固本安神方對絕經(jīng)綜合征模型大鼠的作用及作用機制*

郭珊珊，周曉輝，王淑梅，宗傳杰，刁 麗

（河北省滄州市人民醫(yī)院，河北 滄州 061000）

絕經(jīng)綜合征又稱圍絕經(jīng)期綜合征或更年期綜合 征，癥狀輕重不一，持續(xù)時間不一，嚴(yán)重影響成年女性的身心健康和生活質(zhì)量［1-2］。我國處于絕經(jīng)期女性有1.3億人，其中90%出現(xiàn)絕經(jīng)綜合征［3］。固本安神方由葛根、黃芩、五味子、生地黃、淫羊藿、巴戟天等12味中藥組方，具有滋陰補陽、交通心腎之功效，用于絕經(jīng)前后諸證屬陰陽兩虛者，為臨床有效的驗方［4］，由二仙湯基礎(chǔ)上化裁加味而來。二仙湯出自《中醫(yī)方劑臨床手冊》，臨床常用于治療陰陽兩虛型絕經(jīng)綜合征。在本方基礎(chǔ)上，加丹皮、黃芩清熱，加酸棗仁、遠(yuǎn)志、夜交藤養(yǎng)心安神并交通心腎。本研究中探討了固本安神方治療絕經(jīng)綜合征模型大鼠的作用及作用機制，為其臨床應(yīng)用和新藥開發(fā)提供實驗基礎(chǔ)。現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器、試藥與動物

儀器：移液器（20～200μL，芬蘭Finnpipette公司）；TGL16M型高速冷凍臺式離心機（上海盧湘儀離心機儀器有限公司）；LAbOSPECT-008AS型全自動生化分析儀（日本株式會社日立制作所）；PH-140型恒溫培養(yǎng)箱（武漢一恒蘇凈科學(xué)儀器有限公司）；Tianshi-988型洗板機（北京天石天力醫(yī)療器械技術(shù)開發(fā)中心）；PHY-Ⅲ型病理組織漂烘儀，PBM-B型包埋機（普瑞斯星醫(yī)療器械有限公司）；LEICARM2235型切片機（德國徠卡公司）；Rayto RT-6100型酶標(biāo)儀（深圳雷杜生命科學(xué)股份有限公司）；Mettler Toled 0型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬分之一）；OLYMPUSBX43型顯微鏡（日本奧林巴斯公司）；NANO 2000型紫外分光光度計（美國賽默飛公司）；Exicycler 96型熒光定量聚合酶蓮式反應(yīng)（PCR）儀（韓國Bioneer公司）；WD-9405B型水平搖床，DYY-7C型電泳儀，DYCZ-40D型轉(zhuǎn)移槽，WD-9413B型凝膠成像系統(tǒng)，購于北京六一儀器廠。

試藥：固本安神方由葛根、黃芩、五味子、生地黃、淫羊藿、巴戟天等12味中藥組方，按處方工藝用10倍量水浸泡0.5 h后，按每次90 min和60 min分別回流提取2次，合并2次煎液，并濃縮至每1 mL藥液含生藥總量1.8 g；更年安片（中藥陽性對照藥，江西南昌桑海制藥有限公司，批號為190387）；戊酸雌二醇片（西藥陽性對照藥，Delpharm Lille S.A.S.，批號為491A）。大鼠促黃體生成素（LH）、大鼠促卵泡生長激素（FSH）、大鼠雌二醇（E2）酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試驗試劑盒（江蘇酶免實業(yè)有限公司，批號分別為MM-0624R1，MM-0566R1，MM-0575R1）；無機磷（P）、鈣（Ca）檢測試劑盒（富士膠片和光純藥株式會社，批號分別為003052，011286）；血脂4項［三酰甘油（TG）、膽固醇（CHO）、低密度脂蛋白膽固醇（LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（HDL-C）］試劑盒（中生北控生物科技股份有限公司，批號分別為198031，192061，211491，201401）；伊紅（生工生物工程股份有限公司，批號為A600190）；無水乙醇（國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司，批號為10009218）；TRIpure，RNase inhibitor（北京Bio Teke公司，批號分別為RP1001，RP5602）；BeyoRTⅡM-MLV反轉(zhuǎn)錄酶（上海碧云天公司，批號為D7160L）；蘇木精（批號為H8070），2×Taq PCR Master Mix，SYBR Green（批 號 分 別 為PC1150，SY1020），均購自北京Solarbio公司；PCR檢測反應(yīng)引物（金斯瑞生物科技有限公司），其序列見表1。

表1 PCR檢測反應(yīng)引物序列Tab.1 Primer sequences for PCR detection

動物：3月齡SD雌性大鼠80只，健康清潔級，體質(zhì)量220～250 g，由遼寧長生生物技術(shù)股份有限公司提供，實驗動物合格證號SCXK（遼）2020-0001。本研究方案經(jīng)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會審查批準(zhǔn)（批件號為2020KY038）。

1.2 試驗方法

造模：將80只大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)7 d后，隨機取70只，用水合氯醛麻醉后行雙側(cè)卵巢切除術(shù)，以構(gòu)建絕經(jīng)綜合征模型大鼠。大鼠麻醉后側(cè)臥于手術(shù)臺上，肋脊角下方2 cm與脊柱外側(cè)2 cm交叉處剪毛，消毒；切開皮膚，鈍性剝離筋膜膜層、肌肉層、腹膜層，可見脂肪團(tuán)，翻開脂肪團(tuán)褶皺處可見粉紅色菜花樣卵巢組織；結(jié)扎輸卵管和周圍脂肪組織后，再剪去卵巢及周邊脂肪組織，將脂肪組織回填腹腔復(fù)位后，分層縫合各層組織，消毒皮膚，撒敷適量抗菌藥物，另一側(cè)卵巢同法切除。假手術(shù)組大鼠僅切除卵巢周圍適量脂肪組織，手術(shù)方法同上。術(shù)后第5天開始，對每只大鼠進(jìn)行陰道涂片檢查，每天1次，連續(xù)7 d，通過涂片確認(rèn)動情周期反應(yīng)進(jìn)行，以此確認(rèn)造模是否成功［5-6］。

分組與給藥：將上述造模成功的大鼠隨機分為模型對照組（C組），中藥對照組（D組），西藥對照組（E組），固本安神方高、中、低劑量組（F1組、F2組、F3組），假手術(shù)大鼠作為假手術(shù)對照組（B組），剩余未做手術(shù)的大鼠作為空白對照組（A組），各10只。A組、B組、C組大鼠按每100 g體質(zhì)量1 mL灌胃生理鹽水。其余各組大鼠灌胃相應(yīng)藥物，根據(jù)人與大鼠用藥換算系數(shù)計算大鼠每日每千克體質(zhì)量的給藥量。F1組、F2組、F3組分別給予相當(dāng)于每千克體質(zhì)量的生藥18.0，9.0，4.5 g，D組給予0.56 g/kg更年安片，C組給予0.1 mg/kg戊酸雌二醇片。

樣本采集：造模成功后1周開始給藥，給藥周期為4周，自適應(yīng)性喂養(yǎng)開始，每周定期稱定體質(zhì)量。于給藥4周后取材，取材前12 h禁食不禁飲，于末次給藥30 min后，麻醉取材。于髂主動脈采血，分別置裝有不同抗凝劑的采血管中。另取下丘腦組織，用濾紙吸干表面水分及少許血液，迅速裝入凍存管，置-80℃冰箱保存，用于PCR檢測。再取大鼠子宮、腎上腺、胸腺和脾臟，分別稱定質(zhì)量，計算臟器指數(shù)。另取大鼠子宮固定于10%甲醛溶液中，用于病理形態(tài)學(xué)觀察。

1.3 指標(biāo)檢測

血漿中E2，Ca，P及血脂4項水平的檢測：用枸櫞酸鈉抗血凝，以3 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min，取上層血漿，按試劑盒說明操作，檢測E2，Ca，P的含量。再取上層血漿，用全自動生化分析儀測定血漿中CHO，TG，HDL-C，LDL-C的水平。

子宮、腎上腺、胸腺、脾臟臟器指數(shù)測定：取大鼠的子宮、腎上腺、胸腺、脾臟，稱定其濕質(zhì)量，臟器指數(shù)計算公式：臟器指數(shù)=臟器質(zhì)量×1 000÷體質(zhì)量。

子宮組織病理形態(tài)學(xué)檢測：取2.1.3項下固定于甲醛溶液中的子宮組織適量，經(jīng)常規(guī)包埋，切片，透明，脫蠟，脫水，蘇木精染色8 min，水洗后伊紅染色2 min，再次水洗，脫水，透明2次，中性樹膠封片，置光鏡下觀察。

下丘腦組織中促性腺激素釋放激素（GnRH）、磷脂酶C-β（PLC-β）、肌醇1，4，5-三磷酸受體1（IP3R1）mRNA表達(dá)水平檢測：取2.1.3項下下丘腦組織樣本5 mg，先進(jìn)行總RNA提取（TRIpure裂解→氯仿萃取→分離水相→異丙酮提取→乙醇沉淀→RNasefree ddH2O溶解，即得樣本總RNA），然后進(jìn)行RNA濃度檢測（紫外分光光度計于260 nm及280 nm波長處檢測吸光度，計算濃度），再進(jìn)行反轉(zhuǎn)錄（按反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書合成cDNA，用PCR儀完成反轉(zhuǎn)錄，得到20 μL cDNA樣本），最后使用2×Taq PCR MasterMix試劑盒反應(yīng)進(jìn)行實時熒光定量PCR定量分析（反應(yīng)體系：cDNA模板1μL，上下游引物各0.5μL，SYBR GREEN mastermix 10 μL，ddH2O 8 μL。反應(yīng)條件：94℃預(yù)熱5 min，94℃變性10 s，60℃退火20 s，72℃延伸30 s，40個循環(huán)）。以β-actin作為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法分析目的mRNA的相對表達(dá)水平。

1.4 統(tǒng)計學(xué)處理

采用SPSS 22.0統(tǒng)計學(xué)軟件分析。計量資料以±s表示，多組間比較采用單因素方差分析；組間兩兩比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 對體質(zhì)量的影響

與C組比較，A組和B組大鼠第3周至第7周的體質(zhì)量均顯著降低（P＜0.05），D組大鼠第7周的體質(zhì)量顯著降低（P＜0.05），E組和F1組大鼠第4周至第7周的體質(zhì)量均顯著降低（P＜0.05），F(xiàn)2組、F3組大鼠各時間段的體質(zhì)量均無顯著變化（P＞0.05）。詳見表2。

表2 各組大鼠體質(zhì)量變化比較（±s，g，n=10）Tab.2 Comparison of body mass changes in each group（±s，g，n=10）

表2 各組大鼠體質(zhì)量變化比較（±s，g，n=10）Tab.2 Comparison of body mass changes in each group（±s，g，n=10）

注：與C組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。表3至表6同。Note：Compared with those in the group C，*P＜0.05，**P＜0.01（for Tab.2-6）.

組別A組B組C組D組E組F1組F2組F3組第1周205.15±3.72 206.18±10.05 205.41±7.07 204.76±8.21 203.14±7.10 205.98±9.57 205.78±8.58 204.44±6.48第3周227.01±3.25**228.60±10.18**256.26±13.79 253.54±11.85 257.23±10.49 256.76±9.91 258.61±12.61 259.93±7.37第4周236.13±5.16**237.76±12.85**281.49±20.17 265.32±25.13 265.89±11.35*253.38±14.35**267.54±12.74 269.55±16.66第5周246.67±6.34**248.31±13.96**300.67±23.41 281.30±26.99 278.29±11.63*268.91±17.57**284.38±11.93 295.99±8.58第6周256.58±3.44**259.38±15.34**312.07±21.88 294.68±21.54 276.41±24.77**282.89±12.40**296.51±15.73 308.17±13.42第7周269.80±4.08**265.03±14.33**321.93±20.68 302.86±19.87*297.10±15.29**291.06±13.02**306.15±16.36 313.41±16.24

2.2 對血漿中E2，Ca，P水平的影響

與C組比較，A組、B組、D組、E組、F1組、F2組大鼠血漿中E2水平均顯著升高（P＜0.05），F(xiàn)3組大鼠血漿中E2水平無顯著變化（P＞0.05）；A組、B組和D組、E組、F1組、F2組、F3組大鼠血漿中Ca和P水平均顯著升高（P＜0.05）。詳見表3。

表3 各組大鼠血漿中E2，Ca，P水平比較（±s，n=10）Tab.3 Comparison of E2，Ca and P levels in plasma in each group（±s，n=10）

表3 各組大鼠血漿中E2，Ca，P水平比較（±s，n=10）Tab.3 Comparison of E2，Ca and P levels in plasma in each group（±s，n=10）

組別A組B組C組D組E組F1組F2組F3組E2（pmol/L）36.954±5.215**35.034±4.911**24.034±8.377 34.415±9.460*35.340±6.601**31.457±6.416*32.481±8.886*29.307±7.076 Ca（mmol/L）2.418±0.094**2.390±0.123*2.235±0.115 2.430±0.208*2.463±0.109**2.507±0.116**2.362±0.085*2.458±0.117**P（mmol/L）2.510±0.157**2.422±0.205**2.042±0.135 2.300±0.279*2.317±0.261*2.295±0.265*2.216±0.125*2.272±0.122**

2.3 對血脂4項水平的影響

與C組比較，A組、B組、D組、E組、F1組、F2組、F3組大鼠血漿中CHO和LDL-C水平均顯著降低（P＜0.05），A組、B組、D組、E組、F1組、F2組、F3組大鼠血漿中TG和HDL-C水平均無顯著差異（P＞0.05）。詳見表4。

表4 各組大鼠血脂4項水平比較（±s，mmol/L，n=10）Tab.4 Comparison of levels of four blood lipid indexes in each group（±s，mmol/L，n=10）

表4 各組大鼠血脂4項水平比較（±s，mmol/L，n=10）Tab.4 Comparison of levels of four blood lipid indexes in each group（±s，mmol/L，n=10）

組別A組B組C組D組E組F1組F2組F3組CHO 1.414±0.268**1.474±0.446**2.000±0.247 1.788±0.219*1.727±0.304*1.752±0.137*1.802±0.170*1.781±0.210*TG 0.240±0.034 0.279±0.077 0.314±0.128 0.267±0.057 0.356±0.077 0.300±0.042 0.280±0.058 0.294±0.063 HDL-C 1.583±0.065 1.624±0.142 1.617±0.162 1.629±0.137 1.709±0.250 1.651±0.125 1.601±0.189 1.636±0.180 LDL-C 0.622±0.083*0.527±0.146**0.771±0.126 0.675±0.088*0.646±0.115*0.661±0.065*0.671±0.078*0.668±0.063*

2.4 對胸腺、脾臟、腎上腺、子宮臟器指數(shù)的影響

與C組比較，A組、B組大鼠胸腺、脾臟、腎上腺、子宮臟器指數(shù)均顯著升高（P＜0.05），D組、E組、F1組、F2組、F3組大鼠胸腺、腎上腺、子宮臟器指數(shù)均顯著升高（P＜0.05），D組、F1組、F2組、F3組大鼠脾臟臟器指數(shù)均顯著升高（P＜0.05），E組大鼠脾臟臟器指數(shù)無顯著差異（P＞0.05）。詳見表5。

表5 各組大鼠胸腺、脾臟、腎上腺、子宮臟器指數(shù)比較（±s，n=10）Tab.5 Comparison of indexes of thymus，spleen，adrenal gland and uterus in each group（±s，n=10）

表5 各組大鼠胸腺、脾臟、腎上腺、子宮臟器指數(shù)比較（±s，n=10）Tab.5 Comparison of indexes of thymus，spleen，adrenal gland and uterus in each group（±s，n=10）

組別A組B組C組D組E組F1組F2組F3組胸腺2.352±0.180**2.427±0.459**1.531±0.387 2.201±0.552**2.081±0.426**1.990±0.437*2.100±0.381**1.957±0.387*脾臟2.515±0.175**2.556±0.323**2.212±0.204 2.592±0.339**2.221±0.243 2.439±0.260*2.466±0.273*2.470±0.317*腎上腺0.279±0.064*0.290±0.049**0.229±0.028 0.277±0.071*0.261±0.031*0.261±0.041*0.262±0.033*0.255±0.026*子宮2.107±0.328**2.370±0.374**0.529±0.062 0.625±0.140*1.056±0.493**0.584±0.048*0.613±0.018**0.588±0.062*

2.5 對子宮組織病理形態(tài)學(xué)的影響

A組和B組大鼠子宮管徑粗大，有皺襞，內(nèi)膜層深厚，腺體豐富，單層柱狀上皮細(xì)胞排列整齊；C組大鼠子宮壁明顯變薄，管腔狹窄，固有層細(xì)胞密集，無皺襞；D組和E組大鼠子宮管徑粗大，有皺襞，內(nèi)膜層較深厚，腺體較豐富，單層柱狀上皮細(xì)胞排列較整齊；F1組大鼠子宮管徑變大，出現(xiàn)皺襞，腺體增多，固有層細(xì)胞較不密集，單層柱狀上皮細(xì)胞排列較整齊；F2組大鼠子宮管徑變大，腺體增多，固有層細(xì)胞較不密集；F3組大鼠子宮腺體增多，固有層細(xì)胞略密集。詳見圖1。

A，A'.A組B，B'.B組C，C'.C組D，D'.D組E，E'.E組F，F(xiàn)'.F1組G，G'.F2組H，H'.F3組圖1各組大鼠子宮組織病理形態(tài)改變（A-H，×100；A'-H'，×200）A，A'.Group A B，B'.Group B C，C'.Group C D，D'.Group D E，E'.Group E F，F(xiàn)'.Group F1 G，G'.Group F2 H，H'.Group F3Fig.1 Pathomorphological changes of uterus tissue in each group（A-H，×100；A'-H'，×200）

2.6 對下丘腦組織中GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA相對表達(dá)水平的影響

與C組比較，A組、B組、D組、E組、F1組、F2組、F3組大鼠下丘腦組織中GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA相對表達(dá)水平均顯著升高（P＜0.05）。詳見表6。

表6 各組大鼠下丘腦組織中GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA相對表達(dá)水平比較（±s，n=10）Tab.6 Comparison of relative expression levels of GnRH，PLC-β and IP3R1 mRNA in hypothalamic tissue in each group（±s，n=10）

表6 各組大鼠下丘腦組織中GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA相對表達(dá)水平比較（±s，n=10）Tab.6 Comparison of relative expression levels of GnRH，PLC-β and IP3R1 mRNA in hypothalamic tissue in each group（±s，n=10）

組別A組B組C組D組E組F1組F2組F3組GnRH 1.00±0.08**1.01±0.08**0.41±0.03 0.59±0.03**0.83±0.05**0.86±0.06**0.80±0.04**0.81±0.04**PLC-β 1.00±0.08**1.05±0.10**0.48±0.01 0.84±0.03**0.53±0.04*0.95±0.03**0.73±0.03**0.73±0.01**IP3R1 1.00±0.08**0.96±0.05**0.51±0.04 0.81±0.06**0.85±0.08**0.80±0.06**0.68±0.04*0.60±0.05**

3 討論

中醫(yī)古籍文獻(xiàn)并無絕經(jīng)綜合征的專門記載，根據(jù)該病的癥候特點，諸多論述多歸屬“郁證”“不寐”“百合病”“藏燥”等病證范疇［7-8］?！秲?nèi)經(jīng)》中早有關(guān)于女子“七七任脈虛，太沖脈衰少，天癸竭，地道不通”的記載，是中醫(yī)學(xué)對女子生理變化的早期古樸唯物論的認(rèn)識，認(rèn)為女子年滿“七七”后，沖、任兩脈虛衰，陰陽失衡，腎氣漸衰，天癸枯竭［9］。隨著現(xiàn)代社會節(jié)奏的加快，女性社會壓力逐漸增大，更年期癥狀愈發(fā)明顯，患病率也逐漸升高。西醫(yī)的激素代替療法技術(shù)相對成熟、療效顯著，但還需進(jìn)一步驗證，以降低不良反應(yīng)［10］。中醫(yī)中藥的安全性和有效性經(jīng)過了幾千年的實踐驗證，故對中醫(yī)中藥治療絕經(jīng)綜合征的深入研究具有重要價值。

固本安神方具有滋陰補陽、交通心腎之功效，用于絕經(jīng)綜合征證屬陰陽兩虛者，是臨床應(yīng)用多年的有效驗方。去勢動物模型的復(fù)制周期短、操作簡單、重復(fù)性和穩(wěn)定性均高，是研究圍絕經(jīng)期的最佳動物模型，能體現(xiàn)大多數(shù)人類絕經(jīng)期出現(xiàn)的循環(huán)系統(tǒng)疾病、代謝紊亂、骨質(zhì)疏松等并發(fā)癥［11］。本研究中采用雙側(cè)卵巢切除術(shù)構(gòu)建絕經(jīng)綜合征模型，各組大鼠陰道分泌物涂片發(fā)現(xiàn)，A組與B組大鼠的動情周期變化與術(shù)前基本相同，其余各組均發(fā)生明顯改變，鏡下見大量白細(xì)胞，無成熟上皮細(xì)胞，表明去勢手術(shù)徹底、絕經(jīng)綜合征動物模型復(fù)制成功，實驗后期的性激素水平、病理檢查等相關(guān)指標(biāo)檢測結(jié)果均證明模型復(fù)制成功。

基于下丘腦-垂體-卵巢軸理論，卵巢的分泌活動接受下丘腦和垂體的調(diào)控，卵巢分泌的激素影響子宮內(nèi)膜周期性變化，丘腦-垂體-卵巢軸維持青春期發(fā)育和生殖等重要生理過程［12-13］。E2主要由卵巢分泌，反饋性調(diào)節(jié)下丘腦GnRH分泌，GnRH促進(jìn)垂體前葉產(chǎn)生并分泌FSH和LH，F(xiàn)SH和LH促進(jìn)卵巢分泌E2，以維持子宮內(nèi)膜周期性變化，從而出現(xiàn)動情周期［5］。該過程中受PLC信號級聯(lián)調(diào)節(jié)，GnRHR與Gq/11蛋白結(jié)合，激活PLC信號，并將信號傳遞給二?；视停―AG）和肌醇1，4，5-三磷酸（IP3）刺激細(xì)胞內(nèi)鈣離子釋放［14-15］。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，C組大鼠體質(zhì)量顯著升高，血漿中E2，Ca，P水平均顯著降低，血脂中CHO和LDL-C水平均顯著升高，胸腺、脾臟、腎上腺、子宮臟器指數(shù)均顯著降低，子宮病理形態(tài)學(xué)上子宮壁顯著變薄，管腔狹窄，固有層細(xì)胞密集，無皺襞，下丘腦組織中的GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA表達(dá)量均顯著降低。經(jīng)固本安神方治療后，上述指標(biāo)均被逆轉(zhuǎn)，表明該藥可有效降低絕經(jīng)綜合征模型大鼠的體質(zhì)量，升高血漿中E2，Ca，P水平，降低血脂水平，增加子宮臟器指數(shù)，改善子宮病理形態(tài)學(xué)，升高腎上腺、胸腺和脾臟臟器指數(shù)，升高下丘腦組織中GnRH，PLC-β，IP3R1 mRNA相對表達(dá)水平。且F2組在改善相關(guān)指標(biāo)的趨勢上要優(yōu)于F1組和F3組，這可能與中藥復(fù)方具有雙向調(diào)節(jié)特點有一定關(guān)系，后續(xù)研究中將繼續(xù)探討。

本研究中發(fā)現(xiàn)，固本安神方與中藥陽性對照藥更年安、西藥陽性對照藥戊酸雌二醇這2種臨床常用藥在各項指標(biāo)上表現(xiàn)出了相同的作用趨勢，也證明了其在治療絕經(jīng)期綜合征的作用效果，其作用機制可能與調(diào)節(jié)GnRH/PLC-β信號通路相關(guān)，后續(xù)將對其作用機制進(jìn)行深入研究，為中藥新藥的研究奠定實驗基礎(chǔ)。