有氧運(yùn)動調(diào)控去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制心力衰竭大鼠交感神經(jīng)過度興奮

李曉霞，邢 軍，王 磊，宋玉瑩

交感神經(jīng)在維持正常心臟功能以及病理狀態(tài)下發(fā)生心臟重塑中起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用。交感神經(jīng)末梢釋放去甲腎上腺素（norepinephrine，NE），后者與心肌β-腎上腺素能受體（β-adrenergic receptor，β-AR）結(jié)合，激活心肌細(xì)胞內(nèi)多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑并發(fā)揮其生物學(xué)效應(yīng)[1]。近年來的研究證實(shí)，交感神經(jīng)釋放的NE總量受突觸前膜上一種神經(jīng)遞質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白——去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（norepinephrine transporter，NET）的負(fù)反饋性調(diào)控[2]。NET可再攝取突觸間隙中的NE，對于神經(jīng)突觸釋放到心肌間質(zhì)的NE濃度、神經(jīng)沖動強(qiáng)度以及 β-AR 對 NE 的敏感性起關(guān)鍵調(diào)節(jié)作用[3]。證據(jù)顯示[4]，中樞和外周組織中囊泡釋放的NE約80%～90%被NET再攝取回細(xì)胞漿。多種心血管疾病造成的心力衰竭（心衰）均伴隨交感神經(jīng)過度興奮以及NE過量釋放，心肌間質(zhì)NE濃度大幅升高并介導(dǎo)心臟毒性效應(yīng)，誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡以及β-AR脫敏，心功能下降[5]。研究發(fā)現(xiàn)[4]，心衰時(shí)NET基因表達(dá)量降低造成NE再攝取功能下降是心臟間質(zhì) NE 堆積的主要原因。此外，只有膜表面表達(dá)的 NET 具有正常功能，心衰時(shí)NET發(fā)生內(nèi)化（蛋白由膜表面進(jìn)入胞漿），再攝取作用減弱?？傊?，NET基因表達(dá)降低和/或內(nèi)化均可引起NE代謝異常，這是慢性心衰形成的主要分子生物學(xué)機(jī)制。

臨床研究證實(shí)[6]，規(guī)律體力活動是防治心血管疾病的重要康復(fù)策略，能夠顯著改善患者心肺適能，下調(diào)多種心血管危險(xiǎn)因素，提高生活質(zhì)量。前期研究顯示[7]，慢性心衰大鼠經(jīng)過10周跑臺后心臟重塑得到抑制，心功能和有氧運(yùn)動能力顯著提升，然而其具體機(jī)制尚未明確。人體試驗(yàn)與動物研究發(fā)現(xiàn)[8-12]，中低強(qiáng)度有氧運(yùn)動訓(xùn)練能夠明顯改善諸多心血管疾病和代謝性疾病患者/動物受損的自主神經(jīng)功能，即交感活性降低、迷走活性增加。鑒于NET在心衰發(fā)生發(fā)展中的作用，故本研究旨在觀察長期有氧運(yùn)動對心衰大鼠心肌NET表達(dá)及內(nèi)化的影響，探索運(yùn)動抑制心衰時(shí)交感過度興奮的分子生物學(xué)機(jī)制。

1 材料與方法

（1）實(shí)驗(yàn)動物與干預(yù)方法。38只雄性健康Wistar大鼠（10周齡），購自山東魯抗醫(yī)藥股份有限公司（許可證號：SCXK（魯）2008-0003），體重 250～280 g。將動物分籠飼養(yǎng)（5只/籠），自由進(jìn)食水。

按隨機(jī)原則選取大鼠28只，參照課題組前期建立的造模方法[7-8]（即冠狀動脈結(jié)扎術(shù)）制作心肌梗塞后心衰動物模型。方法：腹腔麻醉后使動物仰臥固定，胸部備皮，連接小動物呼吸機(jī)，于胸骨左側(cè)III～I(xiàn)V肋間處開胸暴露心臟，利用0號絲線結(jié)扎冠狀動脈前降支，而后迅速放回心臟并依次縫合胸壁。模型制作成功后隨機(jī)分為心衰安靜組（heart failure sedentary，HFsed）和心衰運(yùn)動組（heart failure exercise，HF-ex）。另外10只大鼠作為假手術(shù)組（sham operation，Sham），即開胸后只穿針不結(jié)扎，其余處理同上。術(shù)后4周進(jìn)行超聲檢測，將左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction，LVEF）低于45%作為心衰模型制作成功的標(biāo)志。Sham和HF-sed組大鼠在鼠籠內(nèi)安靜飼養(yǎng)，HF-ex組進(jìn)行10周中等強(qiáng)度跑臺運(yùn)動。先利用漸增負(fù)荷運(yùn)動實(shí)驗(yàn)測定大鼠運(yùn)動功能，起始負(fù)荷設(shè)定7 m/min，每3 min遞增5 m/min，直到力竭，記錄最高跑速；正式訓(xùn)練時(shí)，前4周將運(yùn)動強(qiáng)度設(shè)定為最高跑速的50%，后8周則增加至最高跑速的60%，每次訓(xùn)練時(shí)間為60 min，運(yùn)動頻率為5天每周[7-8]。造模過程中，3只動物造模失敗，1只死亡，10周干預(yù)過程中，HF-sed組死亡2只，HF-ex組死亡1只、拒跑2只。上述數(shù)據(jù)在統(tǒng)計(jì)分析時(shí)予以剔除，最終樣本量n＝29，其中 Sham 組 10只、HF-sed 組 10 只、HF-ex組9只。

（2）超聲心動檢測心臟結(jié)構(gòu)與功能。末次訓(xùn)練后48 h，大鼠腹腔麻醉后胸部備皮，仰臥固定，使用超聲心動儀（visualsonics vevo770型，加拿大）測定心臟結(jié)構(gòu)與功能，指標(biāo)包括左心室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end-systolic diameter，LVESD）、左心室舒張 末 期 內(nèi) 徑（left ventricular end-diastolic diameter，LVEDD）、心 率（heart rate，HR）、縮 短 分 數(shù)（fractional shortening，F(xiàn)S）和LVEF。

（3）心率變異性（heart rate variability，HRV）測定。超聲心動術(shù)后，大鼠仍處于麻醉狀態(tài)以及仰臥固定體位。用無創(chuàng)生理信號遙測處理系統(tǒng)監(jiān)測和記錄各組大鼠II導(dǎo)聯(lián)心電圖，采樣頻率為1 000 Hz。使用Power Lab8/35生理信號處理系統(tǒng)及Chart 7.0軟件將獲得的心電圖進(jìn)行 HRV 分析。自動分析連續(xù) RR 間期（RR interval，RRI），手工剔除異常RRI后進(jìn)行頻域分析，獲取低頻波譜（low power，LF）、極低頻波譜（verylow power，VLF）、高 頻 波 譜（high power，HF）和 總 功 率（total power，TP），并對LF和HF進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，計(jì)算標(biāo)準(zhǔn) 化 LF（LFn）＝LF÷（TP-VLF）×100、HFn＝HF÷（TP-VLF）×100、平衡指數(shù)LFn/HFn。

（4）動物取材與心臟組織病理學(xué)觀察。HRV測定后尾靜脈取血300 μL，肝素抗凝，離心后取血漿。沿兩側(cè)腋前線至鎖骨迅速去除胸壁，暴露頸交感神經(jīng)干，于第二肋間附近用顯微手術(shù)剪和手術(shù)鑷取下雙側(cè)頸中—星狀神經(jīng)節(jié)復(fù)合體（即心臟交感神經(jīng)節(jié)）。迅速取心臟，PBS沖洗，濾紙干燥后將心臟分為兩部分，一部分用于組織病理學(xué)觀察，另一部分迅速轉(zhuǎn)移至-80 ℃低溫冰箱凍存待測基因表達(dá)。于心臟橫切面取厚度為2 mm組織，用4%多聚甲醛溶液固定 24 h，石蠟包埋并制作 5 μm 切片。用Masson染色膠原纖維，鏡下選取10個(gè)視野，觀察膠原沉積情況，用Image Pro Plus 6.0圖像分析軟件測量膠原面積與所測視野面積的比值作為膠原容積分?jǐn)?shù)（collagen volumetric fraction，CVF）。

（5）血漿和心肌NE水平測定。采用日本產(chǎn)島津LC10ATvp型高效液相色譜儀測定心肌和血漿NE濃度。嚴(yán)格按照操作說明進(jìn)行。

（6）NET mRNA表達(dá)量檢測。將頸中-星狀神經(jīng)節(jié)復(fù)合體勻漿后，Trizol法抽提總 RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲取cDNA，采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（ABI 7900HT型，美國）檢測 NET mRNA 表達(dá)量，擴(kuò)增條件為：預(yù)變性95 ℃/1 min；95 ℃/15 s，55 ℃/15 s，72 ℃/15 s，共40個(gè)循環(huán)。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）為內(nèi)參基因，計(jì)算其相對表達(dá)量。

（7）NET蛋白表達(dá)量檢測。分別利用總蛋白、膜蛋白、胞漿蛋白提取試劑盒提取蛋白，考馬斯亮藍(lán)法檢測蛋白濃度。用 Western blot法測定蛋白表達(dá)量。方法：將50 μg蛋白樣品上樣到10%SDS-聚丙烯酰胺凝膠，電泳、轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%BSA室溫下封閉2 h，兔抗鼠一抗（NET，1:500；GAPDH，1:1 000）4 ℃過夜，二抗（辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗兔 IgG，1：5000）37 ℃孵育1 h。使用ECL發(fā)光成像，X線膠片壓片曝光，利用凝膠成像系統(tǒng)（ChemiDoc XRS，美國）拍攝并掃描各條帶灰度值。以GAPDH為內(nèi)參蛋白，以各組與Sham組的比值作為蛋白相對表達(dá)量。

（8）數(shù)據(jù)處理。使用 SPSS 20.0進(jìn)行數(shù)據(jù)處理和分析。數(shù)據(jù)以“均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示，各指標(biāo)組間比較使用單因素方差分析，多重比較采用 Newman-Keuls檢驗(yàn)。統(tǒng)計(jì)學(xué)意義定為α＝0.05。

2 結(jié) 果

2.1 心臟結(jié)構(gòu)與功能

與Sham組比較，HF-sed組BW、FS和LVEF降低（P＜0.01），HW、HW/BW、LVESD、LVEDD和 HR升高（P＜0.05）；與 HF-sed 組 比 較 ，HF-ex 組 LVESD 和LVEDD降低（P＜0.05），F(xiàn)S和 LVEF升高（P＜0.05）（見表1）。

表1 心臟結(jié)構(gòu)與功能Table 1 Cardiac Structure and Function

2.2 自主神經(jīng)功能

與 Sham 組比較，HF-sed 組 HFn 下降（P＜0.01），LFn和LFn/HFn增 加（P＜0.05）；與HF-sed組 比 較，HF-ex 組 LFn 和 LFn/HFn 降低（P＜0.05），HFn 升高（P＜0.05）（見表2）。

表2 HRV頻域分析Table 2 Frequency Domain Analysis of HRV

2.3 心臟組織病理學(xué)觀察

心肌Masson染色結(jié)果顯示，心肌細(xì)胞呈紅色，膠原纖維呈藍(lán)色。Sham組大鼠心肌纖維著色均勻，無明顯膠原成分；與Sham組比較，HF-sed組心肌細(xì)胞減少并出現(xiàn)大量膠原沉積，CVF顯著升高（P＜0.05）；與HF-sed組比較，HF-ex組心肌纖維數(shù)量增多，膠原沉積減少，CVF顯著性下降（P＜0.05）（見圖1）。

圖1 心臟組織病理學(xué)改（Masson染色，×400）Figure1 Cardiac Histopathological Change（Masson staining，×400）

2.4 血漿和心肌NE含量

與Sham組比較，HF-sed組血漿和心肌NE均升高（P＜0.05）；與HF-sed組比較，HF-Ex組血漿和心肌NE含量下降（P＜0.05）（見表3）。

表3 血漿與心肌NE含量Table 3 Plasma and Myocardial NE Concentration

2.5 交感神經(jīng)節(jié)NET mRNA表達(dá)量

與 Sham 組 比 較 ，HF-sed 組 交 感 神 經(jīng) 節(jié)NETmRNA表達(dá)量降低（P＜0.05）；與HF-sed組比較，HF-ex組升高（P＜0.05）（見圖2）。

圖2 交感神經(jīng)節(jié)NET mRNA表達(dá)量Figure 2 Sympathetic Ganglion NET mRNA Expression

2.6 心肌NET基因表達(dá)量

心肌未檢測出NET mRNA表達(dá)量。心肌NET蛋白表達(dá)量：與Sham組比較，HF-sed組心肌總NET和膜NET蛋白表達(dá)量降低（P＜0.05），胞漿NET表達(dá)量增加（P＜0.05）；與 HF-sed組比較，HF-ex組心肌總 NET和膜 NET 蛋白表達(dá)量升高（P＜0.05），胞漿 NET 表達(dá)量降低（P＜0.05）（見圖3）。

圖3 NET蛋白表達(dá)量Figure3 NET Protein Expression

3 分析與討論

3.1 有氧運(yùn)動改善心衰大鼠心臟結(jié)構(gòu)重塑和交感神經(jīng)重塑

心臟重塑是心衰發(fā)生發(fā)展過程中最重要的病理生理機(jī)制[13]。伴隨心衰進(jìn)展心臟發(fā)生結(jié)構(gòu)重塑，表現(xiàn)為病理性心臟肥大、心肌纖維化，心功能隨之下降，這在本研究中得到證實(shí)，即與 Sham 組比較，HFsed 組BW、FS和LVEF降低，HW、HW/BW、LVESD、LVEDD和HR升高。病理組織學(xué)發(fā)現(xiàn)，HF-sed組心肌細(xì)胞減少并出現(xiàn)大量膠原沉積，CVF顯著升高。心肌肥大在心梗初期具有重要代償作用，可增加心肌收縮力并維持心輸出量及心臟功能，但伴隨心梗進(jìn)程，肥大的心肌需氧量增加造成心肌缺血，細(xì)胞凋亡甚至壞死，最終導(dǎo)致心功能失代償。心肌纖維化造成心臟硬度增大、心室壁順應(yīng)性下降和心肌電異質(zhì)性增加，在影響心臟舒縮功能同時(shí)易引發(fā)心律失常[14]。運(yùn)動訓(xùn)練是防治心血管疾病的重要非藥物手段[6]。在本研究中，經(jīng)過10周有氧運(yùn)動后，與HF-sed組比較，HF-ex組心肌纖維數(shù)量增多，膠原沉積減少，CVF顯著下降，這與前人針對游泳[15]、高強(qiáng)度間歇運(yùn)動[16]等的研究結(jié)果類似，說明不同運(yùn)動方式均可減輕心梗后心臟細(xì)胞外基質(zhì)過度沉積。膠原纖維含量下降，有利于心動周期過程中心肌收縮力分布恢復(fù)正常并增強(qiáng)心壁順應(yīng)性，繼而提高心臟舒縮功能。值得注意的是，本研究HF-ex組雖然 LVESD 和 LVEDD 降低，但 HW、HW/BW 與HF-sed組并無顯著差異，似乎說明心衰心臟肥大并未改善，但由于LVEF和FS升高，提示長期有氧運(yùn)動促進(jìn)心梗大鼠心臟由病理性肥大向生理性肥大轉(zhuǎn)換，這一結(jié)論在課題組前期研究[17]和袁國強(qiáng)等[16]讓自發(fā)性高血壓大鼠進(jìn)行高強(qiáng)度間歇運(yùn)動的報(bào)道中亦得到證實(shí)，其機(jī)制與運(yùn)動過程中心臟前負(fù)荷增加誘發(fā)心肌肌節(jié)串聯(lián)性增生有關(guān)[18]。因此可以推測，由于規(guī)律運(yùn)動抑制心梗大鼠心臟重塑并延緩心衰進(jìn)程，故心血管不良事件以及并發(fā)癥的發(fā)生率將顯著降低。

近年來研究證實(shí)，心衰時(shí)除發(fā)生心臟結(jié)構(gòu)重塑外，同時(shí)還存在交感神經(jīng)功能代償與異常，即交感神經(jīng)重塑。β-AR阻斷劑對于充血性心衰和急性心肌梗塞患者具有顯著療效[19]，進(jìn)一步證實(shí)交感活性與心臟病進(jìn)展的相互關(guān)聯(lián)。本研究中，與Sham組比較，HF-sed組血漿和心肌 NE 含量，LFn 和 LFn/HFn 顯著升高，提示心衰時(shí)心臟局部和全身交感神經(jīng)均存在過度興奮狀態(tài)，這與課題組前期研究結(jié)果類似[11]。研究證[20]，自主神經(jīng)調(diào)制異常（即交感過度興奮）使心肌細(xì)胞動作電位時(shí)程紊亂、電異質(zhì)性增加，是心血管患者發(fā)生致命性心律失常甚至心源性猝死的重要原因。抑制交感神經(jīng)重塑是調(diào)節(jié)自主神經(jīng)功能紊亂、改善心功能、延緩心衰進(jìn)展的關(guān)鍵靶點(diǎn)和治療策略。本研究發(fā)現(xiàn)，與HF-sed組比較，HF-Ex組血漿和心肌NE含量下降，LFn和LFn/HFn降低，提示運(yùn)動能夠改善心衰大鼠全身和心臟交感神經(jīng)活性，這在以其他心血管疾?。ǜ哐獕?、心梗）[10]和代謝性疾?。ㄌ悄虿?、肥胖）[21]為模型的研究中亦得到印證。交感功能改善有助于心肌電穩(wěn)定性增加，因此心血管不良事件（如心律失常、心源性猝死）發(fā)生率隨之下降。然而，運(yùn)動對心臟自主神經(jīng)功能產(chǎn)生良性效應(yīng)的具體機(jī)制未明。

3.2 有氧運(yùn)動通過調(diào)控NET抑制心衰大鼠交感神經(jīng)過度興奮狀態(tài)

NET是調(diào)節(jié)NE代謝的關(guān)鍵環(huán)節(jié)，心肌NE水平是由交感神經(jīng)末梢釋放量與位于交感神經(jīng)突觸前膜NET 再攝取量之間的動態(tài)平衡決定的[4]。報(bào)道指出[22]，健康志愿者使用NET抑制劑（地昔帕明）能夠使心臟NE外溢顯著性增加，血液動力學(xué)出現(xiàn)異常，因此NET 表達(dá)下調(diào)是心衰時(shí)心肌 NE 顯著增加的原因之一，這在本研究中得到進(jìn)一步證實(shí)，即HF-sed組心臟交感神經(jīng)節(jié) NET mRNA 和心肌 NET 總蛋白含量較Sham組降低。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，HF-sed組心臟交感神經(jīng)節(jié) NET mRNA表達(dá)量下調(diào)，同時(shí)心肌中未檢測出NET mRNA表達(dá)量，說明NET并非在心肌原位表達(dá)，而是在交感神經(jīng)節(jié)（即頸中-星狀神經(jīng)節(jié)復(fù)合體）中合成并翻譯，經(jīng)由軸漿運(yùn)輸至神經(jīng)突觸前膜進(jìn)而發(fā)揮其對NE的再攝取作用[4]，提示交感神經(jīng)節(jié)NET合成減少是心衰時(shí)心肌NET蛋白表達(dá)下調(diào)的主要原因?？傊?，心衰時(shí)NET功能異常發(fā)生在轉(zhuǎn)錄后環(huán)節(jié)。經(jīng)過 10 周有氧運(yùn)動后，與 HF-sed 組比較，HF-ex組交感神經(jīng)節(jié)NET mRNA和心肌總NET表達(dá)量升高。G. MüNCH等[23]的轉(zhuǎn)基因模型研究顯示，心肌過表達(dá)NET可增強(qiáng)心衰大鼠心臟交感神經(jīng)NE再攝取并改善心功能。因此，有氧運(yùn)動通過上調(diào)交感神經(jīng)節(jié)NET表達(dá)量進(jìn)而降低心肌間質(zhì)NE含量，繼而對心臟交感神經(jīng)過度激活產(chǎn)生抑制效應(yīng)。心衰時(shí)，腎素-血管緊張素系統(tǒng)（renin-angiotensin system，RAS）激活并造成血管緊張素II （angiotensin，Ang II）含量增高[24]，Ang II與受體結(jié)合后通過活化NADPH氧化酶途徑誘導(dǎo)氧化應(yīng)激，后者可導(dǎo)致NET肽鏈中氨基酸序列發(fā)生變異（尤其是半胱氨酸殘基），最終引起NET蛋白結(jié)構(gòu)與功能異常[25]。由于規(guī)律訓(xùn)練能夠抑制RAS、下調(diào)Ang II表達(dá)，同時(shí)提高機(jī)體抗氧化能力并減輕氧化應(yīng)激反應(yīng)[26]，故推測有氧運(yùn)動可能通過抑制Ang II介導(dǎo)的氧化作用而恢復(fù)受損的NET結(jié)構(gòu)與功能。此外，課題組近期研究發(fā)現(xiàn)[12]，心衰時(shí)腎上腺G蛋白耦聯(lián)受體激酶2（G protein-coupled receptor kinase-2，GRK2）/α2-腎上腺素受體（adrenergic receptor，α2-AR）信號通路異常造成NE大量分泌，最終引起心臟重塑和心功能不全，而長期有氧運(yùn)動則通過部分恢復(fù)腎上腺GRK2/α 2-AR軸功能進(jìn)而抑制兒茶酚胺過度釋放。因此，本研究中血漿NE含量下降與運(yùn)動誘導(dǎo)腎上腺NE分泌減少有關(guān)，而心肌間質(zhì)NE下降則主要?dú)w因于NET表達(dá)上調(diào)。可見，有氧運(yùn)動對交感神經(jīng)-腎上腺系統(tǒng)（NE產(chǎn)生的2條主要途徑）NE釋放量均具有抑制作用。

J. BACKS等[27]首先觀察到，心臟超負(fù)荷心衰大鼠存在NET再攝取功能異常，其原因除NET表達(dá)量下調(diào)外還與蛋白內(nèi)化現(xiàn)象有關(guān)。本研究同樣發(fā)現(xiàn)，與Sham組比較，HF-sed組心肌細(xì)胞膜NET蛋白降低而胞漿NET增加，提示NET蛋白分子由細(xì)胞膜轉(zhuǎn)向細(xì)胞漿、膜表面NET減少（即內(nèi)化），這可能是心衰時(shí)交感過度興奮的另一重要機(jī)制。經(jīng)過10周運(yùn)動后，與HFsed組比較，HF-ex組心肌膜NET蛋白表達(dá)量升高而胞漿NET表達(dá)量降低，提示有氧運(yùn)動不僅能夠上調(diào)NET表達(dá)量且可抑制其內(nèi)化。運(yùn)動抑制NET內(nèi)化的機(jī)制未明，可能與神經(jīng)生長因子（nerve growth factor，NGF）以及蛋白激酶 C（protein kinase c，PKC）途徑間接關(guān)聯(lián)。NGF是神經(jīng)營養(yǎng)因子家族的一員，通過與其受體（TrkA）結(jié)合以軸突轉(zhuǎn)運(yùn)方式進(jìn)入神經(jīng)元，具有促進(jìn)中樞和外周神經(jīng)分化、生長、存活和再生等效應(yīng)[28]。研究證實(shí)[29]，各種原因?qū)е碌男乃ゾcNGF有直接關(guān)聯(lián)。M. M. KREUSSER等[30]發(fā)現(xiàn)，心衰大鼠開胸后交感神經(jīng)節(jié)內(nèi)直接注射NGF后心臟NE攝取提高、心功能改善，然而NET表達(dá)無顯著變化，其原因可能與內(nèi)化的NET重新膜表達(dá)有關(guān)。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)[11]，心衰大鼠經(jīng)跑臺訓(xùn)練后左心室NGF和TrkA基因表達(dá)量均顯著上調(diào)，因此推斷有氧運(yùn)動可能通過激活NGF途徑抑制 NET內(nèi)化。此外，PKC信號途徑對細(xì)胞增殖、分化、轉(zhuǎn)化和凋亡具有重要作用，與心血管疾病關(guān)系密切[31]。證據(jù)顯示，PKC激活使NET磷酸化，繼之造成NET內(nèi)化和NE攝取能力下降[32]，而Ang II又可激活 PKC[33]，抑制上述信號通路則使 NET 內(nèi)化減輕[34]。由于規(guī)律運(yùn)動能夠下調(diào)心衰大鼠心臟Ang II[26]和 PKC[35]表達(dá)量，故推測有氧運(yùn)動還可能通過抑制Ang II-PKC途徑減輕NET內(nèi)化進(jìn)而發(fā)揮心血管保護(hù)效應(yīng)。然而，上述關(guān)于運(yùn)動對NET內(nèi)化作用機(jī)制的假設(shè)尚需實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步證實(shí)。

本研究在分子水平探討了運(yùn)動對NET表達(dá)及內(nèi)化的影響，這一結(jié)果尚缺乏組織學(xué)證據(jù)（如免疫熒光）；本研究以心肌梗塞后心衰動物為模型，NET在其他心衰模型（高血壓、心肌病等），尤其臨床患者中是否存在相似的機(jī)制以及運(yùn)動干預(yù)效果尚不得而知；由于本研究采用平行觀察實(shí)驗(yàn)，故運(yùn)動改善心衰大鼠交感神經(jīng)過度興奮的確切機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。運(yùn)動與心衰調(diào)控的關(guān)系極為復(fù)雜，其具體分子網(wǎng)絡(luò)信號途徑目前尚未理清，對這一領(lǐng)域深入探索有助于為臨床患者制定個(gè)性化運(yùn)動處方提供理論與實(shí)踐依據(jù)。建議今后研究采用轉(zhuǎn)基因、基因沉默等分子技術(shù)深入探討運(yùn)動對交感神經(jīng)功能影響的確切機(jī)制。目前，國外已研制出檢測體內(nèi)NET水平的無創(chuàng)成像技術(shù)[36]，下一步應(yīng)針對臨床患者探索運(yùn)動對NET的作用規(guī)律，以進(jìn)一步優(yōu)化心衰患者運(yùn)動康復(fù)方案。

4 結(jié) 論

心衰發(fā)生時(shí)，心臟交感神經(jīng)節(jié)和心肌NET表達(dá)下調(diào)，同時(shí)心肌NET發(fā)生內(nèi)化，NE產(chǎn)生增多，交感神經(jīng)過度興奮并誘導(dǎo)心臟重塑（心臟病理性肥大、心肌纖維化），最終引發(fā)心功能下降；長期有氧運(yùn)動通過上調(diào)NET表達(dá)量并抑制其內(nèi)化進(jìn)而改善心衰大鼠交感神經(jīng)過度興奮狀態(tài)，心臟重塑和心衰進(jìn)程得以延緩（心臟生理肥大同時(shí)纖維化減輕），心功能隨之增強(qiáng)。