氣相色譜法測(cè)定胃痛片中4種化學(xué)成分含量*

古炳明，鄔偉魁，劉佳

（廣東省梅州市食品藥品監(jiān)督檢驗(yàn)所，廣東 梅州 514011）

胃痛片是由蒼術(shù)、厚樸、香附、高良姜、陳皮、碳酸氫鈉等制成的中西藥復(fù)方制劑，具有芳香行氣、和中止痛功效，用于胃酸過(guò)多、胃痛及脘悶、嘔吐等屬氣滯證的治療［1］?，F(xiàn)行質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)《國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局國(guó)家藥品標(biāo)準(zhǔn)胃痛片質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)》WS-11084（ZD-1084）-2002-2012Z［2］僅對(duì)方中厚樸、碳酸氫鈉的含量進(jìn)行測(cè)定，含量控制標(biāo)準(zhǔn)單一且未對(duì)方中君藥蒼術(shù)進(jìn)行定量分析，不符合多組分、多靶點(diǎn)的現(xiàn)代中藥質(zhì)量控制要求。蒼術(shù)為君藥，具有燥濕健脾、祛風(fēng)散寒功效，主要活性成分蒼術(shù)素含量高低常用作評(píng)價(jià)蒼術(shù)的質(zhì)量［3-4］。香附為臣藥，有調(diào)經(jīng)止痛、理氣解郁功效，主要活性成分為α-香附酮［5］。本研究中建立了測(cè)定胃痛片中蒼術(shù)素、厚樸酚、厚樸酚和α-香附酮含量的氣相色譜法，可為其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提升提供參考。現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AB204-N型電子分析天平（瑞士梅特勒-托利多公司，精度為萬(wàn)分之一）；BP 211D型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司，精度為十萬(wàn)分之一）；8890型氣相色譜儀（安捷倫公司）；KQ-250DE型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司，功率為300 W，頻率為50 kHz）。

1.2 試藥

蒼術(shù)素對(duì)照品（批號(hào)為111924-201806，含量以99.5%計(jì)），α-香附酮對(duì)照品（批號(hào)為110748-202016，含量以99.4%計(jì)），厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)為110729-202015，含量以99.0%計(jì)），和厚樸酚對(duì)照品（批號(hào)為110730-201915，含量以99.8%計(jì)），均購(gòu)于中國(guó)食品藥品檢定研究院；胃痛片（廣東嘉應(yīng)制藥股份有限公司，批號(hào)分別為20180202，20190501，20200302）；乙酸乙酯（廣州市番禺力強(qiáng)化工廠，批號(hào)為633379-05653）。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：HP-5毛細(xì)管柱（30 m×0.32 mm，0.25μm），（5%）-二苯基（95%）-二甲基聚硅氧烷為固定相；程序升溫：初始溫度為50℃、保持4 min，以10℃/min的速率升至120℃、保持10 min，以10℃/min的速率升至220℃、保持10 min，以10℃的速率升至250℃、保持4 min；進(jìn)樣口溫度：280℃；火焰離子化檢測(cè)器（FID）溫度：300℃；載氣：氮?dú)?；流速?.0 mL/min；進(jìn)樣量：1 μL；分流比：1∶1。

2.2 溶液制備

取蒼術(shù)素對(duì)照品5.18 mg，α-香附酮對(duì)照品7.54 mg，分別置20 mL棕色容量瓶中，以乙酸乙酯溶解并定容；取厚樸酚對(duì)照品26.33 mg、和厚樸酚對(duì)照品25.81 mg，分別置10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯溶解并定容，制成各對(duì)照品貯備液。分別取各對(duì)照品貯備液1 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容，即得混合對(duì)照品溶液。取樣品，避光條件下操作，研細(xì)，取細(xì)粉2.0 g，精密稱定，置棕色容量瓶中，精密加入乙酸乙酯15 mL，稱定質(zhì)量，超聲處理1 h，放冷后再次稱定質(zhì)量，以乙酸乙酯補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。根據(jù)處方工藝分別制備缺蒼術(shù)、香附、厚樸的陰性對(duì)照品，按供試品溶液制備方法制備陰性對(duì)照品溶液。

2.3 方法學(xué)考察

專屬性試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下供試品溶液、混合對(duì)照品溶液及陰性對(duì)照品溶液各適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。供試品溶液中蒼術(shù)素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚色譜與混合對(duì)照品溶液色譜保留時(shí)間一致，各色譜峰分離良好，且陰性對(duì)照無(wú)干擾。色譜圖見(jiàn)圖1。

線性關(guān)系考察：分別精密吸取2.2項(xiàng)下各對(duì)照品貯備液0.60，0.80，1.00，1.20，1.40，1.60 mL，置同一10 mL容量瓶中，加乙酸乙酯稀釋并定容，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積（Y）為縱坐標(biāo)、各成分的質(zhì)量濃度（X，μg/mL）為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 線性關(guān)系考察結(jié)果（n=6）Tab.1 Results of the linear relation test（n=6）

精密度試驗(yàn)：取2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液適量，按2.1項(xiàng)下色譜條件連續(xù)進(jìn)樣測(cè)定6次，記錄色譜圖。結(jié)果蒼術(shù)素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為0.32%，0.35%，0.52%，0.65%（n=6），表明儀器精密度良好。

重復(fù)性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180202）適量，共6份，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。根據(jù)回歸方程計(jì)算得蒼術(shù)素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚的質(zhì)量分?jǐn)?shù)的RSD分別為1.08%，0.75%，0.81%，0.96%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

1.蒼術(shù)素2.α-香附酮3.厚樸酚4.和厚樸酚A.供試品溶液B.混合對(duì)照品溶液C-E.陰性對(duì)照品溶液（分別缺蒼術(shù)、香附、厚樸）圖1氣相色譜圖1.Atractylodin 2.α-Cyperone 3.Magnolol 4.HonokiolA.Test solution B.Mixed reference solution C-E.Negative reference solution（lacking Atractylodis Rhizoma，Cyperi Rhizoma and Magnoliae Officinalis Cortex，respectively）Fig.1 GC chromatograms

穩(wěn)定性試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180202）適量，按2.2項(xiàng)下方法制備供試品溶液，分別于0，2，4，8，24 h時(shí)按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果蒼術(shù)素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚峰面積的RSD分別為1.25%，1.09%，1.13%，1.06%（n=5），表明供試品溶液24 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

加樣回收試驗(yàn)：取樣品（批號(hào)為20180202）1.0 g，共6份，精密稱定，分別精密加入2.2項(xiàng)下混合對(duì)照品溶液5.0 mL，制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 加樣回收試驗(yàn)結(jié)果（n=6）Tab.2 Results of the recovery test（n=6）

2.4 樣品含量測(cè)定

取樣品（批號(hào)分別為20180202，20190501，20200302）適量，依法制備供試品溶液，按2.1項(xiàng)下色譜條件進(jìn)樣測(cè)定，根據(jù)回歸方程計(jì)算蒼術(shù)素、α-香附酮、厚樸酚、和厚樸酚的含量，結(jié)果見(jiàn)表3?？梢?jiàn)，各批樣品中成分含量存在差異，特別是未作規(guī)定的蒼術(shù)素和α-香附酮差異較大。

表3 胃痛片中4種成分含量測(cè)定結(jié)果（mg/g，n=6）Tab.3 Results of content determination of four constituents in Weitong Tablets（mg/g，n=6）

3 討論

3.1 色譜條件選擇

本研究中考察多種程序升溫的氣相色譜分離條件［6-8］，預(yù)試驗(yàn)中，最初程序升溫條件均設(shè)置進(jìn)樣口溫度和檢測(cè)器溫度為300℃；程序升溫，以100℃保持7 min，再以20℃/min的速率升至250℃，保持10 min，分流比為20∶1。但在該條件下部分化學(xué)成分未能出峰，同時(shí)升溫速率過(guò)快導(dǎo)致主成分色譜峰過(guò)于集中，分離度差。更改條件后，進(jìn)樣口溫度為280℃；檢測(cè)器溫度為300℃；程序升溫，初始溫度為50℃，保持4 min；以10℃/min的速率升至120℃，保持10 min；再以1.0℃/min的速率升至250℃，保持4 min；分流比為20∶1。但發(fā)現(xiàn)在該條件下色譜峰的響應(yīng)值較低，調(diào)整分流比，1∶1時(shí)響應(yīng)值在合理范圍內(nèi)且各色譜峰峰形對(duì)稱，分離度符合要求，結(jié)果穩(wěn)定，故選擇分流比為1∶1。

3.2 溶液制備操作

試驗(yàn)初期，混合對(duì)照品溶液的部分色譜峰出峰時(shí)間和峰面積都不太穩(wěn)定，特別是穩(wěn)定性試驗(yàn)中，放置時(shí)間越長(zhǎng)，蒼術(shù)素和α-香附酮的色譜峰面積越小。查閱文獻(xiàn)［9-11］，發(fā)現(xiàn)α-香附酮、蒼術(shù)素均為熱不穩(wěn)定物質(zhì)，且對(duì)光敏感、易氧化，故在對(duì)照品配置及供試品提取過(guò)程中，α-香附酮、蒼術(shù)素對(duì)照品及樣品均需避光保存。本研究中，供試品提取時(shí)間較長(zhǎng)，為避免有效成分的分解失效導(dǎo)致檢測(cè)數(shù)據(jù)的不準(zhǔn)確，超聲處理過(guò)程保持室溫，也可用冰袋控制溫度。

3.3 提取條件選擇

在制備供試品溶液和混合對(duì)照品溶液時(shí)，曾考察提取方法（超聲提取、超聲后離心提?。⑻崛∪軇┓N類（甲醇、乙醇、乙酸乙酯）、料液比及提取時(shí)間，發(fā)現(xiàn)以甲醇、乙醇作提取溶劑時(shí)，蒼術(shù)素和α-香附酮的色譜峰分離度很小，且受進(jìn)樣時(shí)間長(zhǎng)的影響，其他色譜峰不穩(wěn)定，推測(cè)甲醇、乙醇的揮發(fā)性較大，導(dǎo)致目標(biāo)成分濃度出現(xiàn)波動(dòng)，采用乙酸乙酯為溶劑后解決了上述問(wèn)題［12-14］。曾選擇α-蒎烯作為高良姜的定量指標(biāo)，但后續(xù)研究發(fā)現(xiàn)無(wú)高良姜的陰性對(duì)照品中出現(xiàn)了α-蒎烯的干擾峰，查證文獻(xiàn)后得知香附揮發(fā)油中提取分離的單萜化合物有α-蒎烯、β-蒎烯、桉葉素、檸檬烯、γ-聚散花素和α-紫羅蘭酮等［15］。

3.4 方法評(píng)價(jià)

本研究中建立的方法操作簡(jiǎn)便易行，精密度、重復(fù)性和準(zhǔn)確度均良好，可為胃痛片的多成分含量測(cè)定和質(zhì)量控制提供參考。