哺乳動(dòng)物睪丸生物鐘研究進(jìn)展

肖要要，王逸群，張林林 ，潘 韜，靳亞平,2，陳華濤,2

(1.西北農(nóng)林科技大學(xué) 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部動(dòng)物生物技術(shù)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，楊凌 712100；2.西北農(nóng)林科技大學(xué) 動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，楊凌 712100)

生物體在生理、行為等方面呈現(xiàn)出周期性變化的規(guī)律稱為生物節(jié)律；產(chǎn)生和調(diào)節(jié)生物節(jié)律的內(nèi)在機(jī)制稱為生物鐘。生物節(jié)律是35億年前在海洋中誕生的原始生命為適應(yīng)地球自轉(zhuǎn)造成的太陽(yáng)光照周期性變化而逐漸獲得的能力[1]。最典型的例子是睡眠和覺(jué)醒的周期性交替，它以機(jī)體活動(dòng)變化模式24 h為一個(gè)周期。隨著時(shí)間生物學(xué)的發(fā)展，越來(lái)越多的研究表明，生物鐘調(diào)控哺乳動(dòng)物的大量生理學(xué)功能，包括睡眠、記憶、代謝、免疫和生殖等。哺乳動(dòng)物生物鐘系統(tǒng)按其位置和作用的不同主要分為兩部分[2]：一部分位于視交叉上核(SCN)，接受光照信號(hào)刺激，是生物鐘系統(tǒng)的起搏器，被稱為中樞生物鐘；另一部分位于機(jī)體的各個(gè)器官和組織中，它們不僅具有各自節(jié)律性，且受到中樞生物鐘SCN的調(diào)控，被稱為外周生物鐘[3-4]。與生物鐘相關(guān)的基因(包括Period、Timeless及Clock等)陸續(xù)被發(fā)現(xiàn)和克隆，這些基因及其編碼的蛋白產(chǎn)物組成了生物體自我調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄和翻譯反饋的分子環(huán)路。破壞正常的晝夜節(jié)律以及相關(guān)生物鐘基因突變或敲除均會(huì)導(dǎo)致一系列的臨床性疾病，如腫瘤、糖尿病及心血管疾病等[1,5]。

已有證據(jù)表明，不同光照時(shí)間可顯著影響雄性睪丸重量、睪酮水平和精子發(fā)生[6-7]。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，在睪丸組織中存在生物鐘基因的表達(dá)。近年來(lái)，睪丸生物鐘的研究主要聚焦于生物鐘對(duì)睪酮合成、精子發(fā)生等方面的影響。雖然生物鐘分子機(jī)制極其復(fù)雜，但其基本的調(diào)控通路已較為明確，這為我們從生物鐘角度出發(fā)研究雄性生殖生理功能的調(diào)控機(jī)制以及相關(guān)致病因子提供了全新的思路。

1 哺乳動(dòng)物生物鐘分子調(diào)控機(jī)制

生物節(jié)律按照周期的長(zhǎng)短可分為：超日節(jié)律(節(jié)律周期小于20 h)、近日節(jié)律(節(jié)律周期接近24 h)及亞日節(jié)律(節(jié)律周期顯著大于24 h)等。我們通常所說(shuō)的生物鐘是指狹義的生物鐘，也就是近日節(jié)律生物鐘。近日節(jié)律生物鐘由3部分組成：(1)輸入系統(tǒng)。接受外界信號(hào)傳入到生物鐘振蕩器，調(diào)節(jié)生物鐘基因的表達(dá)。光暗與溫度變化是重要的授時(shí)因子，矯正生物鐘基因的節(jié)律位相[8]。(2)生物鐘振蕩器。由一組呈節(jié)律性表達(dá)的生物鐘基因及其編碼的蛋白質(zhì)組成。核心生物鐘基因激活順式作用元件啟動(dòng)靶基因轉(zhuǎn)錄并翻譯成靶蛋白，靶蛋白在細(xì)胞質(zhì)累積并轉(zhuǎn)移到細(xì)胞核，反饋抑制自身基因的轉(zhuǎn)錄活性，使其進(jìn)行節(jié)律性振蕩。(3)輸出系統(tǒng)。包括相關(guān)的生物鐘基因與生物鐘控制基因，將核心生物鐘基因節(jié)律變化信號(hào)，經(jīng)神經(jīng)、內(nèi)分泌等相關(guān)途徑送達(dá)感受器, 調(diào)節(jié)其生理行為的24 h周期性節(jié)律性變化[9]。

在分子機(jī)制層面，生物鐘節(jié)律性振蕩是由生物鐘核心基因及其編碼蛋白組成的正負(fù)反饋轉(zhuǎn)錄、翻譯環(huán)路相互作用而形成的[10]。目前已發(fā)現(xiàn)的核心生物鐘基因有10余種，主要包括Bmal1、Clock、Pers(Per1/Per2/Per3)、Crys(Cry1/Cry2)、Rev-erbα、Rorα、Hnf4a。生物鐘基因在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中形成的反饋循環(huán)通路如圖1所示。在細(xì)胞核中，bHLH型轉(zhuǎn)錄因子BMAL1與CLOCK形成異源二聚體結(jié)構(gòu)，通過(guò)結(jié)合到包括負(fù)性成分Per、Cry在內(nèi)的諸多下游基因的啟動(dòng)子區(qū)域的順式作用元件E-box(5′-CACGTG-3′)或E′-box(5′-CACGTT-3′)上，達(dá)到對(duì)Per、Cry等基因的轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)作用[11]。細(xì)胞質(zhì)中累積的PER和CRY進(jìn)入細(xì)胞核直接抑制BMAL1/CLOCK的轉(zhuǎn)錄活性，從而抑制下游生物鐘基因的轉(zhuǎn)錄激活，形成核心負(fù)反饋調(diào)控環(huán)。在核心反饋環(huán)外圍，還存在其他次級(jí)調(diào)控通路，其中核受體REV-ERB、ROR等可通過(guò)結(jié)合下游靶基因啟動(dòng)子區(qū)域的REV-ERB/ROR應(yīng)答元件(REV-ERB/ROR responsive elements，RORE)分別抑制或促進(jìn)生物鐘基因的轉(zhuǎn)錄參與生物鐘24 h節(jié)律性振蕩的產(chǎn)生[12]。BMAL1/CLOCK通過(guò)E-box激活Dbp的轉(zhuǎn)錄，E4bp4與Dbp進(jìn)而通過(guò)結(jié)合Per上游的順式作用元件D-box，分別促進(jìn)生物鐘相位的后移與前移[13]。BMAL1/CLOCK也能通過(guò)E-box促進(jìn)Dec基因的轉(zhuǎn)錄，其表達(dá)的DEC蛋白通過(guò)與BMAL1蛋白相互作用以及對(duì)E-box的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合，又可以反向抑制BMAL1/CLOCK誘導(dǎo)的Per啟動(dòng)子的反式激活[14]。次級(jí)調(diào)控通路相關(guān)的基因即使缺失，生物節(jié)律也不會(huì)隨之消失，它們的存在是使生物節(jié)律更加穩(wěn)定。在參與生物鐘反饋環(huán)的基因下游，控制各種生理機(jī)能的生物鐘控制基因也隨著生物鐘基因的表達(dá)而被激活。生物鐘系統(tǒng)通過(guò)此種方式實(shí)現(xiàn)了調(diào)控哺乳動(dòng)物全身生理功能的節(jié)律性變化[1]。

2 睪丸生物鐘的發(fā)現(xiàn)

多種雄性動(dòng)物的生殖功能具有強(qiáng)烈的季節(jié)性節(jié)律。其中，公羊能夠解碼全年的日照變化，并將其轉(zhuǎn)換為減少或增強(qiáng)性腺功能和性欲的激素信號(hào)。此外，Hoffman等[15]研究發(fā)現(xiàn)，在LD 16∶8(每天16 h光照和8 h黑暗)或LD 14∶10光照條件下的金倉(cāng)鼠可保持睪丸大小和功能，而LD 2∶22或LD 1∶23可誘導(dǎo)睪丸退化。Gaston等[16]發(fā)現(xiàn)倉(cāng)鼠每天至少需要12.5 h的光照來(lái)維持正常精子生成和防止睪丸退化。然而，Stetson等[6]和Elliott等[7]研究表明，雄性倉(cāng)鼠睪丸功能的正常維持不是由光或暗的絕對(duì)量(每天)或光暗比決定的。相反，光敏性的晝夜節(jié)律決定了光是否會(huì)刺激下丘腦-睪丸軸，揭示了晝夜節(jié)律對(duì)維持雄性生殖具有重要的作用。諸多研究表明，生物鐘基因不僅表達(dá)于下丘腦的SCN，也廣泛表達(dá)于包括肝臟、腎臟、胰臟、睪丸、胸腺和血液在內(nèi)的多種外周組織和器官中，構(gòu)成外周生物鐘。

最早被發(fā)現(xiàn)表達(dá)于睪丸組織中的生物鐘基因是Per1，之后Per2、Per3、Cry1、Cry2、Bmal1和Clock的表達(dá)也相繼被發(fā)現(xiàn)和證明[17]。然而，這些基因在睪丸中的表達(dá)是否具有節(jié)律性一直存在廣泛的爭(zhēng)議。Zylka等[18]研究表明，Per2低表達(dá)于小鼠睪丸中，但Per1和Per3的表達(dá)具有明顯的節(jié)律性。之后，Yamamoto等[19]研究發(fā)現(xiàn)，雖然大部分生物鐘基因(Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、Clock)在睪丸組織中未表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性表達(dá)，但部分生物鐘基因(Bmal1、Rev-erbα、Dbp)的表達(dá)存在一定的節(jié)律性變化。此外，Bebas等[20]研究發(fā)現(xiàn)Per1、Per2和Bmal1在小鼠睪丸組織中的表達(dá)也具有節(jié)律性，而且值得注意的是：Bmal1和Per的表達(dá)時(shí)相一致。Meyer等[21]在不同品系倉(cāng)鼠睪丸中檢測(cè)到了Bmal1、Per1、Per2、Clock、Cry1和Cry2的節(jié)律性表達(dá)。Tong等[22]在敘利亞倉(cāng)鼠睪丸中，檢測(cè)到了Per1的節(jié)律性表達(dá)，Bmal1基因的表達(dá)并沒(méi)有明顯的節(jié)律性。然而，將倉(cāng)鼠長(zhǎng)期置于黑暗環(huán)境中則可檢測(cè)到Bmal1基因明顯的節(jié)律性表達(dá)。與之相反，Morse等[23]發(fā)現(xiàn)Per1與Bmal1在睪丸中不具有節(jié)律性。Alvarez等[24]研究表明，雖然睪丸組織可檢測(cè)到生物鐘基因Bmal1、Per1、Per2、Clock、Cry1和Npas2的表達(dá)，但是這些基因也不具有節(jié)律性。此外，Mazzoccoli等[25]與Chen等[26]的研究也并未發(fā)現(xiàn)生物鐘基因在睪丸組織中的節(jié)律性表達(dá)。綜上所述，雖然生物鐘基因表達(dá)于睪丸組織中，但因種屬差異、睪丸細(xì)胞種類的復(fù)雜性抑或檢測(cè)方法的靈敏性差異等，研究結(jié)果表明生物鐘基因在睪丸組織中的表達(dá)變化規(guī)律存在明顯的差別。

3 睪丸生物鐘的生理功能

生物鐘基因在睪丸組織中的廣泛表達(dá)提示其在雄性生殖過(guò)程中扮演著重要的角色。生物鐘基因敲除小鼠模型的建立為研究生物鐘在雄性生殖過(guò)程中的作用機(jī)制提供了重要手段。研究表明，Bmal1基因敲除小鼠表現(xiàn)出不育癥狀，而Clock基因的突變與Rev-erbα基因的敲除均會(huì)導(dǎo)致小鼠繁殖力的下降，表明生物鐘基因?qū)Υ菩蹌?dòng)物生殖功能的穩(wěn)態(tài)維持具有關(guān)鍵調(diào)控作用[27-30]。

睪丸由間質(zhì)細(xì)胞、支持細(xì)胞、管周肌細(xì)胞和各級(jí)生殖細(xì)胞等多種類型的細(xì)胞組成。睪丸間質(zhì)細(xì)胞分泌睪酮，睪酮的分泌受下丘腦-垂體-睪丸性腺軸的調(diào)節(jié)。已有證據(jù)表明多種哺乳動(dòng)物血清睪酮含量存在24 h周期性節(jié)律變化，哺乳動(dòng)物生物鐘調(diào)控睪酮的合成[27, 31-33]。Alvarez等[27]研究發(fā)現(xiàn)，BMAL1蛋白在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中的表達(dá)具有明顯的節(jié)律性。之后，生物鐘基因Bmal1、Per1、Per2、Per3、Cry1、Cry2、Rorb、Rev-erbα與Rev-erbβ在睪丸間質(zhì)細(xì)胞中表達(dá)的節(jié)律性也被相繼發(fā)現(xiàn)，并伴有睪酮合成相關(guān)基因細(xì)胞色素P450膽固醇側(cè)鏈裂解蛋白酶(cytochrome P450 family 11 subfamily A member 1，Cyp11a1)、3β-羥基類固醇脫氫酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase 2，Hsd3b2)、類固醇激素合成急性調(diào)節(jié)蛋白(steroidogenic acute regulatory protein，StAR)與細(xì)胞色素P45017A1(cytochrome P450 steroid 17-α-monooxygenase，Cyp17a1)的節(jié)律性表達(dá)[26, 34-39]，提示生物鐘在睪丸間質(zhì)細(xì)胞睪酮合成過(guò)程中扮演著重要角色。此外，還有研究表明Bmal1基因敲除雄性小鼠睪酮水平降低，且睪酮合成相關(guān)基因StAR、3β-HSD、Cyp17a1與17β-羥基類固醇脫氫酶(17β-hydroxysteroid dehydrogenase，17β-HSD)的表達(dá)顯著下調(diào)，并伴有睪丸精囊縮小，曲細(xì)精管直徑縮減，精子密度顯著下降，并表現(xiàn)出不育等癥狀[27]。另外，Per2KO小鼠與Per1/Per2dKO小鼠也表現(xiàn)出StAR表達(dá)水平的降低。進(jìn)一步體外試驗(yàn)表明，BMAL1可直接調(diào)控StAR的轉(zhuǎn)錄[27]。山羊睪丸間質(zhì)細(xì)胞過(guò)表達(dá)BAML1可顯著促進(jìn)StAR和HSD17B3的轉(zhuǎn)錄，BMAL1基因敲減導(dǎo)致睪酮合成關(guān)鍵基因表達(dá)下降及睪酮分泌減少[37]。此外，還有研究指出，BMAL1的缺失可促進(jìn)小鼠TM3睪丸間質(zhì)細(xì)胞的凋亡[40]。綜上所述，生物鐘系統(tǒng)可通過(guò)多種途徑參與調(diào)控睪酮的合成。

在生物鐘調(diào)控精子發(fā)生研究領(lǐng)域，多項(xiàng)研究表明生物鐘基因表達(dá)于各級(jí)生殖細(xì)胞中。Morse等[23]發(fā)現(xiàn)Per1主要定位于精子細(xì)胞，Clock富集于精原細(xì)胞和粗線期精母細(xì)胞。Alvarez等[24]研究表明，Per1表達(dá)于精原細(xì)胞和精子細(xì)胞，Clock主要表達(dá)于圓形精子的頂體中。且有研究表明，通過(guò)向睪丸直接注射Clock干擾質(zhì)粒，Clock基因表達(dá)的下調(diào)可致精子體外受精能力和頂體酶活性顯著降低[41]。Cry1基因?qū)ΣG丸功能的維持也具有至關(guān)重要的作用，Cry1基因敲除將會(huì)導(dǎo)致小鼠睪丸免疫反應(yīng)相關(guān)基因表達(dá)發(fā)生改變，并促進(jìn)精子細(xì)胞的凋亡，然而睪酮合成水平與WT小鼠無(wú)顯著差異[42]。

此外，還有研究表明，在哺乳動(dòng)物中，生物鐘相關(guān)基因Per1和Bmal1在生殖管道(附睪、輸精管與儲(chǔ)精囊)與前列腺中的表達(dá)均具有節(jié)律性，且液泡膜H+-ATP酶(Vacuolar-type H+-ATPase，V-ATPase)與碳酸酐酶(Carbonic Anhydrase，CA)表達(dá)也表現(xiàn)出明顯的節(jié)律性[20]。V-ATPase和CA-II對(duì)哺乳動(dòng)物生殖管道中離子穩(wěn)態(tài)的建立具有重要作用。CA-II與V-ATPase在生殖管上皮的表達(dá)表明，它參與質(zhì)子分泌和精子對(duì)碳酸氫鹽的再吸收過(guò)程，且兩者都可使精液保持較低pH值。生殖管道中精液的酸化可抑制精子的游動(dòng)，同時(shí)為精子成熟和防止過(guò)早的頂體酶激活創(chuàng)造適當(dāng)環(huán)境[20]。因此，生物鐘系統(tǒng)也參與調(diào)控精子的成熟過(guò)程。

在睪丸內(nèi)，睪酮與雄激素結(jié)合蛋白相互作用，對(duì)生精小管內(nèi)雄激素水平及生精細(xì)胞增殖和發(fā)育發(fā)揮著重要的調(diào)節(jié)作用[43]。睪酮的分泌與合成同樣對(duì)雄性動(dòng)物生殖器官發(fā)育、副性腺發(fā)育以及維持精子發(fā)生至關(guān)重要[44]。在胚胎時(shí)期低睪酮水平理論上勢(shì)必會(huì)造成雄性小鼠生殖器官發(fā)育與分化的受阻，從而造成其性無(wú)能。然而雄性Bmal1-/-小鼠的精子卻具有一定的活力，可以實(shí)現(xiàn)獲能并且能夠在體外使卵子受精，甚至存在雄性Bmal1-/-小鼠成功與雌性WT小鼠交配并產(chǎn)下幼仔的案例[17]。這可能與Bmal1的缺失并不會(huì)導(dǎo)致睪酮合成完全受阻有關(guān)[45]。

4 睪丸生物鐘影響因素

衰老與生物節(jié)律的調(diào)控失衡之間存在著密切關(guān)系。在小鼠和人體內(nèi)，隨著衰老的進(jìn)行，生物鐘基因表達(dá)水平都存在下降現(xiàn)象，并且近日節(jié)律的相位前移。有研究認(rèn)為這主要與在衰老過(guò)程中SCN內(nèi)的神經(jīng)細(xì)胞數(shù)量降低以及神經(jīng)信號(hào)強(qiáng)度的減弱有關(guān)[46-47]。在向衰老動(dòng)物體內(nèi)移植胎兒SCN后，各種生物鐘基因的表達(dá)水平恢復(fù)正常[48]。此外，向衰老倉(cāng)鼠體內(nèi)移植新生倉(cāng)鼠的SCN后，衰老倉(cāng)鼠恢復(fù)了近日節(jié)律，并且延長(zhǎng)了壽命[49-50]。

進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)分泌節(jié)律隨著衰老而減弱，衰老造成了睪酮振蕩幅度的下降。除了減少睪酮分泌外，衰老還降低了Insl3的表達(dá)，Insl3是睪丸間質(zhì)細(xì)胞功能的另一個(gè)重要標(biāo)志物。睪酮產(chǎn)生的減少以及Insl3表達(dá)的降低反映了老年睪丸間質(zhì)細(xì)胞的功能障礙。但未檢測(cè)到能夠?qū)ΣG酮和Insl3進(jìn)行正調(diào)控的黃體生成素表達(dá)水平的下降，其表達(dá)水平的節(jié)律振蕩亦沒(méi)有受到影響[34]。此外，衰老也減弱了睪丸間質(zhì)細(xì)胞中類固醇生成相關(guān)基因的節(jié)律表達(dá)和生物鐘基因的節(jié)律表達(dá)[51]。再者，有證據(jù)表明BMAL1對(duì)氧化應(yīng)激和DNA損傷的調(diào)節(jié)反應(yīng)相當(dāng)重要，而B(niǎo)MAL1缺乏時(shí)誘導(dǎo)的機(jī)體失調(diào)導(dǎo)致體內(nèi)應(yīng)激反應(yīng)加劇衰老進(jìn)程[52]。還有研究指出，在衰老小鼠睪丸中，衰老引起的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可通過(guò)調(diào)控小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞的生物鐘進(jìn)而影響睪酮的合成[38]。

除了衰老引起的氧化應(yīng)激和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激可調(diào)節(jié)睪丸生物鐘之外，還有研究指出束縛應(yīng)激(Immobilization stress)也可影響睪丸生物鐘的維持。Medar等[53]研究發(fā)現(xiàn)，應(yīng)激不僅可導(dǎo)致與類固醇生成相關(guān)的基因(Lhcgr，Nr3c1，Cyp11a1，Cyp17a1，Hsd3b1/2)在非活動(dòng)(輕度)階段下調(diào)，降低睪酮水平，還可促進(jìn)生物鐘基因(Bmal1，Per1/2和Rev-erba)的表達(dá)。進(jìn)一步研究表明，應(yīng)激可導(dǎo)致糖皮質(zhì)激素上升，且糖皮質(zhì)激素處理的大鼠表現(xiàn)出與束縛應(yīng)激相似的反應(yīng)，也可促進(jìn)生物鐘基因(Rev-erbα/β，Cry1/2，Per1/2)的表達(dá)，表明束縛應(yīng)激可通過(guò)誘導(dǎo)糖皮質(zhì)激素的表達(dá)參與調(diào)節(jié)睪丸生物鐘的維持[53]。

此外，一些化學(xué)物質(zhì)也可以影響睪丸生物鐘系統(tǒng)的運(yùn)轉(zhuǎn)。有研究表明氰戊菊酯殺蟲(chóng)劑(Fenvalerate, Fen)會(huì)造成小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)生物鐘相關(guān)基因(Bmal1、Rev-erbα、Rorα)的表達(dá)節(jié)律異常，并存在Ca2+的水平上升以及StAR基因mRNA的表達(dá)變化，提示Fen可通過(guò)影響小鼠睪丸間質(zhì)細(xì)胞內(nèi)的Ca2+水平與生物鐘相關(guān)基因以及類固醇合成關(guān)鍵基因StAR的表達(dá)抑制睪酮合成[54-55]。近期研究發(fā)現(xiàn)，環(huán)境內(nèi)分泌干擾物雙酚A(Bisphenol A，BPA)可顯著抑制生物鐘系統(tǒng)負(fù)反饋因子Nr1d1的表達(dá)，影響睪丸及睪丸間質(zhì)細(xì)胞的生物鐘，進(jìn)而引起睪酮合成相關(guān)通路關(guān)鍵酶基因表達(dá)水平的下降，造成睪酮含量的降低[56]。此外，進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，霉菌毒素赤霉烯酮(Zearalenone，ZEA)可通過(guò)抑制間質(zhì)細(xì)胞生物鐘基因(Bmal1、Dbp、Per2和Nr1d1)及類固醇基因(StAR、Hsd3b2和Cyp11a1)的表達(dá)進(jìn)而降低睪酮的合成和分泌，導(dǎo)致雄性小鼠的生殖障礙[57]。

5 結(jié)語(yǔ)

越來(lái)越多的研究表明睪丸生物鐘在調(diào)控生殖生理、生殖內(nèi)分泌與代謝等方面起著至關(guān)重要的作用。生物節(jié)律的紊亂會(huì)誘導(dǎo)包括生殖障礙在內(nèi)的各種疾病的發(fā)生。睪丸生物鐘調(diào)控睪酮合成及精子發(fā)生，繼而影響雄性生殖力。衰老及有害化學(xué)物質(zhì)都會(huì)對(duì)睪丸生物鐘產(chǎn)生極不利的影響，通過(guò)降低睪酮的合成進(jìn)一步影響雄性生殖力。然而，當(dāng)前研究大多聚焦于生物鐘系統(tǒng)對(duì)睪酮合成及精子發(fā)生的影響，對(duì)睪丸生物鐘維持的內(nèi)在機(jī)制及其對(duì)其他生殖輔助細(xì)胞如支持細(xì)胞等生理功能調(diào)控的研究還較少。此外，睪丸功能及精子發(fā)生具有時(shí)空特異性，現(xiàn)有的研究缺乏生物鐘對(duì)睪丸與精子特定發(fā)育時(shí)期功能的影響，而組織特異性及條件性敲除小鼠模型的構(gòu)建，將為研究生物鐘系統(tǒng)在睪丸組織中的功能及調(diào)控機(jī)制提供重要研究手段。如何通過(guò)調(diào)控睪丸生物鐘提高睪酮水平及精子活力，高效發(fā)揮雄性種畜生殖潛力，已經(jīng)成為時(shí)間生物學(xué)與生殖生理學(xué)學(xué)科的一個(gè)交叉研究方向，有待于進(jìn)一步深入研究。