鋁納米粉末活化樹突狀細(xì)胞的作用

朱 歌， 李知涵， 劉 堃， 孫天盟

（1. 吉林大學(xué)第一醫(yī)院, 長(zhǎng)春 130000；2. 吉林大學(xué)化學(xué)學(xué)院, 超分子結(jié)構(gòu)與材料國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室, 長(zhǎng)春 130012）

疫苗作為一種主動(dòng)免疫制劑， 是人類公共衛(wèi)生事業(yè)的重要組成部分， 已經(jīng)成為應(yīng)對(duì)全球公共衛(wèi)生問題的主要手段. 隨著疫苗的廣泛應(yīng)用， 天花、 小兒麻痹及麻疹等多種疾病的發(fā)病率顯著降低， 甚至被根除［1］. 癌癥是以自身細(xì)胞基因突變、 異常分化無限增殖、 逃避機(jī)體免疫監(jiān)視、 高浸潤(rùn)性和轉(zhuǎn)移性為特征的一類疾病. 通常情況下， 腫瘤抗原的免疫原性差， 難以有效激活機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)腫瘤細(xì)胞進(jìn)行識(shí)別和清除. 此外， 腫瘤的異質(zhì)性和免疫微環(huán)境的特殊性使腫瘤疫苗的有效性受到極大的限制［2～4］. 佐劑是一類非特異性免疫增強(qiáng)劑， 是疫苗的重要組成部分， 能夠誘導(dǎo)機(jī)體對(duì)低免疫原性抗原產(chǎn)生免疫應(yīng)答， 從而解決抗原自身免疫原性差難以誘導(dǎo)免疫反應(yīng)的問題［5］. 腫瘤相關(guān)抗原被體內(nèi)抗原提呈細(xì)胞（APCs）識(shí)別、 加工處理后， 通過APCs表面主要組織相容性復(fù)合體（MHC-Ⅰ/Ⅱ）-抗原復(fù)合物的形式， 將抗原信息提呈給T/B淋巴細(xì)胞， 啟動(dòng)適應(yīng)性免疫反應(yīng). 研究表明， 預(yù)防腫瘤發(fā)生需要體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng)共同作用， 其中抗體介導(dǎo)的體液免疫發(fā)揮主要作用， 而控制腫瘤的生長(zhǎng)則更依賴于細(xì)胞毒性T細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答. 因此， 腫瘤疫苗對(duì)疫苗佐劑的性能提出了更高要求， 在增強(qiáng)機(jī)體免疫反應(yīng)強(qiáng)度的同時(shí)， 要根據(jù)不同需求對(duì)機(jī)體免疫應(yīng)答類型進(jìn)行調(diào)控， 從而實(shí)現(xiàn)腫瘤精準(zhǔn)預(yù)防和治療［6～8］.

從1926年明礬作為佐劑投入使用開始， 鋁鹽佐劑（主要包括磷酸鋁和氫氧化鋁）， 已成為目前應(yīng)用最為廣泛的疫苗佐劑， 用于預(yù)防多種疾病的發(fā)生［9］， 包括為應(yīng)對(duì)近年來全球新型冠狀病毒疫情而開發(fā)的多種疫苗也是以鋁鹽佐劑為主［10～13］. 在接近一個(gè)世紀(jì)的研究和臨床應(yīng)用中， 鋁鹽佐劑的安全性已經(jīng)得到廣泛認(rèn)可， 也是首個(gè)被美國(guó)食品和藥品管理局（FDA）批準(zhǔn)用于人體的金屬佐劑［14～16］.

盡管歷史悠久、 應(yīng)用廣泛， 但鋁鹽佐劑仍具有局限性. 鋁鹽佐劑是公認(rèn)的體液免疫反應(yīng)誘導(dǎo)劑［17］， 其誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞免疫應(yīng)答的效率非常低， 只適用于體液免疫反應(yīng)可治療疾病的疫苗開發(fā)［18］. 近年來， 納米技術(shù)的發(fā)展為開發(fā)適用于腫瘤疫苗的新型鋁佐劑提供了思路［19～22］.金屬鋁不同于金、 銀等傳統(tǒng)貴金屬元素， 具有易加工、 導(dǎo)熱性強(qiáng)、 熱膨脹系數(shù)小及介電性能好等特性［23］. 金屬鋁納米粉末的合成方法主要包括電爆炸法［24］、 電子束光刻法［25］、 熱分解法和催化分解法［26］. 熱分解法和催化分解法屬于化學(xué)合成法， 制得的金屬納米粒子具有形貌均一及分散性好等優(yōu)勢(shì)， 但因金屬鋁具有高還原電位很難被一般的還原劑還原， 同時(shí)缺少合適的表面配體， 化學(xué)合成法在鋁納米粉末制備工程中發(fā)展相對(duì)緩慢. 電爆炸法和電子束光刻法屬于物理合成法， 電子束光刻法是將高速的電子打在光刻膠表面， 改變光刻膠的化學(xué)性質(zhì)， 該方法制備的金屬鋁納米粉末粒度均勻、 純度高， 但對(duì)儀器要求高、 產(chǎn)量?。?5］. 電爆炸法是指當(dāng)強(qiáng)脈沖電流通過金屬導(dǎo)體絲時(shí)， 電阻的加熱作用迅速將電能轉(zhuǎn)化為熱能， 使導(dǎo)體絲物理狀態(tài)發(fā)生變化， 經(jīng)過固態(tài)加熱、 熔化汽化、 爆炸、 電弧擊穿及冷凝階段， 得到高純度納米粒子的方法， 具有產(chǎn)量高、 通用性強(qiáng)及污染小等優(yōu)點(diǎn)［24］， 但傳統(tǒng)電爆炸法沒有提供外加配體， 制備的金屬鋁納米粉末表面能很高， 通常表現(xiàn)為尺寸在微米級(jí)的聚集體形式， 如何實(shí)現(xiàn)分散聚集態(tài)粒子是目前面臨的主要挑戰(zhàn).

本文利用金屬絲電爆炸法制備形貌均一、 分散性良好的金屬鋁納米粉末（ALEX）， 建立了ALEX與抗原蛋白（OVA）和抗原多肽（Peptide）的復(fù)合方法， 驗(yàn)證了其增強(qiáng)抗原特異性免疫反應(yīng)的能力. 在小鼠黑色素瘤模型中可有效預(yù)防腫瘤的發(fā)生， 為腫瘤疫苗的開發(fā)提供了有效策略.

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 試劑與儀器

羧基端基聚苯乙烯， 分析純， 加拿大Polymer Source公司； 甲苯溶劑及N，N-二甲基甲酰胺（DMF），分析純， 上海安耐吉試劑公司； 鋁金屬絲， 直徑0.2 nm， 純度≥99%， 深圳鴻金泰公司； 磷酸鹽緩沖液（PBS）， 上海龍?zhí)锛夹g(shù)有限公司； 抗原卵清蛋白（OVA）， 美國(guó)Sigma Aldrich公司； 抗原多肽（Peptide），上海吉爾生化有限公司； 鋁凝膠佐劑［Al（OH）3］， 美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司； 粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM-CSF）， 美國(guó)Pepro Tech公司； 白介素-4（IL-4）， 美國(guó)Pepro Tech公司； RPMI1640培養(yǎng)基， 美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司； Anti-CD11c-APC/Cy7和H-2Kb-APC抗體， 美國(guó)Biolegend公司；OVA特異性IgG1及IgG2a抗體酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）檢測(cè)試劑盒， 美國(guó)Alpha Diagnostic Intl公司. 雌性SPF級(jí)別C57BL/6小鼠， 6～8周， 體重16～18 g， 北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司， 動(dòng)物許可證號(hào)SCXK（京）-2016-0016. B16F10-OVA黑色素瘤細(xì)胞系為本實(shí)驗(yàn)室細(xì)胞庫(kù)提供.

RPR-100型光化學(xué)反應(yīng)器， 美國(guó)Rayonet公司； Hitachi-800型透射電子顯微鏡（TEM）， 日本日立公司； Vertex 80V型傅里葉變換紅外光譜儀（FTIR）， 美國(guó)Bruker公司， 4000～400 cm-1； Nano-S90型動(dòng)態(tài)光散射儀（DLS）， 英國(guó)Malvern公司； PerkinElmer Lambda 950型紫外-可見（UV-Vis）分光光度計(jì)， 美國(guó)PerkinElmer公司； Eppendorf F-45-12-11型離心機(jī)， 德國(guó)Eppendorf公司. 多功能微孔板檢測(cè)儀， 瑞士TECAN公司； LSR Fortessa型流式細(xì)胞儀， 美國(guó)Becton Dickinson Biosciences公司.

1.2 實(shí)驗(yàn)過程

1.2.1 鋁納米粉末的合成 在氬氣環(huán)境中， 將鋁金屬絲固定在高壓電極之間（所用供電器儲(chǔ)存電容為96 μF， 電極的預(yù)放電電壓為4.0～4.4 kV）， 在100 kA的電流強(qiáng)度下， 鋁絲被加熱并發(fā)生徑向膨脹， 迅速汽化形成鋁蒸汽， 隨后冷凝形成ALEX， 在充滿氬氣的收集器中收集樣品. 后續(xù)反應(yīng)在氮?dú)猸h(huán)境及800 r/min攪拌條件下進(jìn)行， 將1 mg ALEX和5 mg羧基端基的聚苯乙烯（數(shù)均分子量為4700， 分散度1.09）分別加入含有2 mL甲苯的Slank瓶中， 在液氮條件下反復(fù)凍融3次， 在80 ℃下反應(yīng)24 h， 反應(yīng)溶液逐漸變成黑色均勻液體， 以10000 r/min的速度離心15 min后用等體積甲苯反復(fù)洗滌5次， 得到分散性良好的ALEX.

1.2.2 鋁納米粉末與抗原的復(fù)合物（ALEX-OVA）制備 超聲條件下將5 mL濃度為2 mg/mL的ALEX的DMF溶液和5 mL濃度為3 mg/mL的OVA/Peptide抗原的PBS溶液加入10 mL樣品瓶中， 超聲5 min后分裝至1.5 mL EP管中， 用封口膜密封后置于25 ℃水浴鍋中反應(yīng)12 h， 以10000 r/min的速度離心10 min收集產(chǎn)物， 在25 ℃下真空干燥12 h， 將得到的樣品在4 ℃條件下保存.

1.2.3 鋁納米粉末增強(qiáng)抗原提呈效果 無菌分離C57BL/6小鼠雙側(cè)股骨和脛骨， 使用無菌注射器反復(fù)沖洗骨髓腔， 所得細(xì)胞懸液以1650 r/min的速度離心5 min后， 加入紅細(xì)胞裂解液于冰上處理15 min，用含有20 ng/mL GM-CSF和10 ng/mL IL-4的RPMI1640完全培養(yǎng)基調(diào)整細(xì)胞濃度為5×105cell/mL， 24孔板鋪板（5×105cell/孔）， 置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中誘導(dǎo)分化骨髓來源的樹突狀細(xì)胞（BMDCs）， 分別于體外誘導(dǎo)第2天和第4天每孔除去500 μL培養(yǎng)基， 再加入500 μL含有20 ng/mL GM-CSF 和10 ng/mL IL-4的RPMI1640完全培養(yǎng)基， 體外誘導(dǎo)第6天向培養(yǎng)基中分別加入PBS， OVA溶液， Al（OH）3-OVA溶液或ALEX-OVA溶液， 各組OVA蛋白的終濃度為10 μg/mL， 置于細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h. 消化并以1650 r/min的速度離心5 min收集BMDCs， 用anti-CD11c-APC/Cy7和H-2Kb-APC抗體進(jìn)行標(biāo)記， 于4 ℃避光染色30 min， 并用PBS洗滌3次， 得到的BMDCs用流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測(cè).

1.2.4 鋁納米粉末提高特異性抗體水平測(cè)試 檢測(cè)前的第14和7天， 在C57BL/6小鼠右側(cè)腹股溝部位皮內(nèi)注射PBS， OVA溶液， Al（OH）3-OVA溶液或ALEX-OVA溶液. 利用下頜靜脈采血方式取小鼠外周血， 室溫下靜置4 h后， 以3000 r/min的速度離心15 min收集上層血清. 采用ELISA法檢測(cè)血清中OVA特異性IgG1及IgG2a抗體水平.

1.2.5 鋁納米粉末疫苗的腫瘤預(yù)防實(shí)驗(yàn) 檢測(cè)前的第14和7天， 在C57BL/6小鼠右側(cè)腹股溝部位皮內(nèi)注射PBS， OVA/Peptide溶液， Al（OH）3-OVA/Peptide溶液或ALEX-OVA/Peptide溶液， 建立小鼠黑色素瘤模型， 右側(cè)背部皮下接種B16F10-OVA細(xì)胞（5×105cell/只）. 監(jiān)測(cè)腫瘤大小及小鼠生存期， 腫瘤的體積按下式計(jì)算： 腫瘤體積（mm3）=1/2×腫瘤長(zhǎng)徑（mm）×腫瘤短徑（mm）×腫瘤短徑（mm）.

2 結(jié)果與討論

2.1 鋁納米粉末的合成

利用電爆炸法， 使鋁金屬絲經(jīng)過固態(tài)加熱、 汽化、 爆炸、 電弧擊穿及冷凝5個(gè)階段， 得到高純度、 聚合態(tài)的ALEX. 利用聚苯乙烯的羧基端基“刻蝕”粒子表面的部分氧化鋁， 實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、分散聚集態(tài)粒子的目的， 制備了分散性良好的ALEX［27］. 利用DLS和TEM對(duì)其尺寸和形貌進(jìn)行了表征. 由圖1可見， 制得的ALEX形貌為近球形的菱方八面體， 粒子間未發(fā)生聚集現(xiàn)象， 分散性良好. 根據(jù)檢測(cè)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，ALEX的尺寸為（139.7±42.8） nm， 表面電勢(shì)為（-34.0±1.1） mV.

Fig.1 TEM image of ALEX

2.2 鋁納米粉末與抗原的復(fù)合

在分散性良好的ALEX基礎(chǔ)上， 通過靜電物理吸附的方法將OVA和Peptide接枝于ALEX表面.FTIR檢測(cè)結(jié)果（圖2）顯示， 與OVA共孵育后的ALEX表面存在OVA蛋白的特征信號(hào)峰， 表明抗原蛋白OVA已吸附于ALEX表面， 應(yīng)用二辛可寧酸（BCA）法測(cè)得ALEX表面OVA蛋白的質(zhì)量比為7∶1， 即1 mg ALEX能夠結(jié)合0.143 mg OVA蛋白， 表明建立了穩(wěn)定的抗原與ALEX的復(fù)合方法.利用DLS對(duì)ALEX-OVA的尺寸形貌進(jìn)行了表征，ALEX-OVA的尺寸為（297.4±37.8） nm， 表面電勢(shì)為（-36.5±2.3） mV， 其尺寸較未結(jié)合抗原蛋白的ALEX有所增加， 進(jìn)一步證明ALEX表面已吸附上OVA， 且依然保持良好的分散性.

Fig.2 Infrared spectra of ALEX-OVA

2.3 鋁納米粉末增強(qiáng)抗原提呈效果

樹突狀細(xì)胞（DCs）是目前所知功能最強(qiáng)大的抗原提呈細(xì)胞（APCs）， 在各種疾病的預(yù)防和治療過程中發(fā)揮著重要作用， 其通過對(duì)抗原的識(shí)別、 加工處理及提呈等， 成為連接抗原信號(hào)和機(jī)體免疫反應(yīng)的“橋梁”， 是激活機(jī)體免疫反應(yīng)的重要環(huán)節(jié)之一［28～31］.

為了明確ALEX能否誘導(dǎo)抗原特異性免疫反應(yīng)， 對(duì)與ALEX-OVA共孵育后的BMDCs表面抗原特異性MHC-Ⅰ類分子復(fù)合物的表達(dá)水平進(jìn)行了檢測(cè). 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果［圖3（A）和（B）］顯示， 與OVA蛋白組相比， ALEX-OVA顯著提高了BMDCs表面抗原特異性MHC-Ⅰ類分子復(fù)合物的表達(dá)水平. 在相同Al和OVA劑量的條件下， Al（OH）3-OVA僅在一定范圍內(nèi)促進(jìn)BMDCs表面抗原特異性MHC-Ⅰ類分子復(fù)合物的表達(dá)， 其作用顯著低于ALEX-OVA. 這一結(jié)果表明， ALEX-OVA具有顯著增強(qiáng)DCs抗原提呈的作用.

Fig.3 Representative flow cytometry results(A) and quantitative evaluation(B) of antigen-MHC-I presentation of BMDCs co-cultured with PBS, OVA, Al(OH)3-OVA and ALEX-OVA in vitro

2.4 鋁納米粉末提高特異性抗體水平

疫苗接種后能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原特異性抗體是評(píng)價(jià)疫苗有效性的重要指標(biāo)之一， 體內(nèi)B細(xì)胞接收到APCs所提呈的抗原信息后， 開始增殖分化， 形成漿細(xì)胞或記憶B細(xì)胞， 漿細(xì)胞產(chǎn)生的抗體具有中和、 清除病原微生物及其致病毒素的作用［32，33］. 免疫球蛋白（IgG）是血清中抗體的主要成分， 是機(jī)體免疫系統(tǒng)的重要組成部分. IgG1是含量最多的一種IgG亞型， 在機(jī)體免疫治療中具有重要意義， 主要介導(dǎo)2型輔助性T細(xì)胞（Th2）型體液免疫應(yīng)答， 但無補(bǔ)體激活功能. IgG2a主要介導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答， 同時(shí)可通過經(jīng)典途徑活化補(bǔ)體， 發(fā)揮免疫應(yīng)答功能. 對(duì)疫苗免疫后血清抗原特異性IgG水平進(jìn)行檢測(cè)是衡量特異性免疫反應(yīng)最常用的方法［34，35］.

為了驗(yàn)證ALEX提高體內(nèi)抗原特異性抗體水平的效果， 應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法對(duì)皮內(nèi)注射免疫后的小鼠血清進(jìn)行了抗原特異性IgG1及IgG2a抗體水平的定量檢測(cè). 由圖4（A）和（B）可見， 與PBS和OVA蛋白對(duì)照組相比， 傳統(tǒng)Al（OH）3佐劑能夠提高小鼠血清中抗原特異性IgG1及IgG2a抗體的水平. 在相同劑量Al和OVA條件下， ALEX-OVA免疫后小鼠血清中OVA特異性IgG1及IgG2a抗體水平進(jìn)一步顯著提高， 證明ALEX可以誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答， 且優(yōu)于傳統(tǒng)Al（OH）3佐劑， 為ALEX增強(qiáng)抗原特異性免疫反應(yīng)提供了理論支撐.

Fig.4 Levels of antigen-specific IgG1(A) and IgG2a(B) antibodies enhanced by ALEX in vivo

2.5 鋁納米粉末疫苗有效預(yù)防黑色素瘤

在驗(yàn)證了ALEX能夠增強(qiáng)抗原特性免疫反應(yīng)的基礎(chǔ)上， 應(yīng)用小鼠黑色素瘤模型對(duì)含ALEX的疫苗的腫瘤預(yù)防作用進(jìn)行了驗(yàn)證. 圖5（A）結(jié)果顯示， 與PBS組相比， 用OVA蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行處理， 對(duì)黑色素瘤腫瘤生長(zhǎng)具有較輕的抑制作用， 但所有接種腫瘤細(xì)胞的小鼠均能成瘤， 說明單純的OVA蛋白抗原無法刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠強(qiáng)度的特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)， 不能有效預(yù)防腫瘤的發(fā)生. 在傳統(tǒng)Al（OH）3佐劑存在的條件下， 聯(lián)合OVA蛋白共同應(yīng)用， 與抗原蛋白單獨(dú)處理相比， 顯示出抑制腫瘤細(xì)胞在小鼠體內(nèi)成瘤的效果， 且延緩腫瘤生長(zhǎng)的作用也有所提高， 但并不能完全預(yù)防腫瘤的發(fā)生， 證明傳統(tǒng)Al（OH）3佐劑在誘發(fā)機(jī)體特異性抗腫瘤免疫應(yīng)答方面仍有欠缺， 并不能刺激機(jī)體產(chǎn)生足夠有效的抗腫瘤免疫反應(yīng). 應(yīng)用合成的ALEX與OVA蛋白復(fù)合物對(duì)小鼠進(jìn)行處理， 所有進(jìn)行腫瘤細(xì)胞接種的小鼠均未形成腫瘤， 說明ALEX具有顯著增強(qiáng)體內(nèi)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)的效果， 完全預(yù)防了小鼠黑色素瘤的形成， 發(fā)揮了強(qiáng)大的腫瘤預(yù)防作用.

Fig.5 Tumor growth curves of tumor-bearing mice prevented by PBS, OVA, Al(OH)3-OVA and ALEX-OVA(A) and PBS, Peptide, Al(OH)3-Peptide and ALEX-Peptide(B)

圖5（B）結(jié)果顯示， 當(dāng)抗原為多肽（Peptide）時(shí)， 應(yīng)用單純的Peptide處理小鼠， 同樣無法有效預(yù)防腫瘤的發(fā)生. 聯(lián)合傳統(tǒng)Al（OH）3佐劑對(duì)小鼠進(jìn)行處理后， 并不能提高對(duì)黑色素瘤的預(yù)防和抑制作用. 多肽抗原聯(lián)合ALEX共同應(yīng)用可顯著抑制小鼠黑色素瘤的生長(zhǎng). 綜上可見， 合成的ALEX可以增強(qiáng)體內(nèi)特異性抗腫瘤免疫反應(yīng)， 有效預(yù)防和控制腫瘤的發(fā)生和發(fā)展， 在Al劑量和負(fù)載抗原相同的條件下， 克服了傳統(tǒng)Al（OH）3凝膠佐劑難以誘導(dǎo)抗腫瘤免疫應(yīng)答的缺點(diǎn)， 有望為腫瘤疫苗開發(fā)提供策略.

3 結(jié) 論

應(yīng)用金屬絲電爆炸法合成了ALEX， 在此基礎(chǔ)上應(yīng)用羧基端基聚合物配體與ALEX表面反應(yīng)， 達(dá)到穩(wěn)定、 分散ALEX的目的， 克服了傳統(tǒng)電爆炸法制備鋁納米粉末聚集的缺陷， 得到分散性良好的ALEX. 然后， 利用靜電物理吸附的方法將抗原蛋白（OVA）和抗原多肽（Peptide）結(jié)合于ALEX表面， 通過FTIR檢測(cè)確定了這種抗原結(jié)合方法的可行性， 建立了穩(wěn)定的抗原與ALEX的復(fù)合方法. 為驗(yàn)證ALEX增強(qiáng)特異性免疫反應(yīng)的效果， 分別進(jìn)行了體外及體內(nèi)實(shí)驗(yàn). 體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明， ALEX-OVA復(fù)合物可提高BMDCs表面MHC-Ⅰ類分子-抗原復(fù)合物的表達(dá)水平， 增強(qiáng)其抗原提呈效果； 體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明， ALEX-OVA復(fù)合物可顯著增加小鼠體內(nèi)抗原特異性抗體的水平. 上述結(jié)果均為ALEX增強(qiáng)機(jī)體特異性免疫反應(yīng)提供了理論基礎(chǔ). 最后， 應(yīng)用小鼠黑色素瘤模型， 進(jìn)一步證實(shí)了ALEX-抗原復(fù)合物良好的腫瘤預(yù)防抑制效果. 因此， 合成的ALEX是有望為腫瘤等多種疾病疫苗的開發(fā)提供策略.