HBV相關肝衰竭患者Th1/Th2型細胞因子變化及與預后的關系

劉艷麗，李 靜，于 彬，李 瑾，柴 梅，李滄友

(滄州市第三醫(yī)院 1.供應室;2.肝病科,河北 滄州061000)

乙型肝炎病毒(HBV)感染呈世界性流行，是目前世界范圍內(nèi)的主要公共衛(wèi)生問題之一[1]。全球約有3.5億慢性乙型肝炎病毒感染者，每年有100多萬人死于HBV感染所致的肝衰竭、肝硬化和肝癌，嚴重危害大眾身心健康，對患者造成痛苦，也對醫(yī)療資源造成極大消耗[2-3]。慢性乙型肝炎(CHB)的發(fā)病與細胞因子關系密切，而輔助性T細胞(Th)是分泌產(chǎn)生細胞因子的主要細胞之一，分為Th1和Th2兩個亞群[4]。近年研究發(fā)現(xiàn)，Th1/Th2平衡是維持正常免疫功能所必需的，機體對HBV的免疫應答失衡是CHB及其重癥化的重要發(fā)生機制之一，因而研究HBV感染時Th1/Th2狀態(tài)對認識乙型肝炎重癥化發(fā)病、發(fā)展、預后評估中的作用逐漸引起重視[5-6]。本研究探討Th1/Th2細胞因子在預測HBV相關慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)患者短期預后的價值，現(xiàn)報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象

采用回顧性分析法，病例納入時間為2021年1月至2021年12月，共有69例HBV-ACLF患者入組本研究。納入標準：①診斷符合2018年《肝衰竭診治指南》[7]中ACLF診斷標準；CHB診斷參照2019年《慢性乙型肝炎防治指南》[8]，并通過 HBV 血清學檢查、HBV DNA 定量、實驗室指標等檢查確診；②年齡>18歲，有HBV感染史，首次發(fā)??；③意識、認識及精神正常；④自愿配合并簽定知情同意書；⑤研究方案經(jīng)我院醫(yī)學倫理委員會批準同意。排除標準：①依從性差，不能配合研究者；②惡性腫瘤、合并免疫系統(tǒng)疾病或其他嗜肝病毒感染者；③脂肪肝或藥物性肝炎；④嚴重肝、腎、心功能衰竭或其他嚴重原發(fā)性疾病者。HBV-ACLF組男41例，女28例，年齡26-65歲，平均年齡(48.14±6.35)歲；肝衰竭分型：早期36例，中期21例，晚期12例；既往病史：高血壓53例，2型糖尿病45例，冠心病29例。CHB組70例，男43例，女27例，年齡24-66歲，平均年齡(49.03±6.18)歲；既往病史：高血壓49例，2型糖尿病40例，冠心病24例。同期健康者70例，其中男40例，女30例，年齡24-65歲，平均年齡(49.11±6.22)歲。

1.2 HBV-ACLF組分期標準

早期：無頑固性的腹水，血肌酐水平正常，凝血酶原活動度(PTA)31%-40%；中期：PTA 21%-30%，無頑固性的腹水，血肌酐上升<正常范圍的10%；晚期：PTA≤20%，有頑固性腹水、消化道出血，血肌酐>1.5 mg/dL。

1.3 HBV-ACLF組不同預后

根據(jù)患者 3 個月后的病情轉(zhuǎn)歸情況分組，其中病情好轉(zhuǎn)出院或者病情得到穩(wěn)定控制的患者分為生存組，病情惡化死亡的患者為死亡組。

1.4 方法

采集各組對象第2 d晨起空腹血樣本5 ml，凝聚2 h后，將血液樣本上離心機進行離心處理，轉(zhuǎn)速為 3 500 r/min，時間15 min，完成后收集上層血清儲存于-80℃ 的冷凍箱中準備檢測。應用Roche cobas8000 原裝配套試劑檢測丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、白蛋白(ALB)及總膽紅素(TBiL)水平。采用電化學發(fā)光法記錄乙肝表面抗原(HBeAg)陽性情況，定量 PCR 法檢測血清 HBV DNA 定量水平；應用ELISA法檢測Th1細胞因子[血清白細胞介素-2(IL-2)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)]、Th2細胞因子[IL-4、IL-6、IL-10]水平進行比較，整個操作過程應實施無菌操作，嚴重按照試劑盒(雅酶生物技術有限公司)說明書中方法操作，確保檢測質(zhì)量。

1.5 統(tǒng)計學處理

2 結(jié)果

2.1 三組對象血清Th1/Th2型細胞因子水平比較

HBV-ACLF組患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α、IL-6高于對照組及CHB組，IL-4、IL-10低于對照組及CHB組(P<0.05)，見表1、表2。

表1 三組對象血清Th1細胞因子水平比較

表2 三組對象血清Th2細胞因子水平比較

2.2 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型細胞因子水平比較

隨著病情的加重，INF-γ、TNF-α、IL-6水平升高(P<0.05)，IL-4、IL-10水平下降(P<0.05)，IL-2水平無顯著變化，見表3、表4。

表3 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th1型細胞因子水平比較

表4 不同病情程度HBV-ACLF患者血清Th2型細胞因子水平比較

2.3 不同預后HBV-ACLF患者血清Th1/Th2型細胞因子水平比較

生存組INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡組(P<0.05)，IL-4、IL-10水平高于死亡組(P<0.05)，IL-2水平無顯著變化，見表5、表6。

表5 不同預后HBV-ACLF患者血清Th1型細胞因子水平比較

表6 不同預后HBV-ACLF患者血清Th2型細胞因子水平比較

2.4 血清Th1/Th2型細胞因子和HBV-ACLF患者預后的Logistic回歸分析

將血清 INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10作為自變量，將是否死亡作為因變量，經(jīng)過 Logistic 回歸分析顯示，血清INF-、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影響HBV-ACLF患者預后的獨立危險因素(P<0.05)，見表7。

表7 血清Th1/Th2型細胞因子和HBV-ACLF患者預后的Logistic回歸分析

3 討論

據(jù)統(tǒng)計，亞洲國家中約 70%以的ACLF病人是由HBV感染所誘發(fā)，尋找一種有效評估ACLF病人病情與預后的可靠指標在挽救患者生命，改善預后方面發(fā)揮極重要作用[9-10]。HBV-ACLF的誘發(fā)因素較多，發(fā)病機制復雜，其中細胞因子參與ACLF的發(fā)生與發(fā)展。

近年來，Th1/Th2細胞因子動態(tài)變化在乙肝肝衰竭病情發(fā)展中的作用逐漸引起重視[11,12]。Th1細胞主要包括IFN-γ、TNF-α和IL-2等因子，主要參與機體細胞免疫反應與遲發(fā)性超敏反應。IFN-γ是可以有效反映Th1細胞功能的因子，其不僅參與病原體的清除，還可以募集下游的免疫活性細胞參與機體的免疫反應。IFN-γ除了在CHB中可以促進下游免疫效應細胞的增殖，刺激細胞活化外，還在ACLF發(fā)病中發(fā)揮免疫擴大效應[13]。IL-2是重要的免疫增強因子，能夠激活T細胞，刺激 T細胞增殖，IL-2水平在一定程度上反映了細胞的免疫功能狀態(tài)[14]。TNF-α是典型的炎癥反應因子，是誘導肝細胞壞死的最直接因子[15]。Th2細胞主要分泌IL-4、IL-6、IL-10，能夠輔助B細胞分化為抗體分泌細胞，抑制Th1 型細胞因子的產(chǎn)生，并介導體液免疫。Th2免疫占優(yōu)勢時，可以導致病毒感染的慢性化。

本研究顯示，HBV-ACLF組患者血清IL-2、INF-γ、TNF-α高于對照組及CHB組(P<0.05)，且隨著病情的加重，INF-γ、IL-6水平升高，IL-4、IL-10水平下降。同時生存組INF-γ、IL-6、TNF-α水平低于死亡組，IL-4、IL-10水平高于死亡組。且血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平是影響HBV-ACLF患者預后的獨立危險因素(P<0.05)，顯示出Th1/Th2細胞因子動態(tài)變化在HBV-ACLF患者的發(fā)生和發(fā)展過程中均具有重要作用，通過分析是由于有以下原因：和CHB與健康對照組對比，HBV-ACLF存在著肝臟損傷現(xiàn)象，肝細胞處在嚴重的炎癥反應與應激反應的狀態(tài)下，進而細胞因子被大量釋放，肝細胞受損程度加重，阻斷肝細胞再生，形成惡性循環(huán)，且在病情較重及死亡的患者中，肝細胞損害程度和肝臟組織會發(fā)生重構及纖維化，細胞核與線粒體的正常生理功能受到嚴重傷害，這一過程也進一步刺激了細胞因子的表達[17-18]。這此本研究認為，通過了解HBV-ACLF患者基線Th1/Th2細胞因子的水平有助于判斷ACLF病人的短期預后，在今后的臨床中，也可考慮動態(tài)監(jiān)測Th1/Th2細胞因子的表達來判斷預后，尤其是監(jiān)測血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平變化在指導臨床用藥上也具有積極意義。但本研究尚存在一定的不足，僅觀察了基線血清INF-γ、TNF-α、IL-4、IL-6、IL-10水平的表達，未詳細探討其在對 HBV-ACLF診斷中的應用價值，且樣本量偏少，未來也需進一步深入研究。