基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及分子對(duì)接探討安度更年丸治療圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制*

崔晨輝，杜巧婷，劉令令

1.河南中醫(yī)藥大學(xué)，河南 鄭州 450046； 2.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院，河南 鄭州 450000

圍絕經(jīng)期綜合征(perimenopausal syndrome，PMS)是指處于絕經(jīng)前后的女性因卵巢功能衰退引起的雌激素水平波動(dòng)或下降，從而出現(xiàn)一系列心理及生理變化，主要癥狀有月經(jīng)紊亂、潮熱、盜汗、頭痛頭暈、心悸、易怒、焦慮不安或情緒低落等。調(diào)查顯示，84%的婦女至少經(jīng)歷一種典型的PMS癥狀，約20%的婦女因其癥狀需要就診[1]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)大多采用激素補(bǔ)充療法有效緩解更年期癥狀，但也容易引起多種不良反應(yīng)，包括陰道流血、乳房脹痛等癥狀，還會(huì)增加乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等疾病的發(fā)病率。現(xiàn)有研究表明，中藥復(fù)方及中成藥能夠有效緩解PMS癥狀，且不良反應(yīng)較少[2]。

中醫(yī)古籍無PMS相關(guān)記載，根據(jù)其臨床表現(xiàn)可歸于“年老血崩”“臟躁”“百合病”等[3]，后來將其稱之為“絕經(jīng)前后諸癥”?！端貑枴ど瞎盘煺嬲摗吩疲骸芭印咂呷蚊}虛，太沖脈衰少，天癸竭。地道不通，故形壞而無子也?！笨梢娔I虛是本病的發(fā)病基礎(chǔ)，主要病機(jī)是腎陰陽失調(diào)，還涉及心、肝、脾等臟腑[4]，治療上應(yīng)著重調(diào)和陰陽、滋補(bǔ)肝腎。安度更年丸為河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科的臨床經(jīng)驗(yàn)方，適用于各類虛證的圍絕經(jīng)期綜合征女性，由制何首烏、酒萸肉、鹽菟絲子、覆盆子、鹽補(bǔ)骨脂、茯苓、當(dāng)歸、牛膝、葛根九味中藥組成，此丸為中成藥劑，相比中藥復(fù)方更易攜帶保存，不需要煎煮，方便經(jīng)濟(jì)，臨床治療圍絕經(jīng)期綜合征效果較好，但是其治療機(jī)制尚不明確，需要進(jìn)一步的研究和開發(fā)。

1 資料與方法

1.1 安度更年丸活性成分及作用靶點(diǎn)的搜集在中藥系統(tǒng)藥理學(xué)數(shù)據(jù)庫與分析平臺(tái)(traditional Chinese medicine systemspharmacology database and analysis platform，TCMSP)和BATMAN-TCM 數(shù)據(jù)庫(http：//bionet.ncpsb.org/bat man-tcm/)獲取安度更年丸9味中藥的化學(xué)成分，并根據(jù)口服生物利用度(oral bio-availability，OB)≥30%，類藥性(drug likeness，DL)≥0.18，半衰期(half-life，HL)≥4為條件進(jìn)行篩選，獲得安度更年丸9味中藥的活性成分。通過TCMSP數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步預(yù)測(cè)活性成分的相關(guān)靶點(diǎn)。由于TCMSP中未收集何首烏和補(bǔ)骨脂相關(guān)信息，在BATMAN-TCM 數(shù)據(jù)庫中以“He Shou Wu”(何首烏)、“Bu Gu Zhi”(補(bǔ)骨脂)為檢索詞，以“Herb”為輸入格式，檢索Score Cutoff設(shè)置為20，以P<0.05為有效靶點(diǎn)預(yù)測(cè)置信區(qū)間，檢索獲得何首烏和補(bǔ)骨脂的活性成分及其作用靶點(diǎn)。通過Uniprot數(shù)據(jù)庫(https//www.uniprot.org/)將藥物靶點(diǎn)名稱統(tǒng)一，最終得到安度更年丸的活性成分和作用靶點(diǎn)。

1.2 疾病靶點(diǎn)的獲取以“Perimenopausal Syndrome”“Climacteric Syndrome”“PMS”為關(guān)鍵詞，設(shè)定物種為“Homo Sapiens”，通過GeneCards數(shù)據(jù)庫(https：//www.genecards.org/)和Drugbank數(shù)據(jù)庫(https：//go.drugbank.com/)進(jìn)行疾病靶點(diǎn)的檢索，并將兩個(gè)數(shù)據(jù)庫所得的靶點(diǎn)進(jìn)行匯總。

1.3 安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)的獲取及 “安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-PMS”網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建利用韋恩圖制作平臺(tái)(http：//bioinformatics.psb.ugent.be/webtools/Venn/)制作Venny圖，得到PMS疾病靶點(diǎn)與安度更年丸活性成分相關(guān)靶點(diǎn)的共同靶點(diǎn)，即為安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)。將潛在靶點(diǎn)及其對(duì)應(yīng)的活性成分、中藥及疾病輸入Cytoscape3.7.2軟件，構(gòu)建“安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)圖，節(jié)點(diǎn)表示疾病、藥物、有效成分和潛在靶點(diǎn)，邊表示其之間的相互關(guān)系。用Network Analyzer進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治觯瑓⒖纪負(fù)鋵W(xué)參數(shù)對(duì)比成分及靶點(diǎn)在網(wǎng)絡(luò)中的重要性，參數(shù)包括節(jié)點(diǎn)介數(shù)中心性、接近中心性和度值等，獲得主要活性成分及核心靶點(diǎn)。

1.4 蛋白相互作用(protein-protein interaction，PPI)網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建將安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING網(wǎng)站(https：//string-db.org/)，設(shè)定物種為“Homo Sapiens”，其余參數(shù)設(shè)為默認(rèn)，分析后獲得蛋白相互作用網(wǎng)絡(luò)，將所得網(wǎng)絡(luò)導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化。

1.5 基因本體(gene ontology，GO)功能富集分析和京都基因與基因組百科全書(Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG)信號(hào)通路富集分析將安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入DAVID數(shù)據(jù)庫功能注釋工具Version 6.8(https：//david.ncifcrf.gov/)，物種選擇“Homo Sapiens”，依次進(jìn)行GO功能富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析，設(shè)定P<0.05以確定關(guān)鍵富集通路。使用GraphPad Prism 8.0軟件繪制GO功能富集分析結(jié)果中的生物學(xué)過程(biological process，BP)、分子功能(molecular function，MF)、細(xì)胞組分(cellular component，CC)分析圖。借助微生信數(shù)據(jù)分析和可視化在線平臺(tái)進(jìn)行可視化處理，繪制KEGG富集分析圖。

1.6 關(guān)鍵成分-靶點(diǎn)分子對(duì)接在Pubchem數(shù)據(jù)庫(https：//pubchem.nc-bi.nlm.nih.gov/)中下載小分子3D結(jié)構(gòu)，保存sdf格式，導(dǎo)入OpenBabel-2.4.1軟件轉(zhuǎn)化為pdb格式。從PDB數(shù)據(jù)庫中下載蛋白大分子結(jié)構(gòu)，保存pbd格式。利用Autodock Tools 1.5.6軟件刪除水分子、加氫及加電荷，將兩者保存為pdbqt格式。將小分子關(guān)鍵成分與靶點(diǎn)蛋白大分子結(jié)構(gòu)利用Autodock Tools 1.5.6軟件進(jìn)行對(duì)接，最后用PyMol 2.4軟件實(shí)現(xiàn)對(duì)接結(jié)果可視化，建立對(duì)接相互作用模式圖。

2 結(jié)果

2.1 安度更年丸活性成分及作用靶點(diǎn)以O(shè)B≥30%，DL≥0.18及HL≥4為篩選條件通過TCMSP數(shù)據(jù)庫篩選出七味中藥(酒萸肉、菟絲子、覆盆子、茯苓、當(dāng)歸、牛膝、葛根)活性成分76個(gè)，其中4個(gè)成分A1(β-谷甾醇)、B1(山柰酚)、C1(槲皮素)、D1(豆甾醇)是兩種及以上中藥的共有成分。通過TCMSP數(shù)據(jù)庫進(jìn)一步預(yù)測(cè)活性成分相關(guān)靶點(diǎn)發(fā)現(xiàn)，有22個(gè)活性成分無相關(guān)靶點(diǎn)，將其刪除后得到54個(gè)活性成分及1 339個(gè)靶點(diǎn)。在BATMAN-TCM數(shù)據(jù)庫中獲得何首烏和補(bǔ)骨脂活性成分29個(gè)，靶點(diǎn)630個(gè)。將活性成分和相關(guān)靶點(diǎn)合并后最終篩選得到安度更年丸有效化學(xué)成分為83個(gè)，相關(guān)靶點(diǎn)586個(gè)。見表1。

表1 安度更年丸部分活性成分信息表

2.2 疾病靶點(diǎn)的獲取以“Perimenopausal Syndrome”“Climacteric Syndrome”“PMS”為關(guān)鍵詞在GeneCards數(shù)據(jù)庫和Drugbank數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，將兩個(gè)數(shù)據(jù)庫得到的靶點(diǎn)匯總，合并重復(fù)靶點(diǎn)，最終得到215個(gè)PMS疾病靶點(diǎn)。

2.3 安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)及 “安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-PMS”網(wǎng)絡(luò)將安度更年丸活性成分靶點(diǎn)與PMS疾病靶點(diǎn)導(dǎo)入韋恩圖制作平臺(tái)繪制venny圖，得到71個(gè)共同靶點(diǎn)，即為安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)。利用Cytoscape3.7.2軟件構(gòu)建“安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-PMS”網(wǎng)絡(luò)，該網(wǎng)絡(luò)由131個(gè)節(jié)點(diǎn)(9味中藥、50個(gè)活性成分、71個(gè)靶點(diǎn)和1種疾病)和475條邊組成。其中HSW為何首烏的活性成分，NX為牛膝的活性成分，BGZ為補(bǔ)骨脂的活性成分，TSZ為菟絲子的活性成分，JYR為酒萸肉的活性成分，F(xiàn)L為茯苓的活性成分，GG為葛根的活性成分，PPZ為覆盆子的活性成分，DG為當(dāng)歸的活性成分。A1、B1、C1、D1表示兩種及以上的中藥共有成分。綠色節(jié)點(diǎn)代表共同靶點(diǎn)。經(jīng)網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治龊?，僅列出Degree值排名前十位的活性成分與靶點(diǎn)。見圖1，圖2及表2。

圖1 安度更年丸活性成分靶點(diǎn)與PMS疾病靶點(diǎn)韋恩圖

圖2 “安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-PMS”網(wǎng)絡(luò)

表2 “安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-PMS”網(wǎng)絡(luò)主要成分及靶點(diǎn)

2.4 PPI網(wǎng)絡(luò)將安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)導(dǎo)入STRING(https：//string-db.org/)獲得PPI網(wǎng)絡(luò)，將其導(dǎo)入Cytoscape3.7.2軟件進(jìn)行可視化。每個(gè)節(jié)點(diǎn)代表1個(gè)靶點(diǎn)，節(jié)點(diǎn)顏色由淺至深對(duì)應(yīng)度值由小至大，邊代表連接的2個(gè)蛋白有相互作用關(guān)系，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，該網(wǎng)絡(luò)共有69個(gè)靶蛋白之間存在相互作用關(guān)系，其中花生四烯酸12脂氧合酶(arachidonate 12-lipoxygenase，ALOX12)和端粒酶蛋白組分1(telomerase protein component 1，TEP1)未參與蛋白互作，通過Network Analyzer插件進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治鲲@示，PPI網(wǎng)絡(luò)平均度值為23.38，平均介數(shù)為1.07×10-2，度值、介數(shù)均在平均值以上的靶蛋白共17個(gè)，提示這17個(gè)靶點(diǎn)可能是安度更年丸治療PMS的關(guān)鍵靶點(diǎn)。見表3，圖3。

表3 PPI網(wǎng)絡(luò)中17個(gè)關(guān)鍵靶點(diǎn)信息表

圖3 PPI網(wǎng)絡(luò)

2.5 GO富集分析和KEGG信號(hào)通路富集分析對(duì)安度更年丸治療PMS的潛在靶點(diǎn)進(jìn)行GO生物功能注釋，獲得GO條目578個(gè)(P<0.05)，包括433個(gè)BP條目，60個(gè)MF條目，42個(gè)CC條目，根據(jù)Count值選取各自排名前十的條目繪制條形圖，其中生物過程包括藥物反應(yīng)(response to drug)、信號(hào)傳導(dǎo)(signal transduction)、細(xì)胞因子介導(dǎo)的信號(hào)通路(cytokine-mediated signaling pathway)、基因表達(dá)的正向調(diào)節(jié)(cytokine-mediated signaling pathway)等；分子功能包括RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄因子活性(RNA polymerase II transcription factor activity)、RNA聚合酶II核心啟動(dòng)子近端區(qū)域(RNA polymerase II core promoter proximal region)、DNA結(jié)合(DNA binding)、相同蛋白結(jié)合(identical protein binding)等；細(xì)胞組成包括細(xì)胞內(nèi)面上細(xì)胞器(intracellular membrane-bounded organelle)、細(xì)胞表面(cell surface)、染色質(zhì)(chromatin)、質(zhì)膜(plasma membrane)等，見圖4。KEGG信號(hào)通路分析共富集到100個(gè)條目(P<0.05)，按Count值排序，篩選排名靠前的20個(gè)條目用微生信進(jìn)行可視化，繪制氣泡圖，主要集中在癌癥中的通路、晚期糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycosylation end products，AGEs)-糖基化終末產(chǎn)物受體(receptor of AGEs，RAGE)信號(hào)通路、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B，PI3K/Akt)、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、低氧誘導(dǎo)因子-1 (hypoxia-induceibal factor-1，HIF-1)信號(hào)通路及叉頭框蛋白O(forkhead box O，F(xiàn)oxO)信號(hào)通路等。見圖5。

圖4 GO富集分析

圖5 KEGG信號(hào)通路富集分析

2.6 關(guān)鍵成分-靶點(diǎn)分子對(duì)接將蛋白互作網(wǎng)絡(luò)中的前6個(gè)重要靶點(diǎn)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(vascular endothelial growth factor A，VEGFA)、白細(xì)胞介素-1β(interleukin-1 beta，IL-1β)、細(xì)胞腫瘤抗原p53(cellular tumor antigen p53，TP53)、雌激素受體(estrogen receptor，ESR1)、過氧化物酶體增殖物活化受體γ(peroxisome proliferator-activated receptor gamma，PPARG)、胰島素樣生長(zhǎng)因子1(insulin-like growth factor I，IGF1)與藥物中對(duì)應(yīng)的活性成分進(jìn)行對(duì)接，結(jié)果顯示，上述靶蛋白與化合物結(jié)合能均小于-5 kcal·mol-1，說明其結(jié)合活性良好，見表4。選取5個(gè)結(jié)合能較好的“靶點(diǎn)蛋白-活性分子”繪制對(duì)接模式圖。見圖6。

表4 安度更年丸關(guān)鍵活性成分與關(guān)鍵靶點(diǎn)對(duì)接的結(jié)合能

圖6 分子對(duì)接模式圖

3 討論

圍絕經(jīng)期綜合征是因女性卵巢功能衰退、性激素波動(dòng)或減少所致，主要表現(xiàn)為潮熱、盜汗、情緒不穩(wěn)定等，還易發(fā)生骨質(zhì)疏松、高血壓、心血管疾病、腫瘤及糖脂代謝紊亂等。目前，臨床治療主要為激素藥物治療，配合心理療法等多種形式，雖然具有一定的療效，但激素藥物的不良反應(yīng)會(huì)影響治療效果，導(dǎo)致患者出現(xiàn)其他并發(fā)癥[5-6]。安度更年丸主要運(yùn)用于以虛證為主的PMS，制何首烏為補(bǔ)血藥，益精血、補(bǔ)肝腎；菟絲子補(bǔ)腎固精，養(yǎng)肝明目，為平補(bǔ)陰陽之品，是PMS的常用藥；酒萸肉補(bǔ)肝益腎，有澀精斂汗之功；覆盆子主要功效為益腎固精、養(yǎng)肝明目；補(bǔ)骨脂延年益壽，悅心明目，添補(bǔ)筋骨；當(dāng)歸活血養(yǎng)血，配茯苓利水滲濕，起健脾安神功效，淡滲平補(bǔ)之用；牛膝可補(bǔ)肝腎、強(qiáng)筋骨，具有補(bǔ)益抗衰老作用；葛根具有除煩止渴之功效，其成分可明顯降低血清膽固醇，以上各藥相伍，共奏滋陰養(yǎng)血，寧心安神之效[7]。

網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治霭l(fā)現(xiàn)，作用于PMS的可能關(guān)鍵成分有槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、漢黃芩素、山柰酚、芒柄花黃素等，涉及黃酮類及植物甾醇類兩大類活性成分。槲皮素為黃酮醇類化合物，其具有抗腫瘤、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種藥理活性[8]，多項(xiàng)研究證明槲皮素可以通過抗氧化應(yīng)激、抗炎等對(duì)神經(jīng)系統(tǒng)和肝腎起保護(hù)作用[9]。β-谷甾醇是一種植物甾醇，有抗氧化、抗炎、降血糖、免疫調(diào)節(jié)等作用，已有研究證明，β-谷甾醇具有促進(jìn)大鼠細(xì)胞成骨分化的作用，可能通過調(diào)節(jié)B淋巴細(xì)胞瘤-2基因來抑制骨質(zhì)疏松[10]。豆甾醇和β-谷甾醇對(duì)于降血糖具有協(xié)同作用，豆甾醇可防止糖脂毒性誘導(dǎo)的胰島素分泌缺陷[11]，預(yù)防女性圍絕經(jīng)期并發(fā)糖脂代謝紊亂。漢黃芩素為黃酮類化合物，研究顯示其有一定的抗腫瘤效果，可能是通過同源性磷酸酶-張力蛋白發(fā)揮調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞增殖和凋亡的作用[12]。山柰酚通過誘導(dǎo)IL-1β、腫瘤壞死因子-α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)和IL-8等炎癥介質(zhì)發(fā)揮抗炎和抗癌作用[13]，結(jié)合ESR1、AR受體發(fā)揮雌激素樣保護(hù)作用，影響雌激素調(diào)節(jié)的生物過程。芒柄花黃素與雌二醇具有相似的空間結(jié)構(gòu)，可通過抑制由雌激素受體介導(dǎo)的骨吸收來防止骨質(zhì)流失，還可通過增多成骨細(xì)胞來促進(jìn)骨的形成[14]。

安度更年丸活性成分與PMS有71個(gè)共同靶點(diǎn)，結(jié)合PPI網(wǎng)絡(luò)和“安度更年丸-活性成分-潛在靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)分析預(yù)測(cè)關(guān)鍵靶點(diǎn)有VEGFA、ESR1、PPARG、PGR、AR、IL-1β、TP53、IGF1等，這些靶點(diǎn)共同參與神經(jīng)系統(tǒng)、內(nèi)分泌系統(tǒng)、免疫系統(tǒng)等發(fā)揮治療PMS的作用。VEGFA屬于VEGF類生長(zhǎng)因子，有增加血管通透性、促進(jìn)細(xì)胞外基質(zhì)變性及血管形成等作用[15]，可影響子宮內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞新生血管的形成[16]。PPARG基因定位于3號(hào)染色體短臂2區(qū)5帶(3p25)，屬于轉(zhuǎn)錄因子的核激素受體超家族，在調(diào)節(jié)胰島素靈敏性、脂肪細(xì)胞分化及脂肪細(xì)胞特異基因的表達(dá)方面起重要作用[17-18]。IGF1通過與相應(yīng)受體結(jié)合，激活下游信號(hào)通路，促進(jìn)腫瘤的發(fā)生和發(fā)展，還可以通過影響宮頸上皮細(xì)胞的增殖而增加患宮頸癌的風(fēng)險(xiǎn)[19]。ESR1、AR、PGR為性激素受體，安度更年丸可能通過參與性激素合成、調(diào)節(jié)激素水平改善圍絕經(jīng)期綜合征。研究證明，大腦內(nèi) 5-羥色氨酸(5-hydroxytryptophan，5-HTP)水平降低是導(dǎo)致情緒異常的主要因素之一[20]，而雌激素可通過降低單胺氧化酶(monoamine oxidase，MAO)的水平使之活性降低，進(jìn)而影響5-HT的代謝使其含量上升，抑制焦慮及抑郁情緒的產(chǎn)生[21]。ESR1可與槲皮素等化合物結(jié)合，參與介導(dǎo)雌激素和發(fā)揮雌激素樣作用來治療PMS[22]。PGR為孕激素受體，與化合物結(jié)合后發(fā)揮孕激素樣生物作用，防止圍絕經(jīng)期女性子宮內(nèi)膜異常增生和癌變[23]。AR為雄激素受體，可阻斷高血壓大鼠雄激素受體表達(dá)而降低雌性大鼠血壓[24]。女性圍絕經(jīng)期患癌的風(fēng)險(xiǎn)較大，關(guān)鍵靶點(diǎn)中也涉及癌癥基因。TP53編碼腫瘤蛋白p53，是一種控制細(xì)胞凋亡和增殖的腫瘤抑制因子，是癌癥預(yù)防中最重要的蛋白之一[25]。IL-1β作為一種促炎細(xì)胞因子，參與多種自身免疫性炎癥反應(yīng)和細(xì)胞活動(dòng)，包括細(xì)胞增殖、分化和凋亡[26]。同時(shí)IL-1β參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展，抑制IL-1β過度表達(dá)可預(yù)防腫瘤的侵襲，防止腫瘤的發(fā)生。

富集分析結(jié)果顯示，安度更年丸治療PMS可能與癌癥信號(hào)通路、AGE-RAGE信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路、化學(xué)致癌作用-活性氧、脂質(zhì)和動(dòng)脈粥樣硬化、HIF-1信號(hào)通路、FoxO信號(hào)通路、MAPK信號(hào)通路等途徑相關(guān)。圍絕經(jīng)期激素水平改變會(huì)導(dǎo)致胰島素敏感性降低，引起胰島素抵抗。當(dāng)發(fā)生胰島素抵抗時(shí)，產(chǎn)生的糖基化終末產(chǎn)物(advanced glycosylation end products，AGE)可與RAGE結(jié)合形成AGE-RAGE，并激活信號(hào)傳導(dǎo)通路(AGEs-RAGE信號(hào)通路)，參與氧化應(yīng)激、炎癥和細(xì)胞凋亡等過程[27]，因此，通過調(diào)控AGEs-RAGE信號(hào)通路可減輕胰島素抵抗。PI3K/Akt信號(hào)通路涉及細(xì)胞增殖和生長(zhǎng)、血管生成和凋亡[28]，激活PI3K/Akt信號(hào)通路，可通過控制凋亡相關(guān)基因與蛋白的表達(dá)降低卵巢細(xì)胞凋亡程度，延緩卵巢功能下降。研究顯示，PI3K/Akt信號(hào)通路還對(duì)骨骼肌纖維的生長(zhǎng)發(fā)育具有調(diào)控作用[29]。FoxO信號(hào)通路為PI3K/Akt通路下游眾多通路中的一條，相關(guān)研究發(fā)現(xiàn)，PI3K/Akt通路激活后，F(xiàn)oxO3a磷酸化失活，導(dǎo)致FOXO3a持續(xù)表達(dá)，卵巢細(xì)胞發(fā)育遲緩，會(huì)加速卵巢纖維化、髓質(zhì)破壞和卵巢萎縮[30-31]。MAPK信號(hào)通路在卵巢顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育、成熟過程中有重要的調(diào)控作用[32]。研究發(fā)現(xiàn)，通過調(diào)控HIF-1信號(hào)通路可促進(jìn)骨形成和血管形成；又可增加破骨細(xì)胞的數(shù)量及破骨活性[33]。此外，PI3K/Akt、MAPK等通路對(duì)其亞基 HIF-1α 蛋白的合成有著重要調(diào)節(jié)作用[34]。其余通路也分別與降低圍絕經(jīng)期心血管病發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)及預(yù)防癌癥發(fā)生相關(guān)。

本研究通過檢索獲得安度更年丸的活性成分83個(gè)，安度更年丸-PMS共同靶點(diǎn)73個(gè)。通過網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析、分子對(duì)接驗(yàn)證及結(jié)合文獻(xiàn)檢索后發(fā)現(xiàn)槲皮素、β-谷甾醇、豆甾醇、漢黃芩素、山柰酚等為安度更年丸的主要活性成分，VEGFA、ESR1、PPARG、PGR、TP53等為主要作用靶點(diǎn)，涉及基因表達(dá)的正向調(diào)節(jié)、對(duì)藥物的結(jié)合反應(yīng)、對(duì)細(xì)胞增殖的正向調(diào)控等生物過程，調(diào)控癌癥信號(hào)通路、AGE-RAGE信號(hào)通路、PI3K/Akt信號(hào)通路等，分子對(duì)接驗(yàn)證了6個(gè)重要靶點(diǎn)VEGFA、IL-1β、TP53、ESR1、PPARG、IGF1與其對(duì)應(yīng)的活性成分結(jié)合均較好。

綜上所述，安度更年丸治療圍絕經(jīng)期綜合征可能通過相關(guān)活性成分、作用靶點(diǎn)及代謝通路進(jìn)而調(diào)節(jié)激素水平、改善胰島素抵抗、減輕心血管病的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn)等方面來實(shí)現(xiàn)的。本研究對(duì)闡明安度更年丸治療圍絕經(jīng)期綜合征的作用機(jī)制具有一定借鑒意義，但所得結(jié)論仍需進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)或臨床驗(yàn)證。