2019-2021年重慶市外環(huán)境禽流感病毒污染狀況監(jiān)測(cè)結(jié)果分析

陳 爽，喻 臻，譚章平，葉 盛，王明月，凌 華，唐 云

禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)屬甲型流感病毒，主要感染禽類，其某些亞型能夠跨越種屬屏障，導(dǎo)致人禽流感。常見可感染人類的型別主要有H5、H7和H9亞型，如H5N1、H5N6、H7N9、H9N2、H10N8等[1-5]。重慶市2017年報(bào)告9例H7N9禽流感病例后[6]，2018至2020年未有病例報(bào)告，但2021年1月至9月，連續(xù)報(bào)告3例人感染H5N6禽流感病例[7]，引發(fā)關(guān)注。為了解禽流感病毒在重慶外環(huán)境中的污染狀況，評(píng)估人感染禽流感病毒的公共衛(wèi)生風(fēng)險(xiǎn)，本文對(duì)2019-2021年重慶市外環(huán)境禽流感病毒污染狀況進(jìn)行監(jiān)測(cè)分析，以期為禽流感疫情防控提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 監(jiān)測(cè)點(diǎn)設(shè)置及標(biāo)本采集 根據(jù)《職業(yè)暴露人群血清學(xué)和環(huán)境高致病性禽流感監(jiān)測(cè)方案(2011版)》要求，按地區(qū)分布，在全市設(shè)置8個(gè)監(jiān)測(cè)區(qū)縣，每月共采集123份外環(huán)境標(biāo)本。監(jiān)測(cè)點(diǎn)覆蓋農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)、家禽散養(yǎng)戶、家禽屠宰加工廠。主要采集籠具表面擦拭標(biāo)本、案板表面擦拭標(biāo)本、糞便標(biāo)本、清洗禽類的污水、禽類飲用水等環(huán)境標(biāo)本。標(biāo)本按方案要求采集后，送至重慶市疾控中心流感實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。本研究對(duì)象為2019年1月至2021年12月采集的各類外環(huán)境標(biāo)本4 331份。

1.2 實(shí)驗(yàn)室檢測(cè) 使用SSNP-9600A全自動(dòng)核酸提取儀及配套試劑盒提取病毒核酸，CFX96 Touch熒光定量PCR儀進(jìn)行流感病毒甲型通用核酸檢測(cè)，陽性的標(biāo)本再檢測(cè)H5、H7、H9亞型,同時(shí)采用另一品牌試劑復(fù)核。核酸檢測(cè)試劑盒(熒光PCR法)購自江蘇碩世生物科技股份有限公司及廣州達(dá)安基因股份有限公司，實(shí)驗(yàn)嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行操作和結(jié)果判定。

1.3 數(shù)據(jù)分析 用Excel 2017錄入實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)建立數(shù)據(jù)庫，SPSS 25.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，率間比較采用卡方檢驗(yàn)，P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 檢測(cè)概況 2019年1月至2021年12月，重慶市8個(gè)監(jiān)測(cè)區(qū)縣共采集外環(huán)境標(biāo)本4 331份。其中，甲型陽性1 035份，陽性率為23.90%。亞型主要為H5、H9及H5、H9混合，未檢出H7亞型。不同年份甲型陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=2.27，P>0.05)，分別為24.39%、24.80%和22.56%。1 035份甲型陽性標(biāo)本中，H5亞型占13.43%，H9亞型占47.92%，H5、H9混合型占35.17%，甲型非H5、H7、H9型占3.48%。環(huán)境污染以H9為優(yōu)勢(shì)型別，H5、H9混和型占比有增高趨勢(shì)。詳見表1。

表1 2019-2021年重慶市外環(huán)境標(biāo)本禽流感病毒監(jiān)測(cè)結(jié)果Tab.1 Avian influenza virus in environmental surveillance in Chongqing,2019-2021

2.2 不同監(jiān)測(cè)地區(qū)禽流感病毒檢測(cè)情況 2019-2021年外環(huán)境標(biāo)本中，8個(gè)監(jiān)測(cè)地區(qū)均有甲型陽性檢出，陽性率在10.71%～35.36%。位于主城的九龍坡區(qū)陽性率最高(35.36%)，渝西片區(qū)的銅梁區(qū)其次(34.76%)。南岸區(qū)陽性率26.26%，渝東北片區(qū)的梁平區(qū)陽性率23.61%，相對(duì)較高。其余均在10%～20%，長壽區(qū)18.57%，墊江縣17.89%，江津區(qū)11.96%，酉陽縣10.71%。各地區(qū)甲型核酸檢測(cè)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=195.82，P<0.001)。詳見圖1。

圖1 2019-2021年重慶市不同地區(qū)禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Fig.1 Avian influenza virus in samples from different citiesin environmental surveillance in Chongqing,2019-2021

2.3 不同監(jiān)測(cè)場(chǎng)所禽流感病毒檢測(cè)情況 2019-2021年外環(huán)境標(biāo)本中，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)樣本3 483份，家禽規(guī)模養(yǎng)殖場(chǎng)(戶)樣本411份，家禽散養(yǎng)戶集中的地區(qū)樣本425份，家禽屠宰加工廠樣本12份。經(jīng)檢測(cè)，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)陽性率最高，達(dá)到29.17%。不同監(jiān)測(cè)場(chǎng)所檢測(cè)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=272.54，P<0.001)。詳見表2。

表2 2019-2021年重慶市不同監(jiān)測(cè)場(chǎng)所禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.2 Avian influenza virus in monitoring point samples in environmental surveillance in Chongqing,2019-2021

2.4 不同標(biāo)本類型禽流感病毒檢測(cè)情況 2019-2021年外環(huán)境標(biāo)本中，不同類型標(biāo)本陽性率分別為：清洗禽類的污水為34.54%(276/799)，宰殺或擺放禽肉案板表面的擦拭標(biāo)本為31.75%(328/1 033)，糞便標(biāo)本為19.82%(224/1 130)，籠具表面擦拭標(biāo)本為18.80%(198/1 053)，禽類飲用水為4.09%(9/220)，脫毛機(jī)等其他類型標(biāo)本未檢出甲型陽性。不同標(biāo)本類型檢測(cè)陽性率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (χ2=187.78，P<0.001)。詳見表3。

表3 2019-2021年重慶市不同標(biāo)本類型禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Tab.3 Avian influenza virus in different types of samples in environmental surveillance in Chongqing,2019-2021

2.5 禽流感病毒時(shí)間分布 2019至2021年間，每年4-6月陽性檢出率同年最低，陽性檢出率高峰主要出現(xiàn)在冬春季。2020年10-12月，陽性率最高，達(dá)到34.42%。各季度標(biāo)本核酸陽性檢出率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=70.88，P<0.001)。H5、H9混合陽性占比逐年增高。詳見圖2。

圖2 2019-2021年重慶市不同季度禽流感病毒核酸檢測(cè)結(jié)果Fig.2 Avian influenza virus in different seasons in environmental surveillance in Chongqing,2019-2021

3 討 論

研究結(jié)果顯示，2019-2021年重慶市外環(huán)境禽流感病毒甲型陽性率為23.90%，且各年陽性率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，表明重慶市外環(huán)境污染情況長時(shí)間維持在較高水平。H7亞型自2017年實(shí)施禽間H7免疫以來，環(huán)境未有檢出，表明禽間免疫起到顯著效果。H9為外環(huán)境污染的優(yōu)勢(shì)型別，與我國整體監(jiān)測(cè)情況一致。近3年，H5、H9混和型占比增高，結(jié)合表2、表3發(fā)現(xiàn)，主要在農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)檢出(363/364)，且清洗禽類的污水和宰殺或擺放禽肉案板表面擦拭標(biāo)本混合陽性檢出率達(dá)到68.13%(248/364)，表明禽類處理、售賣環(huán)節(jié)極易造成環(huán)境交叉污染，病毒的基因重組幾率增大，感染風(fēng)險(xiǎn)進(jìn)一步提高。

不同監(jiān)測(cè)地區(qū)檢測(cè)結(jié)果提示重慶市各地區(qū)禽流感病毒污染嚴(yán)重度差異較大。以九龍坡區(qū)(35.36%)、南岸區(qū)(26.26%)為代表的主城區(qū)的甲型陽性率一直較高，這和主城區(qū)農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)受場(chǎng)地限制、衛(wèi)生狀況不佳、交易攤位多、禽類流通量大、人員流動(dòng)頻繁關(guān)系密切。以銅梁區(qū)(34.76%)、江津區(qū)(H5，34.33%)為代表的渝西片區(qū)，在2021年1-9月，報(bào)告了3例人感染H5N6禽流感病例[7]，也提示外環(huán)境持續(xù)存在的禽流感病毒污染，與人感染禽流感病例密不可分。后期應(yīng)加強(qiáng)該片區(qū)環(huán)境及職業(yè)暴露人群的監(jiān)測(cè)，并進(jìn)一步做好環(huán)境陽性標(biāo)本的基因測(cè)序及分子進(jìn)化分析。

外環(huán)境樣本采集的場(chǎng)所以農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)為主(3 483/4 331)，其陽性率也最高，達(dá)到了29.17%，顯著高于家禽養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶、屠宰加工廠，提示家禽養(yǎng)殖場(chǎng)、散養(yǎng)戶、屠宰加工廠等較農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)有更好的防疫、消毒意識(shí)，做到了更好的外環(huán)境管控，外環(huán)境污染率大大降低，人群感染潛在風(fēng)險(xiǎn)隨之降低。農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)雖然已施行一日一清洗消毒等制度，但因其人員、貨物流動(dòng)性大，污染仍較嚴(yán)重，這與多地區(qū)研究結(jié)果相同[8-11]，印證了活禽市場(chǎng)是禽流感病毒傳播的重要場(chǎng)所[12]。而接觸被感染的禽或暴露于活禽市場(chǎng)又是導(dǎo)致發(fā)病的重要危險(xiǎn)因素[13]，提示應(yīng)加強(qiáng)相關(guān)場(chǎng)所的升級(jí)管理。

從不同標(biāo)本類型的檢測(cè)情況看，清洗禽類的污水和宰殺或擺放禽肉案板表面擦拭標(biāo)本陽性率最高，超過30%。這可能與市場(chǎng)條件限制，水源不足，清洗用水反復(fù)使用，加工各類禽類使用同一案板，且案板不清洗或清洗不徹底有關(guān)。也與甘肅[8]、陜西[9]、江蘇[10]、云南[11]等地的研究結(jié)果一致。提示禽類的宰殺、清洗環(huán)節(jié)感染風(fēng)險(xiǎn)大，在今后的防控工作中，應(yīng)特別加強(qiáng)對(duì)職業(yè)暴露人群的宣傳教育，指導(dǎo)提高個(gè)人防護(hù)意識(shí)，減少感染事件發(fā)生。

從時(shí)間分布看，2019至2021年間，每年1-3月、10-12月陽性檢出率較高，而4-6月陽性檢出率同年最低，陽性檢出率呈“V”型分布，呈現(xiàn)季節(jié)差異，該研究結(jié)果與以往研究一致[10,14]，也與人禽流感發(fā)生具有季節(jié)性相符。禽流感病毒在低溫環(huán)境容易存活，春節(jié)期間天氣寒冷，且為活禽流通旺季，提示每年冬春季特別要提前做好人禽流感的防控工作。

禽流感病毒變異，除了基因點(diǎn)突變或多點(diǎn)突變所造成的抗原性漂移外，基因重組引起的抗原性轉(zhuǎn)變，是其跨種屬感染人的遺傳基礎(chǔ)，常導(dǎo)致新亞型的出現(xiàn)[15]。本研究發(fā)現(xiàn)每年監(jiān)測(cè)中，均有甲型陽性，而H5、H7、H9陰性的樣本存在，表明外環(huán)境中還存在其他亞型的禽流感病毒，可加強(qiáng)對(duì)此類樣本的關(guān)注，考慮開展更多亞型的鑒別和基因測(cè)序及分子進(jìn)化分析，以利于新型別的發(fā)現(xiàn)。

自2020年以來，重慶市規(guī)范了活禽交易,推進(jìn)了集中屠宰，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)活禽銷售和宰殺攤戶關(guān)停率超過98%。但從外環(huán)境禽流感病毒污染監(jiān)測(cè)情況看，外環(huán)境中仍存在著較高程度的H5型和H9型禽流感病毒污染，從養(yǎng)殖到宰殺的整個(gè)流程仍具有感染風(fēng)險(xiǎn)，農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)有待持續(xù)改善，禽類交易秩序有待進(jìn)一步規(guī)范，監(jiān)測(cè)工作需持續(xù)開展，從而為我市人感染禽流感病毒的防控和預(yù)警提供科學(xué)依據(jù)。

利益沖突：無