斯氏線蟲對(duì)枸杞紅癭蚊幼蟲侵染能力及存活能力研究

劉曉麗，李 鋒

(寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所，寧夏銀川 750002)

枸杞產(chǎn)業(yè)是最具寧夏特色的傳統(tǒng)優(yōu)勢(shì)產(chǎn)業(yè)，被列為寧夏回族自治區(qū)“六特”產(chǎn)業(yè)之一。其枸杞子藥食歷史悠久，是馳名中外的名貴中藥材，早在《神農(nóng)本草經(jīng)》中就被列為上品，稱其為“久服輕身不老、耐寒暑”；有延衰抗老的功效。枸杞子中含有多種氨基酸，并含有甜菜堿、玉蜀黍黃素、酸漿果紅素等特殊營(yíng)養(yǎng)成分，使其具有非常好的保健功效。近年來，在天氣狀況、種植模式及田間管理等因素的影響下，枸杞蛀果類害蟲發(fā)生逐年加重，對(duì)枸杞產(chǎn)量和品質(zhì)構(gòu)成了較大的威脅。

枸杞紅癭蚊[Jaapiellasp.(Diptera：Cecidomyiidae)]是寧夏枸杞[LyciumbarbarumL.(Solanales：Solanaceae)]生產(chǎn)中主要的成災(zāi)性害蟲之一[1]，以幼蟲寄生為害枸杞幼嫩花蕾為主，花蕾被害率即為產(chǎn)量損失率，被稱為“枸杞的癌癥”[2]。其幼蟲發(fā)育、化蛹需要在枸杞花蕾與土壤2個(gè)隱蔽場(chǎng)所進(jìn)行，大部分發(fā)育期蟲體藏匿不外露，只有幼蟲脫落入土?xí)r、成蟲羽化時(shí)和成蟲期蟲體短暫暴露，給枸杞紅癭蚊的防控帶來了極大困難。

昆蟲病原線蟲(entomopathogenic nematode，簡(jiǎn)稱 EPN)是昆蟲的一種?；纳蕴鞌常ㄋ故暇€蟲科(Steioertidae)和異小桿線蟲科(Heterorhabditidae)等種類，具有殺蟲力強(qiáng)、殺蟲譜廣、生態(tài)安全等優(yōu)點(diǎn)，是一種重要的生物防治資源[3]。目前，國(guó)內(nèi)外對(duì)應(yīng)用EPN代替化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行害蟲防治的研究已有報(bào)道[4-6]，尤其在鞘翅目、鱗翅目害蟲上應(yīng)用較廣泛，且取得了較好的防控效果，但未見有利用昆蟲病原線蟲防治枸杞紅癭蚊的報(bào)道。筆者在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)測(cè)定了斯氏線蟲對(duì)枸杞紅癭蚊幼蟲的侵染力、以枸杞紅癭蚊蟲體及體液為培養(yǎng)基的斯氏線蟲存活率，以期為田間枸杞紅癭蚊的生物防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料枸杞盆栽苗，枸杞苗是從大田中采集的枸杞子鮮果曬干后洗出的枸杞籽培育，由于不是無性系培育，因此枸杞品種不純。為了便于觀察和試驗(yàn)，將培育好的枸杞苗放在寧夏農(nóng)林科學(xué)院大院中陽光充足的綠化帶內(nèi)。

試驗(yàn)儀器：載玻片、蓋玻片、培養(yǎng)皿(9 cm)、小噴壺(100 mL)、顯微鏡(CX21FS1C，奧林巴斯有限公司)。

供試線蟲：斯氏線蟲，由浙江綠神天敵生物有限公司提供(儲(chǔ)存溫度4～10 ℃)。

供試枸杞紅癭蚊幼蟲：于2018年6月在青海采集，保存于寧夏農(nóng)林科學(xué)院植物保護(hù)研究所實(shí)驗(yàn)室4 ℃冰箱中備用。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1斯氏線蟲不同濃度處理對(duì)枸杞紅癭蚊活體幼蟲的侵染效果。分別稱量5、10、15 g的線蟲(線蟲在一個(gè)密封的包裝袋中，線蟲附在濕潤(rùn)多孔的海綿上，5、10、15 g指的是海綿和線蟲總共的重量)。用20 mL的水浸泡海綿，用力按壓海綿，使附著在海綿上的線蟲進(jìn)入水中，再將浸泡海綿的水倒入100 mL的小噴壺中。準(zhǔn)備12個(gè)培養(yǎng)皿，分別將培養(yǎng)皿的底層放一層濾紙。每個(gè)培養(yǎng)皿中放入20頭枸杞紅癭蚊幼蟲，用小噴壺將線蟲噴到培養(yǎng)皿中，每個(gè)濃度3個(gè)重復(fù)，設(shè)清水對(duì)照。每天觀察清水中枸杞紅癭蚊幼蟲的死亡情況，并記錄。將培養(yǎng)皿放到室內(nèi)陰暗處，因?yàn)樘栞椛鋵?duì)線蟲有很強(qiáng)的殺傷力，用紫外線直接照射時(shí)，只需幾分鐘，線蟲就會(huì)死亡。若在較高濕度下，線蟲可以長(zhǎng)時(shí)間存活。在此期間，觀察線蟲侵染枸杞紅癭蚊幼蟲的情況，如果枸杞紅癭蚊幼蟲死亡，則放在載玻片上壓碎用顯微鏡進(jìn)一步觀察枸杞紅癭蚊體中是否有線蟲侵染。如果有線蟲存在則判斷是由線蟲致死，如果沒有線蟲存在則判斷為枸杞紅癭蚊自然死亡。

1.2.2以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲的存活情況。稱量15 g的線蟲(線蟲在一個(gè)密封的包裝袋里，線蟲附在濕潤(rùn)多孔的海綿上，15 g指的是海綿和線蟲總共的重量)，用20 mL的水浸泡海綿，用力按壓海綿，使附著在海綿上的線蟲進(jìn)入水中。將浸泡海綿的水倒入小噴壺中。試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，分別在培養(yǎng)皿中放入20頭枸杞紅癭蚊幼蟲，處理①是將20頭枸杞紅癭蚊幼蟲用昆蟲針挑破，使枸杞紅癭蚊幼蟲的體液流出作為線蟲的培養(yǎng)基質(zhì)；處理②是直接用枸杞紅癭蚊幼蟲作為培養(yǎng)基質(zhì)，每個(gè)處理設(shè)3個(gè)重復(fù)。另設(shè)清水對(duì)照，以清水作為線蟲的培養(yǎng)液，觀察線蟲的死亡情況，同樣設(shè)3個(gè)重復(fù)。分別觀察3種培養(yǎng)液中線蟲的死亡情況，用顯微鏡觀察一個(gè)視野內(nèi)幼蟲的死亡情況并記錄。

2 結(jié)果與分析

2.1 斯氏線蟲不同濃度處理對(duì)枸杞紅癭蚊活體幼蟲的侵染效果不同濃度斯氏線蟲侵染枸杞紅癭蚊幼蟲試驗(yàn)，結(jié)果表明，10 g/20 mL、15 g/20 mL 2個(gè)線蟲濃度處理的侵染效果明顯，死亡率均高于5 g/20 mL濃度處理、清水對(duì)照，且差異顯著。處理后1、2 d，各處理間死亡率差異均不顯著；處理后3 d，15 g/20 mL濃度處理的死亡率較高，達(dá)63%，10 g/20 mL濃度處理次之，為59%；處理后4 d，15 g/20 mL濃度處理的死亡率高達(dá)80%，10 g/20 mL濃度處理次之，達(dá)66%，5 g/20 mL 濃度處理與清水處理死亡率相當(dāng)，均較低(表1)。

表1 不同濃度線蟲對(duì)枸杞紅癭蚊幼蟲的侵染效果Table 1 The infection effect of nematodes with different concentrations on the larvae of Jaapiella sp.

2.2 以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲的存活情況以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲的存活情況試驗(yàn)觀察，結(jié)果表明，以枸杞紅癭蚊幼蟲體液、枸杞紅癭蚊幼蟲為培養(yǎng)基質(zhì)的線蟲存活率顯著高于清水對(duì)照。處理后1 d，以枸杞紅癭蚊幼蟲體液、枸杞紅癭蚊幼蟲為培養(yǎng)液的線蟲存活率均高于清水，但差異不顯著；處理后2、3 d，以枸杞紅癭蚊幼蟲為培養(yǎng)液的線蟲存活率較高，達(dá)97%、100%?？傮w來看，以枸杞紅癭蚊幼蟲體液、枸杞紅癭蚊幼蟲為培養(yǎng)液的線蟲存活率均高于清水對(duì)照，且差異顯著(表2)。

表2 以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲存活情況Table 2 Survival of nematodes cultured in body fluid of Lycium barbarum larvae

3 結(jié)論與討論

3.1 斯氏線蟲不同濃度處理對(duì)枸杞紅癭蚊活體幼蟲的侵染效果斯氏線蟲對(duì)白蟻類昆蟲、草地貪夜蛾幼蟲、銀杏蠐螬銅綠麗金龜幼蟲、蠐螬、舞毒蛾幼蟲、腰果細(xì)蛾幼蟲、腰果云翅斑螟幼蟲有很好的侵染效果[7-14]。該研究結(jié)果表明，線蟲可以侵染枸杞紅癭蚊并致死。線蟲對(duì)枸杞紅癭蚊有很好的防控效果，基本上達(dá)到了試驗(yàn)的目的和要求，線蟲濃度為10 g/20 mL、15 g/20 mL時(shí)藥后4 d對(duì)枸杞紅癭蚊的侵染致死率達(dá)60%以上。但試驗(yàn)中仍存在不足，由于枸杞紅癭蚊幼蟲獲得有一定的難度，一般采集回來后都是保存在4 ℃的冰箱內(nèi)，且枸杞紅癭蚊幼蟲齡期發(fā)育不一致，使得試驗(yàn)期間枸杞紅癭蚊幼蟲的個(gè)體存在一定差異，這給試驗(yàn)結(jié)果造成誤差。研究表明溫濕度對(duì)線蟲侵染昆蟲具有一定影響[15-16]，該試驗(yàn)是在室溫環(huán)境中進(jìn)行，但由于環(huán)境和地理位置的不同，同樣是室溫也不盡相同，因此監(jiān)測(cè)線蟲侵染枸杞紅癭蚊幼蟲時(shí)的溫濕度也很有必要。

3.2 以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲存活情況以枸杞紅癭蚊幼蟲體液培養(yǎng)線蟲的存活情況是在以線蟲不同濃度處理對(duì)枸杞紅癭蚊活體幼蟲的侵染試驗(yàn)為基礎(chǔ)上進(jìn)行的，斯氏線蟲能否侵染枸杞紅癭蚊幼蟲是以第一個(gè)試驗(yàn)為前提的。試驗(yàn)結(jié)果初步證明斯氏線蟲確實(shí)能夠在枸杞紅癭蚊體液中定殖，說明斯氏線蟲能夠侵染枸杞紅癭蚊并致死。

該試驗(yàn)結(jié)果為大田中利用昆蟲病原線蟲控制枸杞紅癭蚊具有一定的理論指導(dǎo)意義。試驗(yàn)中，枸杞紅癭蚊幼蟲體液是暴露在空氣中的(只用培養(yǎng)皿的蓋子蓋上，不能隔絕空氣中)，因此枸杞紅癭蚊幼蟲體液的培養(yǎng)液很快發(fā)臭，這對(duì)于培養(yǎng)線蟲是不利的，該試驗(yàn)只能在培養(yǎng)液中放入新鮮的枸杞紅癭蚊幼蟲體液，但沒有辦法去除舊的培養(yǎng)液，導(dǎo)致試驗(yàn)存在一定誤差。