舌下免疫治療變應(yīng)性鼻炎療效預(yù)測生物標(biāo)志物研究進(jìn)展①

鄒 琪 申 琪 郭向東 （河南中醫(yī)藥大學(xué)，鄭州 450000）

變應(yīng)性鼻炎（allergic rhinitis，AR）是發(fā)生在鼻黏膜的由IgE 介導(dǎo)的Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)，是最常見的過敏性疾病之一，近年來，我國AR 患病率不斷升高，成人自報的標(biāo)準(zhǔn)化患病率從2005 年的11.1%上升至2011 年的17.6%［1-2］。AR 不僅嚴(yán)重影響了患者的學(xué)習(xí)、工作效率和生活質(zhì)量，而且是哮喘的危險因素［3-4］。如何有效治療AR，已經(jīng)成為當(dāng)前研究熱點。目前AR 的治療主要包括避免接觸變應(yīng)原、藥物治療和變應(yīng)原特異性免疫治療（allergen specific immunotherapy，AIT）。根據(jù)給藥途徑不同，AIT 分為皮下免疫治療（subcutaneous immunotherapy，SCIT）和舌下免疫治療（sublingual immunotherapy， SLIT）。AIT能有效改善患者的鼻部癥狀，同時被國際公認(rèn)為唯一可能改變疾病自然進(jìn)程的治療措施，可以預(yù)防哮喘的發(fā)生［5-6］。相比于SCIT，舌下給藥途徑更便捷，同時研究表明其不良反應(yīng)事件的發(fā)生率更低，對于AR 的患者尤其是兒童，安全性更高［7-8］。AIT推薦療程為3年，而過長的周期會導(dǎo)致患者依從性降低、經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)加重［9］。因此在治療前進(jìn)行療效預(yù)測、治療中進(jìn)行療效評估十分重要，但是至今尚無公認(rèn)的客觀生物標(biāo)志物。近幾年AIT療效相關(guān)的生物標(biāo)志物的研究眾多，對于個性化醫(yī)療具有重要意義。本文主要對近10 年關(guān)于SLIT 療效預(yù)測的候選生物標(biāo)志物的研究加以總結(jié)和論述。

1 免疫治療前

1.1 血清變應(yīng)原特異性IgE 血清變應(yīng)原特異性IgE（antigen-specific IgE，sIgE）不僅與AR 的發(fā)生機(jī)制密切相關(guān)，對于治療前預(yù)測免疫治療的療效也具有重要意義。sIgE 在AR 的診斷中具有重要作用，是啟動AIT 的納入標(biāo)準(zhǔn)之一［10-12］。研究表明：血清sIgE 數(shù)值與SLIT的有效應(yīng)答有關(guān)，對SLIT有積極反應(yīng)的患者血清sIgE 水平顯著高于對SLIT 無反應(yīng)的患者［13-14］。CIPRANDI 等［15］通過3 年的真實世界研究，對塵螨或草花粉過敏的75 例成人AR 患者進(jìn)行舌下滴劑治療，根據(jù)視覺模擬量表（visual analogue scale，VAS），與基線（開始SLIT 前）相比，將評分下降至少30%的患者定義為應(yīng)答患者，結(jié)果顯示：應(yīng)答組的血清sIgE 水平顯著高于無應(yīng)答組，ROC 曲線分析認(rèn)為：sIgE 濃度大于14.3 kUA/L 是區(qū)分應(yīng)答者和非應(yīng)答者的最佳閾值；其另一項3 年的回顧性研究［13］，SLIT 治療對象為對草花粉或塵螨等過敏的174例AR 患者，以同樣標(biāo)準(zhǔn)，定義145例（83.3%）為應(yīng)答患者，經(jīng)ROC 分析，治療前患者血清sIgE 水平高于9.5 kUA/L作為可能預(yù)測屋塵螨過敏AR患者有效SLIT 的范圍。另一項兒科研究進(jìn)一步證明了這一觀點，除1例報告了嚴(yán)重反復(fù)呼吸道感染的兒童，sIgE 水平高于10 kUA/L 的兒童免疫治療后，都表現(xiàn)為過敏癥狀的改善和藥物使用的減少［16］。不足的是，上述兩項研究缺乏足夠的對照，需要對更大隊列進(jìn)行嚴(yán)格的前瞻性試驗來驗證血清sIgE 的預(yù)測作用。最新一項研究發(fā)現(xiàn)，對屋塵螨或粉塵螨過敏的SLIT 效果滿意患者血清sIgE 基線值均顯著高于治療效果不滿意的患者［17］。另一方面，sIgE水平可能與鼻部過敏性疾病的嚴(yán)重性相關(guān)，癥狀較重的患者的血清sIgE 水平高于癥狀輕的患者，對AIT 的反應(yīng)優(yōu)于鼻部癥狀較輕的AR 患者［11，18-19］。故sIgE 可能有助于治療前預(yù)測療效，選擇適合免疫治療的患者。

1.2 sIgE/血清總IgE（total IgE，tIgE） 此外，血清sIgE/tIgE 可能也與療效預(yù)測相關(guān)，但相關(guān)研究頗具爭議。早期FUJIMURA 等［20］的實驗表明較低的比值可能是SLIT 有效性的預(yù)測指標(biāo)，OKAMOTO 等［21］通過一項多中心、隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照試驗發(fā)現(xiàn)：sIgE 與tIgE 的比值在有應(yīng)答者的SLIT 組和癥狀輕微的安慰劑組中都較低。但一項對AR 兒童SLIT的臨床試驗則提示血清sIgE、sIgE/tIgE 與臨床療效呈正相關(guān)，血清sIgE/tIgE 的ROC 曲線表明，超過12.6%時，對預(yù)測短期療效的敏感度和特異度分別為97.2%和74.1%［14］。另一項最新的相關(guān)研究中，KIM 等［17］同樣發(fā)現(xiàn)血清sIgE/tIgE 與SLIT 療效滿意度正相關(guān)。有趣的是，有研究顯示有效組和效果較差組的sIgE/tIgE 無顯著差異，該值無法預(yù)測SLIT 的療效［22］。不難發(fā)現(xiàn)，近些年對sIgE/tIgE 與SLIT 療效相關(guān)性的研究數(shù)量較少，明顯少于SCIT 的相關(guān)研究。未來需要進(jìn)行更多、更大隊列、更嚴(yán)格的隨機(jī)對照試驗來了解sIgE與tIgE的比值與有效應(yīng)答的相關(guān)性，以進(jìn)一步明確是否可以作為SLIT 療效預(yù)測指標(biāo)。

2 免疫治療期間

2.1 血清IgE 的抑制活性 血清IgE 抑制活性與SLIT 的臨床效應(yīng)正相關(guān)，作為阻斷免疫抗體的功能指標(biāo)，IgE 易化變應(yīng)原結(jié)合（IgE-facilitated allergen binding，IgE-Fab）的抑制活性和IgE 阻斷因子（IgEblocking factor，IgE-BF）活性升高對治療期間評價SLIT的療效具有參考意義。目前發(fā)現(xiàn)AIT可誘導(dǎo)血清中IgE 的相關(guān)抑制抗體或抑制因子活性增強(qiáng)，包括兩方面：阻止變應(yīng)原與IgE 結(jié)合、阻止IgE-變應(yīng)原復(fù)合物與B 細(xì)胞結(jié)合［23］。檢測方法有IgE-BF 試驗，IgE-Fab 試驗。RENAND 等［24］完成了一項針對花粉過敏患者為期3 年的隨機(jī)對照試驗，期間進(jìn)行多模式的免疫檢測，發(fā)現(xiàn)SLIT 的第2 年和第3 年的血清IgE 抑制活性提高，雖在第3 年抑制活性開始降低，但都高于治療前的水平，且治療期間對IgE-Fab 的抑制活性均顯著高于安慰劑組。一項SLIT 和SCIT對花粉過敏患者的免疫比較試驗的結(jié)果顯示：花粉片劑治療組在3個月后IgE阻斷因子活性逐漸升高，并顯著高于對照組，在治療結(jié)束時該數(shù)值達(dá)0.27［25］。DIDER 等［26］對SLIT 塵螨過敏患者的最佳維持劑量的研究發(fā)現(xiàn)，三種劑量的屋塵螨和粉塵螨片劑給藥后，IgE 阻斷因子都呈升高趨勢，但該試驗只監(jiān)測了治療6個月的血清IgE的抑制活性變化，且缺乏癥狀和藥物評分來確定有效反應(yīng)者，無法確定IgE 阻斷因子與療效的相關(guān)性，需要其他更長療程的SLIT 相關(guān)試驗來驗證IgE-BF 是否與治療后有效應(yīng)答相關(guān)。最新的一項雙盲、雙模擬、安慰劑對照試驗，比較SCIT和SLIT兩年以及停止治療一年后的鼻腔及血液的梯牧草花粉特異性抗體反應(yīng)［27］：與安慰劑組相比，SLIT 組的血清在第2 年和第3 年阻斷了過敏原-IgE復(fù)合物與B細(xì)胞表面的CD23結(jié)合。

2.2 IgG IgG 作為“封閉抗體”，不僅可以與IgE 競爭性結(jié)合變應(yīng)原，防止進(jìn)一步效應(yīng)細(xì)胞的激活和脫顆粒，而且可以抑制變應(yīng)原-IgE 復(fù)合物與B 細(xì)胞表面的FcεⅡ受體結(jié)合［28-30］。IgG 與SLIT 臨床效應(yīng)之間的關(guān)系仍是一個有爭議的問題。國外研究發(fā)現(xiàn)，與安慰劑組或?qū)φ战M相比，經(jīng)SLIT 治療后AR 患者血清變應(yīng)原特異性IgG4（antigen-specific IgG4，sIgG4）有顯著變化，且該水平上升［31-32］。另一項對單敏和多敏患者的治療結(jié)果顯示，治療后sIgG4 均較前顯著升高，不足的是該研究未設(shè)置對照組［33］。一項大型的隨機(jī)、雙盲、安慰劑對照試驗顯示［34］：粉塵螨sIgG4 水平在治療后12 周內(nèi)顯著升高，后期小幅度上升，而安慰劑組無明顯變化。另一項研究也有類似免疫學(xué)變化：過敏性鼻炎兒童免疫治療后，IgG1和IgG4較基線值且對比安慰劑組明顯提高，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義［35］。西班牙學(xué)者發(fā)現(xiàn)，經(jīng)舌下片劑治療的患者sIgG4 水平在前4 個月的升高與檢測到的血清sIgE、IgE-Fab 和IL-4 的下調(diào)以及患者的主觀臨床癥狀改善密切相關(guān)［36］。KIKUOKA 等［37］對聯(lián)合花粉癥的SLIT治療結(jié)果顯示：過敏原為cryj1的雪松花粉癥的治療組IgG4 顯著升高，與鼻部癥狀和藥物評分呈負(fù)相關(guān)。出現(xiàn)類似sIgG4 變化的還有國內(nèi)的幾項研究［38-39］。此外，不少研究則發(fā)現(xiàn)SLIT 療效與血清特異性IgG水平無相關(guān)性：POTTER等［40］的對照試驗中治療組特異性IgG無明顯變化，OKAMOTO等［21］和XIAN 等［41］發(fā)現(xiàn)sIgG4 水平與癥狀嚴(yán)重程度或治療效果無關(guān)。有研究則顯示治療組和對照組sIgG4 水平都顯著升高，且無數(shù)據(jù)顯示sIgG4 的升高與癥狀改善的相關(guān)性［42］。上述試驗結(jié)果各異的原因可能是，血清sIgG 值的變化是免疫水平變化，不能完全代表其阻斷抗體的作用，還應(yīng)關(guān)注抗體阻斷變應(yīng)原與效應(yīng)細(xì)胞表面sIgE 結(jié)合的競爭能力，如SHAMJI 等［43］研究發(fā)現(xiàn)：相比于sIgG，免疫治療后血清抑制活性的功能性測定可能比血清sIgG4 水平更能預(yù)測免疫治療的臨床反應(yīng)。因此，IgG 可能通過競爭性抑制IgE與變應(yīng)原結(jié)合，血清IgG水平升高可能與療效相關(guān)，能否作為療效評估的生物標(biāo)志物需要進(jìn)一步驗證。

2.3 免疫細(xì)胞

2.3.1 調(diào)節(jié)性T 細(xì)胞（regulatory T，Treg） Treg 及其細(xì)胞因子抑制Th2 型免疫反應(yīng)，有利于產(chǎn)生免疫耐受，Treg 細(xì)胞水平升高可能對療效評估具有積極作用［44-45］。Treg 細(xì)胞被分為兩個亞群，以高表達(dá)轉(zhuǎn)錄因子Foxp3 和表面分子CD25 為特點的天然型Tregs 細(xì) 胞（nature regulatory T，nTregs）和 誘 導(dǎo) 型Tregs細(xì)胞（inducible regulatory T，iTreg），亞型有Tr1、Th3，iTreg-35，產(chǎn)生抑制性細(xì)胞因子如IL-10、IL-35、TGF-β［46］。一項針對塵螨過敏患者的兩種免疫治療的比較研究發(fā)現(xiàn)，SLIT 組的CD4+CD25+Foxp3+Tregs細(xì)胞的變化與鼻炎總評分成反比（P=0.024）［41］。一項對草花粉SLIT治療前和治療2年期間收集的鼻液免疫學(xué)指標(biāo)的研究表明，AIT 的成功主要與鼻黏膜中IL-35 型iTreg 細(xì)胞反應(yīng)有關(guān)［47］。SWAMY 等［48］研究發(fā)現(xiàn)，SLIT 組的受試者Foxp3 位點CpG 甲基化減少，對應(yīng)的記憶Treg 細(xì)胞中Foxp3轉(zhuǎn)錄水平升高，而安慰劑組受試者中無此變化，提示Treg 細(xì)胞對SLIT 的長期耐受誘導(dǎo)起促進(jìn)作用。一些學(xué)者持相同觀點：認(rèn)為iTreg 細(xì)胞的亞型上調(diào)與SLIT 臨床療效相關(guān)，可以作為療效預(yù)測的潛在生物標(biāo)志物［20，49-51］。此外，一項為期4 年針對雪松花粉變應(yīng)原的SLIT實驗證明了Foxp3+Treg細(xì)胞對過敏原的長期耐受作用［52］。

2.3.2 嗜堿粒細(xì)胞 嗜堿性粒細(xì)胞反應(yīng)的量化可能是潛在生物標(biāo)志物，通過測定該活性可以評估AR 的免疫治療效果。嗜堿粒細(xì)胞表達(dá)FcεRI，它可以在過敏原暴露后被過敏原特異性IgE 交聯(lián)，導(dǎo)致脫顆粒并釋放組胺、白三烯和其他過敏性介質(zhì)，引起相應(yīng)的炎癥反應(yīng)。嗜堿粒細(xì)胞活性的常用測定包括：①在單細(xì)胞水平上測定全血嗜堿粒細(xì)胞內(nèi)熒光標(biāo)記的二胺氧化酶（diamine oxidase，DAO）以檢測組胺釋放［53］。②通過測定嗜堿粒細(xì)胞表面活性標(biāo)志物如CD63、CD203c、CD107a 以檢測嗜堿粒細(xì)胞活性［54］。一項臨床試驗通過觀察為期2年的舌下和皮下同步免疫治療和停藥后1 年的免疫學(xué)變化，結(jié)果顯示［24］：兩種療法都顯著抑制了草花粉變應(yīng)原誘導(dǎo)的嗜堿性細(xì)胞表面CD63 表達(dá)，且較安慰劑組有顯著差異，這一效應(yīng)在停藥1 年后的第3 年隨訪中持續(xù)存在。SHAMJI 等［55］不僅證明了兩種免疫治療的CD63 嗜堿粒細(xì)胞比例明顯低于對照組，同樣肯定了CD203c、CD107a 以及DAO 表達(dá)活性與免疫治療抑制作用的關(guān)系，且鼻結(jié)膜炎總癥狀評分與細(xì)胞內(nèi)標(biāo)記的DAO 和CD63 嗜堿性細(xì)胞比例顯著正相關(guān)。有趣的是，最近的一項對照試驗中嗜堿性細(xì)胞活性試驗（basophil activation test，BAT）顯示［37］：與對照組相比，SLIT 組的CD203c 活性被抑制，但無顯著差異。有學(xué)者認(rèn)為，外周血嗜堿性粒細(xì)胞的反應(yīng)不是早期臨床反應(yīng)的生物標(biāo)志物［56］。因此，結(jié)果出現(xiàn)差異的原因可能是BAT 需要較長的治療時間后才會出現(xiàn)顯著差異，血液中的嗜堿粒細(xì)胞活性不能等同于局部鼻黏膜的反應(yīng)。KIM 等［57］發(fā)現(xiàn)，對塵螨過敏的老年AR 經(jīng)SLIT 1 年后，嗜堿性粒細(xì)胞CD203c表達(dá)顯著降低，而對照組則無明顯變化。一些研究同樣顯示了嗜堿粒細(xì)胞活性降低與SLIT 療效的相關(guān)性［25，48，58］。

2.3.3 樹突狀細(xì)胞（dendritic cells，DCs） 區(qū)別于皮下AIT，SLIT 的舌下黏膜免疫機(jī)制和圍繞DCs 的靶向SLIT 是當(dāng)前的一大研究熱點。研究認(rèn)為，DCs參與SLIT 的過程為：捕獲過敏原并將其加工成抗原肽，提呈給T 細(xì)胞，同時CD4+T 細(xì)胞分化為Treg 細(xì)胞，通過IFN-γ、IL-10 和TGF-β 的變化調(diào)節(jié)細(xì)胞免疫［59］。一項橫斷面研究，研究者對塵螨過敏的AR患者分別進(jìn)行SLIT 和SCIT 治療，監(jiān)測到外周血DCs亞群中組蛋白甲基化轉(zhuǎn)移酶（EZH2）的表達(dá)與AIT的治療時間呈負(fù)相關(guān)，認(rèn)為該酶的表達(dá)可能與療效相關(guān)［60］。由于該研究未評估患者癥狀，兩者關(guān)系還有待考證。GUEGUEN 等［61］通過監(jiān)測花粉癥患者SLIT 治療前、2 個月后、4 個月后外周血單核細(xì)胞中多種DCs 的20 余種基因和蛋白質(zhì)的表達(dá)，同時計算平均鼻結(jié)膜炎總癥狀評分改善百分比，發(fā)現(xiàn)DCs 某些表達(dá)標(biāo)志物與SLIT 療效具有相關(guān)性，認(rèn)為根據(jù)DCs的相關(guān)標(biāo)志物的表達(dá)，最早可在AIT后2個月用于監(jiān)測療效。早期一項類似研究也認(rèn)為DCs的補(bǔ)體C1Q 和受體stabilin-1 可以在免疫治療早期預(yù)測療效［62］。目前AR 的SCIT 領(lǐng)域，已經(jīng)有不少DCs 的相關(guān)動物實驗研究及臨床研究，SLIT 的臨床試驗還較少，對于SLIT 中DCs 的作用機(jī)制，及DCs 與SLIT 療效的相關(guān)性研究還有待完善。

2.4 白細(xì)胞抗原Ⅱ類分子（leukocyte antigen class II，HLA-Ⅱ）相關(guān)基因 HLA-Ⅱ主要表達(dá)于B 淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、DCs，將抗原肽傳遞給T 細(xì)胞受體，啟動適應(yīng)性免疫過程。據(jù)報道，HLA-Ⅱ基因（HLADRB1、HLA-DQB1）多態(tài)性與過敏性疾病相關(guān)［63］。有 兩 項 研 究 發(fā) 現(xiàn)HLA-DRB1*08：03：02、HLADQB1*06：01：01 等位基因的多態(tài)性可能是我國塵螨過敏型AR 發(fā)病的風(fēng)險因素［64-65］。有學(xué)者通過檢測與人類HLA-DRB1 基因同源的AR 小鼠和健康小鼠基因H2-EB1 蛋白和H2-Eb1 mRNA 表達(dá)情況，以及兩組小鼠血清sIgE、IFN-γ、IL-4 水平，得出結(jié)論：AR 小鼠體內(nèi)出現(xiàn)Th1/Th2 細(xì)胞因子失衡，HLADRB1基因?qū)R 的Th1/Th2反應(yīng)失衡起重要調(diào)節(jié)作用［66］。一項針對塵螨過敏AR 患者的SLIT，證實了HLA-DRB1 和HLA-DQB1 基因多態(tài)性與AR 患者AIT 療效相關(guān)性［67］。因此，HLA-Ⅱ基因的多態(tài)性可能是AR患者對AIT差異應(yīng)答的重要機(jī)制，未來進(jìn)行更多HLA-Ⅱ基因表達(dá)與AIT 相關(guān)的前瞻性隨機(jī)對照研究十分必要。

2.5 細(xì)胞因子 不少研究發(fā)現(xiàn)，AR 患者舌下免疫治療前后多種血清細(xì)胞因子發(fā)生顯著變化，可能與免疫治療機(jī)制相關(guān)，如IL-35、TGF-β 的上調(diào)，IL-4、IL-17、IL-33 的下調(diào)。細(xì)胞因子在介導(dǎo)AR 疾病進(jìn)程中起著重要作用，Th2 細(xì)胞因子（IL-4、IL-5 和IL-13）促進(jìn)IgE 的產(chǎn)生以及肥大細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞的分化；IL-4、IL-5、IL-13 水平的降低，Treg 細(xì)胞產(chǎn)生的IL-10 和TGF-β 水平的升高，可抑制AR 的炎癥反應(yīng)［68-70］。IL-35 是IL-12 家族中新發(fā)現(xiàn)的成員，不同于其他促炎分子，主要由iTreg 細(xì)胞和Breg 細(xì)胞分泌，屬于抗炎和抑制性細(xì)胞因子，IL-35 和IL-35 型iTreg 細(xì)胞的作用是：抑制變應(yīng)原誘導(dǎo)的T 細(xì)胞增殖、Th2 細(xì)胞因子的產(chǎn)生和B 細(xì)胞分泌IgE，以及誘導(dǎo)IFN-γ和IL-10的產(chǎn)生［71-73］。早期的一項研究發(fā)現(xiàn)SLIT 可能是通過降低IL-17 和促進(jìn)IL-35 的表達(dá)水平起效［74］。SHAMJI 等［47］進(jìn)行的3 年草花粉舌下片劑治療AR 的臨床對照試驗發(fā)現(xiàn)：IL-35型iTreg 細(xì)胞產(chǎn)生的IL-35可以抑制過敏癥患者的Th2免疫反應(yīng)，抑制B 細(xì)胞產(chǎn)生sIgE，并且SLIT 組的IL-35 和IL-35型iTreg 細(xì)胞數(shù)值高于SAR 對照組及非特異性對照受試組，且與鼻結(jié)膜總癥狀評分呈負(fù)相關(guān)。此研究不同于其他小鼠模型研究，是在人體血清中發(fā)現(xiàn)IL-35 對多種Th2 細(xì)胞因子的抑制作用及抗炎作用，但此研究樣本量較小，需要在更大隊列中進(jìn)行驗證［75-76］。另一項對塵螨過敏AR 患兒進(jìn)行SLIT 治療結(jié)果顯示［14］：相較于治療無效患者，303 例癥狀改善的兒童IL-10、IL-35、TGF-β水平升高，與臨床療效相關(guān)，對預(yù)測短期療效有臨床意義。針對屋塵螨過敏原的單敏和多敏患者的免疫治療結(jié)果顯示，兩組治療后TGF-β 水平都明顯升高［77］。國內(nèi)學(xué)者通過實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRT-PCR）檢測免疫治療前后外周血單核細(xì)胞中TGF-β 和IL-13 mRNA 表達(dá)水平的變化，結(jié)果顯示癥狀改善的患兒TGF-β mRNA 表達(dá)水平升高，IL-13 mRNA 表達(dá)水平下降，提示該指標(biāo)可用于療效預(yù)測［33］。SUáREZ 等［36］通過分析患者外周血樣對免疫治療的體液和細(xì)胞免疫反應(yīng)，認(rèn)為除阻斷抗體水平，IL-4 水平的降低也可作為有效免疫應(yīng)答的指標(biāo)。LI 等［78］研究發(fā)現(xiàn)患者血清IL-17 在3 年SLIT 后顯著降低，且與癥狀用藥積分顯著正相關(guān)。一項針對屋塵螨過敏原的兒童SLIT 研究，發(fā)現(xiàn)IL-33 表達(dá)抑制與Th2 應(yīng)答減弱及Th1 應(yīng)答增強(qiáng)相關(guān)，并經(jīng)體外實驗證實其對Th2 細(xì)胞因子的直接作用［79］。此外，有研究也發(fā)現(xiàn)了實施免疫治療后細(xì)胞因子的變化，如IL-10、TGF-β 水平升高，IL-4、IL-13水平下降，但都缺乏與臨床癥狀改善的關(guān)系驗證［80］。

綜上所述，近些年關(guān)于AR SLIT 療效預(yù)測生物標(biāo)志物的研究中，不少免疫細(xì)胞、細(xì)胞因子、免疫球蛋白都被發(fā)現(xiàn)與AIT的耐受機(jī)制相關(guān)，如Treg細(xì)胞，調(diào)節(jié)性B 細(xì)胞，IL-35、TGF-β、IgG4、IgA 等。本文主要綜述了研究數(shù)量較多，且檢測方法簡便可行的候選生物標(biāo)志物。從近些年的研究中不難發(fā)現(xiàn)，大多數(shù)研究都是單一檢測某一種或某一類免疫指標(biāo)的變化，而很少橫向?qū)Ρ妊逯忻庖呒?xì)胞、特異性抗體、細(xì)胞因子的變化，不能很好地篩選出與療效最相關(guān)的生物標(biāo)志物。此外，不少研究只是簡單檢測了指標(biāo)的數(shù)值變化，卻沒有驗證其是否與患者癥狀改善具有相關(guān)性。有的研究的局限性則體現(xiàn)在研究的樣本量少、療程短。未來需要更多的大隊列、多中心、長期的隨機(jī)對照安慰劑試驗來驗證這些生物標(biāo)志物的有效性。越來越多的研究從分子表達(dá)水平探索，例如利用實時定量聚合酶鏈反應(yīng)（qRTPCR）檢測了SLIT 后AR 患兒外周血單核細(xì)胞中TGF-β 和IL-13的mRNA 表達(dá)，評估其是否為療效評估指標(biāo)。有試驗研究嗜堿性粒細(xì)胞DPF2 基因的遺傳變異及mRNA 水平評估SLIT 的有效性。不少研究則利用組學(xué)技術(shù)了解SLIT 引起的系統(tǒng)效應(yīng)，這對于AIT 療效預(yù)測研究具有重要意義：明確的AIT 機(jī)制有利于指導(dǎo)不同時期的免疫指標(biāo)的療效相關(guān)性研究。