心康沖劑對(duì)慢性心力衰竭大鼠去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白及交感神經(jīng)系統(tǒng)的影響

唐思琴，郭 冰，劉麗芝，堯忠柳，李 亮，毛以林*

1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)診斷學(xué)湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湖南 長(zhǎng)沙 410208

慢性心力衰竭（chronic heart failure, CHF）是指心肌受損后造成心臟結(jié)構(gòu)和功能異常的一組臨床綜合征，是多種心血管疾病的終末階段。隨著我國(guó)人口老齡化的加劇，CHF 已成為一種常見(jiàn)的心臟疾病，其發(fā)病率具有逐年增高的趨勢(shì)[1]。 血流動(dòng)力學(xué)障礙和神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的異常激活是心力衰竭的主要病理生理機(jī)制，其神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)主要是腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)和交感神經(jīng)系統(tǒng)的異常激活，神經(jīng)內(nèi)分泌細(xì)胞因子系統(tǒng)過(guò)度激活作用而引發(fā)的心室重塑是導(dǎo)致CHF 發(fā)生的主要病理生理基礎(chǔ)[2]。 心康沖劑是湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院治療CHF的經(jīng)驗(yàn)方，該方由真武湯、升陷湯、參苓白術(shù)散三方化裁而來(lái)，常用于治療心腎陽(yáng)虛、脾失健運(yùn)、水飲內(nèi)停證型的CHF 患者，臨床療效較好[3-4]。 前期研究發(fā)現(xiàn)，本方能夠改善CHF 患者心功能，抑制心室重塑，改善心力衰竭癥狀，其機(jī)制可能與改善心肌能量代謝有關(guān)[4]。 為進(jìn)一步探索心康沖劑治療CHF 的潛在機(jī)制，本研究旨在觀察心康沖劑對(duì)CHF 大鼠心肌去甲腎上腺素轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白（norepinephrine transporter,NET）及交感神經(jīng)興奮性影響，為臨床應(yīng)用心康沖劑治療CHF 提供可靠實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料

1.1 動(dòng)物

60 只SPF 級(jí)雄性SD 大鼠，體質(zhì)量（150±10） g，由湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供。 湖南中醫(yī)藥大學(xué)SPF 級(jí)動(dòng)物房飼養(yǎng)，溫度（22±2）℃，相對(duì)濕度50%±10%，光照12 h，自由攝食飲水，標(biāo)準(zhǔn)飼料喂養(yǎng)。動(dòng)物合格證編號(hào)：SCXK（湘）2019-0004。 本實(shí)驗(yàn)通過(guò)湖南中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)（審批號(hào)：LLBH-202105180002）。

1.2 藥物

心康沖劑：黃芪30 g，人參10 g，升麻5 g，柴胡5 g，桔梗5 g，茯苓15 g，陳皮10 g，炒白術(shù)10 g，薏苡仁30 g，砂仁6 g，制附片10 g，桂枝10 g，姜皮10 g，大腹皮10 g。 由湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科提供。注射用鹽酸多柔比星（深圳萬(wàn)樂(lè)藥業(yè)有限公司，10 mg/瓶，批號(hào)：2103E3）；酒石酸美托洛爾片（阿斯利康藥業(yè)有限公司，25 mg/片，批號(hào)：2012A73）。

1.3 主要試劑

NET 抗體（批號(hào)：10007095）、GAPDH 抗體（批號(hào)：00097762）均購(gòu)自美國(guó)Proteintech 公司；DNA 標(biāo)記（批號(hào)：AJG1332A，日本Takara 公司）；UltraSYBR混合物（批號(hào)：03821）、mRNA 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（批號(hào)：26621）、蛋白磷酸酶抑制劑（批號(hào)：01385）均購(gòu)自北京康為世紀(jì)生物科技有限公司；Trizol（批號(hào)：343912，美國(guó)Thermo 公司）；Tris（批號(hào)：WXBD4821V，美國(guó)Sigma 公司）；蛋白酶抑制劑（批號(hào)：9087-70-1，北京金泰宏達(dá)生物科技有限公司）；ELISA 試劑盒（批號(hào)：202103，美國(guó)R&D 公司）。

1.4 主要儀器

離心機(jī)（型號(hào)：H1650R，湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開(kāi)發(fā)有限公司）；酶標(biāo)分析儀（型號(hào)：MB-530，深圳市匯松科技發(fā)展有限公司）；熒光定量RCP 儀（型號(hào)：PIKOREAL96）、熒光PCR 板（型號(hào)：SPL0960）均購(gòu)自美國(guó)Thermo 公司；電泳儀（型號(hào)：DYY-6C）、電泳槽（型號(hào)：DYCZ-24DN）、轉(zhuǎn)膜儀（型號(hào)：DYCZ-40D）均購(gòu)自北京六一生物科技有限公司；便攜式彩色多普勒超聲儀（型號(hào)：DW-PF522，徐州大為自動(dòng)化設(shè)備有限公司）；生理記錄儀（型號(hào)：BL-420F，成都泰盟科技有限公司）；包埋機(jī)（型號(hào)：BMJ-A，常州中威電子儀器公司）；顯微鏡（型號(hào)：BA210T，廈門麥克奧迪電氣股份有限公司）。

2 方法

2.1 分組及造模

動(dòng)物適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周后，隨機(jī)取10 只SD 大鼠為正常組，余下50 只大鼠行腹腔注射鹽酸多柔比星進(jìn)行造模。 參照文獻(xiàn)[5-7]，將注射用鹽酸多柔比星用生理鹽水稀釋成濃度為2 mg/mL，按1 mL/kg 進(jìn)行腹腔注射，前5 周注射2 次，后5 周每周注射1次，連續(xù)10 周，使建模大鼠鹽酸多柔比星藥量累積至20 mg/kg。 末次注射停藥后1 周，行心臟超聲檢測(cè)觀察心臟結(jié)構(gòu)改變，以左室短軸縮短率（left ventricular fractional shortening, LVFS）＜30%，且大鼠出現(xiàn)精神萎靡、體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢、腹水等表現(xiàn)即為造模成功[8]。11 只大鼠在造模過(guò)程中死亡。 造模成功后，采用隨機(jī)數(shù)字表法將大鼠分為模型組、心康沖劑組、美托洛爾組，每組13 只。

2.2 干預(yù)方法

造模成功后，心康沖劑組及美托洛爾組開(kāi)始藥物干預(yù)治療。 大鼠給藥劑量按動(dòng)物與人體表面積折算[9]。 心康沖劑組根據(jù)前期研究[10-11]選取最佳有效劑量1.08 g/kg；美托洛爾組予以美托洛爾2.25 mg/kg；空白組、模型組予以生理鹽水15 mL/kg，各組均每天灌胃1 次，連續(xù)給藥6 周后進(jìn)行相關(guān)指標(biāo)檢測(cè)。 模型組、心康沖劑組、美托洛爾組大鼠因鹽酸多柔比星毒性蓄積分別死亡7、5、5 只。

2.3 檢測(cè)指標(biāo)及方法

2.3.1 心臟超聲檢查 采用2%戊巴比妥鈉30 mg/kg腹腔注射麻醉，麻醉后大鼠取仰臥位，予以前胸備皮涂搽耦合劑，分別獲取胸骨旁左心室長(zhǎng)軸和乳頭肌水平短軸切面，選用便攜式彩色多普勒超聲儀，M型超聲，連續(xù)記錄10 個(gè)周期后，記錄LVFS、左室射血分?jǐn)?shù)（left ventricular ejection fraction, LVEF）、左室舒張期內(nèi)徑（left ventricular end diastolic internal dimension, LVIDd）、左室收縮末期內(nèi)徑（left ventricular end systolic internal dimension, LVIDs）數(shù)值變化，所有數(shù)據(jù)測(cè)量3 次，取平均值[12]，均由同一位專業(yè)人員檢測(cè)，且該檢測(cè)人員不知曉動(dòng)物分組情況。

2.3.2 血清學(xué)檢測(cè)指標(biāo) 大鼠腹主動(dòng)脈采血后置于抗凝管中，常溫下放置15 min后于離心機(jī)中3000 r/min、半徑8 cm、離心15 min，取上清液，于-20 ℃冰箱內(nèi)保存?zhèn)溆?，?yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行ELISA 法測(cè)定大鼠血清腦鈉肽（brain natriuretic peptide, BNP）、去甲腎上腺素（norepinephrine, NE）、腫瘤壞死因子（tumor necrosis factor-α, TNF-α），通過(guò)酶標(biāo)儀讀取數(shù)據(jù)。

2.3.3 心肌病理檢測(cè) 經(jīng)腹主動(dòng)脈采血后，將大鼠開(kāi)胸剝離心臟，在生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，于心室最大橫徑處切開(kāi)，留取最大橫徑至心尖部分約200 mg 置于4%多聚甲醛溶液中固定，石蠟包埋切片，進(jìn)行HE 染色，觀察最大橫徑處心肌組織病理變化。

2.3.4 RT-PCR 法檢測(cè)心肌組織NET、TNF-α mRNA 表達(dá) 取心尖部組織20 mg，Trizol 提取組織總RNA，然后以組織總mRNA 為模板，逆轉(zhuǎn)錄為互補(bǔ)DNA，反應(yīng)體系以GAPDH 為內(nèi)參基因，在NCBI 上搜索NET 基因序列，primer 5 軟件設(shè)計(jì)引物，引物由上海生工生物工程股份有限公司合成，見(jiàn)表1。 PCR反應(yīng)體系為30 μL，包括正反向引物各1 μL，Template 2 μL，ddH2O 11 μL，2×SYBGREEN PCR Master Mix 15 μL。 擴(kuò)增條件：95 ℃10 min，95 ℃15 s，60 ℃30 s，共循環(huán)40 次。 采用2-ΔΔCt法計(jì)算目的基因表達(dá)水平的比值。

表1 引物序列

2.3.5 Western blot 檢測(cè)心肌組織NET 表達(dá) 取各組大鼠心尖部組織25 mg 置于組織裂解液中，按照NET 蛋白定量試劑盒使用說(shuō)明操作，分離提取蛋白，測(cè)定蛋白濃度，隨后進(jìn)行電泳2.5 h、轉(zhuǎn)膜140 min、封閉、一抗孵育，用1×PBST 緩沖液將一抗按照一定比例稀釋，NET（大鼠，1∶2000）、GAPDH（兔，1∶3000），將膜與一抗一起孵育，室溫放置90 min。 孵育結(jié)束后，用1×PBST 緩沖液洗3 次，每次15 min。 然后二抗孵育用1×PBST 緩沖液稀釋HRP 標(biāo)記的二抗，稀釋比例（大鼠，1∶5000；兔，1∶6000），將稀釋后的二抗與膜共同孵育90 min。 孵育結(jié)束后用1×PBST 緩沖液洗3 次，每次10 min。隨后用ECL 顯色曝光、顯影沖洗。

2.3.6 生物信號(hào)采集系統(tǒng)檢測(cè)頸交感神經(jīng)放電（sympathetic nervous system activity, SNA） 將大鼠麻醉后，取仰臥位，沿頸部正中線剪開(kāi)皮膚，逐層分離皮膚、肌肉、筋膜，暴露氣管、頸總動(dòng)脈及神經(jīng)，用玻璃分針?lè)殖鼋桓猩窠?jīng)心支，并將其掛于雙極鉑銀絲電極，表面滴加37 ℃石蠟油以保持濕潤(rùn)，接生物信號(hào)采集系統(tǒng)，記錄基礎(chǔ)放電情況。 為誘導(dǎo)SNA 的最高峰,后靜脈注射硝普鈉（100 ug/kg）[13]。 最終將基礎(chǔ)放電和最高放電值之比作為統(tǒng)計(jì)學(xué)數(shù)據(jù)[14]。

2.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用SPSS 25.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。 計(jì)量資料以“±s”表示，若滿足正態(tài)分布、方差齊性，組間兩兩比較采用最小顯著法（LSD）檢驗(yàn)；若不符合正態(tài)分布，則采用非參數(shù)秩和檢驗(yàn)。 以P＜0.05 表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié)果

3.1 各組大鼠行為學(xué)情況

模型組大鼠精神萎靡、鼠毛疏松易脫、大量腹水，部分出現(xiàn)體質(zhì)量減輕、活躍度降低、進(jìn)食少，個(gè)別大鼠出現(xiàn)便溏。美托洛爾組反應(yīng)稍遲鈍，有腹水，體質(zhì)量增長(zhǎng)緩慢。心康組大鼠喜靜臥，鼠毛缺乏光澤，有腹水，體質(zhì)量緩慢增加，活躍度降低。 空白組大鼠鼠毛光澤，反應(yīng)靈敏，正常進(jìn)食進(jìn)水，二便正常，腹部平坦，體質(zhì)量逐漸增加。

3.2 各組大鼠心臟超聲結(jié)果

與空白組比較，模型組LVIDs、LVIDd 均明顯升高（P＜0.01），LVFS、LVEF 均明顯降低（P＜0.01）。 與模型組比較，心康沖劑組和美托洛爾組LVEF、LVFS均明顯升高（P＜0.05），LVIDd、LVIDs 均明顯降低（P＜0.05）。 心康沖劑組與美托洛爾組間LVEF、LVFS、LVIDd、LVIDs 比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。詳見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）

表2 各組大鼠心功能指標(biāo)比較（±s）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05。

組別空白組模型組心康沖劑組美托洛爾組n 6 6 8 8 LVEF/%87.8±4.7 49.7±7.6**68.8±14.1▲67.8±6.8▲LVFS/%61.2±10.5 24±3.9**37.9±3.3▲35.6±5.2▲LVIDd/mm 5.8±0.5 6.6±0.6**5.8±0.5▲5.9±0.5▲LVIDs/mm 1.8±0.4 5.2±0.6**3.8±0.7▲4.0±0.8▲

3.3 各組大鼠血清BNP、NE、TNF-α 水平

與空白組比較，模型組BNP、NE、TNF-α 均明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，美托洛爾組與心康沖劑組BNP、NE、TNF-α 均明顯降低（P＜0.01）。相比，心康沖劑組與美托洛爾組間BNP、NE、TNF-α 比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 詳見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠血清BNP、NE、TNF-α 水平比較（±s，n=6）

表3 各組大鼠血清BNP、NE、TNF-α 水平比較（±s，n=6）

注：與空白組比，**P＜0.01；與模型組比，▲▲P＜0.01。

組別空白組模型組心康沖劑組美托洛爾組n 66 88 BNP 125.32±4.93 152.05±6.94*138.32±4.10▲▲142.64±4.42▲▲NE 138.78±6.68 175.92±10.69*159.02±6.94▲▲164.19±4.17▲▲TNF-α 259.22±17.57 323.93±12.78*289.88±9.06▲▲295.28±10.34▲▲

3.4 大鼠心肌組織病理學(xué)結(jié)果

空白組心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)均勻，邊緣清晰，排列整齊。 與空白組相比，模型組心肌細(xì)胞可見(jiàn)肥大水腫，結(jié)構(gòu)模糊，排列不規(guī)則，有少量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)。 與模型組相比，心康沖劑組和美托洛爾組心肌細(xì)胞水腫及炎性細(xì)胞浸潤(rùn)程度有不同程度減輕。 詳見(jiàn)圖1。

圖1 各組心肌組織HE 染色圖（×400）

3.5 各組大鼠心肌組織NET、TNF-α mRNA 表達(dá)情況

與空白組比較，模型組NET mRNA 表達(dá)明顯降低（P＜0.01），TNF-α mRNA 明顯升高（P＜0.01）。 與模型組比較，心康沖劑組和美托洛爾組NET mRNA表達(dá)均明顯升高（P＜0.05，P＜0.01），TNF-α mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。與美托洛爾組比較，心康沖劑組NET mRNA 表達(dá)明顯升高（P＜0.01），TNF-α mRNA表達(dá)明顯降低（P＜0.01）。 詳見(jiàn)表4。

表4 各組大鼠心肌NET、TNF-α mRNA 表達(dá)比較（±s，n=4）

表4 各組大鼠心肌NET、TNF-α mRNA 表達(dá)比較（±s，n=4）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；與美托洛爾組比較，##P＜0.01。

組別空白組模型組心康沖劑組美托洛爾組NET 1.08±0.14 0.25±0.03**0.59±0.08▲▲##0.40±0.02▲TNF-α 1.04±0.06 7.78±1.29**1.63±0.32▲▲##3.51±0.57▲▲

3.6 各組大鼠心肌組織NET 表達(dá)情況

與空白組比較，模型組NET 相對(duì)表達(dá)量明顯降低（P＜0.01）。 與模型組比較，心康沖劑組和美托洛爾組NET 相對(duì)表達(dá)量均明顯升高（P＜0.01）。 心康沖劑組與美托洛爾組間NET 相對(duì)表達(dá)量比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 詳見(jiàn)表5、圖2。

表5 各組大鼠心肌NET 相對(duì)表達(dá)量比較（±s，n=4）

表5 各組大鼠心肌NET 相對(duì)表達(dá)量比較（±s，n=4）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組別空白組模型組心康沖劑組美托洛爾組NET 0.71±0.10 0.10±0.02**0.44±0.09▲▲0.34±0.14▲▲

圖2 各組大鼠心肌組織中NET 表達(dá)電泳圖

3.7 各組大鼠頸SNA 情況

與空白組比較，模型組SNA 明顯升高（P＜0.01）。與模型組比較，心康沖劑組和美托洛爾組SNA 明顯降低（P＜0.01）。 心康沖劑組與美托洛爾組間SNA 比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。 詳見(jiàn)表6。

表6 各組大鼠SNA 比較（±s，n=4）

表6 各組大鼠SNA 比較（±s，n=4）

注：與空白組比較，**P＜0.01；與模型組比較，▲▲P＜0.01。

組別空白組模型組心康沖劑組美托洛爾組SNA 46.29±14.49 166.57±26.18**102.56±16.71▲▲87.54±9.31▲▲

4 討論

CHF 屬于中醫(yī)學(xué)“水腫”“喘證”范疇。CHF 患者初期多以心肺氣虛為主，繼而出現(xiàn)心陽(yáng)不足，累及脾腎。 脾腎陽(yáng)虛則水飲內(nèi)停，主要表現(xiàn)為胸悶氣短、呼吸困難、畏寒、納差、乏力、雙下肢水腫等，故治療應(yīng)以升補(bǔ)宗氣、溫陽(yáng)利水為主。 心康沖劑治以溫陽(yáng)補(bǔ)氣，健脾利水，方中黃芪、人參、升麻、柴胡、桔梗以升陷湯之意大補(bǔ)宗氣，茯苓、陳皮、炒白術(shù)、薏苡仁、砂仁以健脾利水，佐入制附片、桂枝以增強(qiáng)溫陽(yáng)化飲之力，配伍姜皮、大腹皮借“以皮行皮”之意以利水消腫。 前期臨床研究發(fā)現(xiàn)，心康沖劑可改善CHF 患者證候?qū)W指標(biāo)，改善心功能，提高患者生活質(zhì)量[3]。

NET 為交感神經(jīng)遞質(zhì)傳導(dǎo)過(guò)程中的重要一環(huán)，尤其是在心血管系統(tǒng)方面[15-16]。 生理情況下，交感神經(jīng)突觸前膜上的NET 可將交感神經(jīng)沖動(dòng)所發(fā)出的NE 通過(guò)再攝取方式回到神經(jīng)末梢中[17]。心臟是交感神經(jīng)豐富器官，心臟交感神經(jīng)NET mRNA 在心臟交感神經(jīng)節(jié)中表達(dá)[18]。 目前，可采用同位素標(biāo)記NET特異性配體法檢測(cè)離體心肌組織中結(jié)合點(diǎn)變化，或采用核素顯像技術(shù)進(jìn)行心肌交感神經(jīng)NE 再攝取功能檢測(cè)[19]。心衰早期NET 表達(dá)下調(diào)，故NE 再攝取障礙，導(dǎo)致交感神經(jīng)興奮性增加。 NE 在血中濃度變化取決于交感神經(jīng)釋放的速度，隨著交感神經(jīng)系統(tǒng)活性增強(qiáng)而上升，反之則下降。 NE 是交感神經(jīng)纖維末端釋放的神經(jīng)遞質(zhì)，是一種潛在的促炎介質(zhì)，可誘導(dǎo)釋放多種炎癥因子。 TNF-α 是炎癥級(jí)聯(lián)反應(yīng)的重要成員，交感神經(jīng)持續(xù)興奮可導(dǎo)致大量細(xì)胞因子釋放，激活免疫系統(tǒng)，出現(xiàn)代償性抗炎反應(yīng)。 CHF 狀態(tài)下交感神經(jīng)系統(tǒng)和免疫炎性系統(tǒng)激活之間有相互作用，故抑制CHF 時(shí)的交感系統(tǒng)興奮性可降低中樞促炎性因子的釋放。

本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)，心康沖劑通過(guò)降低血漿腎素活性、血管緊張素Ⅱ、醛固酮水平，抑制腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)活性，調(diào)節(jié)CHF 內(nèi)分泌系統(tǒng)變化，保護(hù)心肌細(xì)胞[20]。為進(jìn)一步探索心衰發(fā)生發(fā)展的病理機(jī)制，本研究從交感神經(jīng)系統(tǒng)方面進(jìn)行研究。在CHF 早期交感神經(jīng)系統(tǒng)的激活可維持一定的心輸出量和組織器官的血流灌注，是機(jī)體的一種代償機(jī)制。 隨著病情進(jìn)展，出現(xiàn)血流動(dòng)力學(xué)和神經(jīng)-體液因素的紊亂，如醛固酮、血管緊張素Ⅱ等體液因子增多，導(dǎo)致水鈉潴留、心肌重構(gòu)。 故長(zhǎng)時(shí)間交感神經(jīng)系統(tǒng)的高度激活是心室重塑和病情惡化的危險(xiǎn)因素。因此，阻斷神經(jīng)內(nèi)分泌系統(tǒng)的過(guò)度激活是防治心室重構(gòu)治療CHF 的關(guān)鍵[21]。 β 受體阻滯劑可有效抑制交感神經(jīng)系統(tǒng)活性、減慢心率、抑制心肌收縮從而保護(hù)心肌。 美托洛爾屬于臨床常用β 受體阻滯劑，在心力衰竭、冠心病、高血壓等心血管疾病治療過(guò)程中需長(zhǎng)期服用[22-23]。 研究表明，美托洛爾可改善冠心病心力衰竭患者臨床癥狀、促進(jìn)心功能恢復(fù)、減少并發(fā)癥，可顯著提高臨床療效[24]。 潘宇等[25]研究證明美托洛爾通過(guò)抑制β-AR-AC-cAMP 信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，降低應(yīng)激狀態(tài)下家兔交感興奮性，減少NE 釋放，提高心室穩(wěn)定性。徐振興等[26]研究表明美托洛爾治療急性心肌梗死大鼠可以改善心肌神經(jīng)生長(zhǎng)因子表達(dá)和交感神經(jīng)再生。為明確抑制交感神經(jīng)興奮是否可以減少心肌耗氧量，拮抗心室重塑，從而治療CHF。因此，本研究選擇美托洛爾作為陽(yáng)性對(duì)照藥物。

本實(shí)驗(yàn)研究表明，與空白組比較，模型組大鼠LVEF、LVFS 均顯著降低，血清BNP、NE、TNF-α 水平均明顯升高；心肌組織中NET mRNA 及NET 蛋白的表達(dá)明顯降低，興奮性明顯增高。TNF-α mRNA表達(dá)明顯增加。經(jīng)心康沖劑干預(yù)后大鼠LVEF、LVFS不同程度增加，血清BNP、NE、TNF-α 值不同程度下降；心肌組織中NET mRNA 及NET 蛋白的表達(dá)顯著增加，交感神經(jīng)興奮性降低。 TNF-α mRNA 表達(dá)明顯下降。以上結(jié)果說(shuō)明心康沖劑可通過(guò)增加交感神經(jīng)遞質(zhì)的表達(dá)，上調(diào)NET 蛋白，從而降低交感神經(jīng)興奮作用以發(fā)揮改善大鼠心功能、抑制炎癥因子釋放、抑制心室重構(gòu)功效，其效力與美托洛爾相當(dāng)。 本研究只是對(duì)心臟、交感神經(jīng)的初步探索，其防治CHF的作用機(jī)制有待進(jìn)一步深入研究。