上饒地區(qū)RhD陰性獻(xiàn)血者表型及不規(guī)則抗體鑒定分析

汪全民，萬琳

（江西省上饒市中心血站輸血研究室，上饒 334000）

隨著臨床輸血事業(yè)的不斷發(fā)展，對人類紅細(xì)胞血型系統(tǒng)的認(rèn)識和研究更加深入，發(fā)現(xiàn)Rh血型系統(tǒng)的復(fù)雜性以及對臨床輸血的重要性，ABO血型系統(tǒng)因較少產(chǎn)生不規(guī)則抗A、抗B且同型輸注，對臨床安全輸血困擾較少，而Rh血型系統(tǒng)除D抗原同血型輸注外，對其它有重要臨床意義的抗原（C、c、E、e）未進(jìn)行同型相輸，多次輸注Rh抗原不匹配的血液極易產(chǎn)生不規(guī)則抗體，研究發(fā)現(xiàn)，Rh血型系統(tǒng)中D抗原免疫原性最高，其次為E抗原[1]，抗原抗體不匹配輸血可引起溶血性輸血反應(yīng)[2]。因此，采供血機(jī)構(gòu)檢測獻(xiàn)血者RhC、c、E、e抗原和血型不規(guī)則抗體，對血站合理化儲存稀有血型血液，滿足特殊患者的用血需求有重要現(xiàn)實(shí)意義。為了提高臨床安全輸血，減少患者輸血反應(yīng)，獲取上饒地區(qū)Rh陰性獻(xiàn)血者Rh表型及不規(guī)則抗體的構(gòu)成，本文通過回顧分析近兩年本血站檢驗(yàn)科送檢的初篩RhD陰性獻(xiàn)血者檢測結(jié)果，旨在為臨床安全輸血提供支持和依據(jù)，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 研究對象2020年7月至2021年6月本血站檢驗(yàn)科送檢的初篩RhD陰性標(biāo)本299例，年齡18～60周歲的健康無償獻(xiàn)血者（剔除重復(fù)獻(xiàn)血者）。

1.2 儀器與試劑KA-2200型離心機(jī)（日本Kubota公司）；DHW-600型電熱恒溫水箱（北京國華醫(yī)療器械廠）；抗D（IgG+IgM）試劑（英國Millipore公司）；RhD(IgM)血型定型試劑、抗D(IgG)試劑、單克隆IgM抗血清抗C、抗c、抗E、抗e、抗體篩選紅細(xì)胞、抗體特異性鑒定譜細(xì)胞、多特異性抗人球蛋白試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司）。

1.3 試驗(yàn)方法

1.3.1 Rh(D）陰性確認(rèn)RhD(IgM)血型試劑應(yīng)用梯度板鹽水法篩選獻(xiàn)血者，初篩RhD陰性獻(xiàn)血者使用抗D(IgG)和抗D（IgG+IgM）試劑進(jìn)行Rh(D）陰性確認(rèn)，以排除弱D和部分D，按照試劑說明書的操作要求在試管中滴加抗D試劑1至2滴，再滴加2%～5%的待檢紅細(xì)胞1滳，1000 g離心15秒觀察結(jié)果，如無凝集在37℃恒溫水箱中孵育30分鐘，按間接抗人球蛋白試驗(yàn)（IAT）進(jìn)行測定。

1.3.2 Rh血型抗原檢測 應(yīng)用試管鹽水法，單克隆抗C、抗c、抗E、抗e血清檢測RhD陰性獻(xiàn)血者紅細(xì)胞相應(yīng)抗原，按照試劑說明書操作要求在各試管中分別加入抗血清1滴和2%～5%的被檢者紅細(xì)胞1滴，室溫反應(yīng)10分鐘后，1000 g離心15 s觀察結(jié)果。

1.3.3 抗體篩查及鑒定 參照《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》（第4版）的方法對標(biāo)本進(jìn)行抗體篩查及鑒定[3]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 22.0軟件進(jìn)行分析，男性與女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽性通過四格表檢驗(yàn)進(jìn)行比較分析，P＜0.05差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 初篩檢出299份RhD陰性標(biāo)本經(jīng)Rh(D）陰性確認(rèn)D變異型8份（2.68%），RhD陰性291份。見表1。

2.2 Rh表型檢測情況291份RhD陰性標(biāo)本C、c、E、e抗 原 表 現(xiàn) 型 分 別 是ccdee（50.5%）、Ccdee（36.8%）、CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%）表1。RhD陰性獻(xiàn)血者E、C抗原陽性率見表2。

表1 291份RhD陰性標(biāo)本C、c、E、e抗原表現(xiàn)型分布

表2 RhD陰性獻(xiàn)血者E、C抗原構(gòu)成比

2.3 不規(guī)則抗體鑒定結(jié)果299例RhD陰性標(biāo)本中檢出不規(guī)則抗體8例（2.68%），抗體特異性鑒定結(jié)果見表3。

表3 8例不規(guī)則抗體陽性結(jié)果分布

2.4 男女獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體結(jié)果比較分析P＞0.05性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表4。

表4 獻(xiàn)血者男女不規(guī)則抗體陽性比例結(jié)果分析

2.5 3 例IgG抗-D抗體獻(xiàn)血者調(diào)查隨訪情況（1）獻(xiàn)血者余某，女，53歲，B型Ccee，25年前因手術(shù)輸血一次，有妊娠史，孕有RhD陽性子女2名；（2）獻(xiàn)血者曹某，女，24歲，B型ccee，無輸血史，有妊娠史，孕有RhD陽性子女1名；（3）獻(xiàn)血者劉某，女，55歲，O型ccee，1987年因剖腹產(chǎn)輸血一次，有妊娠史，丈夫血型RhD陽性，孕有小孩一名，RhD血型不詳。

3 討論

臨床輸血是救治患者的重要治療手段，輸血存在一定的風(fēng)險(xiǎn)性，提高輸血的安全性一直是臨床關(guān)注的重點(diǎn)[4]。對于稀有血型受血者，快速找到相合的血液至關(guān)重要，這就需要采供血機(jī)構(gòu)根據(jù)不同的ABO血型及Rh表型合理化儲存血液。本次調(diào)查的RhD陰性獻(xiàn)血者中，ABO血型分布特點(diǎn)為O＞A＞B＞AB,與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道的分布頻率一致[5-6]，ABO血型在Rh表型中的分布頻率與總體分布頻率基本一致，有利于血庫合理儲存相應(yīng)血液。對于Rh陰性血型表現(xiàn)型目前發(fā)現(xiàn)共有8種,而本次調(diào)查的291名RhD陰性獻(xiàn)血者Rh表現(xiàn)型檢出6種，以ccdee（50.5%）為主，其次是Ccdee（36.8%)，CCdee（8.9%）、ccdEe（2.4%）、CcdEe（1.0%）、CCdEe（0.4%），未檢出稀有ccdEE和CCdEE表型，本地區(qū)Rh表現(xiàn)型分布特點(diǎn)與相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道類似[7-9]。調(diào)查發(fā)現(xiàn)（表2），RhE抗原陽性率在RhD陰性獻(xiàn)血者中較低（3.78%），而RhC抗原陽性率與抗原陰性率較接近，由此表明，RhD陰性患者輸注D陰性血液時(shí)，在Rh表型未同型輸注時(shí)，產(chǎn)生抗C抗體的概率大大高于產(chǎn)生抗E抗體。因此，對于需要反復(fù)輸血治療的RhD陰性患者，RhC同型輸注比RhE同型輸注更有意義，避免因多次抗原刺激從而產(chǎn)生抗C抗體，造成后期可能無法找到完全匹配的血液進(jìn)行輸注，只能冒險(xiǎn)輸注不完全相合的血液[10]。ccdee和Ccdee兩種表型合計(jì)87.3%，Rh陰性血液輸血電子配血，這兩種血型匹配度高，因此，血站建立一支固定的Rh表型獻(xiàn)血者隊(duì)伍，特別是Rh稀有表型，可為臨床大部分稀有血型患者用血實(shí)現(xiàn)電子配血，以滿足Rh陰性患者安全用血的需求，為患者及時(shí)安全輸血提供支持。

不規(guī)則抗體相對ABO血型系統(tǒng)中規(guī)律產(chǎn)生抗A、抗B抗體而言的非意料之中的意外抗體，其主要通過母嬰血型不合引發(fā)妊娠及輸血等免疫刺激而產(chǎn)生的IgG類抗體[11-12]。此次調(diào)查的299例標(biāo)本不規(guī)則抗體篩查陽性8例（2.68%），略高于文獻(xiàn)報(bào)道的在健康人群中檢出率為0.3%～2.0%[13]，可能與調(diào)查的標(biāo)本量少造成結(jié)果偏差有關(guān)。本次調(diào)查的8例不規(guī)則抗體陽性中，7例女性獻(xiàn)血者，其中3例IgG類抗-D抗體，經(jīng)隨訪調(diào)查可知，產(chǎn)生IgG類抗-D抗體的均有妊娠史的女性，其中兩位有輸血史，另一位無輸血史，但孕有RhD陽性子女一名。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，RhD陰性個(gè)體經(jīng)由輸血、懷孕等接觸D抗原后,產(chǎn)生抗體的幾率明顯大于其他血型抗原[14]。另外，產(chǎn)生IgG抗-E和IgG抗-C的兩位女性獻(xiàn)血者，年齡分別是22歲和44歲，因未能取得聯(lián)系，不能確定產(chǎn)生的原因，其Rh表型分別是Ccdee和ccdee，RhE抗 原 和RhC抗 原 的 表 達(dá) 與RhD關(guān)系密切，在本次調(diào)查的RhD陰性獻(xiàn)血者中，RhE抗原表達(dá)極低（3.78%），而在RhD陽性人群中，RhE抗原陽性率為45.36%[9]，因此，在女性妊娠RhD陽性胎兒概率極高的情況下，同樣懷孕RhE陽性胎兒的概率也較高，提示，RhD陰性女性因妊娠刺激產(chǎn)生抗-E抗體的可能性較大。不同的是，RhC在RhD陰性人群中抗原表達(dá)陽性率較高（47.08%），在RhD陽性人群中，RhC抗原陽性率高達(dá)89.94%[9]，同理說明，在RhD陰性女性人群中，因妊娠刺激產(chǎn)生抗-C抗體的概率可能比RhD陽性妊娠刺激產(chǎn)生抗-C的概率更高。

本次調(diào)查的女性獻(xiàn)血者抗體陽性比例（4.46%）高于男性（0.7%），連續(xù)校正卡方檢驗(yàn)P＞0.05，性別差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，可能與不規(guī)則抗體陽性例數(shù)較少有關(guān)。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體陽性率明顯高于男性[15]，隨著年齡的增長，女性獻(xiàn)血者妊娠次數(shù)的增加，胎母血型不合的免疫刺激的機(jī)會更多，產(chǎn)生不規(guī)則抗體的概率更大，同時(shí)發(fā)生新生兒溶血病的風(fēng)險(xiǎn)增高。因此，篩查女性獻(xiàn)血者不規(guī)則抗體有其必要性，特別是輸注非紅細(xì)胞制品的患者，輸注前應(yīng)篩查不規(guī)則抗體或次側(cè)交叉配血，避免發(fā)生不規(guī)則抗體陽性血液輸給具有相應(yīng)抗原的患者體內(nèi),造成溶血性輸血反應(yīng),甚至危及患者的生命[16]。

綜上，分析獻(xiàn)血者Rh表型和不規(guī)則抗體的構(gòu)成及分布，有利于完善Rh獻(xiàn)血者資料庫，對于稀有血型患者實(shí)現(xiàn)電子配血和精準(zhǔn)輸血進(jìn)行前期探索，為采供血機(jī)構(gòu)合理化儲存稀有血型的血液提供數(shù)據(jù)支持，便于多次輸血的患者同表型輸注，以滿足稀有血型患者的安全輸血需求。