蓮須化學(xué)成分的研究

李 玥，吳 弢

（上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所，上海 201203）

蓮須又名“金櫻草”，來源于睡蓮科蓮屬植物蓮NelmbonuciferaGaertn.的干燥雄蕊，野生或栽培在池塘或水田內(nèi)，廣泛分布于我國南北各?。?］，其味甘、澀，性平，歸心、腎經(jīng)，具有固腎澀精的功效［2-3］?！侗静菥V目》 記載：“蓮須清心通腎、固精氣、烏須發(fā)、悅顏色、益血、止血崩、吐血”［4］。目前，已從蓮須中分離、純化、鑒定出黃酮類、三萜類、甾醇、生物堿等八十余個化合物；藥理研究表明其具有抗炎、抗腹瀉、抗氧化、降血脂、雌激素等作用［5］。蓮須含有豐富天然色素和黃酮類化合物，常被制成健康茶和功能性食品添加劑使用［6］。2020 年版《中國藥典》 一部“蓮須”項下收錄了來源、性狀、粉末鑒別、性味與歸經(jīng)、功能與主治、用法與用量、貯藏、薄層鑒別，無含量測定項。為提升蓮須質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，尋找其指標(biāo)成分，本研究對蓮須甲醇浸提物的乙酸乙酯部位進行研究，首次從蓮屬植物中分離得到化合物2、4 ～15，首次從植物蓮中分離得到化合物16。

1 材料

LC-3000 液相色譜儀（上海儀電分析儀器有限公司）； Bruker AVANCE III 400 MHz／600 MHz 核磁共振波譜儀 （德國Bruker 公司）； GCT Premier Micromass 質(zhì)譜儀 （美國Waters 公司）； BS-100A自動接收儀（上海滬西分析儀器廠有限公司）；Sepacore 中壓制備色譜儀 （瑞士Buchi 公司）；UG120 液相色譜柱（20 mm×250 mm、4.6 mm×150 mm，5 μm，日本曹達株式會社）。

柱硅膠（100 ～200、200 ～300、300 ～400 目，青島海洋化工廠分廠）； 黃海GF254薄層色譜硅膠板／厚制備板（煙臺江友硅膠開發(fā)有限公司）； C8 填料（45～60 μm，S-50 μm，日本YMC 公司）； Sephadex LH-20 （美國GE 公司）； 石油醚、乙酸乙酯、二氯甲烷、無水乙醇、95% 乙醇、甲醇、丙酮（分析純，國藥集團化學(xué)試劑有限公司）。

20 kg 蓮須購自江西省廣昌縣，由上海中藥標(biāo)準(zhǔn)化研究中心吳立宏研究員鑒定為睡蓮科植物蓮NelmbonuciferaGaertn.的干燥雄蕊，憑證標(biāo)本保存于上海中醫(yī)藥大學(xué)中藥研究所標(biāo)本室 （編號lx161024）。

2 提取與分離

20 kg 蓮須用甲醇冷浸提取3 次，每次400 L，合并濾液后，減壓干燥，得浸膏1 200 g。水混懸后，用乙酸乙酯萃取4 次，每次3.6 L，減壓干燥，得乙酸乙酯浸膏（830 g）、水部位浸膏（280 g）。取乙酸乙酯浸膏750 g，經(jīng)100 ～200 目硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0 ～0 ∶1）、二氯甲烷-甲醇（1 ∶0 ～0 ∶1）梯度洗脫，合并，減壓回收，得到Fr.1～Fr.22。

Fr.12 （15.9 g）經(jīng)C8 反相中壓柱，以甲醇-水（80 ∶20 ～100 ∶0）梯度洗脫，得到Fr.12-1 ～Fr.12-9。Fr.12-3 （1.3 g）經(jīng)200～300 目硅膠柱分離，以石油醚-乙酸乙酯（1 ∶0 ～0 ∶1）梯度洗脫，得到Fr.12-3-1～Fr.12-3-6。Fr.12-3-2 （17 mg）經(jīng)制備TLC 分離，以二氯甲烷-甲醇（30 ∶1）洗脫，再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（90 ∶10）洗脫，得到化合物2 （4 mg，tR＝10 min）、9 （5 mg，tR＝16 min）。Fr.12-3-3 （22 mg）經(jīng)制備TLC 分離，以二氯甲烷-甲醇（30 ∶1）洗脫，再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（90 ∶10）洗脫，得到化合物12 （5 mg，tR＝13 min）、14 （4 mg，tR＝18 min）。Fr.12-3-4（117 mg）經(jīng)Sephadex LH-20 分離，以石油醚-二氯甲烷-甲醇（5 ∶5 ∶1）洗脫，得到Fr.12-3-4-1 ～Fr.12-3-4-2。Fr.12-3-4-1 經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（92 ∶8）洗脫，得到化合物1 （6 mg，tR＝8 min）、15 （4 mg，tR＝10 min）。Fr.12-3-4-2 制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（89 ∶11）洗脫，得到化合物4 （8 mg，tR＝21 min）、7 （4 mg，tR＝15 min）。Fr.12-3-6（45 mg）經(jīng)制備TLC 分離，以二氯甲烷-甲醇（30 ∶1）洗脫，再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（90 ∶10）洗脫，得到化合物8 （6 mg，tR＝19 min），再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長254 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（85 ∶15）洗脫，得到19 （4 mg，tR＝12 min）、21 （4 mg，tR＝7 min）。

Fr.17 （56.6 g）經(jīng)200 ～300 目硅膠柱分離，以石油醚-二氯甲烷（2 ∶1 ～0 ∶1）、二氯甲烷-甲醇（1 ∶0～0 ∶1）梯度洗脫，得到Fr.17-1～Fr.17-7。Fr.17-3 （2 g）經(jīng)C8 反相中壓柱分離，以甲醇-水（70 ∶30～100 ∶0）梯度洗脫，得到Fr.17-3-1～Fr.17-3-5，其中90% 甲醇洗脫液中析出無色針狀結(jié)晶，得到化合物17 （15 mg）。Fr.17-3-1 （107 mg）經(jīng)300 ～400 目硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯（5 ∶1）洗脫，再經(jīng)制備TLC 分離，以石油醚-乙酸乙酯（2 ∶1）洗脫，得到化合物3 （6 mg）、10（6 mg）、11 （13 mg）。Fr.17-3-3 （360 mg）經(jīng)Sephadex LH-20 分離，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶1）洗脫，得到Fr.17-3-3-1 ～Fr.17-3-3-2。Fr.17-3-3-1（305 mg）經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長254 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（85 ∶15）洗脫，得到化合物5 （5 mg，tR＝13 min）、6 （4 mg，tR＝12 min）。Fr.17-3-3-2 （10 mg）經(jīng)TLC 制備，以二氯甲烷-甲醇（25 ∶1）洗脫，得到化合物20（2 mg）。Fr.17-3-4 （56 mg）經(jīng)200～300 目硅膠柱分離，以二氯甲烷-甲醇（1 ∶0 ～0 ∶1）梯度洗脫，得到Fr.17-3-4-1 ～Fr.17-3-4-3。Fr.17-3-4-2 （30 mg）經(jīng)制備TLC 純化，以二氯甲烷-甲醇（25 ∶1）洗脫，再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長254 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（87 ∶13）洗脫，得到化合物18 （5 mg，tR＝19 min），再經(jīng)制備HPLC 純化（檢測波長210 nm，體積流量8.0 mL／min），以乙腈-水（90 ∶10）洗脫，得到化合物13 （3 mg，tR＝17 min）。Fr.17-3-5 （33 mg）經(jīng)Sephadex LH-20 分離，以石油醚-二氯甲烷-甲醇（5 ∶5 ∶1）分離，再經(jīng)制備TLC 純化，以石油醚-乙酸乙酯（2 ∶1）洗脫，得到化合物16 （4 mg）。

3 結(jié)構(gòu)鑒定

化合物1：白色粉末，ESI-MSm／z：465.5［M＋Na］＋，分子式C30H50O2，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.17 （1H，t，J＝3.5 Hz，H-12），3.53 （1H，d，J＝11.0 Hz，H-28b），3.20 （2H，dd，J＝11.0，4.5 Hz，H-28a），1.14（3H，s，H-27），0.97 （3H，s，H-26），0.91（6H，d，J＝4.0 Hz，H-23，25），0.86 （6H，m，H-29～30），0.77 （3H，d，J＝3.8 Hz，H-24）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：38.7 （C-1），27.4 （C-2），79.2 （C-3），38.9 （C-4），55.3（C-5），18.5 （C-6），32.7 （C-7），39.9 （C-8），47.7 （C-9），37.1 （C-10），23.7 （C-11），122.5（C-12），144.3 （C-13），41.9 （C-14），25.7 （C-15），22.1 （C-16），37.1 （C-17），42.5 （C-18），46.6 （C-19），31.1 （C-20），34.2 （C-21），31.2（C-22），28.2 （C-23），15.7 （C-24 ～25），16.9（C-26），26.1 （C-27），69.9 （C-28），33.3 （C-29），23.7 （C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［7］報道基本一致，故鑒定為高根二醇。

化合物2：白色粉末，ESI-MSm／z：485.5［M＋H］＋，分子式C32H52O3，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.20 （1H，t，J＝3.5 Hz，H-12），4.03 （1H，d，J＝11.0 Hz，H-3），3.70（1H，d，J＝11.0 Hz，H-28b），3.22 （1H，dd，J＝11.2，4.7 Hz，H-28a），1.16 （3H，s，H-27），0.99 （3H，s，H-26），0.94 （3H，s，H-25），0.92 （3H，s，H-23），0.88 （6H，d，J＝11.0 Hz，H-24，29），0.78 （3H，s，H-30）；13CNMR （100 MHz，CDCl3）δ：39.0 （C-1），25.8（C-2），79.2 （C-3），38.8 （C-4），55.4 （C-5），18.5 （C-6），32.8 （C-7），40.0 （C-8），47.8（C-9），36.0 （C-10），23.0 （C-11），123.1 （C-12），143.8 （C-13），41.9 （C-14），26.2 （C-15），22.5 （C-16），37.1 （C-17），42.8 （C-18），46.5 （C-19），31.1 （C-20），34.2 （C-21），31.6（C-22），28.3 （C-23），15.8 （C-24），15.7 （C-25），16.9 （C-26），27.5 （C-27），71.0 （C-28），33.4 （ C-29），23.8 （ C-30），171.6 （ C-1′），21.2 （C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［8］報道基本一致，故鑒定為高根二醇-3-醋酸酯。

化合物3：白色粉末，ESI-MSm／z：471.3［M-H］-，分子式C30H48O4，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.28 （1H，t，J＝3.4 Hz，H-12），3.65 （1H，m，H-2），2.94 （1H，d，J＝9.6 Hz，H-3），2.89 （1H，dd，J＝13.8，4.0 Hz，H-18），1.20 （3H，s，H-27），1.04 （6H，m，H-23，26），0.98 （3H，s，H-25），0.94 （3H，s，H-29），0.84 （6H，m，H-24，30）；13C-NMR（100 MHz，CD3OD）δ：47.6 （C-1），69.5 （C-2），84.5 （C-3），40.6 （C-4），56.7 （C-5），19.6 （C-6），33.8 （C-7），40.5 （C-8），49.7（C-9），39.3 （C-10），24.6 （C-11），123.4 （C-12），145.4 （C-13），42.9 （C-14），28.8 （C-15），24.1 （C-16），48.1 （C-17），42.7 （C-18），47.3 （C-19），31.6 （C-20），34.9 （C-21），33.6（C-22），29.3 （C-23），17.1 （C-24），17.5 （C-25），17.8 （C-26），26.4 （C-27），182.0 （C-28），33.9 （C-29），24.0 （C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［9］報道基本一致，故鑒定為2α-羥基齊墩果酸。

化合物4：白色粉末，ESI-MSm／z：455.7［M-H］-，分子式C30H48O3，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.28 （1H，t，J＝3.3 Hz，H-12），3.22 （1H，dd，J＝11.0，4.4 Hz，H-3），2.82 （1H，dd，J＝13.1，4.7 Hz，H-18），1.13（3H，s，H-27），0.98 （3H，s，H-23），0.92（3H，s，H-30），0.91 （3H，s，H-25），0.90（3H，s，H-29），0.77 （3H，s，H-24），0.75（3H，s，H-26）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：38.5 （C-1），27.3 （C-2），79.2 （C-3），38.9（C-4），55.4 （C-5），18.4 （C-6），33.2 （C-7），39.4 （C-8），47.8 （C-9），37.2 （C-10），23.7（C-11），122.8 （C-12），143.7 （C-13），41.8（C-14），27.8 （C-15），23.1 （C-16），46.7 （C-17），41.1 （C-18），46.0 （C-19），30.8 （C-20），33.9 （C-21），32.8 （C-22），28.2 （C-23），15.7（C-24），15.5 （C-25），17.3 （C-26），26.1 （C-27），183.0 （C-28），32.6 （C-29），23.5 （C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］報道基本一致，故鑒定為齊墩果酸。

化合物5：白色粉末，ESI-MSm／z：472.4［M-H］-，分子式C30H48O4，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，Pyridine-d6）δ：5.47 （1H，t，J＝3.2 Hz，H-12），4.47 （1H，d，J＝10.9 Hz，H-24a），3.65 （1H，d，J＝10.4 Hz，H-24b），3.29 （1H，dd，J＝13.9，4.3 Hz，H-3），1.54 （3H，s，H-27），1.26 （3H，s，H-29），0.99 （3H，s，H-23），0.97 （3H，s，H-30），0.93 （3H，s，H-26），0.84 （3H，s，H-25）；13C-NMR （100 MHz，Pyridine-d6）δ：39.1 （C-1），28.8 （C-2），80.5（C-3），43.5 （C-4），56.7 （C-5），19.5 （C-6），33.6 （C-7），40.1 （C-8），48.5 （C-9），37.5（C-10），24.4 （C-11），122.8 （C-12），145.2（C-13），42.5 （C-14），28.7 （C-15），24.1 （C-16），47.0 （C-17），42.4 （C-18），46.9 （C-19），31.3 （C-20），34.6 （C-21），33.9 （C-22），24.0（C-23），64.9 （C-24），16.3 （C-25），17.6 （C-26），26.5 （C-27），180.6 （C-28），33.5 （C-29），24.1 （C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［10］報道基本一致，故鑒定為4-epi-hederagenin。

化合物6：白色粉末，ESI-MSm／z：485.1［M-H］-，分子式C31H50O4，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，Pyridine-d6）δ：5.47 （1H，t，J＝3.3 Hz，H-12），4.47 （1H，d，J＝8.9 Hz，H-24a），3.65 （1H，m，H-24b），3.59 （3H，s，-OCH3），3.30 （1H，m，H-3），1.53 （3H，s，H-27），1.24 （3H，s，H-29），0.99 （3H，s，H-23），0.96 （3H，s，H-30），0.93 （3H，s，H-26），0.84 （ 3H，s，H-25 ）；13C-NMR （ 100 MHz，Pyridine-d6）δ：39.1 （C-1），28.7 （C-2），80.5（C-3），43.5 （C-4），56.7 （C-5），19.5 （C-6），31.3 （C-7），40.1 （C-8），48.5 （C-9），37.5（C-10），24.1 （C-11），122.8 （C-12），145.2（C-13），42.4 （C-14），28.8 （C-15），24.4 （C-16），47.1 （C-17），42.5 （C-18），46.9 （C-19），30.4 （C-20），34.6 （C-21），33.6 （C-22），24.0（C-23），64.9 （C-24），16.4 （C-25），17.6 （C-26），26.5 （C-27），180.6 （C-28），33.9 （C-29），24.1 （C-30），50.0 （-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻 ［11］報道基本一致，故鑒定為4-epihederagenin methyl ester。

化合物7：白色粉末，ESI-MSm／z：481.3［M-H］-，分子式C33H54O2，不飽和度7。1H-NMR（600 MHz，Pyridine-d6）δ：4.70 （1H，dd，J＝11.7，4.7 Hz，H-12），3.32 （1H，d，J＝10.5 Hz，H-3），2.07 （1H，m，H-33），1.29 （1H，m，H-27），1.27 （3H，s，H-23），1.02 （3H，s，H-30），1.00 （3H，s，H-24），0.97 （3H，s，H-31），0.91 （3H，s，H-26），0.88 （3H，s，H-25），0.83 （3H，s，H-29）；13C-NMR （150 MHz，Pyridine-d6）δ：40.1 （C-1），24.2 （C-2），81.1（C-3），38.6 （C-4），55.9 （C-5），18.9 （C-6），33.4 （C-7），42.4 （C-8），48.3 （C-9），37.5（C-10），23.3 （C-11），122.8 （C-12），146.0（C-13），42.5 （C-14），28.5 （C-15），28.7 （C-16），32.5 （C-17），47.1 （C-18），46.8 （C-19），31.4 （C-20），34.6 （C-21），38.3 （C-22），17.8（C-23），30.0 （C-24），15.8 （C-25），17.4 （C-26），26.6 （C-27），30.7 （C-28），24.3 （C-29），33.7 （ C-30），30.4 （ C-31），171.0 （ C-1′），21.5 （C-2′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［12］報道基本一致，故鑒定為28α-同-β-香樹脂醇乙酯。

化合物8：白色粉末，ESI-MSm／z：455.1［M-H］-，分子式C30H48O3，不飽和度7。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：4.71 （1H，s，H-29b），4.59 （1H，s，H-29a），3.13 （1H，dd，J＝11.1，5.0 Hz，H-3），1.69 （ 3H，s，H-30），1.01（3H，s，H-27），0.97 （3H，s，H-23），0.95（3H，s，H-26），0.86 （3H，s，H-25），0.75（3H，s，H-24）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：39.7 （C-1），26.9 （C-2），79.7 （C-3），40.0（C-4），56.9 （C-5），19.4 （C-6），33.3 （C-7），41.9 （C-8），52.0 （C-9），38.1 （C-10），22.1（C-11），26.9 （C-12），38.3 （C-13），43.6 （C-14），28.6 （C-15），31.7 （C-16），57.5 （C-17），50.4 （ C-18），49.9 （ C-19），152.0 （ C-20），30.8 （C-21），35.6 （C-22），28.0 （C-23），16.1（C-24），16.7 （C-25），16.6 （C-26），15.1 （C-27），180.0 （C-28），110.2 （C-29），19.5 （C-30）。以上數(shù)據(jù)與文獻［13］報道基本一致，故鑒定為白樺脂酸。

化合物9：白色粉末，ESI-MSm／z：399.2［M-H］-，分子式C27H44O2，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.35 （1H，d，J＝5.2 Hz，H-6），3.52 （1H，m，H-3），1.09 （6H，d，J＝6.9 Hz，H-26 ～27），1.00 （3H，s，H-19），0.91（3H，d，J＝6.6 Hz，H-21），0.67 （3H，s，H-18）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：37.4 （C-1），31.8 （C-2），71.9 （C-3），42.4 （C-4），140.9 （C-5），121.8 （C-6），32.0 （C-7，8），50.2 （C-9），36.6 （C-10），21.2 （C-11），39.9（C-12），42.5 （C-13），56.9 （C-14），24.4 （C-15），28.3 （C-16），56.0 （C-17），12.0 （C-18），19.5 （C-19），35.5 （C-20），18.6 （C-21），30.0（C-22），37.4 （C-23），215.7 （C-24），41.0 （C-25），18.5 （C-26 ～27）。以上數(shù)據(jù)與文獻 ［14］報道基本一致，故鑒定為24-ketocholesterol。

化合物10：白色粉末，ESI-MSm／z：429.1［M-H］-，分子式C29H50O2，不飽和度5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.31 （1H，s，H-26），3.87 （1H，d，J＝7.9 Hz，H-3），3.57 （1H，ddd，J＝15.7，11.2，4.3 Hz，H-7），1.07 （3H，s，H-19），0.95 （3H，d，J＝6.5 Hz，H-21），0.92～0.82 （9H，m，H-26～27，29），0.72 （3H，s，H-18）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：37.2（C-1），31.8 （C-2），71.7 （C-3），42.0 （C-4），143.7 （C-5），125.7 （C-6），73.6 （C-7），32.1（C-8），48.5 （C-9），36.7 （C-10），21.3 （C-11），39.8 （C-12），41.1 （C-13），55.6 （C-14），26.6 （C-15），28.8 （C-16），56.2 （C-17），12.0（C-18），19.3 （C-19），36.3 （C-20），19.1 （C-21），34.2 （C-22），26.3 （C-23），46.1 （C-24），29.4 （C-25），20.0 （C-26），19.4 （C-27），23.3（C-28），12.2 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］報道基本一致，故鑒定為7β-羥基谷甾醇。

化合物11：白色粉末，ESI-MSm／z：429.3［M-H］-，分子式C29H50O2，不飽和度5。1H-NMR（600 MHz，CDCl3）δ：5.58 （1H，dd，J＝5.2，1.5 Hz，H-26），3.83 （ 1H，s，H-3），3.57（1H，ddd，J＝15.8，11.1，4.6 Hz，H-7）1.07（3H，s，H-19），0.97 （3H，s，H-21），0.78 ～0.84 （9H，m，H-26 ～27，29），0.67 （3H，s，H-18）；13C-NMR （150 MHz，CDCl3）δ：37.2 （C-1），31.6 （C-2），71.6 （C-3），42.4 （C-4），146.5 （C-5），124.1 （C-6），65.6 （C-7），37.7（C-8），42.6 （C-9），37.6 （C-10），20.9 （C-11），39.4 （C-12），42.3 （C-13），49.6 （C-14），26.1 （C-15），28.5 （C-16），55.9 （C-17），11.9（C-18），18.5 （C-19），36.3 （C-20），19.0 （C-21），34.2 （C-22），24.5 （C-23），46.1 （C-24），29.3 （C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.3（C-28），12.2 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［15］報道基本一致，故鑒定為7α-羥基谷甾醇。

化合物12：白色粉末，ESI-MSm／z：451.7［M＋Na］＋，分子式C29H48O2，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.19 （1H，s，H-6），4.35 （1H，m，H-3），1.20 （3H，s，H-19），0.94 （3H，d，J＝6.5 Hz，H-21），0.85 （9H，m，H-26～27，29 ），0.73 （ 3H，s，H-18 ）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：36.4 （C-1），34.0 （C-2），68.9 （C-3），41.7 （C-4），171.6（C-5），119.8 （C-6），199.6 （C-7），34.3 （C-8），53.9 （C-9），39.2 （C-10），21.2 （C-11），39.6 （C-12），42.6 （C-13），56.1 （C-14），24.3（C-15），28.3 （C-16），55.7 （C-17），12.1 （C-18），18.4 （C-19），36.2 （C-20），18.8 （C-21），34.0 （C-22），26.2 （C-23），46.0 （C-24），29.3（C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.2 （C-28），12.1 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［16］報道基本一致，故鑒定為3β-羥基豆甾-5-烯-7-酮。

化合物13：白色粉末，ESI-MSm／z：443.5［M-H］-，分子式C29H48O3，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：5.42 （1H，m，H-7），5.23 （2H，m，H-22 ～23），3.98 （1H，m，H-3），3.39 （3H，s，-OCH3），3.17 （1H，d，J＝4.8 Hz，H-6），1.06 （3H，d，J＝6.6 Hz，H-21），1.00 （3H，s，H-19），0.96 （3H，d，J＝6.9 Hz，H-28），0.88 （6H，d，J＝7.3 Hz，H-26～27），0.64 （3H，s，H-18）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：33.2 （C-1），31.9 （C-2），68.5 （C-3），40.8 （C-4），77.1 （C-5），84.0（C-6），116.2 （C-7），144.7 （C-8），44.9 （C-9），38.4 （C-10），23.2 （C-11），40.2 （C-12），44.5 （C-13），56.2 （C-14），24.2 （C-15），29.4（C-16），57.5 （C-17），12.9 （C-18），19.0 （C-19），40.9 （C-20），21.8 （C-21），137.2 （C-22），133.4 （C-23），42.0 （C-24），33.8 （C-25），20.6 （C-26），20.2 （C-27），18.4 （C-28），58.4 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［17］報道基本一致，故鑒定為（3β，5α，6β，22E）-6-甲氧基麥角甾烷-7，22-二烯-3，5-二醇。

化合物14：白色粉末，ESI-MSm／z：423.3［M-H］-，分子式C28H40O3，不飽和度9。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：6.38 （1H，s，H-4），5.27 ～5.32 （2H，m，H-22 ～23），2.84 （1H，t，J＝9.2 Hz，H-9），2.68 （1H，d，J＝16.8 Hz，H-7a），1.29 （3H，s，H-19），1.11 （3H，d，J＝7.0 Hz，H-21），1.00 （3H，s，H-18），0.94（3H，d，J＝6.8 Hz，H-28），0.85 （6H，dd，J＝8.4 Hz，H-26 ～27）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：39.1 （ C-1），34.6 （ C-2），199.3 （ C-3），126.8 （C-4），156.3 （C-5），200.2 （C-6），41.1（C-7），62.4 （C-8），49.6 （C-9），36.2 （C-10），25.3 （ C-11），38.6 （ C-12），54.2 （ C-13），215.0 （ C-14），38.2 （ C-15），23.4 （ C-16），49.6 （C-17），17.3 （C-18），24.2 （C-19），37.5（C-20），23.8 （C-21），132.6 （C-22），135.4（C-23），43.5 （C-24），33.3 （C-25），19.9 （C-26），20.3 （C-27），17.8 （C-28）。以上數(shù)據(jù)與文獻［18］報道基本一致，故鑒定為dankasterone A。

化合物15：無色油狀物，ESI-MSm／z：331.5［M-H］-，分子式C21H32O3，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.66 （1H，d，J＝1.8 Hz，H-2），5.28 （1H，dd，J＝15.3，7.6 Hz，H-16），5.19 （1H，dd，J＝15.3，8.3 Hz，H-15），2.67（1H，dd，J＝10.8，5.9 Hz，H-8），2.30 （1H，m，H-13），1.06 （3H，d，J＝6.6 Hz，H-14），0.94 （3H，d，J＝6.8 Hz，H-21），0.86 （6H，t，J＝6.8 Hz，H-19 ～20），0.63 （3H，s，H-12）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：171.0 （C-1），112.5 （C-2），170.7 （C-3），104.9 （C-4），40.3（C-5），35.3 （C-6），49.1 （C-7），50.6 （C-8），21.6 （C-9），29.1 （C-10），55.6 （C-11），11.9（C-12），43.0 （C-13），21.2 （C-14），134.8 （C-15），133.1 （C-16），43.1 （C-17），33.3 （C-18），19.9 （C-19），20.2 （C-20），17.8 （C-21）。以上數(shù)據(jù)與文獻［19］報道基本一致，故鑒定為demethylincisterol A3。

化合物16：白色粉末，ESI-MSm／z：413.1［M＋H］＋，分子式C29H48O，不飽和度6。1H-NMR（400 MHz，CDCl3）δ：5.74 （1H，s，H-6），1.06 （3H，s，H-19），0.94 （3H，d，J＝6.6 Hz，H-21），0.84 （9H，dd，J＝9.2，7.0 Hz，H-26 ～27，29），0.73 （3H，s，H-18）；13C-NMR （100 MHz，CDCl3）δ：35.8 （ C-1），34.0 （ C-2），199.9 （C-3），123.9 （C-4），171.9 （C-5），33.1（C-6），32.2 （C-7），34.1 （C-8），54.0 （C-9），39.8 （C-10），21.2 （C-11），38.7 （C-12），42.5（C-13），56.0 （C-14），24.3 （C-15），28.3 （C-16），56.1 （C-17），12.1 （C-18）17.5 （C-19），36.3 （C-20），18.8 （C-21），35.8 （C-22），26.2（C-23），46.0 （C-24），29.3 （C-25），20.0 （C-26），19.2 （C-27），23.2 （C-28），12.1 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［20］報道基本一致，故鑒定為β-谷甾酮。

化合物17：無色針狀結(jié)晶（甲醇），ESI-MSm／z：437.2 ［M＋Na］＋，分子式C29H50O，不飽和度5。1H-NMR （400 MHz，C5D5N）δ：5.42 （1H，d，J＝4.7 Hz，H-6），3.84 （1H，m，H-3），1.06（3H，s，H-19），0.99 （3H，t，J＝6.1 Hz，H-21），0.83～0.92 （9H，m，H-26 ～27，29），0.68（3H，s，H-18）；13C-NMR （100 MHz，C5D5N）δ：37.6 （C-1），29.3 （C-2），71.0 （C-3），42.3（C-4），140.8 （C-5），121.0 （C-6），32.0 （C-7），2.3 （C-8），50.5 （C-9），36.7 （C-10），21.2 （C-11），39.8 （C-12），46.0 （C-13），56.7（C-14），24.3 （C-15），28.4 （C-16），56.1 （C-17），11.8 （C-18），19.4 （C-19），43.3 （C-20），19.8 （C-21），34.0 （C-22），26.2 （C-23），51.1（C-24），34.0 （C-25），19.0 （C-26），23.2 （C-27），24.3 （C-28），12.0 （C-29）。以上數(shù)據(jù)與文獻［20］報道基本一致，故鑒定為β-谷甾醇。

化合物18：黃色粉末，ESI-MSm／z：301.7［M-H］-，分子式C15H10O7，不飽和度11。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.75 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-2′），7.65 （1H，dd，J＝8.5，2.2 Hz，H-6′），6.90 （1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.41（1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），6.20 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：147.4 （ C-2），135.8 （ C-3），175.9 （ C-4），161.1 （C-5），97.8 （C-6），164.1 （C-7），93.0（C-8），156.8 （C-9），103.1 （C-10），121.7 （C-1′），114.6 （C-2′），144.8 （C-3′），146.7 （C-4′），114.8 （C-5′），120.3 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［21］報道基本一致，故鑒定為槲皮素。

化合物19：黃色粉末，ESI-MSm／z：315.4［M-H］-，分子式C16H12O7，不飽和度11。1H-NMR（400 MHz，C5D5N）δ：8.31 （1H，d，J＝2.0 Hz，H-6′），8.21 （1H，dd，J＝8.5，2.1 Hz，H-2′），7.38 （1H，d，J＝8.5 Hz，H-5′），6.88 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.77 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6），3.89 （3H，s，-OCH3）；13C-NMR （100 MHz，C5D5N）δ：148.2 （C-2），137.7 （C-3），177.0（C-4），157.2 （C-5），99.0 （C-6），165.3 （C-7），94.2 （C-8），162.2 （C-9），104.2 （C-10），122.7 （ C-1′），116.4 （ C-2′），147.3 （ C-3′），149.0 （ C-4′），112.4 （ C-5′），122.6 （ C-6′），55.7 （-OCH3）。以上數(shù)據(jù)與文獻［21］報道基本一致，故鑒定為異鼠李素。

化合物20：黃色粉末，ESI-MSm／z：285.2［M-H］-，分子式C15H10O6，不飽和度11。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：8.03 ～8.13 （2H，m，H-2′，6′），6.95 ～6.84 （2H，m，H-3′，5′），6.38（1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.16 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-6）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：148.1 （ C-2），137.2 （ C-3），177.4 （ C-4），162.6 （C-5），99.3 （C-6），165.6 （C-7），94.5（C-8），158.3 （C-9），104.6 （C-10），123.7 （C-1′），130.7 （ C-2′，6′），116.3 （ C-3′，5′），160.6 （C-4′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［22］報道基本一致，故鑒定為山柰酚。

化合物21：黃色粉末，ESI-MSm／z：285.3［M-H］-，分子式C15H10O6，不飽和度11。1H-NMR（400 MHz，CD3OD）δ：7.29 ～7.38 （2H，m，H-2′，6′），6.85 （1H，m，H-5′），6.46 （1H，s，H-3），6.33 （1H，d，J＝2.1 Hz，H-8），6.11（1H，d，J＝2.0 Hz，H-6）；13C-NMR （100 MHz，CD3OD）δ：166.1 （C-2），103.4 （C-3），183.5（C-4），159.6 （C-5），101.1 （C-6），169.2 （C-7），95.8 （C-8），163.0 （C-9），104.4 （C-10），123.5 （ C-1′），113.9 （ C-2′），147.2 （ C-3′），151.5 （C-4′），116.8 （C-5′），120.2 （C-6′）。以上數(shù)據(jù)與文獻［23］報道基本一致，故鑒定為木犀草素。

4 討論

從蓮須乙酸乙酯部位分離出21 個化合物，其中化合物1 ～8 均為五環(huán)三萜類，具有豐富的藥理活性?；衔?～17 為甾體類，這類化合物在抗前列腺炎以及預(yù)防前列腺癌、卵巢癌方面有良好活性［24］，本研究為蓮須在抗炎、固腎、雌激素作用等方面的藥效物質(zhì)基礎(chǔ)研究提供了理論依據(jù)。結(jié)合甾體類成分在抗炎、抗腫瘤、降膽固醇［25］等方面的研究，提示選擇此類成分作為蓮須的指標(biāo)成分具有一定的科學(xué)依據(jù)。后續(xù)應(yīng)逐個進行單體成分的相關(guān)生物活性驗證。

蓮須乙酸乙酯部位極性小且成分十分復(fù)雜，分離難度大，采用C8 中壓柱、TLC、HPLC 結(jié)合的手段對該部分獲得了良好的分離效果，為蓮須質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善以及藥材進一步研究開發(fā)提供了參考依據(jù)。前人研究報道黃酮類為蓮須的主要成分，本研究僅分離得到4 個。而黃酮類成分具有抑菌、調(diào)節(jié)血脂、抗病毒等活性［26］，課題組通過TLC、HPLC等手段推測在蓮須的水萃取部位可能有大量的黃酮苷類成分，而對此部位化學(xué)成分研究尚不充足，因此，蓮須物質(zhì)基礎(chǔ)的研究還需繼續(xù)探索。

5 結(jié)論

本研究從蓮須中分離得到21 個化合物，包括三萜、甾體、黃酮這3 類化合物。三萜類包含7 個齊墩果烷型、1 個羽扇豆烷型，甾體類有4 個谷甾、2 個麥角甾、1 個膽甾、1 個豆甾、1 個C21甾體?；衔?、4～15 為首次在蓮屬中分離得到，其中羽扇豆烷型三萜首次在蓮屬中分離得到，豐富了蓮屬的化合物種類，為蓮須及蓮屬的進一步研究提供物質(zhì)基礎(chǔ)研究的理論依據(jù)。