豬鏈球菌病研究進(jìn)展

魏述亮，邱家章，張恒彬

（山東裕城生物技術(shù)有限公司，山東 濟(jì)南 251403）

豬鏈球菌?。⊿wine Streptococosis），作為豬養(yǎng)殖行業(yè)最為常見的病癥之一，臨床主要表現(xiàn)為：仔豬腦膜炎、豬敗血癥、豬心肌內(nèi)膜炎、豬肺炎等等[1]，對(duì)養(yǎng)殖戶帶來(lái)嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)，該病毒力因子復(fù)雜、發(fā)病機(jī)理眾多、防治難度大，引起了越來(lái)越多科研工作者的重視。

1 病原學(xué)

豬鏈球菌作為革蘭氏陽(yáng)性球菌的一種，無(wú)芽孢、鞭毛，呈短鏈狀，有莢膜，通常為圓形或橢圓形，早期培養(yǎng)出現(xiàn)莢膜，有菌毛，在含血液、血清或葡萄糖的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)良好。根據(jù)血平板類型不同，培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生的溶血環(huán)略有差異，豬鏈球菌在多數(shù)血平板呈 α溶血，在馬等動(dòng)物血平板呈 β溶血[2]。它能夠發(fā)酵棉子糖、蔗糖、山梨醇、海藻糖和乳糖；不發(fā)酵甘露糖和阿拉伯糖。生存能力表現(xiàn)較強(qiáng)，在動(dòng)物尸體內(nèi)能存活 6周左右（溫度 4℃以內(nèi)），脫離動(dòng)物機(jī)體在一般水體中能存活 2周左右。常用殺菌劑可將其滅殺，如含氯、乙醇、季銨鹽類等。

豬鏈球菌血清表現(xiàn)類型復(fù)雜，種類眾多，根據(jù)莢膜多糖抗原進(jìn)行分類，目前已發(fā)現(xiàn)的血清型有 35種之多，但不是所有的都具有致病性。截至目前，能引起動(dòng)物感染較強(qiáng)病癥的主要為 1、2、7和9型，其中能導(dǎo)致人類致病或致死的主要為血清2型，可采用專業(yè)診斷試劑進(jìn)行鑒別[3]。

2 流行病學(xué)

從流行病學(xué)角度分析，豬鏈球菌病的發(fā)病無(wú)顯著季節(jié)性特征，一般在天氣炎熱時(shí)發(fā)病率略高于其他季節(jié)，該病發(fā)病通常出現(xiàn)大面積流行性，致死率高，多呈現(xiàn)地域性流行。感染對(duì)象不局限于豬，馬、牛、羊、犬、貓等也易被病菌感染，臨床表現(xiàn)與豬相似。在科學(xué)研究中，研究人員通常用小鼠作為感染動(dòng)物研究對(duì)象[4]。

豬鏈球菌病常見于 1~3個(gè)月齡的仔豬，感染后病癥嚴(yán)重。其中在正常的豬群中，鏈球菌 2型幾乎存在于所有的豬體內(nèi)，扁桃體為定值的靶向器官。以致病豬和病死豬的尸體為豬鏈球菌病的主要傳染源，除此之外，已痊愈的帶病毒豬以及帶病毒尚無(wú)癥狀的健康豬也是其傳染源。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)，如母豬生殖系統(tǒng)中帶有病毒，那其所生產(chǎn)的仔豬也有很大幾率發(fā)生感染，且仔豬在哺乳過(guò)程中也易感染病毒。

鏈球菌病毒感染動(dòng)物機(jī)體的方式多種多樣，主要感染途徑有消化道、呼吸道、皮膚接觸、傷口感染等等，環(huán)境傳播已水體傳播和污染環(huán)境空氣傳播為主。在人獸之間的傳播途徑與之類似，人類感染人群主要集中在養(yǎng)殖場(chǎng)工作人員及豬肉屠宰加工工人，目前為止尚未發(fā)現(xiàn)人與人之間的傳播。

3 臨床癥狀

3.1 敗血癥型

一般發(fā)生在流行初期，突然發(fā)病，體溫升至41～42 ℃，在數(shù)小時(shí)至 1 d內(nèi)死亡。急性病例，常見精神沉郁，體溫 41 ℃ 左右，呈稽留熱，減食或不食，心跳加快，眼結(jié)膜潮紅，流淚，有漿液性鼻液，呼吸淺而快。部分病豬在發(fā)病的后期，耳尖、四肢下端、腹下可見有紫紅色或出血性紅斑，有跛行病程2～4 d。

3.2 腦膜炎型

多發(fā)于哺乳仔豬和保育仔豬，與水腫病的癥狀相似。發(fā)病初期患豬體溫升高，食欲廢絕，便秘，有漿液性或粘液性鼻液，繼而出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，轉(zhuǎn)圈，空嚼，磨牙，直至后軀麻痹，共濟(jì)失調(diào)，側(cè)臥于地，四肢作游泳狀，頸部強(qiáng)直，角弓反張，甚至昏迷死亡。部分豬出現(xiàn)多發(fā)性關(guān)節(jié)炎、關(guān)節(jié)腫大，病程5～10 d。

3.3 關(guān)節(jié)炎型

患豬體溫升高，被毛粗亂，呈現(xiàn)關(guān)節(jié)炎病狀，表現(xiàn)一肢或肢關(guān)節(jié)腫脹，高度跛行，甚至不能起立。病程 2～3周。小部分哺乳仔豬也可發(fā)生，常常因搶不上吃奶而逐漸消瘦。

3.4 化膿性淋巴結(jié)炎型

病豬淋巴腫脹，堅(jiān)硬，有熱痛感，采食、咀嚼、吞咽和呼吸較為困難，多見于頜下淋巴結(jié)化膿性炎癥，咽喉、耳下、頸部等淋巴結(jié)也可發(fā)生。一般不引起死亡，病程為 3～5周。病豬經(jīng)治療后腫脹部分中央變軟，皮膚壞死，破潰流膿，并逐漸痊愈。

4 剖檢病變

病豬死后血液凝固不良呈污穢色。心冠脂肪水腫，心內(nèi)外膜有出血點(diǎn)或出血斑；心包、胸腔積液，呈黃色，有時(shí)積液中有纖維蛋白；鼻黏膜、喉頭、氣管、黏膜充血或出血，有泡沫狀物；肺充血、水腫；肝瘀血腫大，呈暗紫色，有時(shí)呈黃色；脾瘀血腫大，呈暗黃色，病程稍長(zhǎng)的多為黃色；膀胱皺縮，少尿或無(wú)尿，全身淋巴結(jié)出血腫大或水腫，有的淋巴結(jié)周圍結(jié)締組織水腫或呈膠凍樣；胃和小腸黏膜有不同程度的出血，腸系膜水腫；神經(jīng)癥狀嚴(yán)重的腦膜充血、出血，嚴(yán)重的甚至腦膜出血或腦膜下積液。

5 致病機(jī)理

自建國(guó)后有首次報(bào)道記錄以來(lái)，關(guān)于豬鏈球菌病大面積暴發(fā)案例越來(lái)越多，其中人感染情況頻發(fā)[5]，造成嚴(yán)重經(jīng)濟(jì)損失及社會(huì)影響。1999年江蘇一豬養(yǎng)殖場(chǎng)大面積疫情暴發(fā)，引起萬(wàn)余頭豬死亡，養(yǎng)殖人員25人感染，其中14人死亡，死亡率高達(dá) 56 %。2005四川省大面積豬鏈球菌病暴發(fā)，涉及 9個(gè)地市，數(shù)萬(wàn)頭豬死亡，206感染，其中死亡人數(shù)高達(dá) 38人。以上致人傳染死亡主要為 2型豬鏈球菌，因此近年來(lái)越來(lái)越多的研究人員聚焦于此，開展毒力因子、發(fā)病機(jī)理及防治免疫研究，并取得了一定的科研成果。

研究證實(shí)，該菌經(jīng)呼吸道進(jìn)入機(jī)體，起初定值于機(jī)體扁桃體及呼吸道黏膜內(nèi)，在突破機(jī)體局部屏障后入侵淋巴系統(tǒng)和血液系統(tǒng)，通過(guò)血液循環(huán)散播至機(jī)體各組織，產(chǎn)生毒力因子，進(jìn)而引發(fā)各種臨床癥狀，主要表現(xiàn)為急性腦膜炎、肺組織病變、關(guān)節(jié)炎癥等。截止目前，該細(xì)菌在動(dòng)物機(jī)體內(nèi)的具體傳播機(jī)制尚未有明確研究報(bào)道，對(duì)于該方面的研究主要聚焦在細(xì)菌導(dǎo)致腦膜炎的機(jī)制方向上。

6 毒力因子

研究發(fā)現(xiàn)，豬鏈球菌的毒力因子主要包括 7種，具體如下：

6.1 莢膜多糖（CPS）

為細(xì)菌細(xì)胞壁的主要組成部分，由多種同多糖、異多糖組成，分子量達(dá)18萬(wàn)ku上下，在眾多毒力因子的起決定作用，其具體成分及結(jié)構(gòu)受細(xì)菌血清型影響，保護(hù)細(xì)菌免受機(jī)體免疫系統(tǒng)的吞噬。

6.2 黏附素（Adhesin）

黏附素存在于細(xì)菌表面，保證細(xì)菌能夠黏附在受感染機(jī)體內(nèi)，保證細(xì)菌在機(jī)體內(nèi)定植，為感染提供前提條件。在豬鏈球菌中，黏附素[7]主要分為兩種，一種為 18 ku，存在于大多數(shù)血清型菌體中；另一種為 39 ku，主要存在于 2型豬鏈球菌中，其粘附性對(duì)機(jī)體具有較強(qiáng)的致病力。

6.3 溶血素（SLY）

為細(xì)菌在生長(zhǎng)過(guò)程中產(chǎn)生的一種血液毒素，是蛋白毒素的一種，膽固醇能夠不可逆的抑制它的溶血性，與介導(dǎo)細(xì)菌的入侵和裂解細(xì)胞密切相關(guān)[8]。其作為一種成孔毒素，在病毒定值于呼吸系統(tǒng)黏膜后，破壞呼吸道上皮組織，使大量繁殖的細(xì)菌進(jìn)入呼吸道毛細(xì)血管系統(tǒng)，最終擴(kuò)散近循環(huán)系統(tǒng)。

6.4 溶菌酶釋放蛋白（MRP）及細(xì)胞外蛋白因子（EF）

溶菌酶釋放蛋白及胞外蛋白因子均為 2型豬鏈球菌重要毒力因子之一。溶菌酶釋放蛋白是細(xì)菌的胞壁蛋白，分子質(zhì)量為 136 ku，具有黏附上皮細(xì)胞和介導(dǎo)細(xì)菌侵襲作用，還能誘導(dǎo)上皮細(xì)胞和巨細(xì)胞凋亡[9]，促進(jìn)感染過(guò)程。細(xì)胞外蛋白因子是一種分泌性蛋白，分子質(zhì)量為 110 ku，目前作用不詳。根據(jù)MRP和EF的有無(wú)可將2型豬鏈球菌分為 3種表型：MRP+EF+，致病力最強(qiáng)；MRP+EF-，致病力較弱；MRP-EF-，無(wú)致病力，MRP和EF也是判定菌株致病力的標(biāo)準(zhǔn)。

6.5 纖維結(jié)合蛋白（FBPS）

王花茹等[10]對(duì) 2型豬鏈球菌的纖維蛋白結(jié)合蛋白開展了具體研究，其通過(guò)化學(xué)手段分離純化了豬鏈球菌的纖維結(jié)合蛋白，該蛋白能保護(hù)細(xì)菌免受豬免疫系統(tǒng)的吞噬，同時(shí)還具備黏附素的功能，在保證細(xì)菌定值機(jī)體的同時(shí)保護(hù)菌體。同時(shí)其還發(fā)現(xiàn)該蛋白能幫助細(xì)菌黏合在人體纖維蛋白中，是使人類致病的重要因素之一。

6.6 谷氨酸脫氫酶（GDH）

其為最晚發(fā)現(xiàn)的毒力因子，經(jīng)研究人員DNA分析，該脫氫酶中含有一份開放性的閱讀框，其能對(duì)四百多個(gè)氨基酸殘基進(jìn)行編碼。該酶可以和感染豬鏈球菌豬血清發(fā)生反應(yīng)，目前作為檢測(cè)豬鏈球菌的抗原物質(zhì)之一。

7 防治措施

7.1 藥物治療

先前，針對(duì)豬鏈球菌病主要以抗生素藥物治療為主，針對(duì)具體細(xì)菌類型，選擇合適的抗生素藥物混入飼料內(nèi)，在藥物使用過(guò)程中應(yīng)防止細(xì)菌產(chǎn)生耐藥性，用藥最好經(jīng)過(guò)藥敏試驗(yàn)篩選敏感藥物，并經(jīng)常變換使用藥物。近年來(lái)，隨著中獸藥的快速發(fā)展，中藥在治療豬鏈球菌病中的優(yōu)勢(shì)逐漸凸顯出來(lái)，其中地丁、蒲公英、金銀花等藥物被廣泛用于該病治療。

7.2 免疫預(yù)防

作為最行之有效的預(yù)防手段之一，免疫預(yù)防能夠有效控制豬鏈球菌病的大面積暴發(fā)。相對(duì)其他種類細(xì)菌，鏈球菌的血清型多種多樣，存在地域性差別，不同血清型抗原的交叉免疫效果較差。對(duì)此，研制疫苗的關(guān)鍵就在于選擇具有代表性的血清型作為疫苗株。Okwumabua等[11]研究表明，2型豬鏈球菌中 38 ku蛋白具有顯著代表性，其為目前診斷應(yīng)用最廣的抗原。

Wisselink等[12]研究發(fā)現(xiàn)，MRP、EF也可以作為研制鏈球菌疫苗的代表標(biāo)志物，并開發(fā)了WO作為佐劑的 MRP+EF+亞單位疫苗，已能有效預(yù)防2型豬鏈球菌。

李明等[13]利用 2型豬鏈球菌株 MRP和EPF的 NDA序列表達(dá)合成 74 ku蛋白作為免疫原，具有較好的保護(hù)效果。

范紅結(jié)等[14]通過(guò)馬鏈球菌獸疫亞種類M蛋白和豬鏈球菌 MRP融合表達(dá)，發(fā)現(xiàn)表達(dá)產(chǎn)物具有類M蛋白和MRP的雙重抗原性，融合蛋白對(duì)仔豬的免疫保護(hù)率為60%。

7.3 衛(wèi)生管理措施

污染環(huán)境中細(xì)菌傳播作為主要傳染源之一，因而環(huán)境衛(wèi)生對(duì)于防治豬鏈球菌病有著重要作用，其中母豬作為重點(diǎn)關(guān)注對(duì)象，其飼養(yǎng)管理顯得額外重要。在現(xiàn)在豬養(yǎng)殖場(chǎng)現(xiàn)代化、規(guī)?；崆跋?，豬舍的環(huán)境管理逐漸趨于智能化，豬舍衛(wèi)生環(huán)境管理主要為：（1）外來(lái)豬需確保無(wú)疫病。（2）注重環(huán)境衛(wèi)生及通風(fēng)，豬舍布局科學(xué)合理，養(yǎng)殖密度適中。（3）定期消毒能夠有效防止豬鏈球菌病的發(fā)生，也能有效殺滅其他細(xì)菌。