變化可作為水環(huán)境評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。美國(guó)EPA 發(fā)布的魚(yú)類(lèi)毒性基準(zhǔn)中，主要是基于虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)、藍(lán)鰓魚(yú)3 種水生生物最低LC50值的1/2 確定其急性ALB[16]?，F(xiàn)有研究表明，肟菌酯對(duì)于不同魚(yú)類(lèi)以及不同水生生物具有一定的毒性差異[16]，而目前進(jìn)行農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估時(shí)，不僅要參考EPA 等國(guó)外評(píng)估報(bào)告中有關(guān)虹鱒魚(yú)、鰷魚(yú)等魚(yú)類(lèi)的毒性數(shù)據(jù)，同時(shí)也要評(píng)估農(nóng)藥對(duì)斑馬魚(yú)的毒性風(fēng)險(xiǎn)，因此，比較不同魚(yú)類(lèi)ALB 值在斑馬魚(yú)中的生物富集性差異，可為探索符合我國(guó)水生生物的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估體系提供一定的參考依據(jù)。

本研究發(fā)現(xiàn)，將斑馬魚(yú)暴露于魚(yú)類(lèi)ALB 和斑馬魚(yú)LC50值相關(guān)系列質(zhì)量濃度7.15 × 10-4和7.15 ×10-3mg/L、5.10 × 10-4和5.10 × 10-3mg/L、1.20 ×10-3和1.20 × 10-2mg/L 藥液中24 h 后，肟菌酯在斑馬魚(yú)體內(nèi)的殘留量分別為0.0784、0.856、0.0487、0.555、0.130 和1.33 mg/kg。研究表明，不同濃度的肟菌酯均可在斑馬魚(yú)體內(nèi)快速累積，并且在暴露48 h 后基本達(dá)到穩(wěn)定。連續(xù)暴露192 h后，魚(yú)類(lèi)ALB 值相關(guān)濃度7.15 × 10-4和7.15 ×10-3mg/L 肟菌酯在斑馬魚(yú)中的生物富集系數(shù)為117～171，1/100 LC50值濃度 (5.10 × 10-4和1.20 ×10-3mg/L) 肟菌酯的生物富集系數(shù)為113～147，1/10 LC50值濃度 (5.10 × 10-3和1.20 × 10-2mg/L)肟菌酯的生物富集系數(shù)為128～178，具有中等富集效應(yīng)。歐盟食品安全局 (EFSA)的研究表明，肟菌酯在虹鱒魚(yú)中的生物富集系數(shù)為431[12]，本研究結(jié)果與之具有一定差異。綜上可見(jiàn)，肟菌酯對(duì)不同種類(lèi)魚(yú)類(lèi)的急性毒性和生物富集效應(yīng)都存在一定的差異，因此，在研究肟菌酯殘留污染對(duì)魚(yú)類(lèi)的生態(tài)風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，應(yīng)結(jié)合不同濃度和不同魚(yú)類(lèi)的毒性效應(yīng)及生態(tài)毒理學(xué)風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行綜合評(píng)估。

斑馬魚(yú)生物富集試驗(yàn)對(duì)評(píng)價(jià)肟菌酯的環(huán)境行為及其慢性危害具有十分重要的意義。一般情況下，農(nóng)藥的生物富集作用越強(qiáng)，對(duì)生物的慢性危害越大?，F(xiàn)有研究表明，在急性ALB 和對(duì)斑馬魚(yú)的LC50值相關(guān)濃度暴露下，肟菌酯在斑馬魚(yú)中具有中等富集效應(yīng)，因此，在實(shí)際使用過(guò)程中，應(yīng)關(guān)注低濃度肟菌酯對(duì)魚(yú)類(lèi)的潛在危害及食物鏈的放大風(fēng)險(xiǎn)，加強(qiáng)對(duì)水生生態(tài)系統(tǒng)的殘留監(jiān)測(cè)和風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估。在美國(guó)EPA 發(fā)布的魚(yú)類(lèi)毒性基準(zhǔn)中，慢性ALB 主要基于慢性毒性濃度[無(wú)觀察效應(yīng)濃度(NOEC) 及最低觀察效應(yīng)濃度 (LOEC)]等數(shù)據(jù)[16]。而我國(guó)在評(píng)價(jià)農(nóng)藥對(duì)魚(yú)類(lèi)的環(huán)境風(fēng)險(xiǎn)時(shí)，大多數(shù)都采用斑馬魚(yú)的急性毒性數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)估[17]，對(duì)部分原藥同時(shí)會(huì)進(jìn)行魚(yú)類(lèi)早期生活階段毒性試驗(yàn)[25]。美國(guó)EPA 發(fā)布的肟菌酯慢性ALB 值為0.0043 mg/L，主要是基于肟菌酯對(duì)虹鱒魚(yú)游動(dòng)影響的NOEC[12,16]。而目前關(guān)于肟菌酯在斑馬魚(yú)中的研究主要集中在胚胎階段的急性毒性效應(yīng)，肟菌酯對(duì)斑馬魚(yú)早期發(fā)育階段以及成魚(yú)的慢性毒性仍鮮有研究報(bào)道[18]。因此，為了更全面、系統(tǒng)地評(píng)價(jià)肟菌酯對(duì)環(huán)境的安全性，還需進(jìn)一步研究其對(duì)斑馬魚(yú)早期生活階段和成魚(yú)的慢性毒性效應(yīng)，以及開(kāi)展對(duì)其他非靶標(biāo)生物的慢性毒性試驗(yàn)等。