椿根皮的化學成分及抑菌活性研究

袁亞敏， 周曉歡， 王鳳霞， 明虎斌， 何佩娜， 王繼紅

( 平頂山學院 醫(yī)學院， 河南 平頂山 467000 )

椿根皮又稱臭椿皮、樗白皮、椿根白皮，為苦木科植物臭椿(Ailanthusaltissima)的根皮或干皮(全國中草藥匯編組，1975)。其主要分布于我國河南、廣西、河北、湖北、安徽、江西、浙江等地，具有清熱燥濕、澀腸止瀉的功效。臨床上多用于治療由細菌引起的結(jié)腸炎、直腸炎、陰道炎、痔瘡、子宮頸內(nèi)膜炎、菌痢等疾病。劉昌海和張家駒(2003)采用椿根皮散聯(lián)合真人養(yǎng)臟湯治療直腸炎，患者的臨床癥狀明顯好轉(zhuǎn)，總有效率為80%?，F(xiàn)代藥理顯示椿根皮具有抑菌、抗病毒、抗瘧疾、抗腫瘤、抗血小板凝聚、解熱等活性(Du et al., 2019；Yan et al., 2020)。朱育鳳等(2021)分別測試椿根皮的水粗提物和乙醇粗提物的體外抑菌活性結(jié)果顯示，椿根皮的水粗提物對金黃色葡萄球菌具有一定的抑制活性，但無明顯抗綠膿桿菌和大腸桿菌活性；乙醇粗提物對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌均具有顯著抑制活性，并且乙醇粗提物對金黃色葡萄球菌、綠膿桿菌和大腸桿菌的抑菌圈控制明顯優(yōu)于水粗提物。

目前，關(guān)于椿根皮單體化合物的研究報道較少，齊鑫等(2011)從椿根皮分離出鐵屎米酮糖酯、臭椿苦內(nèi)酯、臭椿辛內(nèi)酯A、11-乙酰臭椿苦內(nèi)酯；周曉歡等(2021)從椿根皮95%乙醇提取物中分離得到15個化合物。本文進一步對椿根皮的化學成分及抑菌活性進行研究，目的是明確椿根皮的抑菌物質(zhì)基礎(chǔ)，為椿根皮的資源開發(fā)與利用及抑菌活性的藥物研發(fā)提供一定的參照依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料、儀器和試劑

1.1.1材料 椿根皮采自廣西北海市，由平頂山學院王繼紅副教授鑒定為臭椿(Ailanthusaltissima)的根皮。綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌 (四川睿諾賽生物科技有限公司)。

1.1.2 儀器和試劑 Triple5600+型高分辨質(zhì)譜儀(德國Bruker公司)；AVANCE NEO-600型核磁共振波譜儀 (美國Waters 公司) ；ME188T型分析天平 (美國Mettler Toledo公司)；Sephadex LH-20葡聚糖凝膠 (德國Merck公司)；LHY3100T型電子天平 (德國Florenz Sartorius公司)；柱色譜硅膠 (青島海洋化工廠)；氘代試劑DMSO-d6(德國Sigma-aldrich公司)。

1.2 研究方法

1.2.1 提取和分離 取干燥椿根皮19. 6 kg，分別采用95%甲醇、50%甲醇浸泡提取，回收溶劑得椿根皮浸膏2.3 kg。將浸膏分散于蒸餾水中，依次用等體積的石油醚、丙酮、正丁醇萃取，回收溶劑得石油醚層 (151.3 g)、丙酮層 (106.4 g)、正丁醇層 (117.6 g)。取石油醚層，經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯 (80∶20→50∶50→20∶80)梯度洗脫，得7個組分 (Fr.A1～Fr.A7)。取Fr.A2 (7.1 g)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-丙酮(70∶30→30∶70)梯度洗脫，得5個組分 (Fr.A2-1～Fr.A2-5)。取Fr.A2-2 (206.8 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物8(19 mg)、23(31 mg)。取Fr.A5 (8.3 g)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-二氯甲烷 (60∶40→20∶80)梯度洗脫，得6個組分(Fr.A5-1～Fr.A5-6)。取Fr.A5-1 (224.1 mg)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-二氯甲烷 (50∶50)洗脫，得化合物22(21 mg)；取Fr.A5-3 (95.3 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物4(23 mg)、15(34 mg)。取Fr.A6 (6.8 g)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯 (50∶50→20∶80)梯度洗脫，得7個組分 (Fr.A6-1～Fr.A6-7)。取Fr.A6-5(102. 4 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物14(28 mg)、21(26 mg)。取丙酮層，經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-二氯甲烷(70∶30→50∶50～30∶70)梯度洗脫，得8個組分 (Fr.B1～Fr.B8)。取Fr.B1(8.5 g)，經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯 (75∶25→25∶75)梯度洗脫，得7個組分 (Fr.B1-1～Fr.B1-7)。取Fr.B1-3 (192.3 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物1(28 mg)、3(23 mg)；取Fr.B1-5 (253.4 mg)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-二氯甲烷 (60∶40)洗脫，得化合物13(16 mg)、20(29 mg)。取Fr.B4 (7.5 g)，經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-二氯甲烷(55∶45→15∶75)梯度洗脫，得6個組分(Fr.B4-1～Fr.B4-6)。取Fr.B4-3 (181.5 mg)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-丙酮 (35∶65)洗脫，得化合物7(21 mg)、12(18 mg)；取Fr.A4-4 (73.5 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物2(19 mg)、19(26 mg)。取Fr.B7 (10.2 g)，經(jīng)硅膠柱分離，以石油醚-二氯甲烷 (55∶45→15∶75)梯度洗脫，得8個組分(Fr.B7-1～Fr.B7-8)。取Fr.B7-2 (151.3 mg)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-二氯甲烷 (45∶55)洗脫，得化合物9(33 mg)、16(28 mg)；取Fr.B7-7(131.4 mg)，經(jīng)硅膠柱，以石油醚-二氯甲烷 (35∶65)洗脫，得化合物11(21 mg)、18(35 mg)。取正丁醇層，經(jīng)硅膠柱分離，以乙酸乙酯-甲醇 (65∶35→35∶65→15∶85)梯度洗脫，得6個組分 (Fr.C1～Fr.C6)。取Fr.C2 (8.4 g)，經(jīng)硅膠柱分離，以丙酮-甲醇 (55∶45→15∶85)梯度洗脫，得7個組 (Fr.C2-1～Fr.C2-7)。取Fr.A2-2 (175.3 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物5(33 mg)、6(19 mg)、10(32 mg)。取Fr.C5 (9.7 g)，經(jīng)硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇 (45∶55→25∶75)梯度洗脫，得5個組分(Fr.C5-1～Fr.C5-5)。取Fr.C5-3 (95.3 mg)，經(jīng)Sephadex LH-20，得化合物17(31 mg)。

1.2.2 抑菌活性實驗 采用流式細胞法(李儀奎，1991；李東霞等，2013)測定化合物2、3、8、17的抑菌活性，以卡那霉素為對照組。取綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的標準菌株，接種于麥康凱肉湯培養(yǎng)基中，于36 ℃下培養(yǎng)48 h，采用生理鹽水稀釋(濃度為1×105CFU·mL-1)，置于瓊脂平板上。對照組和化合物樣品配置成濃度為0.1、0.5、1.0、4.0、8.0、12.0、25.0、50.0、100.0、200.0 μg·mL-1。分別將含有樣品的無菌圓形濾紙片置于接種過綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)基上，于37 ℃下培養(yǎng)24 h，檢查抑菌圈、最低抑菌濃度 (MIC)，并分析化合物對綠膿桿菌、金黃色葡萄和枯草芽孢桿菌的抑制活性。

2 結(jié)果與分析

2.1 化合物的結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1白色結(jié)晶。HR-ESI-MSm/z：412.873 1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.41 (1H，t，J=9.6 Hz，H-6)，5.11 (1H，m，H-11)，5.02 (1H，d，J=9.6 Hz，H-12)，3.54 (1H，m，H-3)，1.02 (3H，d，J=9.6 Hz，H-21)，0.91 (3H，s，H-19)，0.83 (3H，d，J=9.6 Hz，H-26)，0.81 (3H，d，J=6.3 Hz，H-27)，0.79 (3H，t，J=9.6 Hz，H-29)，0.68 (3H，s，H-18)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6) δ：39.7 (C-1，s)，33.4 (C-2，s)，74.1 (C-3，d)，42.5 (C-4，s)，140.9 (C-5，s)，123.2 (C-6，s)，25.3 (C-7，d)，52.4 (C-8，s)，51.3 (C-9，s)，35.7 (C-10，s)，129.4 (C-11，s)，136.4 (C-12，d)，42.3 (C-13，s)，58.1 (C-14，s)，24.2 (C-15，t)，30.4 (C-16，d)，56.1 (C-17，s)，12.3 (C-18，t)，21.5 (C-19，s)，36.1 (C-20，d)，19.2 (C-21，s)，41.2 (C-22，s)，25.8 (C-23，d)，47.1 (C-24，s)，29.1 (C-25，s)，21.4 (C-26，d)，19.3 (C-27，s)，24.3 (C-28，s)，12.9 (C-29，s)。以上數(shù)據(jù)與文獻(李南，2021)基本一致，故鑒定化合物1為pleuchiol。

化合物2黃色粉末。HR-ESI-MSm/z：486.701 3 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.71 (1H，ddd，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-3)，5.81 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-2)，4.03 (1H，br s，H-12 )，2.97 (1H，d，J=9.6 Hz，H-6)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：205.7 (C-1，s)，131.4 (C-2，s)，141.6 (C-3，s)，37.6 (C-4，d)，75.1 (C-5，s)，56.8 (C-6，s)，58.3 (C-7，s)，36.7 (C-8，s)，30.1 (C-9，d)，53.1 (C-10，t)，29.7 (C-11，s)，74.1 (C-12，d)，49.3 (C- 13，s)，44.6 (C-14，s)，23.9 (C-15，d)，27.8 (C-16，s)， 45.1 (C-17，s)，13.3 (C-18，d)，16.1 (C-19，t)，41.2 (C-20，d)，13.1 (C-21，s)，79.3 (C-22，s)，31.4 (C- 23，s)，159.3 (C-24，s)，127.3 (C-25，s)，169.1 (C-26，q)，58.2 (C-27，s)，21.8 (C-28，s)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Kuang et al., 2010)基本一致，故鑒定化合物2為withastramonolide。

化合物3白色粉末。HR-ESI-MSm/z：429.423 9 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：5.73 (1H，s，H-6)，3.81 (1H，m，H-3)，1.16 (3H，s，H-19)，0.87 (3H，d，J=9.6 Hz，H-21)，0.83 (3H，t，J=9.6 Hz，H-29)，0.81 (3H，d，J=9.6 Hz，H-26)，0.73 (3H，d，J=4.8 Hz，H-27)，0.68 (3H，s，H-18)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：37.1 (C-1，s)，30.6 (C-2，s)，69.2 (C-3，s)，40.8 (C-4，s)，164.7 (C-5，s)，125.3 (C-6，s)，201.4 (C-7，s)，46.1 (C-8，s)，50.7 (C-9，s)，39.1 (C-10，d)，20.6 (C-11，s)，39.1 (C-12，s)，42.7 (C-13，s)，50.3 (C-14，d)，27.6 (C-15，s)，29.1 (C-16，t)，55.2 (C-17，s)，12.1 (C-18，d)，18.4 (C-19，s)，35.7 (C-20，s)，20.1 (C-21，s)，34.1 (C-22，s)，25.8 (C-23，s)，46.1 (C-24，q)，30.2 (C-25，t)，20.5 (C-26，s)，20.1 (C-27，q)，22.8 (C-28，s)，12.1 (C-29，t)。以上數(shù)據(jù)與文獻(周勤梅等，2016)基本一致，故鑒定化合物3為7-ketositosterol。

化合物4白色粉末。HR-ESI-MSm/z：427.815 9 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：4.71 (1H，s，H-29α)，4.62 (1H，s，H-29β)，3.73 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，3.09 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-3)，1.73 (3H，br s，H-30)，1.13 (3H，s，H-26)，1.02 (3H，s，H-23)，0.85(3H，s，H-24)，0.79 (3H，s，H-25)，0.68 (3H，s，H-27)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：43.2 (C-1，s)，29.1 (C-2，s)，85.1 (C-3，d)，39.7 (C-4，s)，56.1 (C-5，s)，19.1 (C-6，s)，35.2 (C-7，s)，40.6 (C-8，d)，51.3 (C-9，s)，40.3 (C-10，s)，20.7 (C-11，s)，26.1 (C-12，s)，40.2 (C-13，s)，43.1 (C-14，s)，29.1 (C-15，t)，31.2 (C-16，s)，50.4 (C-17，s)，50.9 (C-18，s)，51.2 (C-19，d)，149.3 (C-20，s)，30.4 (C-21，s)，31.6 (C-22，s)，29.7 (C-23，d)，17.1 (C-24，s)，17.2 (C-25，s)，17.9 (C-26，s)，15.3 (C-27，s)，59.3 (C-28，t)，109.4 (C-29，q)，20.1 (C-30，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Omar et al., 2019)基本一致，故鑒定化合物4為白樺酯醇。

化合物5白色針晶。HR-ESI-MSm/z：471.142 9 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：4.91 (1H，d，J=4.8 Hz，H-29α)，4.52 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-29β)，3.69 (3H，s，3-OCH3)，3.17 (1H，td，J=9.6，4.8 Hz，H-3)，2.93 (1H，td，J=9.6，4.8 Hz，H-19)，1.84 (3H，s，H-30)，1.57(3H，s，H-27)，1.13 (3H，s，H-26)，0.87 (3H，s，H-25)，0.74 (3H，s，H-24)，0.65 (3H，s，H-23)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：39.1 (C-1，s)，26.8 (C-2，s)，80.1 (C-3，s)，40.3 (C-4，d)，56.7 (C-5，s)，19.1 (C-6，s)，35.1 (C-7，s)，41.3 (C-8，s)，52.4 (C-9，s)，36.8 (C-10，s)，21.7 (C-11，d)，26.2 (C-12，s)，39.1 (C-13，d)，43.5 (C-14，s)，30.2 (C-15，d)，31.8 (C-16，s)，57.2 (C-17，s)，51.2 (C-18，s)，46.8 (C-19，s)，151.4 (C-20，s)，31.1 (C-21，s)，36.9 (C-22，s)，29.1 (C-23，s)，16.1 (C-24，s)，15.8 (C-25，s)，15.6 (C-26，t)，15.3 (C-27，s)，175.3 (C-28，s)，108.4 (C-29，t)，20.1 (C-30，s)，50.2 (3-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(李曼姝等，2021)基本一致，故鑒定化合物5為樺木酸甲酯。

化合物6白色結(jié)晶。HR-ESI-MSm/z：169.316 2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.61 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5)，7.45 (1H，s，H-2)，6.93 (1H，d，J=9.6 Hz，H-6)，4.03 (9H，s，4-OCH3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：151.3 (C-1，s)，113.4 (C-2，s)，146.2 (C-3，t)，148.1 (C-4，d)，124.1 (C-5，s)，113.2 (C-6，d)，55.8 (1-OCH3，q)，55.8 (2-OCH3，q)，55.0 (4-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(李曼姝等，2021)基本一致，故鑒定化合物6為1,2,4-trimethoxybenzene。

化合物7白色粉末。HR-ESI-MSm/z：143.109 3 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.91 (2H，s，H-2，3)，3.76 (6H，s，1′，2′-OCH3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6) δ：169.2 (C-1，s)，133.1 (C-2，t)，133.1 (C-3，s)，169.2 (C-4，d)，51.6 (1′-OCH3，q)，51.6 (2′-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(羅偉等，2021)基本一致，故鑒定化合物7為順丁烯二酸二甲酯。

化合物8黃色粉末。HR-ESI-MSm/z：298.681 5 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.71 (1H，s，H-11)，6.62 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-15)，5.47 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-16α)，5.09 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-16β)，2.91 (1H，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-2β)，2.37 (1H，ddd，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-1)，2.23 (3H，s，H-17)，2.02 (1H，ddd，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-1)，1.91 (2H，ddd，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-6)，1.68 (2H，ddd，J=9.6，4.8，2.2 Hz，H-7)，1.27 (3H，s，H-20)，1.21 (3H，s，H-18)，1.08 (3H，s，H-19)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：38.2 (C-1，s)，35.1 (C-2，t)，54.1 (C-3，d)，48.3 (C-4，s)，49.1 (C-5，d)，19.8 (C-6，t)，30.4 (C-7，s)，124.1 (C-8，d)，140.2 (C-9，s)，36.9 (C-10，d)，108.3 (C-11，q)，152.4 (C-12，t)，120.1 (C-13，s)，144.8 (C-14，t)，134.8 (C-15，s)，120.4 (C-16，q)，13.1 (C-17，d)，25.1 (C-18，s)，27.2 (C-19，s)，20.6 (C-20，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Craveiro & Silveira,1982)基本一致，故鑒定化合物8為sonderianol。

化合物9白色油狀物。 HR-ESI-MSm/z：279.208 3 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.82 ( 2H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-3，6)，7.63 (2H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-4，5)，4.27 (4H，t，J=9.6 Hz，H-1′)，1.83 (2H，m，H- 2′)，1.52 (4H，J=9.6 Hz，H-3′)，1.03 (6H，J=9.6 Hz，H-4′)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：131.6 (C-1，s)，131.6 (C-2，s)，127.3 (C-3，d)，128.6 (C- 4，s)，128.6 (C-5，s)，127.3 (C-6，d)，64.9 (C-1′，t)，29.1 (C-2′，s)，20.8 (C-3′，q)，14.2 (C-4′，t)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Ma et al., 2021)基本一致，故鑒定化合物9為dibutyl phthalate。

化合物10白色粉末。HR-ESI-MSm/z：384.316 8 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.02 (2H，d，J=4.8 Hz，H-2，2′)，6.93 (2H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-6，6′)，6.81 (2H，d，J=9.6 Hz，H-5，5′)，4.68 (2H，d，J=9.6 Hz，H-7，7′)，4.17 (2H，m，H-9α, 9′α)，3.91 (6H，s，3，3′-OCH3)，3.73 (2H，m，H-9β，9′β)，3.09 (2H，m，H-8，8′)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：140.1 (C-1，s)，108.7 (C-2，d)，151.2 (C-3，s)，146.8 (C-4，d)，115.8 (C-5，s)，119.4 (C-6，s)，88.2 (C-7，t)，56.1 (C-8，s)，73.1 (C-9，s)，140.2 (C-1′，s)，108.7 (C-2′，d)，151.2 (C-3′，t)，146.8 (C-4′，s)，115.8 (C-5′，s)，119.4 (C-6′，s)，88.2 (C-7′，s)，56.1 (C-8′，s)，73.1 (C-9′，t)，57.1 (3-OCH3，q)，57.1 (3′-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(鄭琇梅等，2020)基本一致，故鑒定化合物10為 pinoresinol。

化合物11：無色針晶。HR-ESI-MSm/z：167.317 2 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.04 (2H，d，J=9.6 Hz，H-2，6)，6.93 (2H，d，J=9.6 Hz，H-3，5)，4.41 (2H，q，J=9.6 Hz，H-2′)，1.37 (3H，t，J=9.6 Hz，H-3′)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：122.7 (C-1，d)，131.8 (C-2，s)，114.8 (C-3，s)，160.1 (C-4，d)，114.8 (C-5，d)，131.8 (C-6，d)，167.1 (C-1′，t)，61.4 ( C-2′，q)，16.2 (C-3′，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(李余釗等，2020)基本一致，故鑒定化合物11為對羥基苯甲酸乙酯。

化合物12色油狀物。HR-ESI-MSm/z：204.104 6 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.71 (1H，d，J=4.8 Hz，H-4)，7.52 (1H，d，J=9.6 Hz，H-3)，7.38 (2H，d，J=4.8 Hz，H-2′)，6.91 (2H，d，J=9.6 Hz，H-3′)，6.83 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5)，6.27 (1H，d，J=9.6 Hz，H-2)，3.64 (3H，s，3-OCH3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：171.2 (C-1，d)，115.1 (C-2，s)，147.2 (C-3，s)，159.4 (C-4，d)，116.2 (C-5，s)，127.1 (C-1′，d)，130.8 (C-2′，d)，117.4 (C-3′，t)，134.1 (C-4′，d)，117.4 (C-5′，t)，130.8 (C-6′，t)，51.8 (3-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Son et al., 2005)基本一致，故鑒定化合物12為avenalumic acid methyl ester。

化合物13黃色粉末。HR-ESI-MSm/z：343.206 4 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.22 (1H，d，J=4.8，H-2′)，7.91 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-6′)，7.09 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5′)，6.57 (2H，dd，J=4.8，2.2 Hz，H-7， 9)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：137.2 (C-1，d)，151.2 (C- 2，s)，140.2 (C-3，d)，180.7 (C-4，s)，158.1 (C-5，d)，100.3 (C-6，s)，165.2 (C-7，s)，92.1 (C-8，s)，163.1 (C-9，t)，107.2 (C-10，t)，123.6 (C-1′，s)，116.8 (C-2′，s)，152.4 (C-3′，d)，158.1 (C-4′，t)，113.1 (C-5′，d)，122.4 (C-6′，t)，59.7 (3-OCH3，q)，55.8 (7-OCH3，q)，57.4 (4′-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(余茜，2021)基本一致，故鑒定化合物13為5, 3′-dihydroxy-3, 7, 4′-trimethoxyflavone。

化合物14無色油狀物。HR-ESI-MSm/z：220.281 3 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：4.76 (1H，m，H- 14β)，4.71 (1H，m，H-14a)，2.36 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-4β)，2.17 (1H，m，H-6)，2.11 (1H，m，H-4a)，2.02 (1H，m，H-3β)，1.83 (1H，m，H-7β)，1.81 (1H，m，H-8β)，1.72 (1H，m，H-7α) ，1.63 (1H，m，H-8α)，1.44 (1H，m，H-10)，1.31 (3H，s，H-15)，1.14 (3H，s，H-12)，1.11 (3H，s，H- 13)，0.98 (1H，m，H-3α)，0.83 (1H，m，H-2)，0.51 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-1)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：29.7 (C-1，s)，28.3 (C-2，d)，25.1 (C-3，s)，38.7 (C-4，s)，154.2 (C-5，d)，54.1 (C-6，t)，27.1 (C-7，s)，42.3 (C-8，d)，80.8 (C-9，t)，56.1 (C-10，s)，21.3 (C-11，s)，29.1 (C-12，s)，17.1 (C-13，t)，107.3 (C-14，s)，27.1 (C-15，t)。以上數(shù)據(jù)與文獻(余茜，2021)基本一致，故鑒定化合物14為spathulenol。

化合物15白色晶體。HR-ESI-MSm/z：233.104 1 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.13 (1H，J=9.6 Hz，d，H-8)，6.83 (1H，J=9.6 Hz，d，H-6)，5.73 (1H，s，H-3)，4.36 ( 2H，s，H-11)，2.51 (3H，s，H-14)，2.42 (3H，s，H-13)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：125.3 (C-1，t)，166.8 (C-2，s)，110.7 (C-3，d)，179.6 (C-4，s)，140.2 (C-5，d)，120.3 (C-6，s)，162.1 (C-7，s)，103.4 (C-8，t)，160.5 (C-9，d)，114.3 (C-10，s)，51.3 (C-11，t)，207.3 (C-12，s)，29.7 (C-13，t)，21.3 (C-14，d)。以上數(shù)據(jù)與文獻(張再等，2021)基本一致，故鑒定化合物15為2-甲基-5-丙基酮-7-羥基色原酮。

化合物16黃色粉末。HR-ESI-MSm/z：254.324 6 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.52 (1H，d，J=4.8 Hz，H-5)，8.02 (2H，d，J=9.6 Hz，H-2′，6′)，7.21 (1H，d，J=9.6 Hz，H-8)，7.18 (3H，d，J=9.6 Hz，H-6，3′，5′)，6.93 (1H，s，H-3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：135.6 (C-1，s)，164.1 (C-2，s)，105.3 (C-3，s)，176.3 (C-4，d)，128.5 (C-5，d)，115.4 (C-6，s)，165.3 (C-7，t)，104.6 (C-8，t)，161.1 (C-9，d)，118.3 (C-10，t)，125.2 (C-1′，d)，130.4 (C-2′，s)，118.1 (C-3′，q)，163.1 (C-4′，s)， 118.1 (C-5′，s)，130.4 (C-6′，q) 。以上數(shù)據(jù)與文獻(Kitagawa et al., 1998)基本一致，故鑒定化合物16為7,4′-dihydroxyflavone。

化合物17棕色固體。 HR-ESI-MSm/z：345.124 8 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：12.8 (1H，s，6-OH)，6.34 (1H，br s，H-3)，6.09 (1H，d，J=4.8 Hz，H-5)，5.13 (1H，d，J=9.6 Hz，H-1′)，3.92 (3H，s，2-OCH3)，3.83 (1H，m，H-6′a)，3.72 (1H，m，H-6′β)，3.39～3.44 (3H，m，H-2′，3′，5′)，3.25 (1H，m，H-4′)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：102.4 (C-1，d)，164.3 (C-2，s)，91.8 (C-3，s)，164.1 (C-4，q)，95.8 (C-5，s)，163.1 (C-6，q)，202.6 (C-7，s)，33.1 (C-8，d)，102.3 (C-1′，s)，74.2 (C-2′，q)，76.8 (C-3′，t)，70.1 (C-4′，t)，77.1 (C- 5′，t)，61.2 (C-6′，s)，55.8 (2-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Afshar et al., 2017)基本一致，故鑒定化合物17為 annphenone。

化合物18白色粉末。HR-ESI-MSm/z：169.275 1 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.53 (1H，dd，J=9.6，4.8 Hz，H-6)，7.41 (1H，s，H-2)，7.03 (1H，d，J=9.6 Hz，H-5)，3.96 (3H，s，4-OCH3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：122.4 (C-1，t)，115.8 (C-2，d)，147.1 (C-3，d)，150.8 (C-4)，s，110.4 (C-5，d)，130.4 (C-6，t)，57.3 (4-OCH3，q)，168.3 (7-COOH，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(劉欣媛等，2018)基本一致，故鑒定化合物18為3-羥基-4-甲氧基苯甲酸。

化合物19白色粉末。 HR-ESI-MSm/z：303.104 3 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：6.91～6.86 (3H，m，H-2′，5′，6′)，5.93( 2H，m，H-6，8)，5.36 (1H，dd，J=4.8，2.2 Hz，H-2)，3.92 (3H，s，7-OCH3)，3.16 (2H，m，H-3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：63.2 (C-1，s)，79.1 (C-2，t)，43.6 (C-3，t)，196.4 (C-4，d)，161.7 (C-5，q)，95.1 (C-6，t)，166.8 (C-7，s)，94.1 (C-8，s)，163.2 (C-9，s)，103.1 (C-10，t)，130.2 (C-1′，q)，113.8 (C-2′，d)，146.1 (C-3′，t)，146.3 (C-4′，d)，114.1 (C-5′，s)，117.2 (C-6′，d)，56.1 (7-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(謝安然等，2021)基本一致，故鑒定化合物19為5,3′,4′-三羥基-7-甲氧基二氫黃酮。

化合物20黃色油狀物。HR-ESI-MSm/z：279.316 7 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：7.81 (2H，m，H-3，6)，7.46 (2H，m，H-4，5)，4.29 (4H，t，J=9.6 Hz，H-1′，1″)，1.83 (4H，m，H-2′，2″)，1.51 (4H，m，H-3′，3″)，1.03 (6H，t，J=9.6 Hz，H-4′，4″)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：133.1 (C-1，s)，133.1 (C-2，s)，130.2 (C-3，s)，132.6 (C-4，d)，132.6 (C-5，s)，130.2 (C-6，d)，66.4 (C-1′，s)，31.2 (C-2′，d)，20.1 (C-3′，s)，14.6 (C- 4′，s)，66.4 (C-1″，s)，31.2 (C-2″，s)，20.1 (C-3″，d)，14.6 (C-4″，d)。以上數(shù)據(jù)與文獻(鄒園生等，2019)基本一致，故鑒定化合物20為鄰苯二甲酸二丁酯。

化合物21白色固體。HR-ESI-MSm/z：187.416 2 [M+H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：9.24 ( 1H，s，3，5-OH)，9.02 (1H，s，3-OH)，6.87 (1H，s，H-2，6)，3.18 (3H，s，4-OCH3)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：120.1 (C-1，s)，146.4 (C-2，s)，109.1 (C- 3，d)，139.1 (C-4，s)，109.1 (C-5，d)，146.4 (C-6，s)，59.4 (4-OCH3，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Virginie et al., 2018)基本一致，故鑒定化合物21為4-O-甲基沒食子酸。

化合物22黃色油狀物。HR-ESI-MSm/z：391.203 7 [M + H]+。1H-NMR (600 MHz，acetone-d6)δ：8.26 (4H，s，H-3，4，6，7)，4.34 (4H，m，H-1′，1″)，1.81 (2H，m，H-2′，2″)，1.03 (6H，t，J=9.6 Hz，H-8′，8″)，0.87 (6H，t，J=9.6 Hz，H-6′，6″)。13C-NMR-DEPT (150 MHz，acetone-d6)δ：165.4 (C-1，s)，136.3 (C-2，d)，129.4 (C-3，d)，129.4 (C-4，t)，136.3 (C-5，s)，129.4 (C-6，s)，129.4 (C-7，s)，165.4 (C-8，s)，67.8 (C-1′，s)，40.3 (C-2′，t)，32.8 (C-3′，d)，30.2 (C-4′，d)，24.5 (C-5′，q)，15.6 (C-6′，t)，25.1 (C-7′，s)，12.3 (C-8′，d)，67.8 (C-1″，d)，40.3 (C-2″，t)，32.8 (C-3″，s)，30.2 (C-4″，q，24.5 (C-5″，s)，15.6 (C-6″，s)，25.1 (C-7″，t)，12.3 (C-8″，q)。以上數(shù)據(jù)與文獻(Li et al., 2021)基本一致，故鑒定化合物22為對苯二甲酸二辛酯。

2.2 抑菌活性測試結(jié)果

由表1可知，化合物2對綠膿桿菌、枯草芽孢桿菌，化合物3對枯草芽孢桿菌，化合物8對綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌，化合物17對綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用。其中，化合物2對枯草芽孢桿菌的抑制作用與卡那霉素無顯著差異(P>0.05)。

表 1 化合物抑菌活性Table 1 Antibacterial activities of compounds

3 討論與結(jié)論

椿根皮具有良好的抑菌抗炎活性，但關(guān)于其化學成分的研究報道較少。為了探討其抑菌的物質(zhì)基礎(chǔ)，本文從椿根皮中分離鑒定出22個化合物，均為首次從椿根皮中分離得到，結(jié)構(gòu)主要涉及酚類、黃酮、甾醇、生物堿等。而苦木科植物中單體化合物的報道主要包括苦木素、生物堿、木脂素、黃酮、三萜、蒽醌等，揭示同科不同植物的化學成分可能存在較大不同。

隨著食品藥品行業(yè)“禁抗、減抗”的呼吁，天然抑菌活性劑的開發(fā)利用成為目前研究的熱點。王婉卿等(2020)研究表明椿根皮提取物對綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌、白色念珠菌和大腸桿菌具有良好的抑制活性，但其未對發(fā)揮抑菌活性的物質(zhì)基礎(chǔ)進行闡述。本研究的抑菌活性測試結(jié)果顯示，化合物2對枯草芽孢桿菌的抑菌圈直徑大于20 mm，在藥物敏感性等級劃分中屬于極度敏感，并且MIC僅為1.0 mg·mL-1，提示化合物2可能為主要的抑菌活性成分。此外，化合物3、8、17也具有良好的抑菌活性，可擴展抑菌圈范圍，為潛在的抑菌抗炎成分。以上抑菌物質(zhì)的結(jié)構(gòu)種類涉及黃酮、酚類苯乙酮等，表明椿根皮抑菌活性是多種類成分協(xié)同作用的效果。本研究結(jié)果豐富了椿根皮化學成分的資料庫，為抑菌活性的藥物研發(fā)提供了一定的幫助。