深圳市光明區(qū)24564例新生兒耳聾基因篩查結(jié)果分析*

曾 君 姜盼盼 薛 明 吳莉萍 林珊珊 黃嘉雯 楊江濤, 吳本清,*

1.中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(光明)醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心 (廣東 深圳 518107)

2.深圳罕見病代謝組學(xué)精準(zhǔn)醫(yī)學(xué)工程研究中心 (廣東 深圳 518107)

3.泰安市婦幼保健院 (山東 泰安 271000)

4.深圳愛灣醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室 (廣東 深圳 518107)

遺傳性耳聾是指由基因缺陷引起的聽力損害，父母一方或雙方可能存在相似的聽力損害，也可能是聽力正常的攜帶者。我國新生兒耳聾的發(fā)病率為1‰～3.47‰，其中遺傳性耳聾占50%～60%，每年約有30000名嬰兒患有先天性聽力損失[1-3]。2019年，國家衛(wèi)生健康委員會臨床檢驗(yàn)中心產(chǎn)前篩查與診斷實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評專家委員會和新生兒遺傳代謝病篩查實(shí)驗(yàn)室室間質(zhì)評專家委員會發(fā)表《遺傳性耳聾基因變異篩查技術(shù)專家共識》對耳聾基因篩查實(shí)驗(yàn)室規(guī)范及管理給出明確指導(dǎo)[4]。2021年，中國耳聾基因篩查與診斷臨床多中心研究協(xié)作組及全國防聾治聾技術(shù)指導(dǎo)組發(fā)表《遺傳性耳聾基因篩查規(guī)范》，對耳聾基因篩查臨床實(shí)施、結(jié)果解讀、遺傳咨詢等方面給出臨床工作指南，以引導(dǎo)耳聾基因篩查工作規(guī)范化和有序進(jìn)行[5]。耳聾基因篩查區(qū)別于基因診斷，其基于中國人群遺傳性耳聾相關(guān)基因突變攜帶率高的客觀情況，通過對特定人群進(jìn)行耳聾基因篩查，有利于更早地發(fā)現(xiàn)遺傳性耳聾患者、相關(guān)環(huán)境因素致聾易感者及潛在的耳聾生育高危群體，從而達(dá)到遺傳性耳聾早發(fā)現(xiàn)、早診斷、早干預(yù)及早預(yù)警的目的[6-10]。

1 資料與方法

1.1 研究對象選擇2019 年4月至2021 年12月在中國科學(xué)院大學(xué)深圳醫(yī)院(東院區(qū)、西院區(qū))、深圳市寶田醫(yī)院，中山大學(xué)附屬第七醫(yī)院出生的24564 例新生兒，其中2019年7259例，2020年8940例，2021年8365例。在監(jiān)護(hù)人知情同意下、自愿參與調(diào)查，仔細(xì)閱讀并簽署新生兒耳聾基因篩查知情同意書。

1.2 標(biāo)本采集新生兒出生48～72小時(shí)后，經(jīng)8次母乳喂養(yǎng)，取足跟末梢血3個(gè)血斑，每個(gè)血斑直徑在8mm以上，自然晾干后置于密封袋內(nèi)，于2℃～ 8℃冰箱中密閉保存。

1.3 方法采用飛行時(shí)間質(zhì)譜法(MALDI-TOF-MS)，由深圳愛灣醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)實(shí)驗(yàn)室完成樣本檢測。檢測基因及位點(diǎn)信息見表1所示。

表1 檢測位點(diǎn)信息

1.4 統(tǒng)計(jì)采用R包對檢測結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。

2 結(jié) 果

2.1 新生兒遺傳性耳聾基因突變攜帶率24564例新生兒檢測4個(gè)致病基因共發(fā)現(xiàn)異常樣本947例(男性517例，女性430例)，攜帶率為3.86%。4個(gè)基因的攜帶率分別為GJB2 基因482例，檢出率1.965%，GJB3基因62例，檢出率0.252%，SLC26A4 基因340例，檢出率1.386%，線粒體12Sr RNA 63例，檢出率0.256%。其中GJB2 與 SLC26A4突變頻率明顯高于其他2個(gè)基因。不同年份4個(gè)基因檢測出的異常樣本分布情況如圖1所示。

圖1 篩查群體分布及攜帶者基因分布。圖2 20個(gè)位點(diǎn)頻率排序。

2.2 新生兒遺傳性耳聾基因突變位點(diǎn)分布情況24564例新生兒在19個(gè)位點(diǎn)上檢出異常樣本947例，167delT位點(diǎn)暫未發(fā)現(xiàn)攜帶者。攜帶率從高到低GJB2 基因上分別為235delC為42%，299_300delAT為6%，176_191del16為2%；SLC26A4基因中IVS7-2A>G 為21%，2168A>G為4.5%，1229C>T為3.9%; 線粒體12SrRNA上1555A>G為5.8%；GJB3基因中547G>A 為3.9%，538C>T為2.5%。19個(gè)位點(diǎn)突變類型中雜合突變，占比為94.1%，線粒體均質(zhì)突變占比5.8%，見表2。復(fù)合基因位點(diǎn)突變7例，占比0.73%。其中1例樣本在3個(gè)基因上出現(xiàn)致病突變，見表3。

表2 4基因20位點(diǎn)突變數(shù)據(jù)

表3 復(fù)合突變

3 討 論

本研究對2019～2021深圳光明區(qū)24564例新生兒耳聾基因篩查數(shù)據(jù)進(jìn)行回顧性分析，統(tǒng)計(jì)總體突變攜帶率為3.86%， 高于光明區(qū)2017年5月～2018年 11月篩查的總陽性率3.53%。在單個(gè)基因水平，2017年～2018年GJB2 基因和SLC26A4基因的突變率最高，分別為1.96%和1.21%。近3年的數(shù)據(jù)則顯示GJB2基因?yàn)?.965%， SLC26A4為1.386%，這種差別主要源自早期篩查位點(diǎn)數(shù)量較少(4個(gè)基因9個(gè)位點(diǎn)或15個(gè)位點(diǎn))，存在位點(diǎn)未檢出情況[11-13]。截至2022年6月8日，已知耳聾基因至少124個(gè)(https//hereditaryhearingloss.org)，因此受檢者“通過”篩查，并不代表受檢者沒有攜帶耳聾相關(guān)基因致病變異，因?yàn)楹Y查的范圍僅限于部分基因的熱點(diǎn)致病變異，隨著基因科學(xué)的進(jìn)步及人們對遺傳性耳聾認(rèn)識的加深，基因篩查位點(diǎn)將會進(jìn)一步增加，從而進(jìn)一步提升篩查效率，而遺傳咨詢也將日臻完善。

GJB2基因突變在雙耳先天性重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾中較為常見，聽力損害的程度與基因突變的類型及位點(diǎn)相關(guān)。本次篩查群體中235delc突變頻率為1.61%，與2017年～2018年篩查數(shù)據(jù)(1.63%)相比有所降低。SLC26A4基因突變引起的表型較廣泛，常見于大前庭水管綜合征(EVAS)患者中，以雙耳先天性重度、極重度感音神經(jīng)性耳聾為主要表現(xiàn)，也可表現(xiàn)為遲發(fā)性NSHL，聽力正常的嬰兒出生時(shí)往往因頭部受到碰撞或感冒，出現(xiàn)顯著的聽力下降及Pendred綜合征(前庭水管擴(kuò)大或伴內(nèi)耳畸形，感音神經(jīng)性耳聾和甲狀腺腫)。SLC26A4 基因突變最常見的類型為IVS7-2A>G，本次篩查中IVS7-2A>G突變頻率為0.82%，相比2017年～2018年篩查數(shù)據(jù)(0.91%)有所下降。原因可能是基因突變確定病因后會行早期干預(yù)、積極康復(fù)，受檢者父母再生育前可行胚胎植入前診斷(preimplantation genetic diagnosis，PGD)或產(chǎn)前診斷。受檢者配偶及直系親屬婚育前應(yīng)進(jìn)行相相關(guān)基因的篩查，此類篩查結(jié)果提示受檢者的人工聽覺植入干預(yù)預(yù)后良好。需要注意的是，GJB2基因c.109G>A是當(dāng)前公認(rèn)的致病性突變，但其臨床表型的變異程度較高、外顯率也不明確[14-15]，因此，臨床上不建議對該位點(diǎn)進(jìn)行產(chǎn)前診斷。對于GJB2或SLC26A4基因的單等位基因致病變異，應(yīng)結(jié)合聽力篩查結(jié)果綜合判斷，若為攜帶者或相關(guān)遺傳性耳聾患者，應(yīng)進(jìn)一步行耳聾基因診斷，必要時(shí)行顳骨影像學(xué)檢查及遺傳咨詢；對于聽力篩查通過者，仍建議在3個(gè)月齡后完成診斷性聽力檢查，并進(jìn)行密切隨診；受檢者配偶及直系親屬婚育前應(yīng)進(jìn)行相應(yīng)基因的篩查[4]。從2017年篩查至今，光明區(qū)累計(jì)陽性比例合計(jì)1522例，其中12例存在兩個(gè)突變，1例存在三個(gè)突變，總計(jì)1個(gè)聾孩子及早植入人工耳蝸，113個(gè)家庭藥物性耳聾易感家庭預(yù)防，535個(gè)遲發(fā)型(巴掌或重?fù)?耳聾易感孩子預(yù)防，796個(gè)較高遺傳耳聾風(fēng)險(xiǎn)的孩子開展遺傳咨詢。

造成聽力障礙的因素較為復(fù)雜，有遺傳因素、環(huán)境因素或者兩者共同作用，主要為遺傳因素，約占50%～60%，并且遺傳性耳聾可以表現(xiàn)為遲發(fā)性聽力障礙，因此聽力篩查作為傳統(tǒng)的新生兒聽力檢測方法具有一定的缺陷，而基因檢測可以在基因水平上輔助新生兒耳聾的診斷。新生兒耳聾基因篩查有助于早期發(fā)現(xiàn)耳聾疾病,并且可以在孕前、孕期、新生兒等不同時(shí)期對遲發(fā)性耳聾進(jìn)行干預(yù)，最終達(dá)到早治療的目的，從而有效降低聾啞發(fā)病率，并且后期耳聾基因報(bào)告可以對耳聾兒的婚育有一定的指導(dǎo)作用[16-17]，起到前瞻性預(yù)防耳聾的作用，減少新生兒出生缺陷。因此，耳聾基因檢測是發(fā)現(xiàn)聽力漏檢聾兒、先天性聾兒和藥物性聾兒的重要手段。